專利名稱：一種金線蓮的快繁方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種金線蓮的快繁方法。
背景技術：
金^MUinoectochilus.roxburghii (Wall.) Lindl.)自古以來就是民間使用 的珍貴藥材，對治療小兒驚風、高熱、百日咳等有奇效。現(xiàn)代醫(yī)學研究認為野生、栽培或組 培的金線蓮具有強心、止痛和降血糖等功效，對于高血壓、腫瘤有一定的療效。兼具賞葉、觀 花之功用，是觀賞價值極高的花卉珍品。金線蓮為典型的陰性植物，生長在陰蔽的闊葉林下，肥沃腐殖土中，對空氣、溫度、 光照、積溫等生態(tài)條件要求嚴格。由于金線蓮屬的植物種子不具胚乳，無發(fā)芽能力，只有在 與真菌共生條件下，才能促使其種子萌發(fā)生長，因此金線蓮的種子發(fā)芽率很低。長期以來， 對金線蓮的有性繁殖均未取得突破性進展。近年來，隨著金線蓮賴以生存的自然環(huán)境發(fā)生 了變化，野生資源銳減，加上人為的大量采挖，現(xiàn)已瀕臨滅絕。由于組織培養(yǎng)具有環(huán)境因子可人工控制，繁殖周期短、速度快，可周年進行生產(chǎn)， 節(jié)省生產(chǎn)材料，同時還具有保持植物原有優(yōu)良性狀等優(yōu)勢，所以被廣泛采用于很多植物種 苗的工廠化繁育，取得了巨大的的經(jīng)濟效益。經(jīng)過多年的組織培養(yǎng)實踐，金線蓮組培快繁技 術日趨成熟，但是在快繁過程中仍存在著一些影響快繁的突出問題(1)金線蓮叢生芽誘 導、增殖、幼苗培養(yǎng)與生根所使用的基本培養(yǎng)基(MS)仍需進一步改良。(2)金線蓮試管苗移 植栽培技術仍然深受傳統(tǒng)的人工栽培技術的影響。這勢必給金線蓮苗健壯生長、快速繁殖、 簡化栽培管理、降低生產(chǎn)成本等生產(chǎn)技術環(huán)節(jié)的改良、發(fā)展帶來一定困難與局限性。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種金線蓮的快繁方法。本發(fā)明的金線蓮的快繁方法，包括種苗消毒、芽誘導、芽增殖、幼苗培養(yǎng)、根誘導、 試管苗移栽，其中所述芽增殖的培養(yǎng)基為去除肌醇的MS+ ZnS04 · 7H20
6mg/L+KH2P04180mg/L+6-BA4mg/L+ NAAlmg/L+洲蔗糖；所述幼苗培養(yǎng)的培養(yǎng)基為去 除肌醇的 MS+ZnS04 · 7H203mg/L +KH2P04280mg/L+NAA 0. 6mg/L+4% 蔗糖，pH5_6 ；所述根誘導 的培養(yǎng)基為
MS+ ZnSO4WH2O 3mg/L+KH2P04 280mg/L+IBA0. 6mg/L+4% 蔗糖+0. 2% 活性碳；所述試管 苗移栽采用流動循環(huán)式溶液培養(yǎng)。所述流動循環(huán)式溶液培養(yǎng)的具體步驟如下
(1)取莖段粗壯，高3 3.5cm的試管苗進行移栽；
(2)移栽前先打開瓶塞煉苗10d，然后將試管苗從培養(yǎng)瓶取出，洗凈附著其上的固體培 養(yǎng)基后，放入400倍多菌靈稀釋液中，消毒5-7min ；
(3)將上述消毒后的試管苗固定在泡沫板上，株間距8'8cm ；
(4)向培養(yǎng)槽中注入稀釋4倍濃度的MS培養(yǎng)基，pH值5.4^6. 5，初始水位達5_6 cm，根據(jù)每天蒸發(fā)情況，及時補充無菌水；
(5)將固定有試管苗的泡沫板置于培養(yǎng)槽中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件溫度2(T25°C，濕度 75 85%，光照強度2600 800 Ix ；
(6)培養(yǎng)30天左右，葉面追施葉面肥，葉面噴霧，以葉面滴水為度，根據(jù)金線蓮苗的生 長情況，適時葉面追肥，時間每隔半個月一次。針對影響組培快繁中的突出問題，本發(fā)明以篩選金線蓮誘導、增殖、幼苗培養(yǎng)和根 誘導培養(yǎng)基為目的，把簡化培養(yǎng)基的成分，優(yōu)化激素的種類、配比和濃度做為研究的重點， 運用正交試驗設計和完全隨機區(qū)組試驗設計，達到優(yōu)化培養(yǎng)、除去肌醇，節(jié)約成本的目的。 同時突破傳統(tǒng)的幼苗土培方式，采用流動循環(huán)式溶液培養(yǎng)，克服了土培金線蓮土壤水分不 易控制、根系不發(fā)達、緩苗時間長、幼苗生長慢的缺點，流動循環(huán)式溶液培養(yǎng)有利于金線蓮 生長發(fā)育，適合組培苗馴化移栽，其植株生長健壯，葉片較大生長旺盛且為墨綠色，有光澤， 最大的葉片寬幅可達2. Icm0由于營養(yǎng)液流動，便于水氣交流，營養(yǎng)均衡，特別能促進根部生 長，單株平均鮮生高達2. 29g,比同期土培重0. 37g，從株高、新葉數(shù)、發(fā)根率、鮮質(zhì)量等生物 量指標來看，都明顯優(yōu)于傳統(tǒng)土培栽培方式，而且易于進行人工操作管理。


圖1為不同栽培方式對移栽組培苗生長的影響。
具體實施例方式1、消毒
選擇生長健壯的野生金線蓮或人工栽培的金線蓮植株，用流動水將植株洗凈，去掉根、 葉，再用小刀把葉鞘及頂芽外葉削掉，注意不要傷及腋芽，再用肥皂水振蕩l-2min，洗去肥 皂水后，用無菌水沖洗一遍，用70-75%乙醇浸泡l-2min，再放入1- 氯化汞溶液中浸泡 5-10min,之后用無菌水沖洗4飛遍備用。2、接種
將消毒好的材料切成帶廣2個腋芽的莖段，接到芽誘導培養(yǎng)基上1/2MS+6-BA 5mg/L + NAA 2mg/L+ZT 0. lmg/L + 瓊脂 0. 65g/L+4% 蔗糖，pH5_6。3、培養(yǎng)
在金線蓮的芽誘導培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)溫度控制在23-25°C，光照度為50(Γ6001χ。4、芽增殖
將誘導芽接種到芽增殖培養(yǎng)基上，進行暗培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度20-22°C，所述芽增殖培養(yǎng)基 為MS (去除肌醇)+ZnSO4 · 7H203mg/L+KH2P04180mg/L+6-BA2mg/L+ NAAlmg/L+4% 蔗糖， PH5-6;接種20 d后側(cè)芽開始萌動。在芽體器官分化的同時，繼續(xù)大量增殖新芽，40 d后每 個外植體大約可以分化出15-20個莖高l-2cm的新芽，擴繁迅速，生長密集。5、幼苗培養(yǎng)
芽增殖培養(yǎng)3個月左右長出幼苗，選擇有2-3個葉片、高約34cm的生長良好的小 苗，接在幼苗培養(yǎng)基上，每個培養(yǎng)基上接2-3株，進行光培養(yǎng)，每天光照12h，光照強度為 500-600 lx，溫度控制在20-22 ；所述幼苗培養(yǎng)基為MS (去除肌醇)+ZnSO4 · 7H203mg/L +KH2P04280mg/L+NAA 0. 6mg/L+4% 蔗糖，pH5_6。
6、根誘導
幼苗培養(yǎng)3個月左右可轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基(MS+ ZnSO4 · 7H20 3mg/L+ KH2P04 280mg/L+IBA0. 6mg/L+4%蔗糖+0.覬活性碳)，每天光照10-12 h，光照強度 120(Γ 5001χ，溫度控制在20-22 ；培養(yǎng)10 d后開始生根，根從靠近培養(yǎng)基的每個節(jié)長出 1-2條，呈肉質(zhì)狀，根比較短且不分枝，其上有細密、乳白色的根毛，培養(yǎng)50 d左右，植株長 至4-5cm，葉色暗綠，根系發(fā)育完好時可進行室外移栽。7、金線蓮流動循環(huán)式溶液培養(yǎng)
(1)取莖段粗壯，長勢好，高約3 3.5cm,適宜移植的試管苗；
(2)移栽前先打開瓶塞煉苗10d，然后將試管苗從培養(yǎng)瓶取出，洗凈附著其上的固體培 養(yǎng)基后，放入400倍多菌靈稀釋液中，消毒5-7min ；
(3)將上述消毒后的試管苗用軟性海綿固定在泡沫板(100'60'2. 5cm )上，株間距 (8'8 cm)；
(4)向培養(yǎng)槽(105'65'IOcm)中注入稀釋4倍濃度的常用培養(yǎng)基MS，pH值5.Γ6.5， 初始水位達5-6 cm左右，根據(jù)每天蒸發(fā)情況，每天及時補充無菌水；
(5)將固定有試管苗的泡沫板置于培養(yǎng)槽中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件溫度2(T25°C，濕度 75 85%，光照強度2600 800 Ix ；
(6)培養(yǎng)30天左右，葉面追施葉面肥(0.6%尿素(w/w) +0. 2%磷酸二氫鉀液(w/w))，葉 面噴霧，以葉面滴水為度，根據(jù)金線蓮苗的生長情況，適時葉面追肥，時間每隔半個月一次。8、不同栽培方式對金線蓮生長的影響
比較不同栽培方式對金線蓮生長的影響，如表1和圖1所示，采用本發(fā)明的金線蓮快繁 方法，其植株生長健壯，根系粗壯，葉片較大生長旺盛且為墨綠色，有光澤，最大的葉片寬幅 可達2. Icm0由于營養(yǎng)液流動，便于水氣交流，營養(yǎng)均衡，特別能促進根部生長，單株平均鮮 生高達2. 29g,比同期土培重0. 37g，從株高、新葉數(shù)、發(fā)根率、鮮質(zhì)量等生物量指標來看，都 明顯優(yōu)于傳統(tǒng)土培栽培方式，而且易于進行人工操作管理。表1不同栽培方式對金線蓮生長的影響
權利要求
1.一種金線蓮的快繁方法，包括種苗消毒、芽誘導、芽增殖、幼苗培養(yǎng)、根誘導、試管苗 移栽，其特征在于所述芽增殖的培養(yǎng)基為去除肌醇的MS+ ZnS04 · 7H206mg/L+KH2P04180mg/L+6-BA4mg/L+ NAAlmg/L+2% 蔗糖。
2.根據(jù)權利要求1所述的金線蓮的快繁方法，其特征在于所述幼苗培養(yǎng)的培養(yǎng)基為 去除肌醇的 MS+ZnS04 · 7H203mg/L +KH2P04280mg/L+NAA 0. 6mg/L+4% 蔗糖，pH5_6。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的金線蓮的快繁方法，其特征在于所述根誘導的培養(yǎng)基為MS+ ZnSO4 · 7H20 3mg/L+KH2P04 280mg/L+IBA0. 6mg/L+4% 蔗糖 +0. 2% 活性碳。
4.根據(jù)權利要求1、2或3所述的金線蓮的快繁方法，其特征在于所述試管苗移栽采 用流動循環(huán)式溶液培養(yǎng)。
5.根據(jù)權利要求4所述的金線蓮的快繁方法，其特征在于所述流動循環(huán)式溶液培養(yǎng) 的具體步驟如下(1)取莖段粗壯，高3 3.5cm的試管苗進行移栽；(2)移栽前先打開瓶塞煉苗10d，然后將試管苗從培養(yǎng)瓶取出，洗凈附著其上的固體培 養(yǎng)基后，放入400倍多菌靈稀釋液中，消毒5-7min ；(3)將上述消毒后的試管苗固定在泡沫板上，株間距8'8cm ；(4)向培養(yǎng)槽中注入稀釋4倍濃度的MS培養(yǎng)基，pH值5.4^6. 5，初始水位達5_6 cm，根 據(jù)每天蒸發(fā)情況，及時補充無菌水；(5)將固定有試管苗的泡沫板置于培養(yǎng)槽中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件溫度2(T25°C，濕度 75 85%，光照強度2600 800 Ix ；(6)培養(yǎng)30天左右，葉面追施葉面肥，葉面噴霧，以葉面滴水為度，根據(jù)金線蓮苗的生 長情況，適時葉面追肥，時間每隔半個月一次。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種金線蓮的快繁方法，包括種苗消毒、芽誘導、芽增殖、幼苗培養(yǎng)、根誘導、試管苗移栽，所述芽增殖的培養(yǎng)基為去除肌醇的MS+ZnSO4·7H2O6mg/L+KH2PO4180mg/L+6-BA4mg/L+NAA1mg/L+2%蔗糖。本發(fā)明以篩選金線蓮誘導、增殖、幼苗培養(yǎng)和根誘導培養(yǎng)基為目的，達到優(yōu)化培養(yǎng)、除去肌醇，節(jié)約成本的目的。同時突破傳統(tǒng)的幼苗土培方式，采用流動循環(huán)式溶液培養(yǎng)，有利于金線蓮生長發(fā)育，適合組培苗馴化移栽。
文檔編號A01H4/00GK102090341SQ20101060431
公開日2011年6月15日 申請日期2010年12月24日 優(yōu)先權日2010年12月24日
發(fā)明者寧書菊, 林亮亮, 魏道智 申請人:福建農(nóng)林大學