專利名稱：一種大菱鲆育苗方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于水產(chǎn)品養(yǎng)殖領(lǐng)域，涉及大菱鲆育苗方法。
背景技術(shù)：
大菱鲆(Scophthalmus maximus)英文名Turbot，原產(chǎn)于英國(guó)，主要分布于大西洋 東岸的北海、黑海西部及地中海沿岸。大菱鲆味鮮美，風(fēng)味獨(dú)特，是歐美重要的名貴養(yǎng)殖魚 類。屬鰈形目、鲆科、大菱鲆屬。體扁平近似圓形，雙眼位于身體的左側(cè)。該魚體中部肌肉 層較厚，內(nèi)臟團(tuán)較小，含肉率高。表皮、肌肉及鱗片中富含膠質(zhì)。大菱鲆喜底棲，無(wú)眼的一側(cè) 貼底生活。覓餌時(shí)躍起捕食，平時(shí)活動(dòng)較少，性情溫和。大菱鲆為冷水性魚類，適于低溫生 活，最佳生長(zhǎng)水溫為14-18°C。個(gè)體發(fā)育上，初期孵化的仔魚全長(zhǎng)為2-3mm，孵化后第2天開 口并攝食。隨著養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大，各種病害發(fā)生的頻率和規(guī)模也在不斷增大，其中苗種 培育期間疾病造成的危害尤其嚴(yán)重。同時(shí)，由于設(shè)備簡(jiǎn)陋生產(chǎn)工藝不規(guī)范等，仔魚的成活率 普遍較低，平均只有3% _5%，成活率過低，一方面造成單位水體出苗量少，同時(shí)增加了培 苗成本，帶來了人力、財(cái)力和資源的巨大浪費(fèi)?？莶菅挎邨U菌抗逆性好、穩(wěn)定性強(qiáng)及能有效抑制有害菌生長(zhǎng)，能在水體中迅速繁 殖，并產(chǎn)生大量的胞外酶類，從而大量消耗池塘中的殘餌和動(dòng)物排泄物等大分子有機(jī)物。大 分子有機(jī)物被分解為小分子的有機(jī)酸、氨基酸等物質(zhì)，能為水體中的生物提供營(yíng)養(yǎng)，促進(jìn)水 體養(yǎng)殖生物的生長(zhǎng)，其在水產(chǎn)中的應(yīng)用具有極大的潛力和優(yōu)勢(shì)。光合細(xì)菌營(yíng)養(yǎng)非常豐富，不僅粗蛋白、氨基酸含量高，而且富含各種B族維生素、 輔酶Q、葉酸、生物素及其他未知的多種生物活性物質(zhì)，還含有豐富的類胡蘿卜素，是一種營(yíng) 養(yǎng)價(jià)值高且營(yíng)養(yǎng)成分較全的細(xì)菌，可明顯促進(jìn)養(yǎng)殖生物的生長(zhǎng)、縮短養(yǎng)殖周期、提高魚苗成 活率等。同時(shí)由于光合細(xì)菌有效地改善了養(yǎng)殖池的生態(tài)環(huán)境，如水質(zhì)凈化，有益微生物菌群 增多等，使得水產(chǎn)養(yǎng)殖病害減少，為養(yǎng)殖動(dòng)物營(yíng)造良好的生存環(huán)境。結(jié)合光合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌兩者的優(yōu)勢(shì)制成的混合菌液，既可以達(dá)到提高育苗 成活率、降低白化率、畸形率、促進(jìn)魚苗生長(zhǎng)、提高魚苗免疫力，還可以改善水質(zhì)的功效?？?服了設(shè)備簡(jiǎn)陋及工藝簡(jiǎn)單帶來的低成活率及高成本，提供了一種安全、綠色、無(wú)公害的水產(chǎn) 育苗新方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有大菱鲆育苗技術(shù)的成活率低、成本高的不足之處，提
供一種大菱鲆育苗方法。本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)一種大菱鲆育苗方法如下(1)親魚選擇選擇體形完整、色澤正常、健康活潑、體表光亮、體重在1. 5-2. Okg的 大菱鲆作為親魚；(2)親魚培養(yǎng)按雌雄(1 3) 1的比例，在親魚培育池中進(jìn)行培育，培育池中加
3入光合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌混合菌液，使培育池中的光合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌混合菌液濃 度為10-107cfu/mL，投飼料前，將所用飼料要用濃度為10-107CfU/mL的光合細(xì)菌和枯草芽 孢桿菌混合菌液浸泡；(3)采卵、受精、孵化大菱鲆在達(dá)到性成熟后，分別采集卵子和精液，進(jìn)行人工受 精，受精后，將受精卵移入孵化箱內(nèi)進(jìn)行孵化，獲得初孵仔苗。(4)仔魚培育將初孵仔魚放入育苗池內(nèi)進(jìn)行培育，育苗池中加入光合細(xì)菌和枯草 芽孢桿菌混合菌液，使育苗池中光合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌混合菌液濃度為10-107cfU/mL， 將所用飼料用濃度為IO-IO7CfuAiL的光合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌混合菌液浸泡，經(jīng)過80-90 天的飼養(yǎng)，即可進(jìn)入養(yǎng)成階段。所述親魚培養(yǎng)過程中水溫控制在19_20°C，光照調(diào)控在20001UX，光照時(shí)間每日 9-20小時(shí)，培育時(shí)間2 3個(gè)月。所述孵化溫度為10 20°C進(jìn)行孵化，經(jīng)過2 3天的完成孵化。所述育苗池中初孵仔魚的布池密度為2萬(wàn)粒/m3，水溫為18 - 2 0°C，鹽度為 26-28%。，pH 為 8. 0-8. 2，溶解氧 5. 0-7. Omg/L，充氣量控制在 30 60L/h/m2。所述光合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌混合菌液中光合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌細(xì)菌數(shù)之比 為 1 1。所述光合細(xì)菌為紅假單胞菌(Rhodopseudomonas sp.，CGMCC 1.2193，購(gòu)于中 國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心)、沼澤紅假單胞菌(Rhodopseudomonaspalustris， CGMCC 1.2352，購(gòu)于中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心)或莢膜紅細(xì)胞(Rhodobacter capsulatus, GIM1. 168，購(gòu)于中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心)中的至少一種，枯草芽孢 桿菌(Bacillus Subtilis Cohn，GIM1. 136，購(gòu)于廣東省微生物研究所)。本發(fā)明大菱鲆育苗方法利用光合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌凈化水質(zhì)、抑制病原微生物 生長(zhǎng)繁殖、提高水產(chǎn)動(dòng)物免疫力及促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)，從而實(shí)現(xiàn)提高魚苗的成活率、促進(jìn) 大菱鲆生長(zhǎng)等的目的。本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果1、本發(fā)明中所述大菱鲆育苗方法在改善水質(zhì)上有顯著效果，能夠有效降解氨氮等 有害物質(zhì)，換水時(shí)間可延長(zhǎng)至40天一次，大大節(jié)約了育苗成本。2、本發(fā)明能提高大菱鲆育苗的成活率、免疫力、生長(zhǎng)速度及降低白化率、畸形率。3、本發(fā)明所述大菱鲆育苗方法在水產(chǎn)動(dòng)物養(yǎng)殖的應(yīng)用中安全性好。利用光合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌對(duì)病原菌的拮抗作用、利用水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境中的有機(jī) 物質(zhì)、產(chǎn)生一些有利于水產(chǎn)動(dòng)物生長(zhǎng)的活性因子而達(dá)到提高大菱鲆育苗成活率等的方法屬 于生物方法，從而克服了設(shè)備簡(jiǎn)陋、低成活率所帶來的高成本。4、本發(fā)明所述大菱鲆育苗方法有效、環(huán)保、不產(chǎn)生病原菌抗性，應(yīng)用前景良好。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。實(shí)施例1光合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌混合菌液(1)光合細(xì)菌菌液的制備濃度為109cfu/mL 的紅假單胞菌(Rhodopseudomonas sp.，CGMCC 1. 2193，購(gòu)于中
4國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心)按培養(yǎng)基體積的0. 接種到優(yōu)化RCVBN液體培養(yǎng)基中， 于30°C、光照強(qiáng)度為30001x下光照厭氧培養(yǎng)48h后得到的菌液按培養(yǎng)基體積的10%接種 入優(yōu)化的RCVBN培養(yǎng)基中，光照厭氧發(fā)酵培養(yǎng)48h，然后6000rpm離心15min獲得菌體，往菌 體中加入無(wú)菌的磷酸鹽緩沖液可得到濃度為IO12CfuAiL的光合細(xì)菌菌液。(2)枯草芽孢桿菌菌液的制備濃度為109cfu/mL 的枯草芽孢桿菌(Bacillus Subtilis Cohn, GIM1. 136，購(gòu)于廣 東省微生物研究所)按培養(yǎng)基體積的0. 接種到營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，于37°C、250rpm搖 床活化培養(yǎng)18h，得到的菌液按培養(yǎng)基體積的10%接種入營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，置于37°C、 250rpm搖床培養(yǎng)24h，然后6000rpm離心15min獲得菌體，往菌體中加入無(wú)菌的磷酸鹽緩沖 液可得到濃度為IO12CfuAiL的光合細(xì)菌菌液。(3)將光合細(xì)菌濃縮液與枯草芽孢桿菌濃縮液按細(xì)菌數(shù)1 1混合。實(shí)施例2大菱鲆育苗實(shí)驗(yàn)具體實(shí)驗(yàn)步驟如下(1)親魚選擇從山東省某魚場(chǎng)2齡大菱鲆成魚中選擇體形完整、色澤正常、健康 活潑、體表光亮、生長(zhǎng)速度快、體重在1. 5-2. Okg范圍內(nèi)的600條大菱鲆成魚作為親魚。(2)親魚培養(yǎng)按雌雄(1 3) 1的比例，在親魚培育池中進(jìn)行培育，培育池中 加入光合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌混合菌液，使培育池中的光合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌混合菌液 濃度為10-107cfU/mL，投飼料前，將所用飼料要用分別用濃度為10、ΙΟ3、105、107cfu/mL的光 合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌混合菌液浸泡；親魚按照雌雄2 1比例進(jìn)行優(yōu)選。親魚在35m2的培育池中進(jìn)行強(qiáng)化培養(yǎng)，平均 4條/m2。培育池中的水先經(jīng)過二級(jí)砂濾后，加入光合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌混合菌液，使混 合菌液濃度分別達(dá)到10、103、105、107cfU/mL。所用配合飼料中同時(shí)添加親魚性腺發(fā)育所必 須的卵磷脂和不飽和脂肪酸。投餌前，所用飼料用濃度為10、103、105、107CfU/mL的光合細(xì) 菌和枯草芽孢桿菌混合菌液浸泡，分批投餌，每日投喂3次。培育池中水溫控制在19_20°C，光照調(diào)控在20001UX，光照時(shí)間由開始每日10小時(shí) 逐步增加到20小時(shí)，在合適的光照調(diào)控和營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化培育條件下，加上光合細(xì)菌和枯草芽孢 桿菌混合菌液的作用，親魚性腺發(fā)育加快，經(jīng)過2個(gè)月的溫光調(diào)控，親魚即可達(dá)到成熟產(chǎn)精 產(chǎn)卵。光合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌的混合菌液促進(jìn)了親魚的營(yíng)養(yǎng)吸收和快速生長(zhǎng)，保證性腺 發(fā)育正常、培育出優(yōu)良的受精卵。(3)采卵、受精、孵化大菱鲆在上述條件下培育至性成熟以后，將雌雄分開，分別采 集精液和卵子，人工受精。受精后，將沉浮卵分開，將孵卵(受精卵UOOOg移入孵化箱內(nèi)進(jìn) 行孵化。受精卵在14°c進(jìn)行孵化，經(jīng)過3天的時(shí)間完成孵化，獲得初孵仔苗。(4)仔魚培育將初孵仔魚放入育苗池內(nèi)進(jìn)行培育，所用飼料分別用濃度為10、103、 105、IO7CfuAiL的光合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌混合菌液浸泡，育苗池中初孵仔魚的布池密度為 2萬(wàn)粒/m3，苗種培育過程中的水溫為18-20°C，鹽度為27%。，pH為8. 0，溶解氧6. Omg/L，苗 種培育期間不斷充氣，前10天充氣量控制在30L/h/m2，仔魚開鰾后逐漸增加充氣量至60L/ h/m2，育苗期間及時(shí)清除池底部的沉淀物及水表面的雜物，及時(shí)分苗。實(shí)驗(yàn)設(shè)置不同的換水 頻率5天全池?fù)Q水一次、10天全池?fù)Q水一次、15天全池?fù)Q水一次、20天全池?fù)Q水一次、25 天全池?fù)Q水一次、30天全池?fù)Q水一次、35天全池?fù)Q水一次、40天全池?fù)Q水一次，每次換水后
5加光合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌的混合菌液，使水體中的菌體濃度達(dá)到10-107cfu/mL。加菌方 法為用相應(yīng)的池水稀釋菌液后，均勻潑灑全池，使菌液混合均勻。魚苗經(jīng)過80-90天的飼 養(yǎng)，即可進(jìn)入養(yǎng)成階段。投喂的飼料包括輪蟲、鹵蟲無(wú)節(jié)幼蟲、鹵蟲和顆粒飼料。19日齡投喂輪蟲，投喂密 度為10個(gè)/mL，25日齡投喂鹵蟲無(wú)節(jié)幼蟲，投喂密度為由開始的0.2個(gè)/mL逐漸增加到1 個(gè)/mL，35日齡投喂鹵蟲。要少投勤投，吃飽即可。投餌前，餌料分別用濃度為10、103、105、 IO7CfuAiL的光合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌的混合菌液浸泡。按照上述育苗方法，平均分為A-D共4個(gè)試驗(yàn)組，B、C、D每個(gè)試驗(yàn)組有8個(gè)小組， 分別為 Bi、Cl、Dl ；B2、C2、D2 ；B3、C3、D3 ；B4、C4、D4 ；B5、C5、D5 ；B6、C6、D6 ；B7、C7、D7 ；B8、 C8、D8 ；B1-D8每小組再分為4組，即B11-B14…D81-D84，每組2個(gè)重復(fù)。對(duì)4組試驗(yàn)魚初 始體重進(jìn)行方差整齊性檢驗(yàn)，組間差異不顯著(P > 0. 05)。五組試驗(yàn)組的處理如下A組工廠生產(chǎn)的養(yǎng)殖方式(對(duì)照組)。B組在水中潑灑光合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌混合體菌液，使水體中光合細(xì)菌和枯 草芽孢桿菌的混合菌液濃度分別達(dá)到10、103、105、107cfU/mL，喂食普通飼料。C組在水中投放經(jīng)濃度為10、103、105、107Cfu/mL的光合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌混 合菌液浸泡后的飼料。D組在水中加入光合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌的混合菌液，使菌體濃度達(dá)到分別達(dá) 到10、103、105、107cfu/mL，同時(shí)分別投放經(jīng)濃度為10、ΙΟ3、105、107cfu/mL的光合細(xì)菌和枯草 芽孢桿菌混合菌液浸泡后的飼料。Bi、Cl、Dl組每5天全池?fù)Q水一次，換水后重新加菌B2、C2、D2組每10天全池?fù)Q水一次，換水后重新加菌B3、C3、D3組每15天全池?fù)Q水一次，換水后重新加菌B4、C4、D4組每20天全池?fù)Q水一次，換水后重新加菌B5、C5、D5組每25天全池?fù)Q水一次，換水后重新加菌B6、C6、D6組每30天全池?fù)Q水一次，換水后重新加菌B7、C7、D7組每35天全池?fù)Q水一次，換水后重新加菌B8、C8、D8組每40天全池?fù)Q水一次，換水后重新加菌B11、C11、D11...D81 投放的菌液濃度為 10cfu/mLB12、C12、D12…D82 投放的菌液濃度為 103cfu/mLB13、C13、D13…D83 投放的菌液濃度為 105cfu/mLB14、C14、D14... D84 投放的菌液濃度為 107cfu/mL所用飼料符合中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《無(wú)公害食品漁用配合飼料安全限 量》(NY5072-2002)的規(guī)定。試驗(yàn)結(jié)束測(cè)定養(yǎng)殖池的水質(zhì)情況、魚的生長(zhǎng)指標(biāo)及免疫指標(biāo)。I水質(zhì)檢測(cè)水質(zhì)檢測(cè)包括氨態(tài)氮，亞硝酸鹽氮，COD的檢測(cè)。氨態(tài)氮用次溴酸納氧化法法測(cè)定(GB12763. 4-91)；亞硝酸鹽氮用重氮-偶氮光度 法測(cè)定(GB12763. 4-91) ；COD用堿性高錳酸鉀法測(cè)定(HY003. 4-91)。表一水質(zhì)的檢測(cè)
表二水質(zhì)的檢測(cè)
表三水質(zhì)的檢測(cè) 表四生長(zhǎng)水質(zhì)的檢測(cè) 表一至表四中的水質(zhì)數(shù)據(jù)符合中華人民共和國(guó)海水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)(GB3097-1997)第 二類適用于水產(chǎn)養(yǎng)殖，與A組相比，B、C、D組的氨態(tài)氮、亞硝酸鹽氮、COD都有不同程度的 降低。其中B、C、D組的氨態(tài)氮至少降低了 29. 23ug/L ；亞硝酸鹽氮至少降低了 15. 19ug/L ； COD至少降低了 3.450mg/L。在水中或者是在飼料中添加濃度為10_107Cfu/mL光合細(xì)菌和 枯草芽孢桿菌的混合體菌液，全池?fù)Q水時(shí)間5、10、15、20、25、30、35、40天一次，對(duì)氨態(tài)氮、 亞硝酸鹽氮、COD影響不大，都能達(dá)到改善水質(zhì)的目的。由此可見，無(wú)論在水中還是在飼料中添加濃度為10-107Cfu/mL的光合細(xì)菌和枯草 芽孢桿菌的混合液，能夠達(dá)到提高魚的免疫力、促進(jìn)攝食和快速生長(zhǎng)的目的，并且能夠降解 氨氮、抑制水中的致病菌，從而達(dá)到改善水質(zhì)，減少換水頻率，全池?fù)Q水時(shí)間可以延長(zhǎng)至40
天一次，節(jié)省成本，提高經(jīng)濟(jì)效益，促進(jìn)養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展。
II育苗的生長(zhǎng)指標(biāo)
育苗的生長(zhǎng)指標(biāo)包括大菱鲆仔魚的成活率、白化率、田奇形率。
表五生長(zhǎng)指標(biāo)的檢測(cè)

D5249.4713.859.41D6249.4713.869.41D7249.4613.869.43D8249.4513.949.53表七生長(zhǎng)指標(biāo)的檢測(cè)組別仔魚的成活率/%白化率/%畸形率/%B1343.6414.799.61B2343.6414.89.61B3343.6314.89.62B4343.6314.819.62B5343.6214.819.63B6343.6214.829.63B7343.6114.829.64B8343.6114.889.64C1346.6114.699.69C2346.614.79.7C3346.5914.719.71C4346.5814.719.71C5346.5714.719.72C6346.5614.739.73C7346.5514.749.74C8346.5414.749.76D1350.8313.329.43D2350.8313.339.44D3350.8213.349.45D4350.8113.359.46D5350.813.369.47D6350.7913.369.48D7350.7913.369.48D8350.7213.379.49表八生長(zhǎng)指標(biāo)的檢測(cè)組別仔魚的成活率/%白化率/%畸形率/%B1445.7714.299.4B2445.7714.39.4B3445.7614.39.41B4445.7614.319.41B5445.7514.319.42B6445.7514.329.42B7445.7414.329.43B8445.7414.389.43
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從表五至表八中可以看出，與A組相比，B、C、D組的仔魚成活率有明顯的提高， 白化率、畸形率都有明顯的降低。其中B、C、D組的仔魚成活率至少分別增加了 18.65%、 19. 9%,26. 08% ；白化率至少分別降低了 4. 93%,5. 19%,6. 71% ；畸形率至少分別降低了 6. 1%、6. 3%、6.9%。在水中或者是在飼料中添加濃度為10-107Cfu/mL光合細(xì)菌和枯草芽 孢桿菌的混合菌液，全池?fù)Q水時(shí)間5、10、15、20、25、30、35、40天一次，對(duì)仔魚成活率、白化 率、畸形率影響不大。因此，無(wú)論是在水中還是飼料中添加濃度為10-107Cfu/mL光合細(xì)菌和枯草芽孢桿 菌的混合菌液，全池?fù)Q水時(shí)間長(zhǎng)達(dá)40天一次都能提高育苗期間的仔魚成活率、降低白化率 及畸形率。且D組效果最好。II免疫指標(biāo)的檢測(cè)免疫指標(biāo)包括溶菌酶活力、酚氧化酶(PO)活力、超氧化物歧化酶(SOD)活力。1、溶菌酶活力測(cè)定 按Parry等所述方法進(jìn)行。(Ellis A Ε. Lysozymeassays. [Μ]//Stolen J S, Fletcher T C, Anderson D P, et al. Techniques in FishImmunology I. USA :S0S Publications, 1990 :101_103.)將 5 μ 1 血清加入 3mL 濃度為 0. 2mg/mL 溶壁微球菌(Micrococcuslysodeikticus) 菌液中，置722型分光光度計(jì)中(波長(zhǎng)540nm)，分別在0. 5min和4. 5min后記錄吸光值。 以Imin內(nèi)吸光值下降0.001為一個(gè)活性單位(U)，計(jì)算公式為溶菌酶活力(U/mL)= 1000X (0D1-0D2)/4X5X0. 001。2、酚氧化酶(PO)活力的測(cè)定酚氧化酶活性測(cè)定采用Hern0ndez-L0pez 等(Hern0ndez-L0pez J, Gollas-Galvan Τ.Vargas-Albores F.Activation of the prophenoloxidase system of thebrown Penaeus californiensis Holmes [J ]. Comp Biochem Physiol, 1996. 113C 61-66.)的方 法。以實(shí)驗(yàn)條件下，每mL血清每min吸光增加0. 001，定義為1個(gè)酶活性單位(U)。
CN 101919360 A
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3、超氧化物歧化酶(SOD)活力超氧化物歧化酶(SOD)活力按鄧碧玉等改進(jìn)的連苯三酚自氧化法進(jìn)行。(鄧碧玉， 袁勤生，李文杰.改良的連苯三酚自氧化測(cè)定超氧化物歧化酶活性的方法[J].生物化學(xué)與 生物物理進(jìn)展，1991，18 (2) 163 163)活性單位定義為每mL血清中超氧化物歧化酶活力抑制率達(dá)到50%所對(duì)應(yīng)的超氧 化物歧化酶量為1個(gè)酶活性單位。表九免疫指標(biāo) 表十免疫指標(biāo) 表十-一免疫指標(biāo)
表十-二免疫指標(biāo)
D84 61.47425.5527.94從表九至表十二中可以看出，與A組相比，B、C、D組的溶菌酶活力、超氧化物歧 化酶活力、酚氧化酶活力都有明顯的提高。其中B、C、D組的溶菌酶活力至少分別增加 了 23. 38U/mL、34. 23U/mL、42. 84U/mL ；超氧化物歧化酶活力至少分別增加了 102. 51U/mL、 188. 53U/mL、213. 52U/mL ；酚氧化酶活力至少分別增加了 14. 13U/mL、18. 15U/mL、22. 73U/ mL。在水中或者是在飼料中添加濃度為IO-IO7CfuAiL光合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌的混合菌 液，全池?fù)Q水時(shí)間5、10、15、20、25、30、35、40天一次，對(duì)溶菌酶活力、超氧化物歧化酶活力、 酚氧化酶活力影響不大，都能達(dá)到提高免疫力的目的。試驗(yàn)結(jié)果表明，B、C、D組的養(yǎng)殖方式能夠達(dá)到提高育苗的成活率、免疫力、促進(jìn)攝 食和快速生長(zhǎng)等的目的，且D組效果最佳，育苗成活率高達(dá)52. 96%。即無(wú)論在水中還是 在飼料中添加濃度為IO-IO7CfuAiL光合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌混合菌液，全池?fù)Q水時(shí)間長(zhǎng)達(dá) 40天一次，都能夠顯著提高大菱鲆的育苗成活率、降低白化率、畸形率等生長(zhǎng)指標(biāo)，同時(shí)能 明顯改善養(yǎng)殖池中的水質(zhì)，在水中和飼料中同時(shí)添加，效果更佳。全池?fù)Q水時(shí)間5、10、15、 20、25、30、35、40天一次，對(duì)育苗成活率、降低白化率、畸形率均無(wú)明顯影響。上述實(shí)施例中的D組為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述 實(shí)施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組 合、簡(jiǎn)化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
1權(quán)利要求
一種大菱鲆育苗方法，其特征在于包括以下步驟(1)親魚選擇選擇體重在1.5 2.0kg的大菱鲆作為親魚；(2)親魚培養(yǎng)按雌雄(1～3)∶1的比例，在親魚培育池中進(jìn)行培育，培育池中加入光合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌混合菌液，使培育池中的光合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌混合菌液濃度為10 107cfu/mL，投飼料前，將所用飼料要用濃度為10 107cfu/mL的光合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌混合菌液浸泡15～45min；(3)采卵、受精、孵化大菱鲆在達(dá)到性成熟后，分別采集卵子和精液，進(jìn)行人工受精，受精后，將受精卵移入孵化箱內(nèi)進(jìn)行孵化，獲得初孵仔苗；(4)仔魚培育將初孵仔魚放入育苗池內(nèi)進(jìn)行培育，育苗池中加入光合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌混合菌液，使育苗池中光合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌混合菌液濃度為10 107cfu/mL，將所用飼料用濃度為10 107cfu/mL的光合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌混合菌液浸泡15～45min，經(jīng)過80 90天的飼養(yǎng)，即可進(jìn)入養(yǎng)成階段。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種大菱鲆育苗方法，其特征在于所述親魚培養(yǎng)過程中水溫 控制在19-20°C，光照調(diào)控在20001UX，光照時(shí)間每日9_20小時(shí)，培育時(shí)間2 3個(gè)月。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種大菱鲆育苗方法，其特征在于所述孵化溫度為10 20°C 進(jìn)行孵化，經(jīng)過2 3天的完成孵化。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種大菱鲆育苗方法，其特征在于所述育苗池中初孵仔魚的 布池密度為2萬(wàn)粒/m3，水溫為18-20°C，鹽度為26-28%。，pH為8. 0-8. 2，溶解氧5. 0-7. Omg/ L,充氣量控制在30 60L/h/m2。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種大菱鲆育苗方法，其特征在于光合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌 混合菌液中光合細(xì)菌與枯草芽孢桿菌按細(xì)菌數(shù)11混合。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種大菱鲆育苗方法，其特征在于所述光合細(xì)菌為紅假 單胞菌(Rhodopseudomonas sp.，CGMCC 1· 2193)、沼澤紅假單胞菌(Rhodopseudomonas palustris,CGMCC 1.2352)或莢膜紅細(xì)胞(Rhodobacter capsulatus,GIM1. 168)中的至少 一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種大菱鲆育苗方法，其特征在于所述枯草芽孢桿菌 (Bacillus Subtilis Cohn，GIM1.136)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種大菱鲆育苗方法，包括親魚選擇、親魚培養(yǎng)、采卵、受精、孵化、仔魚培育，在親魚培養(yǎng)池及育苗池中加入光合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌混合菌液，使光合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌混合菌液濃度為10-107cfu/mL，將所用飼料用濃度為10-107cfu/mL的光合細(xì)菌和枯草芽孢桿菌混合菌液浸泡。本方法所述大菱鲆育苗方法在改善水質(zhì)上有顯著效果，能夠有效降解氨氮等有害物質(zhì)，換水時(shí)間可延長(zhǎng)至40天一次，大大節(jié)約了育苗成本，能提高大菱鲆育苗的成活率、免疫力、生長(zhǎng)速度及降低白化率、畸形率，在水產(chǎn)動(dòng)物養(yǎng)殖的應(yīng)用中安全性好，環(huán)保、不產(chǎn)生病原菌抗性，應(yīng)用前景良好。
文檔編號(hào)A01K61/00GK101919360SQ201010268518
公開日2010年12月22日 申請(qǐng)日期2010年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月31日
發(fā)明者肖小麗, 蔡俊鵬 申請(qǐng)人:華南理工大學(xué)