專利名稱：以幼嫩植株及幼葉片切塊為外植體的君子蘭離體繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明為花卉繁殖方法，具體涉及君子蘭體外無性快速繁殖方法。
背景技術(shù)：
植物組織培養(yǎng)即植物無菌培養(yǎng)技術(shù)，是根據(jù)植物細胞的全能性，利用植物體離體 的器官(如根、莖、葉、莖尖、花、果實等)、組織(如形成層、表皮、皮層、胚乳等)或細胞(如 大孢子、小孢子、體細胞等)以及原生質(zhì)體，在無菌和適宜的人工培養(yǎng)基及光照、溫度等人 工條件下，能誘導出愈傷組織、不定芽、不定根，形成完整的植株或產(chǎn)生具有經(jīng)濟價值的其 它產(chǎn)品的技術(shù)。由植物組織培養(yǎng)所產(chǎn)生的再生植株除了極低的變異外，基本都能保持親本 (外植體來源植株)的優(yōu)良性狀。植物組織培養(yǎng)技術(shù)發(fā)明以來已經(jīng)取得了很大的進展，自上 世紀60年代以來植物組織培養(yǎng)已經(jīng)從實驗室研究階段成為一種大規(guī)模成批量的工廠化生 產(chǎn)方法。君子蘭，是石蒜科君子蘭屬的多年生草本觀賞植株。原產(chǎn)南非高山，性喜溫涼，于 本世紀初經(jīng)由德國和日本引入我國，并安家落戶。是我國名貴花卉，經(jīng)濟價值較高。它株型 端莊、葉、花、果并美，深受國內(nèi)外花卉愛好者的青睞。目前，君子蘭的繁殖方式主要為種子 繁殖與分株繁殖，這兩種方式的繁殖速度都很慢成齡君子蘭一年只開一次花，且種子至少 需要9個月才能成熟；分株繁殖_年最多分出1 3株。由于君子蘭高度雜合，種子繁殖得 到珍品君子蘭的得率很低，即便以珍品君子蘭做父母本得到珍品的幾率仍很低，珍品君子 蘭在國內(nèi)、國際市場一直供不應求。利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)快速地離體繁殖君子蘭可以大 規(guī)模產(chǎn)生株型統(tǒng)一的君子蘭，快速繁殖君子蘭優(yōu)良稀缺品種，進一步滿足國內(nèi)、國際市場的 需求。前人所做的君子蘭組織培養(yǎng)實驗雖然已經(jīng)初步獲得成功，但由于再生率低、再生周期 長等限制了君子蘭組織培養(yǎng)技術(shù)在實際生產(chǎn)中的應用。本發(fā)明可使君子蘭在一年以內(nèi)實現(xiàn) 快速繁殖。

發(fā)明內(nèi)容
為克服傳統(tǒng)繁殖方法產(chǎn)生君子蘭株型千差萬別、繁殖速度慢的缺點；也為了克服 前人君子蘭組織培養(yǎng)實驗中再生率低(平均每塊外植體再生出0 2株再生芽)、再生周期 長的缺點。提供一種以幼嫩植株及幼葉片切塊為外植體的君子蘭離體快速繁殖方法本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是1.外植體的獲得取成熟種子，放入無菌超凈臺中，用75% (體積/體積)酒精浸 泡1 2min，用0. 1 0. 2% (質(zhì)量/體積)的氯化汞水溶液浸泡10 20分鐘，無菌水沖 洗3 5遍，將種子接種到不含激素的1/2MS半固體培養(yǎng)基上，20 30°C每天8_12小時光
照培養(yǎng)。2.外植體接種及愈傷誘導待步驟1種苗長出1-2片葉時，將小植株的地上部分 (包括幼葉和幼莖)切為直徑3 5mm的小塊，接種在含6-BA1 2mg/L、NAA0. 5 2. Omg/ L、蔗糖3. 0% (質(zhì)量/體積)的MS半固體培養(yǎng)基上，20 30°C每天40W日光燈照射8 9 小時。40 50天繼代一次，待長出黃色粒狀愈傷時即可誘導分化。也可用無菌再生植株幼嫩地上部分為外植體。3.叢生芽的誘導將愈傷轉(zhuǎn)接到誘導分化培養(yǎng)基MS+KT (2. 0 4. Omg/L) +2， 4-D (0. 2 0. 5mg/L) +3. 0% (質(zhì)量/體積)蔗糖，40 50天繼代一次，20 30°C每天光照 10 12小時。轉(zhuǎn)分化培養(yǎng)基4個月時從一片來源的愈傷可分化出121株再生苗。4.根的誘導再生植株轉(zhuǎn)到1/2MS+蔗糖2% (質(zhì)量/體積)的生根培養(yǎng)基上，20 30°C每天10 14小時光照。5.再生植株移栽植株生根后便可移栽。腐殖土 121°C滅菌30 60分鐘以上。 移栽前將植株上的瓊脂等雜物沖洗干凈。7天左右澆一次透水便可成活。本發(fā)明使君子蘭在相對短的時間內(nèi)大量產(chǎn)生基因背景完全相同、株型統(tǒng)一的再生 植株。以幼嫩植株地上部分的切塊為外植體的脫分化率均值可達72%，愈傷分化率均值可 達87.5%，單片葉產(chǎn)生的愈傷經(jīng)繼代可分化出幾百株再生苗，叢生芽生根率可達100%，在 適宜環(huán)境下移栽成活率達100%。本發(fā)明可以在不影響母株正常發(fā)育及繁殖的情況下使君子蘭在相對短的時間內(nèi) 大規(guī)模繁殖出遺傳背景相同、外觀整齊的植株；取材不受季節(jié)限制；再生周期短；脫分化率 及分化率高；生根率高；移栽成活率高，植株移栽后生長狀態(tài)良好；非常適用于君子蘭稀缺 品種的快速繁殖；適用于君子蘭“葉盤轉(zhuǎn)化法”轉(zhuǎn)基因；平均單株再生苗的成本極低，非常 適合工廠化生產(chǎn)。
具體實施例方式下面將結(jié)合實際操作對本發(fā)明作進一步的說明，但本發(fā)明的范圍并不局限于以下 的實施例。實施例1 1.外植體的獲得取成熟種子，放入無菌超凈臺中，用75% (體積/體積)酒精浸 泡lmin，用0. 1 % (質(zhì)量/體積)的氯化汞水溶液浸泡10分鐘，無菌水沖洗3遍，將種子接 種到不含激素的1 /2MS半固體培養(yǎng)基上，20 °C每天8小時光照培養(yǎng)。2.外植體接種及愈傷誘導將步驟1中長出1片葉的小植株或者含有1片葉的 無菌再生植株的地上部分(包括幼葉和幼莖)切為直徑3mm的小塊，接種在含6-BAlmg/L、 NAAO. 5mg/L、蔗糖3. 0% (質(zhì)量/體積)的MS半固體培養(yǎng)基上，20°C每天40W日光燈照射8 小時。40天繼代一次，待長出黃色粒狀愈傷時即可誘導分化。3.叢生芽的誘導將愈傷轉(zhuǎn)接到誘導分化培養(yǎng)基MS+KT2. Omg/L+2，4_D0. 2mg/ L+3. 0% (質(zhì)量/體積)蔗糖，40天繼代一次，20C每天光照10小時。4.根的誘導再生植株轉(zhuǎn)到1/2MS+蔗糖2% (質(zhì)量/體積)的生根培養(yǎng)基上，20°C 每天10小時光照。5.再生植株移栽植株生根后便可移栽。腐殖土 121°C滅菌30分鐘。移栽前將植 株上的瓊脂等雜物沖洗干凈。7天左右澆一次透水便可成活。實施例2:1.外植體的獲得取成熟種子，放入無菌超凈臺中，用75% (體積/體積)酒精浸 泡2min，用0.2% (質(zhì)量/體積)的氯化汞水溶液浸泡20分鐘，無菌水沖洗5遍，將種子接 種到不含激素的1/2MS半固體培養(yǎng)基上，30°C每天12小時光照培養(yǎng)。
2.外植體接種及愈傷誘導將步驟1中長出兩片葉的小植株或長有兩片葉的無 菌再生植株的地上部分(包括幼葉和幼莖)切為直徑5mm的小塊，接種在含6-BA2mg/L、 NAA2. Omg/L、蔗糖3. 0% (質(zhì)量/體積)的MS半固體培養(yǎng)基上，30°C每天40W日光燈照射9 小時。50天繼代一次，待長出黃色粒狀愈傷時即可誘導分化。3.叢生芽的誘導將愈傷轉(zhuǎn)接到誘導分化培養(yǎng)基MS+KT4. Omg/L+2,4-DO. 5mg/ L+3. 0% (質(zhì)量/體積)蔗糖，50天繼代一次，30°C每天光照12小時。4.根的誘導再生植株轉(zhuǎn)到1/2MS+蔗糖2% (質(zhì)量/體積)的生根培養(yǎng)基上，30°C 每天14小時光照。5.再生植株移栽植株生根后便可移栽。腐殖土 121°C滅菌60分鐘。移栽前將植 株上的瓊脂等雜物沖洗干凈。7天左右澆一次透水便可成活。、實施例3 1.外植體的獲得取成熟種子，放入無菌超凈臺中，用75% (體積/體積)酒精浸 泡40S，用0. 15% (質(zhì)量/體積)的氯化汞水溶液浸泡15分鐘，無菌水沖洗4遍，將種子接 種到不含激素的1/2MS半固體培養(yǎng)基上，24°C每天10小時光照培養(yǎng)。2.外植體接種及愈傷誘導待步驟1種苗長出1片葉時，將小植株的地上部分(包 括幼葉和幼莖)切為直徑4mm的小塊，接種在含6-BA1. 5mg/L、NAAl. Omg/L、蔗糖3. 0% (質(zhì) 量/體積)的MS半固體培養(yǎng)基上，24°C每天40W日光燈照射8. 5小時。45天繼代一次，待 長出黃色粒狀愈傷時即可誘導分化。也可用一片葉的無菌再生植株幼嫩地上部分為外植 體。3.叢生芽的誘導將愈傷轉(zhuǎn)接到誘導分化培養(yǎng)基MS+KT(3mg/L)+2，4-D(0. 4 mg/L)+3.0% (質(zhì)量/體積)蔗糖，45天繼代一次，24°C每天光照11小時。4.根的誘導再生植株轉(zhuǎn)到1/2MS+蔗糖2% (質(zhì)量/體積)的生根培養(yǎng)基上，24°C 每天12小時光照。5.再生植株移栽植株生根后便可移栽。腐殖土 121°C滅菌50分鐘以上。移栽前 將植株上的瓊脂等雜物沖洗干凈。7天左右澆一次透水便可成活。
權(quán)利要求
以幼嫩植株及幼葉片切塊為外植體的君子蘭離體快速繁殖方法，其特征是具體步驟如下1).外植體的獲得取成熟種子，放入無菌超凈臺中，用75％(體積/體積)酒精浸泡1～2min，用0.1～0.2％(質(zhì)量/體積)的氯化汞水溶液浸泡10～20分鐘，無菌水沖洗3～5遍，將種子接種到不含激素的1/2MS半固體培養(yǎng)基上，20～30℃每天8-12小時光照培養(yǎng)；2).外植體接種及愈傷誘導待步驟1種苗長出1-2片葉時，將小植株的地上部分，包括幼葉和幼莖切為直徑3～5mm的小塊，接種在含6-BA1～2mg/L、NAA0.5～2.0mg/L、蔗糖3.0％(質(zhì)量/體積)的MS半固體培養(yǎng)基上，20～30℃每天40W日光燈照射8～9小時，40～50天繼代一次，待長出黃色粒狀愈傷時即誘導分化，或用無菌再生植株幼嫩地上部分為外植體；3).叢生芽的誘導將愈傷轉(zhuǎn)接到誘導分化培養(yǎng)基MS+KT(2.0～4.0mg/L)+2，4-D(0.2～0.5mg/L)+3.0％(質(zhì)量/體積)蔗糖，40～50天繼代一次，20～30℃每天光照10～12小時，轉(zhuǎn)分化培養(yǎng)基4個月時從一片來源的愈傷分化出121株再生苗；4).根的誘導再生植株轉(zhuǎn)到1/2MS+蔗糖2％(質(zhì)量/體積)的生根培養(yǎng)基上，20～30℃每天10～14小時光照；5).再生植株移栽植株生根后移栽，腐殖土121℃滅菌30～60分鐘以上，移栽前將植株上的瓊脂或雜物沖洗干凈，7天澆一次透水便成活。
全文摘要
本發(fā)明為花卉繁殖方法，具體涉及君子蘭體外無性快速繁殖方法。本發(fā)明采用外植體接種及愈傷誘導、叢生芽的誘導、導分化培養(yǎng)、根的誘導、再生植株培養(yǎng)、再生植株移栽等技術(shù)快速繁殖君子蘭花卉?？梢栽诓挥绊懩钢暾０l(fā)育及繁殖的情況下使君子蘭在相對短的時間內(nèi)大規(guī)模繁殖出遺傳背景相同、外觀整齊的植株；取材不受季節(jié)限制；再生周期短；脫分化率及分化率高；生根率高；移栽成活率高，植株移栽后生長狀態(tài)良好；非常適用于君子蘭稀缺品種的快速繁殖；適用于君子蘭“葉盤轉(zhuǎn)化法”轉(zhuǎn)基因；平均單株再生苗的成本極低，非常適合工廠化生產(chǎn)。
文檔編號A01H4/00GK101822218SQ20101012585
公開日2010年9月8日 申請日期2010年3月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月17日
發(fā)明者王麗, 王欽美, 鄒凡雨 申請人:東北師范大學