專利名稱：一種功能性飼料用添加劑油茶粕蛋白多肽的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種飼料用功能性添加劑的制備方法，尤其涉及一種功能性飼料用添 加劑油茶粕蛋白多肽的制備方法。
背景技術(shù)：
目前，魚粉及動物加工后的副產(chǎn)物蛋白一直是畜禽和水產(chǎn)飼料中應(yīng)用最廣泛的蛋 白源。但存在三個方面的問題第一，由于受全球性的濫捕、厄爾尼諾現(xiàn)象及環(huán)境污染等影 響，魚粉的產(chǎn)量逐年下降，目前世界魚粉的供應(yīng)已不能滿足日益增長的養(yǎng)殖需求 ’第二’為 了防范牛腦海綿狀病毒的入侵，許多國家和地區(qū)明令禁止動物源性飼料如肉粉，骨粉，肉骨 粉、血粉、血漿粉、羽毛粉、乳清粉等動物性蛋白質(zhì)使用于畜禽飼料；第三，我國動物蛋白原 料資源非常短缺，大多依賴進(jìn)口。優(yōu)質(zhì)動物源性蛋白的價格不斷攀升，已嚴(yán)重影響到我國養(yǎng) 殖業(yè)的利潤水平。油茶粕蛋白多肽是以油茶粕為原料經(jīng)復(fù)合蛋白酶水解后干燥所得，該蛋 白多肽有如下優(yōu)點(1)其富含谷氨酸、精氨酸、亮氨酸和天冬氨酸，且氨基酸組成全面，其 生物價(BV)和蛋白質(zhì)功效比(PER)接近飼料常用的魚蛋白；(2)油茶粕蛋白多肽更容易被 動物消化吸收，可提高飼料的利用率，降低生產(chǎn)成本；(3)油茶粕蛋白多肽具有良好的功能 活性，一方面其具有很強的抗氧化活性，另一方面，茶籽蛋白多肽還具有較強的免疫調(diào)節(jié)活 性，可有效提高被飼養(yǎng)動物的抗病能力、減少藥物的使用，從而大大提高被飼養(yǎng)動物肉的安 全性。因此油茶粕蛋白多肽是一種非常適合作為高經(jīng)濟(jì)價值動物的飼料添加劑，可添加到 諸如南美對蝦、羅非魚等的飼料中，作為飼料常規(guī)蛋白的高級替代品。目前制備油料餅粕蛋白多肽常用的方法是“先用堿溶酸沉提取蛋白再用蛋白酶水 解法”或“對餅粕直接用產(chǎn)蛋白酶的微生物接種發(fā)酵法”，這些方法的致命弱點有三個(1) 提取的蛋白質(zhì)變性嚴(yán)重，水溶性差，導(dǎo)致后續(xù)蛋白酶酶解的效率低；( 環(huán)境污染嚴(yán)重，堿 溶酸沉法提取蛋白后，廢液難處理，對環(huán)境影響大；C3)對餅粕直接用產(chǎn)蛋白酶的微生物接 種發(fā)酵法，這種方法因為獲得的蛋白酶活性不強，水解能力有限，且水解度不易控制，發(fā)酵 時間長，生產(chǎn)效率低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有蛋白多肽制備方法存在的上述缺陷，提供一種蛋白質(zhì)變 性少，水溶性優(yōu)良，生產(chǎn)效率高，對環(huán)境污染少的功能性飼料用添加劑油茶粕蛋白多肽的制 備方法。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的，其包括以下步驟(1)將油茶籽經(jīng)榨油后的餅粕用粉碎機粉碎，過100目篩；(2)用水浸提法，按照固體質(zhì)量與液體體積比為1:7 13(優(yōu)選1:8 12)的比例，進(jìn)行茶 皂素分離，浸提溫度為65 85°C (優(yōu)選7(T80°C)，浸提時間為6 10 h (優(yōu)選疒9 h)，浸提液 PH值為7.0，浸提完成后離心，使浸提液和茶粕分離，得到脫除茶皂素的油茶粕；(3)按照固體質(zhì)量與液體體積比為1:7 13(優(yōu)選1:纊12)的比例，將脫皂素油茶粕加入清水中浸泡廣3 h(優(yōu)選2 h)，調(diào)節(jié)pH值至8.0，加入由堿性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶按質(zhì)量比 為f 4:1 (優(yōu)選3:1)組成的復(fù)合蛋白酶，復(fù)合酶用量為已脫除茶皂素的油茶粕所含蛋白量 (用凱氏定氮法測定)的廣3 wt%(優(yōu)選1. 5 2. 5 wt%)，置于溫度45 55°C (優(yōu)選50°C )水 浴搖床中水解12 16 h (優(yōu)選13 14 h)；(4)水解完成后，將水解物加熱至8(T90°C(優(yōu)選85°C)，維持5 15 min(優(yōu)選8 12 min)，使酶失活；(5)離心分離固液相，收集上清液；(6)將上清液pH值調(diào)節(jié)至中性；(7)用孔徑為0.Γ μ m的微孔膜(優(yōu)選聚丙烯高分子超細(xì)纖維膜)進(jìn)行過濾，去除大 分子；(8)置于真空度低于0.098MPa，35飛5°C (優(yōu)選40°C )低溫真空干燥，得到相對分子質(zhì) 量為1000 Da以下的油茶粕蛋白多肽。本發(fā)明的優(yōu)點是生產(chǎn)成本低，使用本發(fā)明方法獲得的產(chǎn)品用于養(yǎng)殖，動物成活率、 增重率顯著提高，免疫力明顯增強，養(yǎng)殖效果明顯；無毒副作用；可使農(nóng)業(yè)廢棄物資源得到 綜合利用，變廢為寶，有利于環(huán)保，經(jīng)濟(jì)和社會效益顯著。
具體實施例方式以下結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。實施例1(1)將油茶籽經(jīng)榨油后的餅粕用粉碎機粉碎，過100目篩；(2)用水浸提法，按照固體質(zhì)量與液體體積比為1:8的比例，進(jìn)行茶皂素分離，浸提溫 度為70°C，浸提時間為9 h，浸提液pH值為7. 0，浸提完成后離心，使浸提液和茶粕分離，得 到脫除茶皂素的油茶粕；(3)按照固體質(zhì)量與液體體積比為1:8的比例，將脫皂素油茶粕加入清水中浸泡2h， 調(diào)節(jié)PH值至8.0，加入由風(fēng)味蛋白酶和堿性蛋白酶按質(zhì)量比為3:1組成的復(fù)合蛋白酶，復(fù)合 酶用量為已脫除茶皂素的油茶粕所含蛋白量(用凱氏定氮法測定)的1.5 wt%，置于溫度 50°C水浴搖床中水解14 h ；(4)水解完成后，將水解物加熱至85°C，維持8min,使酶失活；(5)離心分離固液相，收集上清液；(6)用0.5 mol/L的鹽酸將上清液pH值調(diào)節(jié)至中性；(7)用孔徑為0.Γ μ m的聚丙烯高分子超細(xì)纖維膜進(jìn)行過濾，去除大分子；(8)置于真空度低于0.098MPa，40°C低溫真空干燥，得到相對分子質(zhì)量低于1000 Da 的油茶粕蛋白多肽。實施例2(1)將油茶籽經(jīng)榨油后的餅粕用粉碎機粉碎，過100目篩；(2)用水浸提法，按照固體質(zhì)量與液體體積比為1:12的比例，進(jìn)行茶皂素分離，浸提溫 度為80°C，浸提時間為7 h，浸提液pH值為7. 0，浸提完成后離心，使浸提液和茶粕分離，得 到脫除茶皂素的油茶粕；(3)按照固體質(zhì)量與液體體積比為1:12的比例，將脫皂素油茶粕加入清水中浸泡2.0h，調(diào)節(jié)pH值至8.0，加入由風(fēng)味蛋白酶和堿性蛋白酶按質(zhì)量比為3:1組成的復(fù)合蛋白酶，復(fù) 合酶用量為已脫除茶皂素的油茶粕所含蛋白量(用凱氏定氮法測定)的2. 5 wt%，置于溫度 50°C水浴搖床中水解13 h ；(4)水解完成后，將水解物加熱至85°C，維持12min，使酶失活；(5)離心分離固液相，收集上清液；(6)用0.5 mol/L的鹽酸將上清液pH值調(diào)節(jié)至中性；(7)用孔徑為0.Γ μ m的聚丙烯高分子超細(xì)纖維膜進(jìn)行過濾，去除大分子；(8)置于真空度低于0.098MPa，40°C低溫真空干燥，得到相對分子質(zhì)量低于1000 Da 的油茶粕蛋白多肽。實施例3在每千克飼料中添加500 mg實施例1制備的油茶粕蛋白多肽飼喂南美白對蝦5周，與 基礎(chǔ)飼料組(未添加油茶粕蛋白多肽)相比，其成活率提高了 15. 2%，增重率提高了 25. 4%， 免疫力增強(血清溶菌酶活力提高了 49. 1%，酸性磷酸酶活力提高了 63. 7%，堿性磷酸酶活 力提高了 59. 3%，超氧化物歧化酶活力提高了 61. 5%，丙二醛含量降低了 21. 6%，所述酶的活 力與丙二醛的含量均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的相應(yīng)試劑盒，用分光光度法進(jìn)行 測定)。實施例4在每千克飼料中添加1000 mg實施例1制備的油茶粕蛋白多肽飼喂南美白對蝦5周，與 基礎(chǔ)飼料組(未添加油茶粕蛋白多肽)相比，其成活率提高了 20. 4%，增重率提高了 32. 6%， 免疫力增強(血清溶菌酶活力提高了 56. 8%，酸性磷酸酶活力提高了 75. 9%，堿性磷酸酶活 力提高了 70. 8%，超氧化物歧化酶活力提高了 76. 2%，丙二醛含量降低了 27. 9%，所述酶的活 力與丙二醛的含量均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的相應(yīng)試劑盒，用分光光度法進(jìn)行 測定)。實施例5在每千克飼料中添加1500 mg實施例2制備的油茶粕蛋白多肽飼喂南美白對蝦5周，與 基礎(chǔ)飼料組(未添加油茶粕蛋白多肽)相比，其成活率提高了 7%，增重率提高了 38. 8%， 免疫力增強(血清溶菌酶活力提高了 60. 3%，酸性磷酸酶活力提高了 82. 1%，堿性磷酸酶活 力提高了 76. 8%，超氧化物歧化酶活力提高了 83. 4%，丙二醛含量降低了 33. 7%，所述酶的活 力與丙二醛的含量均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的相應(yīng)試劑盒，用分光光度法進(jìn)行 測定)。實施例6在每千克飼料中添加2000 mg實施例2制備的油茶粕蛋白多肽飼喂南美白對蝦5周，與 基礎(chǔ)飼料組(未添加油茶粕蛋白多肽)相比，其成活率提高了 26. 3%，增重率提高了 41. 2%， 免疫力增強(血清溶菌酶活力提高了 63. 1%，酸性磷酸酶活力提高了 84. 9%，堿性磷酸酶活 力提高了 78. 5%，超氧化物歧化酶活力提高了 85. 1%，丙二醛含量降低了 35. 2%，所述酶的活 力與丙二醛的含量均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的相應(yīng)試劑盒，用分光光度法進(jìn)行 測定)。
權(quán)利要求
1.一種功能性飼料用添加劑油茶粕蛋白多肽的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)將油茶籽經(jīng)榨油后的餅粕用粉碎機粉碎，過100目篩；(2)用水浸提法，按照固體質(zhì)量與液體體積比為1:7 13的比例，進(jìn)行茶皂素分離，浸提 溫度為65、5°C，浸提時間為6 10 h，浸提液pH值為7. 0，浸提完成后離心，使浸提液和茶粕 分離，得到脫除茶皂素的油茶粕；(3)按照固體質(zhì)量與液體體積比為1:7 13的比例，將脫皂素油茶粕加入清水中浸泡 Γ3 h，調(diào)節(jié)pH值至8.0，加入由堿性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶按質(zhì)量比為2 4:1組成的復(fù)合蛋 白酶，置于溫度45飛5°C水浴搖床中水解12 16 h，復(fù)合酶用量為已脫除茶皂素的油茶粕所 含蛋白量的廣3 wt%,已脫除茶皂素的油茶粕所含蛋白量用凱氏定氮法測定；(4)水解完成后，將水解物加熱至8(T90°C，維持5 15min，使酶失活；(5)離心分離固液相，收集上清液；(6)將上清液pH值調(diào)節(jié)至中性；(7)用孔徑為0.Γ μ m的微孔膜進(jìn)行過濾，去除大分子；(8)置于真空度低于0.098MPa，35飛5°C低溫真空干燥，得到油茶粕蛋白多肽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的功能性飼料用添加劑油茶粕蛋白多肽的制備方法，其特征在 于步驟⑵所述水浸提法，按照固體質(zhì)量與液體體積比為1:壙12的比例，進(jìn)行茶皂素分離， 浸提溫度為7(T80°C，浸提時間為7 9 h。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的功能性飼料用添加劑油茶粕蛋白多肽的制備方法，其特征在 于步驟(3)所述按照固體質(zhì)量與液體體積比為1:壙12的比例，將脫皂素油茶粕加入清水中 浸泡2 h，加入由堿性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶按質(zhì)量比為3:1組成的復(fù)合蛋白酶，復(fù)合酶用量 為已脫除茶皂素的油茶粕所含蛋白量的1.5 2. 5 wt%，置于溫度50°C水浴搖床中水解13 14 h。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的功能性飼料用添加劑油茶粕蛋白多肽的制備方法，其特征在 于步驟(4)所述水解完成后，將水解物加熱至85°C，維持纊12 min，使酶失活。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的功能性飼料用添加劑油茶粕蛋白多肽的制備方法，其特征在 于步驟(7)所述用孔徑為0. Γι μ m的聚丙烯高分子超細(xì)纖維膜進(jìn)行過濾，去除大分子。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的功能性飼料用添加劑油茶粕蛋白多肽的制備方法，其特征在 于步驟(8)所述置于真空度低于0. 098 MPa，40°C低溫真空干燥，得到油茶粕蛋白多肽。
全文摘要
一種功能性飼料用添加劑油茶粕蛋白多肽的制備方法，其包括以下步驟(1)將油茶餅粕粉碎；(2)脫皂素；(3)加復(fù)合酶進(jìn)行水解；(4)滅酶，溫度80~90℃，時間5~15min；(5)離心分離，收集上清液；(6)調(diào)上清液pH值至中性；(7)用微孔膜過濾；(8)低溫真空干燥，溫度35~55℃，真空度低于0.098MPa，得到油茶粕蛋白多肽；本發(fā)明制得的油茶粕蛋白多肽的相對分子質(zhì)量低于1000Da，屬小分子肽，無苦味，無毒，食用安全，具有很強的免疫調(diào)節(jié)活性，可以有效提高被飼養(yǎng)動物的成活率和增重率。本發(fā)明的生產(chǎn)成本低，可綜合利用農(nóng)業(yè)廢棄資源，變廢為寶，有利于環(huán)保，經(jīng)濟(jì)和社會效益顯著。
文檔編號A23K1/14GK102048026SQ20101057292
公開日2011年5月11日 申請日期2010年12月6日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月6日
發(fā)明者周波, 唐靜, 鐘海雁, 龍奇志, 龔吉軍 申請人:中南林業(yè)科技大學(xué)