專利名稱：殼聚糖在防治水稻細菌性條斑病中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及植物保護技術的生物防治領域，尤其涉及殼聚糖在防治水稻細菌性條 斑病中的應用。
背景技術：
細條病亦是水稻上一種重要的細菌性病害，1918年由菲律賓首次報道并被誤以 為水稻細菌性條紋病(Bacterail stripe of rice)長達數(shù)年。水稻細菌性條斑病最初 以Xanthomonas translucents f. sp. oryzea,誤將其認為白葉枯病。其后，Goto對此病菌 和稻谷類黑穎病菌的幾個變種作了比較研究后提出用Xanthomonas translucents f. sp. oryzea 代替 Xanthomonas oryzicola.隨后，Bradbury (1971)又將其修正為 Xanthomonas translucents f. sp. oryzicola.最終，Dye 重新命名為 Xanthomonas camperstris pv. oryzicola., 1990年Swing等根據(jù)病原的表型、基因型、化學分類資料重新承認水稻黃 單胞菌這個種(Xanthomonas oryzae)，該種包括了分別引起白葉枯病和細條病黃單胞桿菌 白葉枯致病型(Xanthomonas oryzae pv. oryzae)和細菌性條斑病致病型(Xanthomonas oryzae pv. oryzicola) 2個變種。至此該菌的地位才得以穩(wěn)固。
目前是我國繼稻瘟病、紋枯病和白葉枯病后的第四大水稻病害，也是我國水稻上 唯一的檢疫性病害。由于近年來感病的雜交水稻面積推廣和稻種的南繁、調運，致使此病迅 速蔓延，病區(qū)不斷擴大，常年發(fā)生面積在460萬公頃以上?，F(xiàn)已成為水稻特別是秈稻上的重 大病害。由于缺乏優(yōu)良的抗病品種，該病在我國湖南、廣東、廣西和海南等地的危害已經超 過水稻白葉枯病。到目前為止，還沒有發(fā)現(xiàn)有效的化學制劑來防治水稻細菌性條斑病，應用 較廣的銅制劑對該病害的效果也不好。因此發(fā)明新的有效的生化試劑來抵抗這種病害非常 有必要。
殼聚糖是由甲殼素經脫乙?；幚砗蟮漠a物，通常將脫乙酰度大于55%的甲殼素 稱作殼聚糖，其學名為聚氨基葡萄糖，化學名(1，4) -2-氨基-2-脫氧-β -D-葡萄糖，廣泛 存在于蝦、蟹等動物外殼和藻類、真菌的細胞壁中。
殼聚糖是一種抗菌譜較廣的天然物質，對細菌、酵母菌和真菌等均有不同程度的 抑制作用。殼聚糖具有良好的生物相溶性，可生物降解性以及無毒副作用，其分子內含 有-OH和-NH2-活性基團，易與多種有機物發(fā)生反應，目前廣泛應用在工業(yè)、農業(yè)、醫(yī)藥、化 工、環(huán)境保護和水處理等領域。發(fā)明內容
本發(fā)明提供了一種殼聚糖在防治水稻細菌性條斑病中的應用，解決了現(xiàn)有藥劑 少、防效差的問題。
殼聚糖在防治水稻細菌性條斑病中的應用。
本發(fā)明還提供了殼聚糖在提高水稻抗細菌性條斑病性能、降低水稻細菌性 條斑病發(fā)病率和病害程度以及抑制水稻細菌性條斑病病原菌(Xanthomonas oryzaepv. oryzicola)生長中的應用。
本發(fā)明還提供了一種防治植物細菌條斑病的藥劑，該種藥劑分別以殼聚糖為主要 成份，添加常規(guī)的藥用賦形劑，如水、乙酸等，制成水劑、粉劑等劑型。
所述的殼聚糖的脫乙酰度優(yōu)選大于85%，易獲得，成本低。
本發(fā)明還提供了一種上述藥劑的制備方法，包括以下步驟
將殼聚糖粉末溶于體積百分比為的乙酸溶液中，然后添加水配制成濃度為 5mg/mL的殼聚糖溶液。NaOH調節(jié)pH至6. 0，使得殼聚糖溶解，其用量和濃度可以根據(jù)需要 進行調整。
采用上述殼聚糖溶液不僅在離體條件下能抑制Xanthomonas oryzae pv. oryzicola(Xoc)的生長，而且在水稻活體上能有效降低條斑病的發(fā)生率和嚴重程度。
殼聚糖對水稻無毒害作用，而且能顯著減少了水稻細菌性條斑病的發(fā)病率以及病 斑直徑，同時還能增強其抗細菌性條斑病的性能。


圖1為實施例3中不同濃度的殼聚糖溶液對Xoc BLS-Ol生長的影響；
圖2為實施例5中濃度為0. 20mg/mL的殼聚糖對水稻病害發(fā)生率的影響；
圖3為實施例5中濃度為0. 20mg/mL的殼聚糖對水稻病斑直徑的影響；具體實施方式
實施例1制備殼聚糖溶液
將脫乙酰度為85%的殼聚糖粉末溶解于體積百分比為的乙酸中，配制成濃度 為5mg/mL的殼聚糖溶液，用NaOH調節(jié)pH至6. 0，在室溫下?lián)uM小時，用高壓滅菌鍋121°C 滅菌20分鐘，待用。實驗以pH為6. 0的無菌去離子水作為殼聚糖處理的對照。
實施例2離體條件下檢測殼聚糖對Xoc BLS-01生長的影響
本實施例的菌株Xoc BLS-Ol由浙江大學生物技術研究所提供，該菌株為試驗材 料，其特性對試驗結果沒有影響。本實施例采用計數(shù)法檢測殼聚糖對Xoc BLS-Ol生長的影 響，具體方法如下
Xoc BLS-Ol在瓊脂培養(yǎng)基中，培養(yǎng)48小時，用無菌水制得菌懸液(IO9CFU/ mL)。10倍梯度稀釋，吸取各濃度的Xoc菌懸液10 μ L到平板上，處理后的平板置于28V溫 箱培養(yǎng)48小時。實驗以pH為6. O的無菌去離子水作為殼聚糖處理的對照，每個處理設六個重復。實驗重復兩次。
實施例3檢測殼聚糖不同濃度時的抑菌活性
在實施例1制得的5mg/mL的殼聚糖溶液里加入無菌的去離子水配制成濃度為 0. 05，0. 10，和0. 20mg/mL的殼聚糖溶液。在各處理中接種Xoc菌懸液(108CFU/mL)，160" minJ8°C條件下振蕩培養(yǎng)4小時，收集樣本按實施例2檢測菌體數(shù)。實驗以pH為6. O的無 菌去離子水作為殼聚糖處理的對照。
如圖1所示，殼聚糖溶液在不同濃度時對Xoc BLS-Ol表現(xiàn)出顯著的抑菌活性，而 且隨著濃度的增加抑菌活性逐漸增強。與對照相比，殼聚糖溶液在濃度0. 05mg/mL時細胞 數(shù)量下降了 1. 88Log CFU/mL，在濃度0. 10mg/mL時細菌數(shù)量下降了 2. 05Log CFU/mL，然而在0. 20mg/mL時細菌數(shù)量下降了 3. 96，因此殼聚糖溶液在0. 2mg/mL時抑菌活性最高。
實施例4檢測殼聚糖在不同接種時間下的抑菌活性
吸取實施例1制得的5mg/mL的殼聚糖溶液100 μ L，加入4. 9mL無菌去離子水配制 濃度為0. 20mg/mL的殼聚糖溶液。同實施例3，在各處理中接種Xoc菌懸液(108CFU/mL)， 1601~/1^11、281條件下振蕩培養(yǎng)0，2，4，6，12，對小時后檢測乂0(3 BLS-Ol的生長情況。實驗 以PH為6. 0的無菌去離子水作為殼聚糖處理的對照。
結果顯示，作為對照的無菌去離子水中接種Xoc BLS-012小時后細胞數(shù)量下降了 0. 06Log CFU/mL，接下來菌量保持穩(wěn)定。而處理組殼聚糖溶液中Xoc細菌數(shù)量顯著下降，在 O 12小時內逐漸降低，在M小時內細菌數(shù)量比12小時有所增加。與對照相比，接種2小 時后，殼聚糖溶液中的細胞數(shù)量減少了 2. 74Log CFU/mL，在接種12小時后，殼聚糖溶液中 的細胞數(shù)量減少了 5. 87Log CFU/mL (見表1)。
表1殼聚糖溶液不同接種時間對Xoc BLS-Ol的抑菌活性
權利要求
1.殼聚糖在防治水稻細菌性條斑病中的應用。
2.殼聚糖在提高水稻抗細菌性條斑病性能中的應用。
3.殼聚糖在降低水稻細菌性條斑病發(fā)病率和病害程度中的應用。
4.殼聚糖在抑制水稻細菌性條斑病病原菌(Xanthomonasoryzae pv. oryzicola)生長 中的應用。
全文摘要
本發(fā)明公開了殼聚糖在防治水稻細菌性條斑病中的應用。本發(fā)明殼聚糖制劑能顯著降低水稻條斑病的發(fā)生率和病斑的大小，且能顯著提高水稻幼苗中苯丙氨酸解氨酶，過氧化物酶和多酚氧化酶的活性，從而增強水稻的抗病能力。采用本發(fā)明殼聚糖制劑防治水稻細菌性條斑病簡單易行，成本較低。
文檔編號A01N43/16GK102037965SQ20111000731
公開日2011年5月4日 申請日期2011年1月14日 優(yōu)先權日2011年1月14日
發(fā)明者劉寶平, 唐喬梅, 李斌, 石雨, 謝關林, 陶中云 申請人:浙江大學