專利名稱：光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液在大菱鲆養(yǎng)成中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于生物技術領域，涉及菌類及其應用，特別涉及光合細菌和枯草芽孢桿 菌混合菌液及其在大菱鲆養(yǎng)成過程中的應用。
背景技術：
大菱鲆，性格溫順，體形優(yōu)美，肌肉豐厚白嫩，骨刺少，內臟團小，出肉率高，鰭邊和 皮下含有豐富的膠質蛋白，口感良好，風味獨特，深受消費者喜愛。大菱鲆集群性強，相互間 沒有殘食現(xiàn)象，故適合于高密度養(yǎng)殖。在一個有限的水體環(huán)境中放養(yǎng)大量的多寶魚，大量投 喂高蛋白飼料，殘餌加上魚自身的排泄物，池塘內淤積大量的有機物，超過了水體的自凈能 力，造成水質惡化，病原微生物大量孳生，致使大菱鲆發(fā)病，養(yǎng)殖水體的生態(tài)環(huán)境遭到破壞。 為防治魚病而施放的抗生素在殺滅病原微生物的同時，也將水體內的有益菌殺死。由于沒 有從根本上杜絕病原微生物的發(fā)生，致使魚病頻繁發(fā)生。加上反復使用抗生素，導致病原微 生物的抗藥性增加，又給病害防治工作帶來了困難。養(yǎng)殖池大量換水直接對受納環(huán)境造成 污染；而按照相關標準的要求對養(yǎng)殖廢水進行處理，又需要較高的投資，使養(yǎng)殖成本增加。 為了解決多寶魚的藥殘問題及水質問題，給養(yǎng)殖戶找到好的防病治病及改善水質的辦法與 途徑，給消費者提供放心無公害水產(chǎn)品，使用生物防治方法具有強大的優(yōu)越性。光合細菌，廣泛分布于湖泊、池塘、水田、河川、海洋及濕潤土壤中。能以養(yǎng)殖水體 中的有機物為碳源進行光合作用，起到凈化水質、抑制病原微生物生長繁殖和提高水產(chǎn)動 物免疫力的作用。光合細菌菌體蛋白質含量高，并含有大量促進魚蝦生長的活性因子，如生 物素、維生素、類胡蘿卜素等，可明顯促進養(yǎng)殖生物的生長發(fā)育，縮短養(yǎng)殖周期?？莶菅挎邨U菌屬于對人畜無毒無害的細菌，在自然界分布廣泛，國內外均允許將 其用于飼料添加劑。枯草芽孢桿菌在水中增殖后產(chǎn)生的許多胞外酶能把養(yǎng)殖水體、底泥中 的淀粉、蛋白質、脂肪等有機質分解，從而達到降低養(yǎng)殖水體富營養(yǎng)化和減少底泥生成的作 用。具有生長速度快、抗逆性好、穩(wěn)定性強及能有效抑制有害菌生長等特點，其在水產(chǎn)中的 應用具有極大的潛力和優(yōu)勢。用光合細菌和枯草芽孢桿菌的混合菌液促進大菱鲆生長、提其高免疫力，兼具兩 者的優(yōu)勢，使得這一混合菌液適合作為促進大菱鲆生長、提高魚類免疫、成活率的混合菌液 及其環(huán)境中致病菌的生物凈化因子，從而克服了抗生素濫用帶來的副作用和對養(yǎng)殖廢水進 行處理的高成本，為人類提供了安全、綠色、無公害的水產(chǎn)養(yǎng)殖模式。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有微生物制劑不能同時促進大菱鲆的生長、提高免疫力 及其改善水質的不足之處，提供一種光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液在在大菱鲆養(yǎng)成中 的應用。本發(fā)明的目的通過以下技術方案來實現(xiàn)光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液在在大菱鲆養(yǎng)成中的應用。
所述光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液中光合細菌和枯草芽孢桿菌細菌數(shù)之比 為 1 1。所述光合細菌為紅假單胞菌(Rhodopseudomonas sp.，CGMCC1. 2193)、沼澤紅 假單胞菌(Rhodopseudomonas palustris, CGMCC1. 2352)或莢膜紅細胞(Rhodobacter capsulatus, GIM1. 168)中的至少一種。所述枯草芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌(Bacillus Subtilis Cohn，GIM1. 136)。所述光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液在大菱鲆養(yǎng)成中的應用是將光合細菌和 枯草芽孢桿菌混合菌液潑灑于水體中，使水體中光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液終濃度 為 10-107cfu/mL。所述光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液在在大菱鲆養(yǎng)成中的應用是將飼料用濃 度為10-107Cfu/mL的光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液浸泡15 45min。本發(fā)明利用光合細菌和枯草芽孢桿菌凈化水質、抑制病原微生物生長繁殖、提高 水產(chǎn)動物免疫力及促進水產(chǎn)動物的生長，從而實現(xiàn)促進大菱鲆生長、提高免疫力的目的。本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術具有如下的優(yōu)點及效果1、本發(fā)明所述混合菌液在改善水質及控制養(yǎng)殖環(huán)境中病害菌中效果顯著，同時全 池換水時間可延長至40天一次，大大降低了養(yǎng)殖成本。2、本發(fā)明能提高養(yǎng)殖生物的成活率、體重增長率、體長增長率及提高魚類免疫力。3、本發(fā)明所述微生物制劑在水產(chǎn)動物養(yǎng)殖的應用中安全性好。利用光合細菌和枯草芽孢桿菌對病原菌的拮抗作用、利用水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境中的有機 物質、產(chǎn)生一些有利于水產(chǎn)動物生長的活性因子而達到改善水質及促進水產(chǎn)動物生長的方 法屬于生物方法，從而克服了藥物濫用帶來的副作用4、本發(fā)明所述的混合菌液有效、環(huán)保、不產(chǎn)生病原菌抗性，應用前景良好。
具體實施例方式下面結合實施例對本發(fā)明作進一步詳細的描述，但本發(fā)明的實施方式不限于此。實施例1光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液制備(1)光合細菌菌液的制備濃度為109cfu/mL 的紅假單胞菌(Rhodopseudomonas sp.，CGMCC 1. 2193，購于中 國普通微生物菌種保藏管理中心)按培養(yǎng)基體積的0. 接種到優(yōu)化RCVBN液體培養(yǎng)基中， 于30°C、光照強度為30001x下光照厭氧培養(yǎng)48h后得到的菌液按培養(yǎng)基體積的10%接種 入優(yōu)化的RCVBN培養(yǎng)基中，光照厭氧發(fā)酵培養(yǎng)48h，然后6000rpm離心15min獲得菌體，往菌 體中加入無菌的磷酸鹽緩沖液可得到濃度為IO12CfuAiL的光合細菌菌液。(2)枯草芽孢桿菌菌液的制備濃度為109cfu/mL 的枯草芽孢桿菌(Bacillus Subtilis Cohn, GIM1. 136，購于廣 東省微生物研究所)按培養(yǎng)基體積的0. 接種到營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，于37°C、250rpm搖 床活化培養(yǎng)18h，得到的菌液按培養(yǎng)基體積的10%接種入營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，置于37°C、 250rpm搖床培養(yǎng)24h，然后6000rpm離心15min獲得菌體，往菌體中加入無菌的磷酸鹽緩沖 液可得到濃度為IO12CfuAiL的光合細菌菌液。(3)將光合細菌濃縮液與枯草芽孢桿菌菌液按細菌數(shù)1 1混合。
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實施例2大菱鲆養(yǎng)殖實驗每個大菱鲆養(yǎng)殖水池大菱鲆5000尾(大菱鲆來源于山東省某魚場)，大菱鲆均重 25 士 0. 5g，水溫為 25 0C ο平均分為A-D共4個試驗組，B、C、D每個試驗組有8個小組，分別為Bi、Cl、Dl ； B2、C2、D2 ；B3、C3、D3 ；B4、C4、D4 ；B5、C5、D5 ；B6、C6、D6 ；B7、C7、D7 ；B8、C8、D8 ；B1-D8 每小 組再分為4組，即B11-B14…D81-D84，每組2個重復。對4組試驗魚初始體重進行方差整 齊性檢驗，組間差異不顯著(P > 0. 05)。五組試驗組的處理如下A組工廠生產(chǎn)的養(yǎng)殖方式(對照組)。B組在水中潑灑光合細菌和枯草芽孢桿菌的混合體菌液，使水體中光合細菌和 枯草芽孢桿菌混合菌液濃度分別達到10、103、105、107cfU/mL，喂食普通飼料。C組在水中投放經(jīng)濃度為10、103、105、107Cfu/mL的光合細菌和枯草芽孢桿菌的 混合菌液浸泡后的飼料。D組在水中加入光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液，使菌體濃度達到分別達到 10、103、105、107cfu/mL，同時分別投放經(jīng)濃度為10、ΙΟ3、105、107cfu/mL的光合細菌和枯草芽 孢桿菌混合菌液浸泡后的飼料。Bi、Cl、Dl組每5天全池換水一次，換水后重新加菌B2、C2、D2組每10天全池換水一次，換水后重新加菌B3、C3、D3組每15天全池換水一次，換水后重新加菌B4、C4、D4組每20天全池換水一次，換水后重新加菌B5、C5、D5組每25天全池換水一次，換水后重新加菌B6、C6、D6組每30天全池換水一次，換水后重新加菌B7、C7、D7組每35天全池換水一次，換水后重新加菌B8、C8、D8組每40天全池換水一次，換水后重新加菌B11、C11、D11...D81 投放的菌液濃度為 10cfu/mLB12、C12、D12…D82 投放的菌液濃度為 103cfu/mLB13、C13、D13…D83 投放的菌液濃度為 105cfu/mLB14、C14、D14... D84 投放的菌液濃度為 107cfu/mL即 B11-B14…D81-D84，每組 2 個重復。所用飼料符合中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標準《無公害食品漁用配合飼料安全限 量》(NY5072-2002)的規(guī)定。試驗結束測定養(yǎng)殖池的水質情況、魚的生長指標及免疫指標。I水質檢測水質檢測包括氨態(tài)氮，亞硝酸鹽氮，COD的檢測。氨態(tài)氮用次溴酸納氧化法法測定(GB12763. 4-91)；亞硝酸鹽氮用重氮-偶氮光度 法測定(GB12763. 4-91) ；COD用堿性高錳酸鉀法測定(HY003. 4-91)。表一水質的檢測
權利要求
光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液在在大菱鲆養(yǎng)成中的應用。
2.根據(jù)權利要求1所述光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液在大菱鲆養(yǎng)成中的應用，其 特征在于所述光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液中光合細菌和枯草芽孢桿菌細菌數(shù)之比 為 1 1。
3.根據(jù)權利要求1所述光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液在大菱鲆養(yǎng)成中的應用， 其特征在于所述光合細菌為紅假單胞菌(Rhodopseudomonas sp.，CGMCC 1.2193)、沼澤 紅假單胞菌(Rhodopseudomonas palustris, CGMCC 1. 2352)或莢膜紅細胞(Rhodobacter capsulatus, GIM1. 168)中的至少一種。
4.根據(jù)權利要求1所述光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液在大菱鲆養(yǎng)成中的應用，其 特征在于所述枯草芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌(Bacillus Subtilis Cohn, GIM1. 136)。
5.根據(jù)權利要求1所述光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液在大菱鲆養(yǎng)成中的應用，其 特征在于所述光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液在大菱鲆養(yǎng)成中的應用是將光合細菌和 枯草芽孢桿菌混合菌液潑灑于水體中，使水體中光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液終濃度 為 10-107cfu/mL。
6.根據(jù)權利要求1所述光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液在大菱鲆養(yǎng)成中的應用，其 特征在于所述光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液在大菱鲆養(yǎng)成中的應用是將飼料用濃度 為10-107Cfu/mL的光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液浸泡15 45min。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液在大菱鲆養(yǎng)成中的應用，應用是將光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液潑灑于水體中，使水體中光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液終濃度為10-107cfu/mL，或者將飼料用濃度為10-107cfu/mL的光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液浸泡15～45min。該微生物制劑應用于大菱鲆養(yǎng)殖過程中，能有效改善水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境、提高大菱鲆養(yǎng)殖過程中的成活率、免疫力、促進其生長及改善水質。
文檔編號A23K1/18GK101940177SQ201010268508
公開日2011年1月12日 申請日期2010年8月31日 優(yōu)先權日2010年8月31日
發(fā)明者肖小麗, 蔡俊鵬 申請人:華南理工大學