專利名稱：通過植物組織培養(yǎng)黃金寶樹進行優(yōu)良植物體的誘導、繼代增殖培養(yǎng)的方法
技術領域：
本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術領域，具體是一種通過植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)，組織培 養(yǎng)生產(chǎn)黃金寶樹誘導和繼代增殖培養(yǎng)的方法。
背景技術：
黃金寶樹(Melaleuca bracteata)又稱千層金，系桃金娘科白干層屬常綠喬木。是 一種以觀葉為主的彩葉樹種主干直立，側枝橫展至下垂，嫩枝紅色，老枝變灰，葉四季黃色， 韌性很好，抗風力強，在海邊生長勢非常好。適合做行道樹，分離島景觀，住宅區(qū)情景景觀 等。黃金寶樹葉片經(jīng)過摩擦還散發(fā)一種令人感覺非常舒服的清香，經(jīng)專家驗證其含有降低 精神壓力的元素，有一定藥用價值。這種芳香油是目前世界上珍貴的化妝品香料之一。黃 金寶樹適應土質(zhì)的范圍也非常廣，從酸性到石灰?guī)r土質(zhì)甚至鹽堿地都能適應?？共∠x能力 強，既抗旱又抗?jié)?，適宜水邊生長，還能抗鹽堿、抗強風。是沿海地區(qū)不可多得的優(yōu)良的景觀 造林樹種，目前最快捷有效且經(jīng)濟的方法是建立黃金寶樹優(yōu)良無性系組培快繁技術體系， 以迅速提高黃金寶樹生產(chǎn)力。利用現(xiàn)代組織培養(yǎng)生物技術和先進的栽培技術，開展黃金寶樹組培和規(guī)范化栽培 技術研究，建立黃金寶樹生產(chǎn)基地，不僅能大大加快繁殖速度，使種苗的質(zhì)量均衡一致，更 適合規(guī)范化管理，促進我國林業(yè)綠化產(chǎn)業(yè)逐步走向國際化和規(guī)范化，促進福建及我林業(yè)綠 化事業(yè)的發(fā)展，具有顯著的生態(tài)效益、經(jīng)濟效益和社會效益。因此，本研究具有良好的應用 價值、廣闊的市場前景、重他要理論價值和現(xiàn)實意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術中的不足，提供一種保持植物體本身優(yōu)良藥效， 繁殖速度快，增殖倍數(shù)高的通過植物組織培養(yǎng)黃金寶樹進行優(yōu)良植物體的誘導、繼代增殖 培養(yǎng)的方法。本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的通過植物組織培養(yǎng)對黃金寶樹進行優(yōu)良植物體的誘 導和繼代增殖培養(yǎng)的方法，它包括如下步驟A、植物體的選擇及無菌處理選擇6-10月份生長的黃金寶樹枝條，除去葉進行清洗和無菌處理，將莖段剪成 0. 5-1. 5CM帶莖節(jié)的黃金寶樹小段組織。B.叢生芽誘導培養(yǎng)將經(jīng)過無菌處理后的黃金寶樹小段組織在誘導培養(yǎng)基中進行組織誘導培養(yǎng)叢 生芽，培養(yǎng)周期10-40天，培養(yǎng)溫度15-30°C，光照培養(yǎng)時間0- 小時/天，光照強度 1000 20001uX Ix ；所述的誘導培養(yǎng)基為為MS培養(yǎng)基+蔗糖10-50g/L g/L+瓊脂6_8g/ L+活性炭 1.0-3. Og/L+萘乙酸 0. 1-5. Omg/L、+6-芐氨基腺嘌呤 0. 01-5. Omg/L, PH 值為 5. 0-7. O0
C.大規(guī)模培養(yǎng)將誘導出的叢生芽在大規(guī)模培養(yǎng)基中進行大規(guī)模培養(yǎng)，培養(yǎng)周期10-40天，培 養(yǎng)溫度15-35°c，光照培養(yǎng)時間0- 小時/天，光照強度1000 20001UX ；所述的大規(guī) 模培養(yǎng)基為改良MS基本養(yǎng)基+硝酸鈣600mg/L+蔗糖20_40g/L+瓊脂6_8g/L+萘乙酸 1. 0-3. Omg/L、+6-芐氨基腺嘌呤 1. 0-4. Omg/L, PH 值為 5. 0-7. O。作為本發(fā)明通過組織培養(yǎng)生產(chǎn)黃金寶樹的方法更優(yōu)化的技術方案，對培養(yǎng)基的配 方比例和培養(yǎng)條件進行優(yōu)化選擇。所述的叢生芽誘導培養(yǎng)培養(yǎng)周期20-40天，培養(yǎng)溫度20-30°C，光照培養(yǎng)時 間0- 小時/天，光照強度1500 20001UX ；所述的誘導培養(yǎng)基為為MS培養(yǎng)基+蔗糖 10-50g/L+ 瓊脂 6-8g/L+ 萘乙酸 0. 1-5. Omg/L、+6-芐氨基腺嘌呤 0. 01-5. Omg/L, PH 值為 5. 0-7. O。所述的大規(guī)模培養(yǎng)培養(yǎng)周期20-50天，培養(yǎng)溫度20-30°C，光照培養(yǎng)時間8_16 小時/天，光照強度1500 20001UX ；所述的大規(guī)模培養(yǎng)基為改良MS基本養(yǎng)基+硝酸鈣 600mg/L+ 蔗糖 20-40g/L+ 瓊脂 6_8g/L+ 萘乙酸 1. 0-3. Omg/L、+6-芐氨基腺嘌呤 1. 0-4. Omg/L+, PH 值為 5. 0-7. O。植物體的無菌處理是本發(fā)明的重要技術環(huán)節(jié)，無菌處理的方法包括如下步驟A)將選取的健壯無病蟲害的黃金寶樹植株，用自來水沖洗3-5小時，用毛刷清洗 干凈，除去根和葉，再用蒸餾水沖洗，置超凈工作臺內(nèi)。B)將除去了葉的莖段植物體用70-80%的酒精浸泡20-40秒進行表面滅菌，再用 無菌水清洗干凈C)將經(jīng)過酒精滅菌的莖段植物體用0. 3-0. 8%次氯酸鈉溶液浸泡消毒3-6分鐘， 用無菌水沖洗4-5次，再轉入0. 1-0. 15%升汞溶液中滅菌8分鐘，倒去滅菌液，用事先準備 好的無菌水沖洗4-5次，再用濾紙吸干無菌水；D)無菌條件下將次氯酸鈉消毒的莖段剪成0. 5-1. 5CM帶莖節(jié)的小段。本發(fā)明的優(yōu)點在于通過植物組織培養(yǎng)，保持植物體的優(yōu)良性狀，保持植物優(yōu)良的 藥物療效，該方法易操作，生產(chǎn)成本低，不污染環(huán)境，可以實現(xiàn)工廠化育苗。選用配方合理的 誘導培養(yǎng)基，誘導出的叢生芽比例達到68%以上，通過兩段培養(yǎng)的方式再生植株產(chǎn)量大幅 度提高，和增殖倍數(shù)達到4倍以上。通過本發(fā)明方法生產(chǎn)黃金寶樹，保持母株的優(yōu)良性狀， 藥效顯著，不變異，產(chǎn)量高，成本低，周期短，極具市場競爭力。
具體實施例方式下面結合具體實施對本發(fā)明做進一步的說明。實施例1 一種通過植物組織培養(yǎng)黃金寶樹進行優(yōu)良植物體的誘導、繼代增殖培 養(yǎng)的方法，包括如下步驟A.植物體的選擇及無菌處理A)選擇12月份生長的黃金寶樹枝條，用自來水沖洗2-3小時，用毛刷清洗干凈，除 去根和葉，再用蒸餾水沖洗，置操凈工作臺內(nèi)；B)將除去了葉的莖段植物體用70%的酒精浸泡30秒進行表面滅菌，再用無菌水 清洗干凈；
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C)將經(jīng)過酒精滅菌的莖段植物體用0.3%次氯酸鈉溶液浸泡消毒10分鐘，用無菌 水沖洗5次，再轉入0. 1 %升汞溶液中滅菌8分鐘，倒去滅菌液，用事先準備好的無菌水沖洗 4-5次，再用濾紙吸干無菌水；D)無菌條件下將消毒的莖段剪成1-1. 5CM左右?guī)o節(jié)的黃金寶樹小段；b.叢生芽誘導培養(yǎng)將經(jīng)過無菌處理后的黃金寶樹小段組織在誘導培養(yǎng)基中進行組織誘導培 養(yǎng)叢生芽，培養(yǎng)周期35天，培養(yǎng)溫度J8°C，光照培養(yǎng)時間16小時/天，光照強度 1500-20001ux ；所述的誘導培養(yǎng)基為為MS培養(yǎng)基+蔗糖10_50g/L g/L+瓊脂6_8g/L+萘 乙酸 0. 1-5. Omg/L、+6-芐氨基腺嘌呤 0. 01-5. Omg/L, PH 值為 5. 5。C.大規(guī)模培養(yǎng)將誘導出的叢生芽在大規(guī)模培養(yǎng)基中進行大規(guī)模培養(yǎng)，培養(yǎng)周期60天，培養(yǎng)溫 度J8°C，光照培養(yǎng)時間16小時/天，光照強度1500-20001uX所述的大規(guī)模培養(yǎng)基為 改良MS基本養(yǎng)基+硝酸鈣600mg/L+蔗糖20_40g/L+瓊脂6_8g/L+萘乙酸1. 0-3. Omg/L、 +6-芐氨基腺嘌呤 1. 0-4. Omg/L, PH 值為 5. 0-7. O。實施例2 —種通過組織培養(yǎng)生產(chǎn)黃金寶樹的方法，它包括如下步驟a.植物體的選擇及無菌處理A.)選擇9月份生長的黃金寶樹枝條，用自來水沖2-3小時，用毛刷清洗干凈，除去 根和葉，再用蒸餾水沖洗，置操凈工作臺內(nèi)；B)將除去葉的莖段植物體用70%的酒精浸泡25秒進行表面滅菌，再用無菌水清 洗干凈；C)將經(jīng)過酒精滅菌的莖段植物體用0. 6%次氯酸鈉溶液浸泡消毒5分鐘，用無菌 水沖洗4次，再轉入0. 2%升汞溶液中滅菌4分鐘，倒去滅菌液，用事先準備好的無菌水沖洗 4-5次，再用濾紙吸干無菌水；D)無菌條件下將消毒的莖段剪成ICM左右?guī)o節(jié)的黃金寶樹小段；E)采用不同培養(yǎng)基并附加不同種類和濃度的細胞分裂素對誘導不定芽和萌芽率 的影響以MS、White、和&為基本培養(yǎng)基，添加的糖和瓊脂、和誘導的培養(yǎng)基一樣分別附 加不同種類和濃度的細胞分裂素(6-BA、NAA)；采用4因素3水平的正交設計L9 (34)(見表 1)，共9個處理，每處理接種10瓶，每瓶接1株苗，每處理重復3次，調(diào)查并統(tǒng)計不定芽數(shù)及
萌芽率。表1黃金寶樹初代培養(yǎng)試驗
權利要求
1.通過植物組織培養(yǎng)對黃金寶樹進行優(yōu)良植物體的誘導和繼代增殖培養(yǎng)的方法，它包 括如下步驟1.1植物體的選擇及無菌處理選擇5-12月份生長的健壯無病蟲害的黃金寶樹枝條，除去葉進行數(shù)小時的流水清洗 和無菌處理，將莖段剪成0. 5-1. 5CM帶莖節(jié)的小段組織；1. 2叢生芽誘導培養(yǎng)將經(jīng)過無菌處理后的黃金寶樹小段組織在誘導培養(yǎng)基中進行組織誘導培養(yǎng)叢生芽， 培養(yǎng)周期10-60天，培養(yǎng)溫度15-30°C，光照培養(yǎng)時間0-24小時/天，光照強度0 20001ux ；所述的誘導培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基+蔗糖10-50g/Lg/L+瓊脂6_8g/L+萘乙酸 0. 1-5. Omg/L+6-芐氨基腺嘌呤 0. 01-5. Omg/L, PH 值為 5. 0-7. 0 ；1.3大規(guī)模培養(yǎng)將誘導的叢生芽在大規(guī)模培養(yǎng)基中進行大規(guī)模培養(yǎng)，培養(yǎng)周期10-70天，培養(yǎng)溫度 10-3°C，光照培養(yǎng)時間0- 小時/天，光照強度0 20001UX ；所述的培養(yǎng)基為改良MS基 本養(yǎng)基+硝酸鈣600mg/L+蔗糖20-40g/L+瓊脂6_8g/L+萘乙酸1. 0-3. Omg/L、+6-芐氨基 腺嘌呤 1. 0-4. Omg/L, PH 值為 5. 0-7. 0。
2.如權利要求1所述的通過植物組織培養(yǎng)對黃金寶樹進行優(yōu)良植物體的誘導和繼 代增殖培養(yǎng)的方法，其特征在于所述的叢生芽誘導培養(yǎng)培養(yǎng)周期20-50天，培養(yǎng)溫度 15-30°C，光照培養(yǎng)時間8-16小時/天，光照強度1000 30001ux，所述的誘導培養(yǎng)基 為MS培養(yǎng)基+蔗糖10-50g/L g/L+瓊脂6-8g/L+萘乙酸0. 1-5. Omg/L+6-芐氨基腺嘌呤 0. 01-5. Omg/L, PH值為5. 0-7. 0。所述的大規(guī)模培養(yǎng)條件培養(yǎng)周期:20-50天，培養(yǎng)溫度 15-30°C，光照培養(yǎng)時間8-16小時/天，光照強度1000 30001ux ；所述的大規(guī)模培養(yǎng)基 為改良MS基本養(yǎng)基+硝酸鈣600mg/L++蔗糖20_40g/L+瓊脂6_8g/L+萘乙酸1. 0-3. Omg/ L、+6-芐氨基腺嘌呤 1. 0-4. Omg/L, PH 值為 5. 0-7. 0。
3.如權利要求1或2所述的通過植物組織培養(yǎng)對黃金寶樹進行優(yōu)良植物體的誘導和繼 代增殖培養(yǎng)的方法，其特征在于植物體的選擇和無菌處理方法包括如下步驟A、將選取黃金寶樹枝條，用自來水沖洗2-3小時，用毛刷清洗干凈，除去葉，再用蒸餾 水沖洗，置超凈工作臺內(nèi)；B、將除去了葉的莖段植物用70-80%的酒精浸泡20-40秒進行表面滅菌，再用無菌水清洗干凈。C、將經(jīng)過酒精滅菌的莖段植物體用0.3-0. 8%次氯酸鈉溶液浸泡消毒3-6分鐘，用無 菌水沖洗4-5次，再轉入0. 15%升汞溶液中滅菌8分鐘，倒去滅菌液，用事先準備好的無菌 水沖洗4-5次，再用濾紙吸干無菌水D、在無菌條件下將消毒好的莖段剪成0.5-1. 5CM帶莖節(jié)的小段。
全文摘要
本發(fā)明公開了通過植物組織培養(yǎng)黃金寶樹進行優(yōu)良植物體的誘導、繼代增殖培養(yǎng)的方法，誘導培養(yǎng)和大規(guī)模培養(yǎng)兩個階段采用了兩種不同的培養(yǎng)基，誘導培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基+蔗糖10-50g/L+瓊脂6-8g/L+萘乙酸0.1-5.0mg/L、+6-芐氨基腺嘌呤0.01-5.0mg/L，pH值為5.0-7.0；大規(guī)模培養(yǎng)的培養(yǎng)基為改良MS基本養(yǎng)基+硝酸鈣600mg/L+蔗糖20-40g/L+瓊脂6-8g/L+萘乙酸1.0-3.0mg/L、+6-芐氨基腺嘌呤1.0-4.0mg/L，pH值為5.0-7.0。本發(fā)明的方法易操作，生產(chǎn)成本低，適合工廠化育苗，產(chǎn)量高，品質(zhì)好，不污染環(huán)境，可以實現(xiàn)批量生產(chǎn)。
文檔編號A01H4/00GK102144557SQ20111003570
公開日2011年8月10日 申請日期2011年1月29日 優(yōu)先權日2011年1月29日
發(fā)明者陳詠梅, 黃碧華 申請人:福建省金草生物科技有限公司