專利名稱：：一種無(wú)毒無(wú)色無(wú)味的生物誘殺果實(shí)蠅的水劑及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種無(wú)毒無(wú)色無(wú)味的生物誘殺果實(shí)蠅的水劑及制備方法，屬于生物制藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：果實(shí)蠅是我國(guó)二類檢疫性害蟲(chóng)，俗稱金蒼蠅、針?lè)洹|方果實(shí)蠅。該蠅外形與蒼蠅近似，但體形比蒼蠅小，全體金黃色帶黑色斑紋，繁殖速度快，暴發(fā)性強(qiáng)，危險(xiǎn)性大。成蟲(chóng)產(chǎn)卵于果皮內(nèi)，幼蟲(chóng)在果肉內(nèi)蛀食，造成番荔枝、番石榴、香蕉、芒果、木瓜、楊桃、柑桔、蜜柚、油柰等水果的腐爛與落果，嚴(yán)重影響品質(zhì)和產(chǎn)量，被譽(yù)為水果的"頭號(hào)殺手"。果實(shí)蠅分布于澳大利亞、新西蘭、美國(guó)的夏威夷、環(huán)太平洋島嶼，我東南沿海各省區(qū)以及緬甸、柬埔寨、老撾、越南、中國(guó)臺(tái)灣、日本、印尼、馬來(lái)西亞、泰國(guó)、文萊、印度、孟加拉國(guó)、尼泊爾、斯里蘭卡、巴基斯坦、伊朗、阿富汗、阿塞拜疆、非洲的埃及、肯尼亞、坦桑尼亞、毛里求斯、巴布亞新幾內(nèi)亞、新愛(ài)爾蘭等等各國(guó)，全球氣候變暖加劇了這鐘小昆蟲(chóng)的蔓延。長(zhǎng)期以來(lái)一直被世界各國(guó)列為重要檢疫昆蟲(chóng)。果實(shí)蠅對(duì)瓜果產(chǎn)業(yè)的危害主要有以下兩方面一方面直接危害瓜果產(chǎn)業(yè)的生產(chǎn)果實(shí)蠅侵害瓜果后會(huì)造成果實(shí)腐爛、落果，嚴(yán)重影響瓜果的產(chǎn)量和質(zhì)量。嚴(yán)重時(shí)會(huì)使產(chǎn)量下降40%以上。另一方面，嚴(yán)重影響市場(chǎng)準(zhǔn)入由于果實(shí)蠅的嚴(yán)重危害性因而一直以來(lái)是世界各國(guó)作為外來(lái)生物入侵的強(qiáng)勢(shì)類群和口岸檢疫的防范重點(diǎn)。甚至于即便水果本身沒(méi)有被果實(shí)蠅侵害過(guò)但由于產(chǎn)地臨近果實(shí)蠅災(zāi)區(qū)而即會(huì)被進(jìn)口國(guó)列入限制進(jìn)口產(chǎn)品予以嚴(yán)加防范進(jìn)而失去進(jìn)入國(guó)際市場(chǎng)的機(jī)會(huì)。由此果實(shí)蠅的防范成了全世界各國(guó)特別是水果產(chǎn)業(yè)發(fā)達(dá)國(guó)家的重要課題。果實(shí)蠅已在水果種植區(qū)較普遍發(fā)生，目前人們找到的防治措施有1化學(xué)防治技術(shù)的應(yīng)用，包括直接噴灑農(nóng)業(yè)，用浸藥的毒果誘殺等，該防治技術(shù)效果不明顯，農(nóng)藥殘留期長(zhǎng)且大，易造成人畜中毒。2物理防范包括覆蓋防蟲(chóng)網(wǎng)、套袋防蟲(chóng)保果等技術(shù)，該技術(shù)施工復(fù)雜，成本高，效果一般。3用放出無(wú)孕雄蟲(chóng)的方法防止果實(shí)蠅的繁殖，該技術(shù)理論可行，實(shí)際操作非常困難，基本無(wú)效。4化學(xué)農(nóng)藥直接加性信息素引誘劑來(lái)殺成蟲(chóng)，該技術(shù)為現(xiàn)階段普遍采用，效果明顯，但只能誘殺雄蟲(chóng)，且有效期短(3-5天)，布點(diǎn)復(fù)雜，化學(xué)農(nóng)藥藥物殘留高，直接影響到瓜果的食用。隨著環(huán)保意識(shí)的提高，市場(chǎng)已在呼喚無(wú)公害的純綠色誘殺劑。
發(fā)明內(nèi)容因此，人們對(duì)防治效果更好、有效期更長(zhǎng)、能雙性誘殺的純綠色無(wú)公害誘殺劑期望需求越來(lái)越大，尤其是在國(guó)家提倡綠色食品、綠色種植的環(huán)境下，抑制酶與昆蟲(chóng)性信息素的應(yīng)用前景必將更加廣闊。至今為止，還沒(méi)有發(fā)現(xiàn)任何有關(guān)本發(fā)明藥物組合物的報(bào)道。本發(fā)明人經(jīng)過(guò)反復(fù)研究，并通過(guò)動(dòng)物臨床試驗(yàn)的反復(fù)驗(yàn)證，終于找到了有更好防治果實(shí)蠅的藥物，從而完成了本發(fā)明。本發(fā)明的目的就是提供一種更為有效防治果實(shí)蠅的一種純綠色無(wú)公害誘殺劑組合物。本發(fā)明的另外一個(gè)目的是提供了該誘殺劑組合物的制備方法。誘殺劑是采用性信息素和聚集信息素，按照比列互配，加抑制酶經(jīng)過(guò)復(fù)雜工藝研制而成。首先解決了有效期的問(wèn)題，最長(zhǎng)效果可達(dá)到60天，大大降低了農(nóng)民朋友的使用成本，另外使用非常方便，直接噴灑在果樹(shù)樹(shù)葉后即可，無(wú)毒、無(wú)殘留，不影響水果品質(zhì)。因?yàn)椴捎靡种泼?，耙向作用單一，?duì)靶標(biāo)以外的昆蟲(chóng)和生物無(wú)任何毒副作用。1)抑制酶制取工藝流程為感染源分離純化一一擴(kuò)大培養(yǎng)——濃縮滅活，加佐劑-一昆蟲(chóng)群體感染一一酶檢測(cè)-一昆蟲(chóng)體液采集-一離心分離-一滅活-一精濾出菌-一凍干-一制粉-一分裝待檢一一抑制酶成品入庫(kù)。抑制酶能抑制果實(shí)蠅體內(nèi)的保護(hù)酶的活性從而造成酶斷裂2)信息素的添加信息素是生物體之間起化學(xué)通訊作用的化合物的統(tǒng)稱，是昆蟲(chóng)交流的化學(xué)分子語(yǔ)言。在自然界中，害蟲(chóng)雌成蟲(chóng)在性成熟后，會(huì)釋放一種叫性信息素的化合物，它釋放至空氣中后隨氣流擴(kuò)散，剌激雄蟲(chóng)觸角中的化學(xué)感覺(jué)器官，引起雄性個(gè)體性沖動(dòng)及引誘雄蟲(chóng)向釋放源定向飛行，并與釋放雌成蟲(chóng)交配以繁衍后代。因此，昆蟲(chóng)性誘劑產(chǎn)品是仿生高科技產(chǎn)品，通過(guò)誘芯釋放人工合成的性信息素。性誘劑是模擬自然界的昆蟲(chóng)性信息素，通過(guò)釋放器釋放到田間來(lái)誘殺異性害蟲(chóng)的仿生高科技產(chǎn)品。該技術(shù)誘殺害蟲(chóng)不接觸植物和農(nóng)產(chǎn)品，沒(méi)有農(nóng)藥殘留之憂，是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生態(tài)防治害蟲(chóng)的首選方法之一。性信息素作為同種異性昆蟲(chóng)之間生殖階段的化學(xué)通訊工具，其化學(xué)結(jié)構(gòu)的高度復(fù)雜性和特殊性是昆蟲(chóng)種間生殖隔離的重要保證，因此，不同昆蟲(chóng)之間的性信息素相互不能替代，也不會(huì)引起混淆，這在昆蟲(chóng)的區(qū)域性調(diào)查、植物檢疫以及誘殺防治等方面具有較大的實(shí)用價(jià)值。本發(fā)明在制劑中按照比例添加性信息素和聚集信息素，是只針對(duì)靶向單一的瓜果實(shí)蠅引誘，對(duì)其他非靶向的生物及天敵無(wú)任何影響。3)中草藥植物提取物利用超聲波的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外超聲波的次級(jí)效應(yīng)，如機(jī)械振動(dòng)、乳化、擴(kuò)散、碎、化學(xué)效應(yīng)等也能加速欲提取成分的擴(kuò)散釋放并充分與溶劑混合，利于提取。驗(yàn)法，用超臨界流體萃取技術(shù)對(duì)印楝素、野菊花的萃取條件進(jìn)行了優(yōu)化選擇，結(jié)果最佳萃取條件為壓力34.smPa，溫度6(TC，改性劑乙醇0.3ml，靜態(tài)萃取時(shí)間10min，動(dòng)態(tài)萃取量10ml，以水作為吸收。印楝素、野菊花對(duì)哺乳動(dòng)物等非靶標(biāo)生物非常安全。本發(fā)明藥物對(duì)人及動(dòng)物無(wú)毒害，不污染環(huán)境，是一種符合環(huán)保要求的綠色產(chǎn)品。該誘劑具有醇和濃厚的芳香氣味，對(duì)果實(shí)蠅有較強(qiáng)的引誘滅殺作用，而且本藥劑原料采購(gòu)方便，生產(chǎn)成本低廉，工藝簡(jiǎn)單，因此低成本和環(huán)保無(wú)毒害的優(yōu)勢(shì)具有很強(qiáng)的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力。具體實(shí)施例方式以下通過(guò)試驗(yàn)例來(lái)進(jìn)一步闡述本發(fā)明所述藥物的有益效果，這些試驗(yàn)例包括了本發(fā)明藥物(以下稱殺手1號(hào))的安全性試驗(yàn)(急性毒性試驗(yàn)和亞慢性毒性試驗(yàn))和臨床觀察試驗(yàn)。[試驗(yàn)例1]本發(fā)明藥物對(duì)小白鼠的急性毒性試驗(yàn)l試驗(yàn)材料1.l供試藥物殺手1號(hào)，湖南威亞藥業(yè)科技有限公司生產(chǎn)，批號(hào)2009061041.2供試動(dòng)物健康小白鼠50只，雌雄各半，體重為18-22g，購(gòu)自中南大學(xué)實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物部。2試5驗(yàn)方法將50只小白鼠隨機(jī)分成5組，每組10只，雌雄各半，分別按lg/kg體重、2g/kg體重、5g/kg體重、8g/kg體重、12g/kg體重五個(gè)劑量組的藥量將殺手1號(hào)一天分5次灌胃小鼠。給藥后，觀察并記錄7d內(nèi)動(dòng)物所出現(xiàn)的毒性反應(yīng)，統(tǒng)計(jì)死亡動(dòng)物數(shù)并對(duì)死亡動(dòng)物及時(shí)尸檢，如有病變組織則進(jìn)行組織學(xué)就檢，用改良寇氏法計(jì)算1^)5。及95%平均可信限。3結(jié)果與分析表1殺手1號(hào)的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>急性毒性試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果表明小白鼠灌胃藥物后，第一組、第二組和第三組全部成活，臨床表現(xiàn)正常；第四組在24h內(nèi)死亡1只；第五組在12h內(nèi)死亡2只。中毒小白鼠主要癥狀為精神沉郁、呼吸困難，以腹式呼吸為主，對(duì)死亡小白鼠剖檢，發(fā)現(xiàn)有胃脹和鼓起現(xiàn)象，其余組織均未見(jiàn)異常。按改良寇氏法計(jì)算殺手1號(hào)內(nèi)服半數(shù)致死量(LD5。)為72g/kg體重，95X平均可信限為68.4-80g/kg體重，按毒性標(biāo)準(zhǔn)判斷基本為無(wú)毒制劑。4結(jié)論殺手l號(hào)給小白鼠灌胃的半數(shù)致死量(LD5。)為72g/kg體重，按藥物安全毒理學(xué)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)為基本無(wú)毒制劑，在藥物防治范圍內(nèi)(l-12g/kg體重)是安全的。[試驗(yàn)例2]本發(fā)明藥物對(duì)大白鼠的亞慢性毒性試驗(yàn)1試驗(yàn)材料1.1供試藥物殺手1號(hào)，湖南威亞藥業(yè)科技有限公司生產(chǎn)，批號(hào)200906101.2供試動(dòng)物健康大白鼠50只，雌雄各半，體重為120-128g，購(gòu)自中南大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部。2試驗(yàn)方法給大白鼠分別灌胃殺手1號(hào)0.5g/kgd、2g/kgd(相當(dāng)于臨床給藥劑量的5倍、20倍)，連續(xù)四個(gè)月，觀察并記錄動(dòng)物所出現(xiàn)的毒性反應(yīng)，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)對(duì)大白鼠的血常規(guī)檢查、肝功能檢查、心電圖檢查等生理指標(biāo)檢查，并解剖觀察各組織臟器的病理變化。3結(jié)果與分析3.1兩劑量組大白鼠給藥后的一般活動(dòng)，精神狀態(tài)、毛發(fā)、糞便等均未見(jiàn)明顯差異。3.2給藥前后外周血象，包括紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血紅細(xì)胞、紅細(xì)胞壓積均在正常范圍內(nèi)波動(dòng)。3.3對(duì)三項(xiàng)肝(SGPT、SGOT)、腎(尿素氮、肌酐)功能指標(biāo)均未見(jiàn)明顯影響。3.4試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，動(dòng)物血清中總蛋白、白蛋白、堿性磷酸酶的含量與對(duì)照組相比無(wú)明顯差異。3.5心電圖檢查均未發(fā)現(xiàn)異常。3.6各主要臟器肉眼檢查未明顯腫大、充血、壞死等病理形態(tài)學(xué)變化。3.7心、肝、脾、肺、腎、胸腺、腎上腺、子宮、睪丸的重量系數(shù)與對(duì)照組相比，無(wú)顯著差異。3.8病理組織學(xué)檢查，均未見(jiàn)異常。3.9以上結(jié)果說(shuō)明該藥比較安全，在所試劑量范圍內(nèi)。4結(jié)論亞慢性毒性試驗(yàn)研究結(jié)果表明給大白鼠分別灌胃殺手1號(hào)0.5g/kgd、2g/kgd(相當(dāng)于臨床給藥劑量的5倍、20倍)，連續(xù)四個(gè)月，兩個(gè)劑量組大白鼠給藥后的一般活動(dòng)，血常規(guī)檢查、肝功能檢查、心電圖檢查等生理指標(biāo)檢查，各組織臟器的病理變化均未見(jiàn)異常，按毒性標(biāo)準(zhǔn)判斷基本為無(wú)毒制劑，在藥物防治范圍內(nèi)(0.l-2g/kg體重)是安全的。[試驗(yàn)例3]本發(fā)明藥物防治果實(shí)蠅的臨床療效試驗(yàn)試驗(yàn)單位廣東省某植保站近幾年我國(guó)瓜果類受果實(shí)蠅危害較為嚴(yán)重，通過(guò)采取相關(guān)的技術(shù)措施已得到初步控制，其中雄性誘殺是一項(xiàng)主要防治措施。為尋求更好的誘殺劑，2009年9月11日湖南威亞與廣東某植保站共同生產(chǎn)的雌雄雙殺引誘劑"穩(wěn)黏"進(jìn)行田間試驗(yàn)?，F(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告如下。1材料與方法1.1i式禾才"殺手1號(hào)"雌雄雙殺果實(shí)蠅誘殺劑，威亞藥業(yè)有限公司產(chǎn)品；誘蠅醚(性引誘劑，誘殺雄蟲(chóng))，廣東省昆蟲(chóng)研究所產(chǎn)品。試驗(yàn)在廣東省汕頭市澄海區(qū)蓮下鎮(zhèn)槐澤管理區(qū)4年生楊桃園進(jìn)行，楊桃園面積4028m2。1.2試驗(yàn)設(shè)置"殺手1號(hào)"與誘蠅醚效果對(duì)比試驗(yàn)。設(shè)兩個(gè)處理A.每667m2設(shè)置"殺手1號(hào)"誘殺15個(gè)點(diǎn)，將"殺手1號(hào)"67ml噴撒在樹(shù)葉和果實(shí)表面；B.每667m2設(shè)置誘蠅醚誘殺瓶4個(gè)，每瓶加誘蠅醚2ml及敵敵畏2ml。將誘殺瓶懸掛在樹(shù)冠下面離地面1.5m處，每瓶相隔10米。試驗(yàn)期間天氣晴好，氣溫2028°C。2結(jié)果與分析試驗(yàn)結(jié)果看出，"殺手1號(hào)"誘殺劑誘殺果實(shí)蠅效果比性誘劑誘蠅醚好，5天累計(jì)每個(gè)點(diǎn)平均誘殺果實(shí)蠅107.25頭(以掉在樹(shù)葉下放放置的塑料收納膜上死亡的蟲(chóng)數(shù)為準(zhǔn))，是誘蠅醚誘殺13頭的8.25倍，按雌雄蟲(chóng)性比1:1計(jì)，"殺手1號(hào)"的誘殺雄蠅的數(shù)量是誘蠅醚的4倍。權(quán)利要求一種無(wú)毒無(wú)色無(wú)味的生物誘殺蒼蠅和瓜果實(shí)蠅的水劑及制備方法，其特征在于它主要是由下列重量份的原材料制成100克中含80克白糖，1克性信息素(順-9-二十三碳烯)，1克聚集信息，10克抑制酶，8克提取物(印楝素、野菊花各2克)。2.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物，其中各原料藥的用量為白糖80克、性信息素(順_9-二十三碳烯)1克、聚集信息1克、抑制酶10克、印楝素提取物2克、野菊花2克。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述藥物的制備方法，它包括下列步驟1)抑制酶制取工藝流程為感染源分離純化一一擴(kuò)大培養(yǎng)——濃縮滅活，加佐劑——昆蟲(chóng)群體感染一一酶檢測(cè)——昆蟲(chóng)體液采集-一離心分離——滅活-一精濾出菌——凍干-制粉——分裝待檢一一抑制酶成品入庫(kù)，抑制酶能抑制果實(shí)蠅體內(nèi)的保護(hù)酶的活性從而造成酶斷裂；2)信息素的添加信息素是生物體之間起化學(xué)通訊作用的化合物的統(tǒng)稱，是昆蟲(chóng)交流的化學(xué)分子語(yǔ)言，在自然界中，害蟲(chóng)雌成蟲(chóng)在性成熟后，會(huì)釋放一種叫性信息素的化合物，它釋放至空氣中后隨氣流擴(kuò)散，剌激雄蟲(chóng)觸角中的化學(xué)感覺(jué)器官，引起雄性個(gè)體性沖動(dòng)及引誘雄蟲(chóng)向釋放源定向飛行，并與釋放雌成蟲(chóng)交配以繁衍后代，因此，昆蟲(chóng)性誘劑產(chǎn)品是仿生高科技產(chǎn)品，通過(guò)誘芯釋放人工合成的性信息素，性誘劑是模擬自然界的昆蟲(chóng)性信息素，通過(guò)釋放器釋放到田間來(lái)誘殺異性害蟲(chóng)的仿生高科技產(chǎn)品，該技術(shù)誘殺害蟲(chóng)不接觸植物和農(nóng)產(chǎn)品，沒(méi)有農(nóng)藥殘留之憂，是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生態(tài)防治害蟲(chóng)的首選方法之一；性信息素作為同種異性昆蟲(chóng)之間生殖階段的化學(xué)通訊工具，其化學(xué)結(jié)構(gòu)的高度復(fù)雜性和特殊性是昆蟲(chóng)種間生殖隔離的重要保證，因此，不同昆蟲(chóng)之間的性信息素相互不能替代，也不會(huì)引起混淆，這在昆蟲(chóng)的區(qū)域性調(diào)查、植物檢疫以及誘殺防治等方面具有較大的實(shí)用價(jià)值；3)中草藥植物提取物利用超聲波的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外超聲波的次級(jí)效應(yīng)，如機(jī)械振動(dòng)、乳化、擴(kuò)散。擊碎、化學(xué)效應(yīng)等也能加速欲提取成分的擴(kuò)散釋放并充分與溶劑混合，利于提取。驗(yàn)法，用超臨界流體萃取技術(shù)對(duì)印楝素、野菊花萃取條件進(jìn)行了優(yōu)化選擇，結(jié)果最佳萃取條件為壓力34.smPa，溫度6(TC，改性劑乙醇0.3ml，靜態(tài)萃取時(shí)間10min，動(dòng)態(tài)萃取量10ml，以水作為吸收。印楝素、野菊花對(duì)哺乳動(dòng)物等非靶標(biāo)生物非常安全。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種無(wú)毒無(wú)色無(wú)味的生物誘殺果實(shí)蠅的水劑及制備方法。采用性信息素和聚集信息素，按照比列互配，加抑制酶經(jīng)過(guò)復(fù)雜工藝研制而成，屬生物制藥領(lǐng)域。解決了有效期的問(wèn)題，最長(zhǎng)效果可達(dá)到60天，大大降低了農(nóng)民朋友的使用成本，另外使用非常方便，直接噴灑在果樹(shù)樹(shù)葉后即可，無(wú)毒，無(wú)殘留，不影響水果品質(zhì)。因?yàn)椴捎靡种泼?，靶向作用單一，?duì)靶標(biāo)以外的昆蟲(chóng)和生物無(wú)任何毒副作用。文檔編號(hào)A01P19/00GK101785486SQ20101013132公開(kāi)日2010年7月28日申請(qǐng)日期2010年3月24日優(yōu)先權(quán)日2010年3月24日發(fā)明者趙璋申請(qǐng)人:趙璋