專利名稱：一種食藥用真菌液體種子的培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及發(fā)酵工程領(lǐng)域，具體的說是一種食藥用真菌液體種子的培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
液體種子是藥用真菌液體發(fā)酵的基礎(chǔ)，是決定液體發(fā)酵成敗和效果好壞的關(guān)鍵因 素之一，優(yōu)良的種子不僅能使液體發(fā)酵過程中菌絲體產(chǎn)量和多糖產(chǎn)量顯著增加，而且能夠 縮短發(fā)酵時間，提高發(fā)酵設(shè)備的利用率；液體種子也是藥用真菌固體發(fā)酵和蘑菇栽培中的 優(yōu)良種子，可以顯著提高發(fā)菌速度，縮短發(fā)菌期，提早蘑菇收獲時間和提高蘑菇產(chǎn)量。以往液體種子生產(chǎn)中，多以菌絲體產(chǎn)量或菌絲球個數(shù)為單一考察對象，沒有同時 考察兩者的生產(chǎn)技術(shù)；對培養(yǎng)基配方的選擇也是從少數(shù)幾種配方中篩選，沒有通過數(shù)學(xué)模 型進(jìn)行優(yōu)化，獲得最佳培養(yǎng)基配方；對培養(yǎng)方法也缺少創(chuàng)新性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種生活力強(qiáng)、菌 絲體產(chǎn)量和菌絲球個數(shù)均顯著增加的液體種子的培養(yǎng)方法。本發(fā)明解決上述技術(shù)問題采用的技術(shù)方案是提供一種通過均勻設(shè)計(jì)數(shù)學(xué)模型優(yōu) 化出的培養(yǎng)基配方，結(jié)合靜止預(yù)培養(yǎng)方法，培養(yǎng)優(yōu)良液體種子。其包括如下步驟(1)選用的培養(yǎng)基配方(克/升)為葡萄糖15-35，馬鈴薯100-200，酵母膏 15-17. 5，牛肉膏12. 5-17. 5。制作固體培養(yǎng)基時，在上述配方中加入20克瓊脂。(2)從保藏的食藥用真菌菌種中，無菌操作接種到平板固體培養(yǎng)基上，在20-30°C 下恒溫培養(yǎng)5-10天；(3)用直徑為10毫米打孔器從上述平板菌種邊緣生長旺盛處打孔，取菌種10 土夬， 接種于裝有IOOmL液體培養(yǎng)基的250mL三角瓶中；(4)在20_30°C下靜止預(yù)培養(yǎng)1-2天；(5)轉(zhuǎn)入搖床中，于20_30°C和120轉(zhuǎn)/分鐘恒溫?fù)u床繼續(xù)培養(yǎng)至8_10天，即可獲 得優(yōu)良液體種子。本發(fā)明方法所用的培養(yǎng)基配方與其它液體種子培養(yǎng)中的配方顯著不同在于第一 是同時以菌絲球個數(shù)和菌絲體產(chǎn)量兩個指標(biāo)為優(yōu)化指標(biāo)獲得的，避免了單一篩選指標(biāo)的缺 陷；第二是經(jīng)過均勻設(shè)計(jì)數(shù)學(xué)模型優(yōu)化獲得的配方，更科學(xué)合理；第三配方中的營養(yǎng)物質(zhì) 豐富與搭配合理，不僅為種子生長提供了充足的營養(yǎng)，而且為其創(chuàng)造了適宜的生長環(huán)境。本發(fā)明方法與其它液體種子培養(yǎng)方法的另一個顯著不同在于靜止預(yù)培養(yǎng)1-2天， 可顯著促進(jìn)菌絲體的萌發(fā)，增加生長點(diǎn)，從而獲得菌絲球個數(shù)和菌絲體產(chǎn)量均顯著增加、菌 種生活力強(qiáng)的優(yōu)良液體種子。本發(fā)明生產(chǎn)的液體種子的菌絲球個數(shù)和菌絲體產(chǎn)量分別比對照培養(yǎng)基配方和培 養(yǎng)方法提高7-14倍和2-4倍，而且種子處于對數(shù)旺盛生長期，生活力強(qiáng)。本發(fā)明生產(chǎn)的液體種子不僅可用于工業(yè)化液體發(fā)酵，也可用于固體發(fā)酵，以及蘑菇栽培中。用于液體發(fā)酵生產(chǎn)菌絲體則可使菌絲體產(chǎn)量達(dá)到15. 4-19. 2克/升，比對照提 高2. 6-3. 2倍。本發(fā)明適合于生產(chǎn)真菌優(yōu)良液體種子。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明。實(shí)施例1一種食藥用真菌液體種子的培養(yǎng)方法，其所用培養(yǎng)基配方(克/升)為葡萄糖15， 馬鈴薯100，酵母膏15，牛肉膏12. 5，首先從保藏的菌種中，無菌操作接種到平板固體培養(yǎng) 基上，在20°C下恒溫培養(yǎng)8天；然后用直徑為10毫米打孔器從上述平板菌種邊緣生長旺盛 處打孔，取菌種10塊，接種于裝有IOOmL液體培養(yǎng)基的250mL三角瓶中；在20°C下靜止預(yù) 培養(yǎng)1天；最后轉(zhuǎn)入搖床中，于20°C和120轉(zhuǎn)/分鐘恒溫?fù)u床培養(yǎng)10天，即可獲得優(yōu)良液 體種子。本發(fā)明生產(chǎn)的液體種子中，菌絲體產(chǎn)量為7. 4克/升，菌絲球個數(shù)為122. 8個/毫 升，分別比對照培養(yǎng)方法提高2. 8倍和7. 8倍，而且，菌種處于對數(shù)旺盛生長期，非常適合于 作為液體種子用于大規(guī)模液體發(fā)酵或固體發(fā)酵。實(shí)施例2一種食藥用真菌液體種子的培養(yǎng)方法，其所用培養(yǎng)基配方(克/升)為葡萄糖25， 馬鈴薯150，酵母膏15，牛肉膏15，首先從保藏的菌種中，無菌操作接種到平板固體培養(yǎng)基 上，在30°C下恒溫培養(yǎng)5天；然后用直徑為10毫米打孔器從上述平板菌種邊緣生長旺盛處 打孔，取菌種10塊，接種于裝有IOOmL液體培養(yǎng)基的250mL三角瓶中；在30°C下靜止預(yù)培 養(yǎng)1天；最后轉(zhuǎn)入搖床中，于30°C和120轉(zhuǎn)/分鐘恒溫?fù)u床培養(yǎng)8天，即可獲得優(yōu)良液體種 子。本發(fā)明生產(chǎn)的液體種子中，菌絲體產(chǎn)量為8. 3克/升，菌絲球個數(shù)為192. 5個/毫升， 分別比對照培養(yǎng)方法提高3. 2倍和12. 2倍，而且，菌種處于對數(shù)旺盛生長期，非常適合于作 為液體種子用于大規(guī)模液體發(fā)酵或固體發(fā)酵。實(shí)施例3一種食藥用真菌液體種子的培養(yǎng)方法，其所用培養(yǎng)基配方(克/升)為葡萄糖35， 馬鈴薯200，酵母膏17. 5，牛肉膏17. 5，首先從保藏的菌種中，無菌操作接種到平板固體培 養(yǎng)基上，在25°C下恒溫培養(yǎng)8天；然后用直徑為10毫米打孔器從上述平板菌種邊緣生長旺 盛處打孔，取菌種10塊，接種于裝有IOOmL液體培養(yǎng)基的250mL三角瓶中；在25°C下靜止 預(yù)培養(yǎng)2天；最后轉(zhuǎn)入搖床中，于25°C和120轉(zhuǎn)/分鐘恒溫?fù)u床培養(yǎng)9天，即可獲得優(yōu)良液 體種子。本發(fā)明生產(chǎn)的液體種子中，菌絲體產(chǎn)量為8. 8克/升，菌絲球個數(shù)為206. 3個/毫 升，分別比對照培養(yǎng)方法提高3. 4倍和13. 1倍，而且，菌種處于對數(shù)旺盛生長期，非常適合 于作為液體種子用于大規(guī)模液體發(fā)酵或固體發(fā)酵。
權(quán)利要求
一種食藥用真菌液體種子的培養(yǎng)方法，其特征在于包括如下步驟(1)選用的培養(yǎng)基配方(克/升)為葡萄糖15 35，馬鈴薯100 200，酵母膏15 17.5，牛肉膏12.5 17.5；(2)從保藏的食藥用真菌菌種中，無菌操作接種到平板固體培養(yǎng)基上，在20 30℃下恒溫培養(yǎng)5 10天；(3)用直徑為10毫米打孔器從上述平板菌種邊緣生長旺盛處打孔，取菌種10塊，接種于裝有100mL液體培養(yǎng)基的250mL三角瓶中；(4)在20 30℃下靜止預(yù)培養(yǎng)1 2天；(5)轉(zhuǎn)入搖床中，于20 30℃和120轉(zhuǎn)/分鐘恒溫?fù)u床繼續(xù)培養(yǎng)至8 10天，即可獲得優(yōu)良液體種子。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的食藥用真菌液體種子培養(yǎng)方法，其特征在于所用的培養(yǎng)基 為固體，其組成配方(克/升)為葡萄糖15-35，馬鈴薯100-200，酵母膏15-17. 5，牛肉膏 12. 5-17. 5，瓊脂 20 克。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液體種子培養(yǎng)方法，其特征在于所述的方法也適用于自動發(fā) 酵罐發(fā)酵生產(chǎn)液體種子。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種食藥用真菌液體種子的培養(yǎng)方法，首先，向裝有100mL特定配方的液體培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，接入10塊直徑為10毫米的平板菌種，在20-30℃下靜止預(yù)培養(yǎng)1-2天后，再于20-30℃和120轉(zhuǎn)/分鐘下恒溫?fù)u床繼續(xù)培養(yǎng)至8-10天，即可培養(yǎng)獲得優(yōu)良液體種子。本發(fā)明培養(yǎng)的液體種子的菌絲球個數(shù)和菌絲體生物量均顯著增加，分別比在對照配方和培養(yǎng)方法下提高7-14倍和2-4倍，而且種子處于對數(shù)生長期，生活力強(qiáng)，是優(yōu)良的液體種子。本發(fā)明可用于各種食藥用真菌三角瓶液體種子的培養(yǎng)，以及自動發(fā)酵罐生產(chǎn)液體種子。培養(yǎng)的液體種子不僅可用于液體發(fā)酵，也可用于固體發(fā)酵，以及蘑菇栽培中。
文檔編號C05G1/00GK101940128SQ20101025776
公開日2011年1月12日 申請日期2010年8月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月17日
發(fā)明者朱國振, 董靜, 閆培生, 高秀君 申請人:哈爾濱工業(yè)大學(xué)(威海)