專利名稱：一種藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藍靛果忍冬愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
藍靛果忍冬(Lonicera caerulea)，別名藍靛果，俗稱山茄子、羊奶子、黑瞎子果 等，為多年生落葉小灌木，是東北亞地區(qū)特有小槳果之一，其分布區(qū)域主要在俄羅斯、朝鮮 北部、日本和中國東北的大小興安嶺、長白山、張廣才嶺等林區(qū)。藍靛果忍冬是繼黑穗醋栗、樹莓、越橘之后的又一種新興的小漿果，主要生長在林 中濕地或林緣、沼澤草甸，要求弱酸的土壤，上部枝條耐-40°C以上低溫，適應(yīng)性較強。藍靛果忍冬果實具有較高的營養(yǎng)保健價值，富含糖類、有機酸、礦物質(zhì)、維生素等 成分。所含17種氨基酸的總量高于普通水果，其中必需氨基酸占總量40%左右；礦質(zhì)元素 中鋅、硒、鐵、鈣含量較高；果實可鮮食，也可加工成飲料、果醬、果糕和果酒等；另外，莖葉 和果實又可提取天然紫紅色素。近年來隨著藍靛果忍冬市場需求不斷增長，其鮮果價格也不斷增高，近4年來由 每公斤4元漲到每公斤10 15元，速凍果市場價格增至9500元/噸，濃縮汁國際市場價 格為6. 0 8. 0萬元/噸，飲品銷售價為5 10元/瓶，市場供不應(yīng)求。隨著對野生藍靛果飲料、果酒、色素等產(chǎn)品開發(fā)，掠奪式采收導致野生資源銳減， 加之資源分布有限，難以滿足日益增長的市場需求，因此開展人工撫育與栽培十分必要。而 制約人工栽培的主要問題是種苗繁殖困難，生產(chǎn)上主要采用扦插與分根、種子實生苗繁殖 種，前者繁殖系數(shù)低，成活率不高，且破壞野生資源；后者種苗變異性較大，影響果實的品 質(zhì)與產(chǎn)量，且因種子粒小，成苗困難，育苗技術(shù)難度大。通過組織培養(yǎng)快速繁殖可以解決上 述問題，國內(nèi)植物組培快繁一般采用MS培養(yǎng)基，但因培養(yǎng)植物種類、取材時期、培養(yǎng)部位不 同，其效果也不同。目前國內(nèi)有關(guān)藍靛果忍冬組培方面的報道較少，主要采取腋芽或莖尖 培養(yǎng)，但效果不理想，尚沒有直接分化芽叢的報道，需通過愈傷誘導植株，植株分化率不足 30%，且未見在生產(chǎn)上應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有藍靛果忍冬的組織培養(yǎng)主要采取腋芽或莖尖培養(yǎng)， 存在植株分化率低及培養(yǎng)基成本高的問題，本發(fā)明提供了一種藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植 株再生誘導培養(yǎng)基。本發(fā)明藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基，是由大量元素、微量元素 和激素組成，其中所述大量元素由濃度為900 920mg/L的NH4N03、90 100mg/L的ΚΗ2Ρ04、 1000 1050mg/L 的 KNO3>240 250mg/L 的 CaCl2 · 2H20、200 210mg/L 的 MgSO4 · 7H20 和15 18mg/L的EDTA-Fe組成，所述微量元素由濃度為0. 83mg/L的KI、22. 3mg/L的 MnSO4 ·4Η20、6· 2mg/L 的 Η3Β03、8· 6mg/L 的 ZnSO4 ·7Η20、0· 025mg/L 的 Na2MoO4 ·2Η20、0· 25mg/ L的CuSO4 ·5Η20和0. 025mg/L的CoCl2 ·6Η20，所述激素由濃度為1. 0 2. Omg/L的6-芐基氨基嘌呤(6-BA)或者激動素(KT)和0. 05 0. 2mg/L的吲哚丁酸(IBA)或者萘乙酸(NAA) 組成。本發(fā)明在六月初(六月一號至六號)藍靛果忍冬生長盛季采集其幼莖，用70% (體積)酒精浸泡10s，無菌水沖洗3遍，再用0. (質(zhì)量)升汞液消毒8min，再無菌水沖 洗3 5遍；接種至培養(yǎng)基時將藍靛果忍冬幼莖兩端剪去，接種于本發(fā)明的LD1培養(yǎng)基表面； 培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度M ，光照時間14 16h/d，光照強度1800 20001x，20 30 天繼代一次。本發(fā)明的藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基(記為LD1培養(yǎng)基)中 無機鹽(大量元素和微量元素)含量是2483. 23 2586. 23mg/L,較佳的無機鹽含量是 2534. 73mg/L,與現(xiàn)有MS培養(yǎng)基中無機鹽含量0604. 005mg/L)的質(zhì)量濃度比為1 1. 85 1.78，較佳的比值為1 1.82，即現(xiàn)有MS培養(yǎng)基所含無機鹽濃度是本發(fā)明的LD1培養(yǎng)基所 含無機鹽濃度的1. 85 1. 78倍。本發(fā)明的LD1培養(yǎng)基中無機鹽的濃度低于現(xiàn)有MS培養(yǎng) 基所含無機鹽濃度，在MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上將大量元素的用量進行了調(diào)整，降低了 N03_、Mg2+、 鐵元素濃度；微量元素中硫酸銅用量為MS培養(yǎng)基的10倍，同時含有微量的Mo，其參與氨基 酸合成與代謝，有促進器官形成的作用。本發(fā)明合理降低培養(yǎng)基無機鹽的含量，有利于分化培養(yǎng)，而高濃度無機鹽抑制愈 傷組織植株的再生，尤其是磷鎂含量越高、比值越大其抑制作用越明顯；微量元素銅含量的 增加可促進愈傷組織健康生長及胚狀體的產(chǎn)生。利用本發(fā)明的LD1培養(yǎng)基進行藍靛果忍冬 幼莖培養(yǎng)，藍靛果忍冬幼莖很容易被誘導形成愈傷組織，愈傷組織誘導率均可達到90%以 上；再將誘導出的淡綠色愈傷組織轉(zhuǎn)接至本發(fā)明的LD1培養(yǎng)基上進行繼代與分化培養(yǎng)，愈 傷組織誘導成植株的幾率高，再生植株誘導率(即植株分化率)可達50% 82%，比現(xiàn)有 MS培養(yǎng)基的植株分化率(30%)提高了 66.6% 173.3%，比對照MS培養(yǎng)基節(jié)約投入成本 45. 1%。本發(fā)明解決了藍靛果忍冬在繁殖方面解決了一系列組培難題，通過幼莖培養(yǎng)誘導 出愈傷組織及再生植株，而且種性一致性強，經(jīng)組培苗移栽植株生長與結(jié)果性狀測定，種性 純度98%以上，且能夠達到快速繁殖優(yōu)良種苗的目的，并已在生產(chǎn)中得到推廣應(yīng)用，推廣面 積達到100余畝，表現(xiàn)出高度一致性和豐產(chǎn)性。本發(fā)明的LD1培養(yǎng)基配制方法與常規(guī)培養(yǎng)基配制方法相同，但配方要求嚴格，各種 組分中元素與激素一定要在其濃度范圍內(nèi)進行配制。
具體實施例方式本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉具體實施方式
，還包括各具體實施方式
間的 任意組合。
具體實施方式
一本實施方式為藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基， 培養(yǎng)基是由大量元素、微量元素和激素組成，其中所述大量元素由濃度為900 920mg/L的 NH4NO3>90 100mg/L 的 KH2PO4UOOO 1050mg/L 的 KNO3>240 250mg/L 的 CaCl2 · 2H20、 200 210mg/L的MgSO4 · 7H20和15 18mg/L的EDTA-Fe組成，所述微量元素由濃度為 0. 83mg/L 的 KI、22. 3mg/L 的 MnSO4 ·4Η20、6· 2mg/L 的 Η3Β03、8· 6mg/L 的 ZnSO4 ·7Η20、0· 025mg/ L 的 Na2MoO4 · 2H20、0. 25mg/L 的 CuSO4 · 5H20 和 0. 025mg/L 的 CoCl2 · 6H20，所述激素由濃度為1. 0 2. Omg/L的6-芐基氨基嘌呤(6-BA)或者激動素(KT)和0. 05 0. 2mg/L的吲哚 丁酸(IBA)或者萘乙酸(NAA)組成。本實施方式的藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基(記為LD1培養(yǎng)基)， 合理降低培養(yǎng)基無機鹽的含量，有利于分化培養(yǎng)，而高濃度無機鹽抑制愈傷組織植株的再 生，尤其是磷鎂含量越高、比值越大其抑制作用越明顯；微量元素銅含量的增加可促進愈傷 組織健康生長及胚狀體的產(chǎn)生。利用本實施方式的LD1培養(yǎng)基進行藍靛果忍冬幼莖培養(yǎng)， 愈傷組織誘導率均可達到90%以上，再生植株誘導率(即植株分化率)可達50%以上，比 對照MS培養(yǎng)基節(jié)約投入成本45. 1%。其中，愈傷組織誘導率指植株莖段組培后能夠誘導出 愈傷組織的的比率；再生植株誘導率(即植株分化率)是指誘導出的愈傷組織能夠分化出 植株的比率。本實施方式的LD1培養(yǎng)基通過幼莖培養(yǎng)誘導出愈傷組織及再生植株，種性一致性 強，經(jīng)組培苗移栽植株生長與結(jié)果性狀測定，種性純度98%以上，且能夠達到快速繁殖優(yōu)良 種苗的目的，并已在生產(chǎn)中得到推廣應(yīng)用，推廣面積達到100余畝，表現(xiàn)出高度一致性和豐 產(chǎn)性。本實施方式的LD1培養(yǎng)基配制方法與常規(guī)培養(yǎng)基配制方法相同，但配方要求嚴格， 各種組分中元素與激素一定要在其濃度范圍內(nèi)進行配制。
具體實施方式
二 本實施方式與具體實施方式
一不同的是所述大量元素由濃度為 91 Omg/L 的 NH4N03、95mg/L 的 KH2PO4、1025mg/L 的 KN03、M5mg/L 的 CaCl2 · 2H20、205mg/L 的 MgSO4 · 7H20和16. 5mg/L的EDTA-Fe組成。其它參數(shù)與具體實施方式
一相同。本實施方式的藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基(記為LD1培養(yǎng)基) 中無機鹽(大量元素和微量元素)含量是2534. 73mg/L,與現(xiàn)有MS培養(yǎng)基中無機鹽含量 (4604. 005mg/L)的質(zhì)量濃度比為1 1.82。本實施方式的藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基合理降低培養(yǎng)基無 機鹽的含量，有利于分化培養(yǎng)，而高濃度無機鹽抑制愈傷組織植株的再生，尤其是磷鎂含量 越高、比值越大其抑制作用越明顯；微量元素銅含量的增加可促進愈傷組織健康生長及胚 狀體的產(chǎn)生。利用本實施方式的LD1培養(yǎng)基進行藍靛果忍冬幼莖培養(yǎng)，愈傷組織誘導率均 可達到90%以上，再生植株誘導率(即植株分化率)可達58%以上，比對照MS培養(yǎng)基節(jié)約 投入成本45. 1%0具體實施方式
三本實施方式與具體實施方式
一或二不同的是所述激素由濃度為
1.0 2. Omg/L的6-芐基氨基嘌呤(6-BA)和0. 1 0. 2mg/L的吲哚丁酸(IBA)組成。其 它參數(shù)與具體實施方式
一或二相同。本實施方式的藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基進行藍靛果忍冬幼 莖培養(yǎng)，愈傷組織誘導率均可達到90%以上，再生植株誘導率(即植株分化率)可達65% 以上，比對照MS培養(yǎng)基節(jié)約投入成本45. 1%。
具體實施方式
四本實施方式與具體實施方式
一或二不同的是所述激素由濃度為
2.Omg/L的6-芐基氨基嘌呤(6-BA)和0. 2mg/L的吲哚丁酸(IBA)組成。其它參數(shù)與具體 實施方式一或二相同。本實施方式的藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基進行藍靛果忍冬幼 莖培養(yǎng)，愈傷組織誘導率均可達到90%以上，再生植株誘導率(即植株分化率)可達82%，比對照MS培養(yǎng)基節(jié)約投入成本45. 1 %。
具體實施方式
五本實施方式與具體實施方式
一或二不同的是所述激素由濃度為
1.0 2. Omg/L的激動素(KT)和0. 05 0. lmg/L的萘乙酸(NAA)組成。其它參數(shù)與具體 實施方式一或二相同。本實施方式的藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基進行藍靛果忍冬幼 莖培養(yǎng)，愈傷組織誘導率均可達到90%以上，再生植株誘導率(即植株分化率)可達56% 以上，比對照MS培養(yǎng)基節(jié)約投入成本45. 1%。
具體實施方式
六本實施方式與具體實施方式
一或二不同的是所述激素由濃度為
2.Omg/L的激動素(KT)和0. 05mg/L的萘乙酸(NAA)組成。其它參數(shù)與具體實施方式
一或 二相同。本實施方式的藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基進行藍靛果忍冬幼 莖培養(yǎng)，愈傷組織誘導率均可達到90%以上，再生植株誘導率(即植株分化率)可達78%， 比對照MS培養(yǎng)基節(jié)約投入成本45. 1 %。
具體實施方式
七本實施方式與具體實施方式
一至六之一不同的是藍靛果忍冬幼 莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基培養(yǎng)藍靛果忍冬幼莖的培養(yǎng)條件是培養(yǎng)溫度24 26°C， 光照時間14 16h/d，光照強度1800 20001x，20 30天繼代一次。其它參數(shù)與具體實 施方式一至六之一相同。
具體實施方式
八本實施方式與具體實施方式
一至七之一不同的是藍靛果忍冬幼 莖接種至藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基之前，需要對藍靛果忍冬幼莖進行 如下處理在六月一日至六月六日采集藍靛果忍冬幼莖，用70% (體積)酒精浸泡10s，無 菌水沖洗3遍，再用0. 1 % (質(zhì)量)升汞液消毒8min，然后再用無菌水沖洗3 5遍，然后 在接種至培養(yǎng)基時將經(jīng)上述處理后的藍靛果忍冬幼莖兩端剪去，再接種于藍靛果忍冬幼莖 愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基表面。其它參數(shù)與具體實施方式
一至七之一相同。本實施方式中無菌水為市售產(chǎn)品。
具體實施方式
九本實施方式為藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng) 基，培養(yǎng)基是由大量元素、微量元素和激素組成，其中所述大量元素由濃度為910mg/L的 NH4NO3>95mg/L 的 KH2PO4、1025mg/L 的 KN03、245mg/L 的 CaCl2 · 2H20、205mg/L 的 MgSO4 · 7H20 和16. 5mg/L的EDTA-Fe組成，所述微量元素由濃度為0. 83mg/L的KI、22. 3mg/L的 MnSO4 ·4Η20、6· 2mg/L 的 Η3Β03、8· 6mg/L 的 ZnSO4 ·7Η20、0· 025mg/L 的 Na2MoO4 ·2Η20、0· 25mg/ L的CuSO4 · 5H20和0. 025mg/L的CoCl2 · 6H20，所述激素由濃度為1. Omg/L的6-芐基氨基 嘌呤(6-BA)和0. 05mg/L的吲哚丁酸(IBA)組成。本實施方式的藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基進行藍靛果忍冬幼 莖培養(yǎng)，愈傷組織誘導率均可達到90%以上，再生植株誘導率(即植株分化率)可達58%， 比對照MS培養(yǎng)基節(jié)約投入成本45. 1 %。
具體實施方式
十本實施方式與具體實施方式
九不同的是所述激素由濃度為 1. Omg/L的6-芐基氨基嘌呤(6-BA)和0. lmg/L的吲哚丁酸(IBA)組成。本實施方式的藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基進行藍靛果忍冬幼 莖培養(yǎng)，愈傷組織誘導率均可達到90%以上，再生植株誘導率(即植株分化率)可達66%， 比對照MS培養(yǎng)基節(jié)約投入成本45. 1 %。
具體實施方式
十一本實施方式與具體實施方式
九不同的是所述激素由濃度為 1. Omg/L的6-芐基氨基嘌呤(6-BA)和0. 2mg/L的吲哚丁酸(IBA)組成。本實施方式的藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基進行藍靛果忍冬幼 莖培養(yǎng)，愈傷組織誘導率均可達到90%以上，再生植株誘導率(即植株分化率)可達68%， 比對照MS培養(yǎng)基節(jié)約投入成本45. 1 %。
具體實施方式
十二 本實施方式與具體實施方式
九不同的是所述激素由濃度為 1. Omg/L的6-芐基氨基嘌呤(6-BA)和0. 05mg/L的萘乙酸(NAA)組成。本實施方式的藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基進行藍靛果忍冬幼 莖培養(yǎng)，愈傷組織誘導率均可達到90%以上，再生植株誘導率(即植株分化率)可達52%， 比對照MS培養(yǎng)基節(jié)約投入成本45. 1 %。
具體實施方式
十三本實施方式與具體實施方式
九不同的是所述激素由濃度為 1. Omg/L的6-芐基氨基嘌呤(6-BA)和0. lmg/L的萘乙酸(NAA)組成。本實施方式的藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基進行藍靛果忍冬幼 莖培養(yǎng)，愈傷組織誘導率均可達到90%以上，再生植株誘導率(即植株分化率)可達64%， 比對照MS培養(yǎng)基節(jié)約投入成本45. 1 %。
具體實施方式
十四本實施方式與具體實施方式
九不同的是所述激素由濃度為
1.Omg/L的6-芐基氨基嘌呤(6-BA)和0. 2mg/L的萘乙酸(NAA)組成。本實施方式的藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基進行藍靛果忍冬幼 莖培養(yǎng)，愈傷組織誘導率均可達到90%以上，再生植株誘導率(即植株分化率)可達56%， 比對照MS培養(yǎng)基節(jié)約投入成本45. 1 %。
具體實施方式
十五本實施方式與具體實施方式
九不同的是所述激素由濃度為
2.Omg/L的6-芐基氨基嘌呤(6-BA)和0. 05mg/L的萘乙酸(NAA)組成。本實施方式的藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基進行藍靛果忍冬幼 莖培養(yǎng)，愈傷組織誘導率均可達到90%以上，再生植株誘導率(即植株分化率)可達64%， 比對照MS培養(yǎng)基節(jié)約投入成本45. 1 %。
具體實施方式
十六本實施方式與具體實施方式
九不同的是所述激素由濃度為 2. Omg/L的6-芐基氨基嘌呤(6-BA)和0. lmg/L的萘乙酸(NAA)組成。本實施方式的藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基進行藍靛果忍冬幼 莖培養(yǎng)，愈傷組織誘導率均可達到90%以上，再生植株誘導率(即植株分化率)可達72%， 比對照MS培養(yǎng)基節(jié)約投入成本45. 1 %。
具體實施方式
十七本實施方式與具體實施方式
九不同的是所述激素由濃度為 2. Omg/L的6-芐基氨基嘌呤(6-BA)和0. 2mg/L的萘乙酸(NAA)組成。本實施方式的藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基進行藍靛果忍冬幼 莖培養(yǎng)，愈傷組織誘導率均可達到90%以上，再生植株誘導率(即植株分化率)可達70%， 比對照MS培養(yǎng)基節(jié)約投入成本45. 1 %。
具體實施方式
十八本實施方式與具體實施方式
九不同的是所述激素由濃度為 2. Omg/L的6-芐基氨基嘌呤(6-BA)和0. 05mg/L的吲哚丁酸(IBA)組成。本實施方式的藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基進行藍靛果忍冬幼 莖培養(yǎng)，愈傷組織誘導率均可達到90%以上，再生植株誘導率(即植株分化率)可達68%，
具體實施方式
十九本實施方式與具體實施方式
九不同的是所述激素由濃度為 2. Omg/L的6-芐基氨基嘌呤(6-BA)和0. lmg/L的吲哚丁酸(IBA)組成。本實施方式的藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基進行藍靛果忍冬幼 莖培養(yǎng)，愈傷組織誘導率均可達到90%以上，再生植株誘導率(即植株分化率)可達80%， 比對照MS培養(yǎng)基節(jié)約投入成本45. 1 %。
具體實施方式
二十本實施方式與具體實施方式
九不同的是所述激素由濃度為 2. Omg/L的6-芐基氨基嘌呤(6-BA)和0. 2mg/L的吲哚丁酸(IBA)組成。本實施方式的藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基進行藍靛果忍冬幼 莖培養(yǎng)，愈傷組織誘導率均可達到90%以上，再生植株誘導率(即植株分化率)可達82%， 比對照MS培養(yǎng)基節(jié)約投入成本45. 1 %。
具體實施方式
二十一本實施方式與具體實施方式
九不同的是所述激素由濃度為 1. Omg/L的激動素(KT)和0. 05mg/L的吲哚丁酸(IBA)組成。本實施方式的藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基進行藍靛果忍冬幼 莖培養(yǎng)，愈傷組織誘導率均可達到90%以上，再生植株誘導率(即植株分化率)可達56%， 比對照MS培養(yǎng)基節(jié)約投入成本45. 1 %。
具體實施方式
二十二 本實施方式與具體實施方式
九不同的是所述激素由濃度為 1. Omg/L的激動素(KT)和0. lmg/L的吲哚丁酸(IBA)組成。本實施方式的藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基進行藍靛果忍冬幼 莖培養(yǎng)，愈傷組織誘導率均可達到90%以上，再生植株誘導率(即植株分化率)可達60%， 比對照MS培養(yǎng)基節(jié)約投入成本45. 1 %。
具體實施方式
二十三本實施方式與具體實施方式
九不同的是所述激素由濃度為 1. Omg/L的激動素(KT)和0. 2mg/L的吲哚丁酸(IBA)組成。本實施方式的藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基進行藍靛果忍冬幼 莖培養(yǎng)，愈傷組織誘導率均可達到90%以上，再生植株誘導率(即植株分化率)可達66%， 比對照MS培養(yǎng)基節(jié)約投入成本45. 1 %。
具體實施方式
二十四本實施方式與具體實施方式
九不同的是所述激素由濃度為 1. Omg/L的激動素(KT)和0. 05mg/L的萘乙酸(NAA)組成。本實施方式的藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基進行藍靛果忍冬幼 莖培養(yǎng)，愈傷組織誘導率均可達到90%以上，再生植株誘導率(即植株分化率)可達58%， 比對照MS培養(yǎng)基節(jié)約投入成本45. 1 %。
具體實施方式
二十五本實施方式與具體實施方式
九不同的是所述激素由濃度為 1. Omg/L的激動素(KT)和0. lmg/L的萘乙酸(NAA)組成。本實施方式的藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基進行藍靛果忍冬幼 莖培養(yǎng)，愈傷組織誘導率均可達到90%以上，再生植株誘導率(即植株分化率)可達56%， 比對照MS培養(yǎng)基節(jié)約投入成本45. 1 %。
具體實施方式
二十六本實施方式與具體實施方式
九不同的是所述激素由濃度為 1. Omg/L的激動素(KT)和0. 2mg/L的萘乙酸(NAA)組成。本實施方式的藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基進行藍靛果忍冬幼莖培養(yǎng)，愈傷組織誘導率均可達到90%以上，再生植株誘導率(即植株分化率)可達50%， 比對照MS培養(yǎng)基節(jié)約投入成本45. 1 %。
具體實施方式
二十七本實施方式與具體實施方式
九不同的是所述激素由濃度為 2. Omg/L的激動素(KT)和0. 05mg/L的吲哚丁酸(IBA)組成。本實施方式的藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基進行藍靛果忍冬幼 莖培養(yǎng)，愈傷組織誘導率均可達到90%以上，再生植株誘導率(即植株分化率)可達60%， 比對照MS培養(yǎng)基節(jié)約投入成本45. 1 %。
具體實施方式
二十八本實施方式與具體實施方式
九不同的是所述激素由濃度為 2. Omg/L的激動素(KT)和0. lmg/L的吲哚丁酸(IBA)組成。本實施方式的藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基進行藍靛果忍冬幼 莖培養(yǎng)，愈傷組織誘導率均可達到90%以上，再生植株誘導率(即植株分化率)可達70%， 比對照MS培養(yǎng)基節(jié)約投入成本45. 1 %。
具體實施方式
二十九本實施方式與具體實施方式
九不同的是所述激素由濃度為 2. Omg/L的激動素(KT)和0. 2mg/L的吲哚丁酸(IBA)組成。本實施方式的藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基進行藍靛果忍冬幼 莖培養(yǎng)，愈傷組織誘導率均可達到90%以上，再生植株誘導率(即植株分化率)可達74%， 比對照MS培養(yǎng)基節(jié)約投入成本45. 1 %。
具體實施方式
三十本實施方式與具體實施方式
九不同的是所述激素由濃度為 2. Omg/L的激動素(KT)和0. 05mg/L的萘乙酸(NAA)組成。本實施方式的藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基進行藍靛果忍冬幼 莖培養(yǎng)，愈傷組織誘導率均可達到90%以上，再生植株誘導率(即植株分化率)可達78%， 比對照MS培養(yǎng)基節(jié)約投入成本45. 1 %。
具體實施方式
三十一本實施方式與具體實施方式
九不同的是所述激素由濃度為 2. Omg/L的激動素(KT)和0. lmg/L的萘乙酸(NAA)組成。本實施方式的藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基進行藍靛果忍冬幼 莖培養(yǎng)，愈傷組織誘導率均可達到90%以上，再生植株誘導率(即植株分化率)可達76%， 比對照MS培養(yǎng)基節(jié)約投入成本45. 1 %。
具體實施方式
三十二 本實施方式與具體實施方式
九不同的是所述激素由濃度為 2. Omg/L的激動素(KT)和0. 2mg/L的萘乙酸(NAA)組成。本實施方式的藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基進行藍靛果忍冬幼 莖培養(yǎng)，愈傷組織誘導率均可達到90%以上，再生植株誘導率(即植株分化率)可達60%， 比對照MS培養(yǎng)基節(jié)約投入成本45. 1 %。其中，上述具體實施方式
九至三十二中，藍靛果忍冬幼莖接種于藍靛果忍冬幼莖 愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基前，需要對藍靛果忍冬幼莖進行如下處理在六月一日至六 月六日采集藍靛果忍冬幼莖，用70% (體積)酒精浸泡10s，無菌水沖洗3遍，再用0.1% (質(zhì)量)升汞液消毒8min，然后再用無菌水沖洗3 5遍，然后在接種至培養(yǎng)基時將經(jīng)上 述處理后的藍靛果忍冬幼莖兩端剪去，再接種于藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培 養(yǎng)基表面，此時幼莖誘導出愈傷組織的幾率即為愈傷組織誘導率；誘導出愈傷組織后，再將 生長良好的愈傷組織轉(zhuǎn)接至藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基，再誘導生長植株，能夠誘導出植株的幾率即為再生植株誘導率(即植株分化率)，其中轉(zhuǎn)接的愈傷組織數(shù) 為50。
具體實施方式
九至三十二中，培養(yǎng)條件均是培養(yǎng)溫度24 26°C，光照時間14 16h/d，光照強度1800 20001x，20 30天繼代一次。綜上具體實施方式
九至三十二可知，隨著6-BA濃度或者KT濃度的增加植株分化 率上升，當6-BA濃度或者KT濃度為2. Omg/L時，最高分化率分別可達82. 0 %、78. 0 %，其 中6-BA對愈傷組織分化的促進效果要好于KT，平均植株分化率較高。當6-BA濃度一定時， 植株分化率隨IBA濃度增加呈現(xiàn)上升的趨勢，以IBA濃度為0. 2mg/L為最佳；當6-BA濃度 一定時，植株分化率隨NAA濃度增加呈現(xiàn)先上升再下降的趨勢，其中以0. lmg/L的濃度為最 佳。與此不同，在KT與IBA、NAA的配比組合中，當KT濃度一定時，IBA濃度變化對植株分 化率的影響與6-BA時的相同，IBA的濃度以0. 2mg/L最為適宜，而隨著NAA濃度增加分化 率則呈下降趨勢，NAA濃度以0. 05mg/L最為適宜。
權(quán)利要求
1.一種藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基，其特征在于藍靛果忍冬幼莖愈 傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基是由大量元素、微量元素和激素組成，其中所述大量元素由濃 度為 900 920mg/L 的 NH4N03、90 100mg/L 的 KH2PO4UOOO 1050mg/L 的 KN03、240 250mg/L 的 CaCl2 · 2H20、200 210mg/L 的 MgSO4 · 7H20 禾口 15 18mg/L 的 EDTA-Fe 組成， 所述微量元素由濃度為 0. 83mg/L 的 KI、22. 3mg/L 的 MnSO4 ·4H20、6. 2mg/L 的 H3B03、8. 6mg/ L 的 ZnSO4 · 7Η20、0· 025mg/L 的 Na2MoO4 · 2Η20、0· 25mg/L 的 CuSO4 · 5H20 禾口 0. 025mg/L 的 CoCl2 · 6H20，所述激素由濃度為1. 0 2. Omg/L的6-芐基氨基嘌呤或者激動素和0. 05 0. 2mg/L的吲哚丁酸或者萘乙酸組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基，其特征 在于所述大量元素由濃度為 910mg/L 的 NH4N03、95mg/L 的 KH2PO4、1025mg/L 的 KN03、245mg/ L 的 CaCl2 · 2H20、205mg/L 的 MgSO4 · 7H20 和 16. 5mg/L 的 EDTA-Fe 組成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基，其 特征在于所述激素由濃度為1. 0 2. Omg/L的6-芐基氨基嘌呤和0. 1 0. 2mg/L的吲哚 丁酸組成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基，其 特征在于所述激素由濃度為2. Omg/L的6-芐基氨基嘌呤和0. 2mg/L的吲哚丁酸組成。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基，其 特征在于所述激素由濃度為1. 0 2. 0mg/L的激動素和0. 05 0. lmg/L的萘乙酸組成。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基，其 特征在于所述激素由濃度為2. 0mg/L的激動素和0. 05mg/L的萘乙酸組成。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基， 其特征在于藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基的培養(yǎng)條件是培養(yǎng)溫度24 26°C，光照時間14 16h/d，光照強度1800 20001x，20 30天繼代一次。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基， 其特征在于藍靛果忍冬幼莖接種至藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基之前，需 要對藍靛果忍冬幼莖進行如下處理在六月一日至六月六日采集藍靛果忍冬幼莖，用70% (體積)酒精浸泡10s，無菌水沖洗3遍，再用0.1% (質(zhì)量)升汞液消毒8min，然后再用無 菌水沖洗3 5遍，然后在接種至培養(yǎng)基時將經(jīng)上述處理后的藍靛果忍冬幼莖兩端剪去，再 接種于藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基表面。
全文摘要
一種藍靛果忍冬幼莖愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基，涉及一種藍靛果忍冬愈傷組織植株再生誘導培養(yǎng)基。解決現(xiàn)有藍靛果忍冬的組織培養(yǎng)主要采取腋芽或莖尖培養(yǎng)，存在植株分化率低及培養(yǎng)基成本高的問題。培養(yǎng)基由大量元素、微量元素和激素組成，其中所述激素由1.0～2.0mg/L的6-芐基氨基嘌呤或者激動素和0.05～0.2mg/L的吲哚丁酸或者萘乙酸組成。利用本發(fā)明的LD1培養(yǎng)基，藍靛果忍冬幼莖很容易被誘導形成愈傷組織，愈傷組織誘導率均可達到90％以上；愈傷組織誘導成植株的幾率高，植株分化率可達50％～82％，比現(xiàn)有MS培養(yǎng)基的植株分化率提高了66.6％～173.3％，比對照MS培養(yǎng)基節(jié)約投入成本45.1％。
文檔編號A01H4/00GK102119657SQ20101057236
公開日2011年7月13日 申請日期2010年12月3日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月3日
發(fā)明者沈云霞, 班文杰, 趙恒田, 鄧中樞, 黃福山 申請人:中國科學院東北地理與農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所