專利名稱：蒔蘿子揮發(fā)油制備方法及其對油菜菌核病的防治作用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及蒔蘿子揮發(fā)油的制備方法，以及蒔蘿子揮發(fā)油對油菜菌核病的防治作用，屬于農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
揮發(fā)油(essential oil)是一類由揮發(fā)性天然化合物組成并帶有強烈氣味的油狀 液體總稱，它是一種植物體內(nèi)的次生代謝物。揮發(fā)油在植物界分布廣泛，主要集中在菊科、 傘形科、唇形科、蕓香科、樟科、姜科、木蘭科等植物中。揮發(fā)油具有豐富的生物活性，具體表 現(xiàn)為抗菌驅(qū)蟲、抗炎、抗病毒、抗氧化、抗腫瘤、解熱鎮(zhèn)痛祛痰止咳等。目前已知的植物揮發(fā) 油有大約3000種，其中約300種已被廣泛應(yīng)用于制藥、食品、農(nóng)業(yè)、化妝品等工業(yè)中。蒔蘿(AnetAum graveolens L)為傘形科一年生草本植物。蒔蘿用作藥用植物的 歷史可追溯到2000多年前，在食品工業(yè)中，蒔蘿被廣泛的用作調(diào)味劑。現(xiàn)世界各地多有栽 培，主要生產(chǎn)國為印度，我國南北各地均有栽培。我國應(yīng)用其作為藥用植物歷史悠久，歷代 本草，多有著錄。其干燥成熟果實稱為蒔蘿子，亦為常用的維吾爾族藥。蒔蘿在臨床上主要 用于治療消化系統(tǒng)疾病，如胃痛、消化不良、口臭及腸胃氣脹，并有安神、鎮(zhèn)靜的療效，亦可 用于治療小兒打嗝，對哺乳期婦女有催乳的作用。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明蒔蘿子揮發(fā)油具有 抗菌、驅(qū)蟲、抗氧化、催乳、調(diào)節(jié)女性生育周期及降血脂等藥理活性。油菜菌核病由核盤菌Schroiior腫(Lib.) de Bary]引起，在我 國各油菜產(chǎn)區(qū)，尤其在長江流域及東南沿海冬油菜產(chǎn)區(qū)發(fā)生最為嚴重，一般年份油菜菌核 病發(fā)病率為10% 30%，嚴重年份達80%以上，油菜感病后減產(chǎn)達11% 73%，含油量降低 1% 5%。核盤菌是一種危害嚴重、世界性的植物病害真菌，寄主超過400種植物。我國報 道的核盤菌自然寄主有36科214種植物，目前主要采用抗病品種和化學(xué)農(nóng)藥苯丙咪唑類或 二甲酰亞胺類等抗菌劑作為防治手段。如今，合成抗菌劑的安全性日益受到人們的關(guān)注，使 得植物源農(nóng)藥(揮發(fā)油、植物提取物等)需求量逐漸增加。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種蒔蘿子揮發(fā)油的制備方法，以及蒔蘿子 揮發(fā)油對油菜菌核病的防治作用
蒔蘿子揮發(fā)油的制備方法如下
將干燥的蒔蘿子粉碎，過篩，稱取適量，加入蒸餾水，蒸餾，餾出物除掉水相后，干燥得 蒔蘿子揮發(fā)油。采用氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)聯(lián)用的方法，從制得的蒔蘿子揮發(fā)油中共鑒定出 了 23個化合物(表1)，占總含量的99.4wt%。主要化合物有香芹酮(41. 5wt%)、檸檬烯 (32. 6wt%)及芹菜腦(16. 8wt%)等?！断懔舷憔瘖y品》1995年第4期，報道了用水蒸氣蒸餾法提取甘肅產(chǎn)蒔蘿子揮 發(fā)油主要成分為香芹酮(40. 37%)及檸檬烯(12. 64 %)?！断懔舷憔瘖y品》2009年第2期報道了用頂空固相萃取方法富集廣西產(chǎn)的蒔蘿子粉碎時釋放的揮發(fā)氣體成分，用GC-MS分 析了其主要成分為檸檬烯(50. 48%)、香芹酮(41. 14%)及二氫香芹酮(3.73%)?！短烊划a(chǎn)物 研究與開發(fā)》2010年第22期報道了用水蒸氣蒸餾的方法提取了廣西產(chǎn)蒔蘿子揮發(fā)油，用 GC-MS方法鑒定了其主要成分為香芹酮(54. 587%)、檸檬烯(18. 492%)及芹菜腦(11. 949%)。 《Journal of Agricultural and Food Chemistry》2003 年第 13 期報道了用水蒸氣蒸餾方 法提取了保加利亞蒔蘿子揮發(fā)油，GC-MS分析其主要成分為香芹酮(50. 1%%)、檸檬烯(44. 1 %)及二氫香芹酮(1. 9%)。中國專利CN101298581A公開了一種用超臨界提取方法制備了蒔 蘿子揮發(fā)油，GC-MS分析其重要成分為香芹酮(73. 6%)和檸檬烯(14. 7 %)。這些報告都與 本發(fā)明涉及的蒔蘿子揮發(fā)油主要化學(xué)成分或含量有所不同。 沒有任何文獻報道過用蒔蘿子揮發(fā)油防治油菜菌核病。在本發(fā)明中，通過體內(nèi)、體 外實驗證實了蒔蘿子揮發(fā)油在接觸和揮發(fā)條件下對核盤菌菌絲生長有較好的抑制作用。測 定了不同濃度蒔蘿子揮發(fā)油在接觸實驗時對于菌絲生長的抑制作用，結(jié)果表明在揮發(fā)油濃 度為0. 25-0. 3 μ 1/ml時對核盤菌菌絲生長抑制率可達50_60%，在揮發(fā)油濃度為0. 9-1. 2 μ 1/ml時，對于菌絲生長的抑制率范圍可達90-100%。在揮發(fā)條件下測定了不同濃度蒔蘿 子揮發(fā)油對于菌絲生長的抑制作用，結(jié)果表明揮發(fā)油濃度在0.02 μ 1/ml air以下時對于核 盤菌菌絲生長沒有抑制作用，當(dāng)揮發(fā)油濃度為0. 10-0. 14 μ 1/ml air時對于菌絲生長的抑 制率可達75-100%。蒔蘿子揮發(fā)油在接觸和揮發(fā)條件下對核盤菌菌核萌發(fā)也有較好的抑制作用。在 接觸條件下，測定了不同濃度蒔蘿子揮發(fā)油對于核盤菌菌核萌發(fā)的抑制作用。結(jié)果表 明當(dāng)揮發(fā)油濃度低于0. 1μ 1/ml以下時，對于菌核萌發(fā)沒有抑制作用；當(dāng)揮發(fā)油濃度為 0. 8-1.0 μ 1/ml時，菌核萌發(fā)率僅為20%至0。在揮發(fā)條件下，測定了不同濃度蒔蘿子揮發(fā) 油對于核盤菌菌核萌發(fā)的抑制作用。結(jié)果表明當(dāng)揮發(fā)油濃度低于0.04 μ 1/ml air時，對于 核盤菌菌核萌發(fā)沒有抑制作用；當(dāng)濃度為0. 14-0. 16 μ 1/ml air時，菌核萌發(fā)率僅為20%至 O0蒔蘿子揮發(fā)油對核盤菌有較強的體內(nèi)抑制活性。在預(yù)防實驗中，當(dāng)揮發(fā)油濃度為 0. 1-0. 25 μ 1/ml時，菌斑直徑范圍為23. 8-12. 1mm，而空白對照菌斑直徑為30mm，效果明 顯；當(dāng)揮發(fā)油濃度在0. 5 μ 1/ml及以上時，完全抑制了核盤菌菌絲在油菜葉片上的生長，表 現(xiàn)出良好的預(yù)防效果。在治療實驗中，當(dāng)揮發(fā)油濃度為0. 75-1. 0 μ 1/ml時，菌斑直徑范圍 為10. 9-8. 7_，而空白對照菌斑直徑為30. 4_，表現(xiàn)出明顯的治療效果?？傊?，本發(fā)明蒔蘿子揮發(fā)油的制備方法簡單易行，容易操作。所制備的蒔蘿子揮發(fā) 油對核盤菌菌絲生長和菌核萌發(fā)有較好的抑制作用，可用于油菜菌核病的防治。
具體實施例方式實施例1 蒔蘿子揮發(fā)油的制備
將干燥的蒔蘿子粉碎后過40目篩，稱取400-500g，加入適量蒸餾水，蒸餾，餾出物除 掉水相后，每90-100ml揮發(fā)油用35-45g無水硫酸鈉進行干燥，得到蒔蘿子揮發(fā)油，于4°C冰 箱內(nèi)密封避光保存。以此法獲得的蒔蘿子揮發(fā)油得率可達3. 5% (v/m干重)以上。采用日本SHIMADZU GCMS-QP2010型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對制得的蒔蘿子揮發(fā)油進行了分析。GC條件Rtx -5MS毛細管柱(30mX0. 25mmX0. 25 mm)；進樣口溫度240°C ； 分流進樣，分流比20:1;揮發(fā)油進樣量1 μ 1 ；載氣(99. 999%的高純氦)恒線速度40 cm/ sec ；吹掃氣流量3 ml/min。升溫程序初始溫度70 °C，保持2 min ；再以10 V /min程序 升溫至250°C，保持lOmin。MS條件電子轟擊源(Electron Impact, ΕΙ),電子能量為70 eV，離子源溫度200°C，接口溫度220°C。選取SCAN模式時，質(zhì)量掃描范圍為3(T500(m/z)， 溶劑延遲2. 5 min。根據(jù)保留時間，同時對各化合物質(zhì)譜在OTST數(shù)據(jù)庫進行相似檢索，對 各組分進行定性分析，其相對含量采用面積歸一化法進行計算。GC-MS分析結(jié)果見表1。從 蒔蘿子揮發(fā)油中共鑒定出了 23個化合物(表1)，占總含量的99. 4wt%。主要物質(zhì)有香芹酮 (41. 5wt %)，檸檬烯(32. 6 wt%)及芹菜腦(16. 8 wt%)等。表1蒔蘿子揮發(fā)油主要化學(xué)成分
權(quán)利要求
1.一種蒔蘿子揮發(fā)油的制備方法，其特征在于將干燥的蒔蘿子粉碎，稱取適量，加入 蒸餾水，進行水蒸氣蒸餾，餾出物除掉水相后，干燥得蒔蘿子揮發(fā)油。
2.如權(quán)利要求1所述的蒔蘿子揮發(fā)油的制備方法，其特征在于將干燥的蒔蘿子粉碎 過40目篩。
3.如權(quán)利要求1所述的蒔蘿子揮發(fā)油的制備方法，其特征在于餾出物除掉水相后，每 90-100ml揮發(fā)油用35-45g無水硫酸鈉干燥。
4.蒔蘿子揮發(fā)油用于抑制核盤菌菌絲的生長。
5.蒔蘿子揮發(fā)油用于抑制核盤菌菌核的萌發(fā)。
6.蒔蘿子揮發(fā)油用于油菜菌核病的防治。
全文摘要
本發(fā)明屬于農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域，提供了一種蒔蘿子揮發(fā)油的制備方法將干燥的蒔蘿子粉碎，稱取適量，加入蒸餾水，進行水蒸氣蒸餾，餾出物除掉水相后，干燥得蒔蘿子揮發(fā)油。本發(fā)明的制備方法簡單易行，容易操作。分別在接觸、揮發(fā)實驗條件下測定了蒔蘿子揮發(fā)油對核盤菌菌絲生長及菌核萌發(fā)的抑制作用。結(jié)果證明蒔蘿子揮發(fā)油對核盤菌菌絲生長和菌核萌發(fā)有較好的抑制作用，體內(nèi)抑制核盤菌菌絲生長也表現(xiàn)出較好活性，可用于油菜菌核病的防治。
文檔編號A01P3/00GK102093931SQ20101057999
公開日2011年6月15日 申請日期2010年12月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月9日
發(fā)明者何敬勝, 曾紅, 王有為, 班小泉, 田俊, 陳玉欣, 黃博 申請人:武漢大學(xué)