專(zhuān)利名稱：中國(guó)蕙蘭組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物的組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種中國(guó)蕙蘭組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基配 方，以及利用該培養(yǎng)基培養(yǎng)原球莖或根狀莖的方法。
背景技術(shù)：
蕙蘭新品種主要依賴于野生植株中篩選，迄今為止，蕙蘭野生資源在江、浙、皖三 省已瀕臨滅絕。在2001年底正式啟動(dòng)的全國(guó)野生動(dòng)植物保護(hù)及自然保護(hù)區(qū)建設(shè)工程中， 蘭科植物被作為15個(gè)野生動(dòng)植物類(lèi)群之一，被列入工程建設(shè)的重點(diǎn)，蘭科植物全部被列入 《國(guó)家重點(diǎn)保護(hù)野生植物名錄(第二批)》，從而納入《中華人民共和國(guó)野生植物保護(hù)條例》 的保護(hù)范圍。規(guī)定對(duì)野生來(lái)源的蘭花，禁止商業(yè)性的國(guó)際貿(mào)易。單一依靠從蕙蘭野生植株中選擇優(yōu)良品種和利用傳統(tǒng)分株方法繁殖擴(kuò)大蕙蘭規(guī) 模已成為制約我國(guó)國(guó)蘭產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸。解決這一問(wèn)題的根本途徑就是通過(guò)現(xiàn)代生物技術(shù) 克服蕙蘭種子在天然條件下幾乎不能萌發(fā)成苗的技術(shù)問(wèn)題，為雜交育種和種苗快繁提供技 術(shù)支撐，建立人工培植基地，這是解決好保護(hù)與利用的矛盾，實(shí)現(xiàn)蕙蘭可持續(xù)發(fā)展的行之有 效的途徑，對(duì)于保持和促進(jìn)中國(guó)蘭花產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展具有重要意義。與大花蕙蘭、蝴蝶蘭等洋蘭相比，國(guó)蘭組織培快繁技術(shù)難度相對(duì)較大，目前尚未建 立成熟的組培快繁生產(chǎn)體系。蕙蘭是我國(guó)五大國(guó)蘭之一，根據(jù)前人的研究報(bào)告，種子萌發(fā)形成原球莖已經(jīng)成功， 將原球莖繼續(xù)分化成芽或根，也已成功。但在實(shí)際工作中，如按照前人報(bào)導(dǎo)的配方從事生 產(chǎn)，重復(fù)性并不理想。在已查閱的3篇經(jīng)典論文中，以Yongqin Chen的技術(shù)最為成熟，但是 母液配方較為復(fù)雜，原球莖組培成苗需要分兩步實(shí)施。在CN101622955《一種適宜蕙蘭種子無(wú)菌萌發(fā)培養(yǎng)基組合物及其方法》專(zhuān)利中，公 開(kāi)的配方為改良基本培養(yǎng)基+6-BA0. 5 1. Omg/L+NAA 0. 5 1. Omg/L，活性碳lg/L，椰子 汁50-100m/L。但是，這只是一種適于種子無(wú)菌萌發(fā)形成原球莖的培養(yǎng)基，而對(duì)生芽生根情 況未有說(shuō)明。(注蘭花種子萌發(fā)后，先形成原球莖，然后再分化芽或根，一般需要在不同的 培養(yǎng)基上分化)?，F(xiàn)有文獻(xiàn)(楊寧生，楊柏云，鐘青萍.蕙蘭Cymbidium faberi rolfe種子無(wú)菌培 養(yǎng)的研究[J].江西科學(xué)，1994，6 (2) :80 84)還顯示原球莖MS培養(yǎng)基+NAA 0. 5mg/L+6-BA lmg/L 5個(gè)月部分原球莖能誘導(dǎo)成苗。但是不足之處在于成苗率情況沒(méi)有數(shù)據(jù)顯示。在另一 艮道中(Yongqin Chen, Xiao Liu, Youqi Liu. In vitro plant regeneration from the immature seeds of Cymbidium faberi[J]. Plant Cell, Tissue and Organ Culture，2005，81 :247 251)，對(duì)楊寧生文獻(xiàn)的配方改進(jìn)為，①蕙蘭原球莖在改 良MS培養(yǎng)基+NAA 0. 5-1. Omg/L+6-BA 2_5mg/L培養(yǎng)60天誘導(dǎo)芽；②轉(zhuǎn)至改良MS培養(yǎng)基 +Ac (活性碳)lg/L中培養(yǎng)50天后生根。但是，該方法仍然存在改良MS培養(yǎng)基母液的配制 較為復(fù)雜，生芽與生根需要分兩步進(jìn)行，增加藥品成本與人工成本的不足。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服現(xiàn)有蕙蘭組培配方復(fù)雜，生芽與生根需要分步進(jìn)行，以及藥用成本與人 工成本高的不足，本發(fā)明提供一種蕙蘭原球莖或根狀莖組織培養(yǎng)一步成苗的配方，利用該 配方可以實(shí)現(xiàn)一步成苗，有效地解決了問(wèn)題。本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是一種中國(guó)蕙蘭組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基，是在花寶1號(hào)基本培養(yǎng)基中添加吲哚丁酸 (IBA)O. 5mg/L，萘乙酸(NAA)O. 2mg/L,蔗糖 30g/L,瓊脂 4g/L，活性炭 lg/L，椰乳 10% (V/ V)，pH 為 5.6。本發(fā)明還公開(kāi)了使用上述配方進(jìn)行組織培養(yǎng)的方法，其步驟是1)選材選生長(zhǎng)健康的綠色原球莖或根狀莖；2)按以下配方配制培養(yǎng)基花寶1號(hào)基本培養(yǎng)基+IBA 0. 5mg/L+NAA 0. 2mg/L+蔗 糖 30g/L+ 瓊脂 4g/L，活性炭 lg/L+ 椰乳 10% (V/V)，pH 為 5. 6 ；3)接種培養(yǎng)將原球莖或根狀莖接入到上述步驟2)的培養(yǎng)基中，放在25士2°C、光 照2000-30001x的培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)至生根成苗。本發(fā)明的有益效果體現(xiàn)在1)該方法操作簡(jiǎn)便。步驟減少后，藥品成本與人工成本降低，污染率降低。2)實(shí)用效果好。在接種后2個(gè)月開(kāi)始發(fā)芽，3個(gè)月開(kāi)始生根，5個(gè)月80%的原球莖 生根成苗，可進(jìn)行煉苗移栽，縮短了蕙蘭種苗生產(chǎn)和育種周期。


圖1是原球莖接入本發(fā)明培養(yǎng)基；圖2是原球莖在培養(yǎng)基中發(fā)芽生根；圖3是組培苗生根成苗。
具體實(shí)施例方式在本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)，除非有另外說(shuō)明，一般具有本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常 理解的含義。下面結(jié)合具體的制備實(shí)施例和應(yīng)用實(shí)施例，并參照數(shù)據(jù)進(jìn)一步詳細(xì)地描述本發(fā) 明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例只是為了舉例說(shuō)明本發(fā)明，而非以任何方式限制本發(fā)明的范圍。在以下的實(shí)施例中，未詳細(xì)描述的各種過(guò)程和方法是本領(lǐng)域中公知的常規(guī)方法。 所用試劑的來(lái)源、商品名以及有必要列出其組成成分者，均在首次出現(xiàn)時(shí)標(biāo)明，其后所用相 同試劑如無(wú)特殊說(shuō)明，均以首次標(biāo)明的內(nèi)容相同?；▽?號(hào)購(gòu)于北京康倍斯科技有限公司。實(shí)施例1 將蕙蘭品種‘老極品’ X ‘泰素’后，獲得種子，在萌發(fā)培養(yǎng)基上培養(yǎng)8-10個(gè)月，獲 得原球莖或根狀莖后，按本發(fā)明方法培養(yǎng)1)選擇健康的綠色原球莖或根狀莖為材；2)配培養(yǎng)基用花寶1號(hào)做為基本培養(yǎng)基，添加0. 5mg/L IBA+0. 2mg/L NAA附加 蔗糖30g · L—1，瓊脂4g · ΙΛ活性炭Ig · L—1，椰乳10 % (V/V)，PH為5. 6，分裝到三角瓶中121 °C 滅菌 20min ；3)接種將步驟1)選好的材質(zhì)接種在步驟2)的培養(yǎng)基上，盡量帶塊接不要切開(kāi) 或掰開(kāi)；每瓶接6-8個(gè)原球莖(圖1)；4)培養(yǎng)條件放在25士2°C培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，光照2000-30001x ；在接種后2個(gè)月左右部分發(fā)芽，3個(gè)月芽長(zhǎng)高、綻開(kāi)葉，有的部分生根，根數(shù)2-3條， 根長(zhǎng)0. 8-4cm不等(圖2)，4個(gè)月左右根苗變粗壯，5個(gè)月左右大部分生根成苗(圖3)，生 根率達(dá)80%左右，生根數(shù)4-6條。有的可進(jìn)行煉苗移栽。有的再放幾個(gè)月根系和苗繼續(xù)變 粗壯。本發(fā)明不限于這些公開(kāi)的實(shí)施方案，本發(fā)明將覆蓋在專(zhuān)利書(shū)中所描述的范圍，以 及權(quán)利要求范圍的各種變型和等效變化。
權(quán)利要求
一種中國(guó)蕙蘭組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基，是以花寶1號(hào)為基本培養(yǎng)基，其特征在于，在基本培養(yǎng)基中添加吲哚丁酸0.5mg/L，萘乙酸0.2mg/L，蔗糖30g/L，瓊脂4g/L，活性炭1g/L，椰乳10％(V/V)，pH為5.6。
2.一種中國(guó)蕙蘭組織培養(yǎng)的方法，包括選材、培養(yǎng)基配制、接種培養(yǎng)的步驟，其特征 在于，所說(shuō)的培養(yǎng)基的配方為以花寶1號(hào)為基本培養(yǎng)基，在基本培養(yǎng)基中添加吲哚丁酸 0. 5mg/L，萘乙酸 0. 2mg/L,蔗糖 30g/L,瓊脂 4g/L，活性炭 lg/L,椰乳 10% (V/V)，pH 為 5. 6。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，具體步驟為1)選材選生長(zhǎng)健康的綠色原球莖或根狀莖；2)按以下配方配制培養(yǎng)基花寶1號(hào)基本培養(yǎng)基+IBA0. 5mg/L+NAA 0. 2mg/L+蔗糖 30g/L+ 瓊脂 4g/L，活性炭 lg/L+ 椰乳 10% (V/V)，pH 為 5. 6 ；3)接種培養(yǎng)將原球莖或根狀莖接入到上述步驟2)的培養(yǎng)基中，放在25士2°C、光照 2000-30001x的培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)至生根成苗。
全文摘要
本發(fā)明涉及植物的組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種中國(guó)蕙蘭組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方，以及培養(yǎng)方法。本發(fā)明的培養(yǎng)基是以花寶1號(hào)為基本培養(yǎng)基，在基本培養(yǎng)基中添加吲哚丁酸0.5mg/L，萘乙酸0.2mg/L，蔗糖30g/L，瓊脂4g/L，活性炭1g/L，椰乳10％(V/V)，pH為5.6。在進(jìn)行組織培養(yǎng)時(shí)，將選好的健康原球莖或根狀莖接種到上述培養(yǎng)基中培養(yǎng)至成苗。該方法操作簡(jiǎn)便，一步成苗，藥品成本與人工成本降低，污染率降低，實(shí)用效果好，縮短了蕙蘭種苗生產(chǎn)和育種周期。
文檔編號(hào)A01H4/00GK101889550SQ201010244860
公開(kāi)日2010年11月24日 申請(qǐng)日期2010年8月4日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月4日
發(fā)明者俞麗琴, 孔芬, 陶俊 申請(qǐng)人:揚(yáng)州大學(xué)