專利名稱：一種抑制鏈孢霉生長(zhǎng)的殺菌劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于微生物領(lǐng)域，具體地說(shuō)涉及是一種抑制鏈孢霉生長(zhǎng)的殺菌劑及其制備 方法。
背景技術(shù)：
鏈孢霉是一種頑強(qiáng)、速生的氣生霉，主要危害各種食用菌菌種，也發(fā)生在栽培過(guò)程 中，危害食用菌的菌絲體和子實(shí)體，極難防治，目前雖有化學(xué)藥劑防治，但效果不佳，且毒性 大，目前尚未發(fā)現(xiàn)能有效抑制鏈孢霉生長(zhǎng)的微生物或其代謝物。鏈孢霉廣泛分布在自然界的土壤中、禾本科植物以及富含淀粉的食物上，能產(chǎn)生 大量的分生孢子，靠氣流傳播。培養(yǎng)室環(huán)境不衛(wèi)生；菌袋高壓滅菌不徹底；棉塞受潮、過(guò)松； 菌袋破漏，均是鏈孢霉侵染的主要途徑。菌袋一旦受侵染后，所產(chǎn)生新的分生孢子，是再侵 染的主要來(lái)源。在高溫高濕條件下，能在1-2天內(nèi)傳遍整個(gè)培養(yǎng)室。鏈孢霉是菌種生產(chǎn)期間危害最嚴(yán)重的一種病害之一。菌袋一經(jīng)污染很難徹底清 除，常引起整批菌種或菌袋報(bào)廢，經(jīng)濟(jì)上損失很大。目前常用的鏈孢霉殺菌劑為百菌清和多菌靈，但這兩種殺菌劑存在如下缺陷毒 性強(qiáng)，對(duì)生產(chǎn)種危害大，污染環(huán)境，對(duì)鏈孢霉殺菌作用不強(qiáng)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的首先在于提供一種鏈孢霉殺菌劑。本發(fā)明所提供的一種鏈孢霉殺菌劑，是通過(guò)將惡臭假單胞菌種進(jìn)行液體培養(yǎng)，所 得到的上清液。所述的鏈孢霉殺菌劑，是通過(guò)如下方法制備得到的 液體培養(yǎng)惡臭假單胞菌種；
菌液離心取上清液，即為殺菌劑。優(yōu)選的方式為菌液離心取上清液后，再進(jìn)行過(guò)濾。所述的過(guò)濾為用0. 22 μ m微孔濾膜進(jìn)行過(guò)濾。所述的鏈孢霉殺菌劑，其是通過(guò)如下方法制備得到的
制備液體培養(yǎng)基牛肉膏3 g，蛋白胨10 g，NaC 15 g，瓊脂20 g，水1000 mL, pH
7. 0-7. 2 ；
按照5%的接種量將惡臭假單胞菌種接入液體培養(yǎng)基，放入37°C恒溫?fù)u床培養(yǎng)，轉(zhuǎn) 速120 rmp/min，振蕩培養(yǎng)4天；
將振蕩培養(yǎng)后的菌液4000 rmp/min離心15分鐘，取上清液，重復(fù)3次后，取上清 液真空過(guò)濾；
將獲得的上清液，用0.22 ym微孔濾膜過(guò)濾。優(yōu)選的鏈孢霉殺菌劑是通過(guò)如下制備方法得到的
制備液體培養(yǎng)基牛肉膏3 g，蛋白胨10 g，NaC 15 g，瓊脂20 g，水1000 mL, pH7. 0-7. 2 ；
按照5%的接種量將惡臭假單胞菌種接入液體培養(yǎng)基，放入37°C恒溫?fù)u床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速 120 rmp/min，振蕩培養(yǎng)4天；
將振蕩培養(yǎng)后的菌液4000 rmp/min離心15分鐘，取上清液，重復(fù)3次后，取上清液真 空過(guò)濾；
將獲得的上清液，用10 μ m微孔濾膜過(guò)濾，45°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至菌液OD值為0. 1， 再用0. 22 μ m微孔濾膜過(guò)濾，4°C密封保存。本發(fā)明還提供了制備上述鏈孢霉殺菌劑的方法，該方法為 液體培養(yǎng)惡臭假單胞菌種；
菌液離心取上清液，即得殺菌劑。本發(fā)明所用的惡臭假單胞菌種O^e^/oMwas /^iiiZa SK_10)其來(lái)源為上海 農(nóng)科院保藏菌種，編號(hào)SK-10。本發(fā)明所提供的鏈孢霉殺菌劑具有具有殺菌效果好、安全等特點(diǎn)。既能有效防治 鏈孢霉污染，又對(duì)環(huán)境無(wú)污染，同時(shí)制備簡(jiǎn)單、使用方便，可以達(dá)到生物防治鏈孢霉的目的。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1制備鏈孢霉殺菌劑1并檢測(cè)殺菌活性
制備液體培養(yǎng)基牛肉膏3 g，蛋白胨10 g, NaC15 g，瓊脂20 g，水1000 mL, pH 7. 0-7. 2 ；按照5%的接種量將惡臭假單胞菌種接入液體培養(yǎng)基，放入37°C恒溫?fù)u床培養(yǎng)，轉(zhuǎn) 速120rmp/min，振蕩培養(yǎng)4天；將振蕩培養(yǎng)后的菌液4000 rmp/min離心15分鐘，取上清液， 重復(fù)3次后，取上清液真空過(guò)濾，作為殺菌劑1。4°C密封保存。將殺菌劑1劃線于90mm LB平皿離中心2cm的兩側(cè)，于中心分別接種白色鏈孢霉 菌盤和紅色鏈孢霉菌盤，于28°C培養(yǎng)3天，觀察鏈孢霉生長(zhǎng)情況，并與空白對(duì)照比較。實(shí)施例2制備鏈孢霉殺菌劑2并檢測(cè)其殺菌活性
將實(shí)施例1制備的鏈孢霉殺菌劑1用0. 22 μ m微孔濾膜過(guò)濾，4°C密封保存，作為殺菌 劑2。IOOml PDA溶解后加Ilml的殺菌劑2( 10%);每IOOmlPDA倒六皿，分別接種紅色鏈 孢霉、白色鏈孢霉、空白對(duì)照；無(wú)任何處理PDA平皿接種紅色鏈孢霉(R)和白色鏈孢霉(W)。實(shí)施例3制備鏈孢霉殺菌劑3并檢測(cè)其殺菌活性
將實(shí)施例1制備的鏈孢霉殺菌劑1用10 μ m微孔濾膜過(guò)濾，45°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至菌 液OD值為0. 1，用0. 22 μ m微孔濾膜過(guò)濾，4°C密封保存，作為殺菌劑3。80ml PDA溶解后加20ml的殺菌劑3 (20%);每IOOmlPDA倒六皿，分別接種紅色鏈 孢霉、白色鏈孢霉、空白對(duì)照；無(wú)任何處理PDA平皿接種紅色鏈孢霉(R)和白色鏈孢霉(W)。實(shí)施例1、實(shí)施例2和實(shí)施例3的殺菌劑均可有效的殺滅鏈孢霉，其對(duì)紅色鏈孢霉 和白色鏈孢霉的殺菌率如下表所示。
權(quán)利要求
一種鏈孢霉殺菌劑，其特征在于其是通過(guò)將惡臭假單胞菌種進(jìn)行液體培養(yǎng)，所得到的上清液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鏈孢霉殺菌劑，其特征在于是通過(guò)如下方法制備得到的液體培養(yǎng)惡臭假單胞菌種；菌液離心取上清液，即為殺菌劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的鏈孢霉殺菌劑，其特征在于菌液離心取上清液后，進(jìn)行過(guò)濾。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的鏈孢霉殺菌劑，其特征在于所述的過(guò)濾為用0.22 u m微孔濾 膜進(jìn)行過(guò)濾。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的鏈孢霉殺菌劑，其特征在于其是通過(guò)如下方法制備 得到的制備液體培養(yǎng)基牛肉膏3 g，蛋白胨10 g, NaCl 5 g，瓊脂20 g，水1000 mL, pH 7. 0-7. 2 ；按照5%的接種量將惡臭假單胞菌種接入液體培養(yǎng)基，放入37°C恒溫?fù)u床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速 120 rmp/min，振蕩培養(yǎng)4天；將振蕩培養(yǎng)后的菌液4000 rmp/min離心15分鐘，取上清液，重復(fù)3次后，取上清液真 空過(guò)濾；將獲得的上清液，用0.22 ym微孔濾膜過(guò)濾。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的鏈孢霉殺菌劑，其特征在于其是通過(guò)如下方法制備 得到的制備液體培養(yǎng)基牛肉膏3 g，蛋白胨10 g, NaCl 5 g，瓊脂20 g，水1000 mL, pH 7. 0-7. 2 ；按照5%的接種量將惡臭假單胞菌種接入液體培養(yǎng)基，放入37°C恒溫?fù)u床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速 120 rmp/min，振蕩培養(yǎng)4天；將振蕩培養(yǎng)后的菌液4000 rmp/min離心15分鐘，取上清液，重復(fù)3次后，取上清液真 空過(guò)濾；將獲得的上清液，用m微孔濾膜過(guò)濾，45°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至菌液0D值為0. 1，再 用0. 22 y m微孔濾膜過(guò)濾，4°C密封保存。
7.一種制備權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述鏈孢霉殺菌劑的方法，其特征在于該方法為 液體培養(yǎng)惡臭假單胞菌種；菌液離心取上清液，即得殺菌劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種鏈孢霉殺菌劑，該鏈孢霉殺菌劑是通過(guò)液體培養(yǎng)惡臭假單胞菌種，菌液離心取上清液得到。本發(fā)明的鏈孢霉殺菌劑具有殺菌效果好、安全等特點(diǎn)。
文檔編號(hào)A01N63/02GK101940223SQ201010294919
公開日2011年1月12日 申請(qǐng)日期2010年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月28日
發(fā)明者于海龍, 周峰, 李玉, 林娓娓, 王瑞娟, 郭倩 申請(qǐng)人:上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院;上海國(guó)森生物科技有限公司