專利名稱：牡丹花藥愈傷組織誘導方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及一種愈傷組織培養(yǎng)方法，尤其涉及一種牡丹花藥愈傷組織誘導方法。
背景技術(shù)：
牡丹為中國十大名花之一，也是中國的國花，有“花中之王”的美譽。牡丹組織培 養(yǎng)主要是利用芽進行誘導植株和利用外植體通過愈傷組織途徑進行誘導，而牡丹的愈傷組 織誘導對于再生植株是一個重要的階段，較高的愈傷組織誘導率對于后期愈傷組織的分化 奠定良好的基礎，如何獲得較高的愈傷組織誘導率與培養(yǎng)基類型、激素的種類和濃度以及 培養(yǎng)條件有密切的關系。愈傷組織培養(yǎng)是一種最常見的培養(yǎng)形式，除莖尖分生組織培養(yǎng)和一部分器官培養(yǎng) 以外，其他幾種植物組織培養(yǎng)形式最終都要經(jīng)歷愈傷組織才能產(chǎn)生植株。此外愈傷組織還 常常是懸浮培養(yǎng)的細胞和原生質(zhì)體的來源。愈傷組織分為胚性愈傷組織和非胚性愈傷組 織，胚性愈傷組織是指體細胞胚的愈傷組織，經(jīng)過分化成幼嫩的植株?，F(xiàn)有技術(shù)中，牡丹組織培養(yǎng)研究已經(jīng)有較長的歷史，研究內(nèi)容也主要集中在外植 體選擇、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)配比和培養(yǎng)基配方等領域，主要是利用莖尖直接發(fā)育成植株，而利用 外植體誘導愈傷組織，然后利用愈傷組織分化產(chǎn)生植株的研究相對較少，而愈傷組織的誘 導是愈傷組織分化產(chǎn)生植株的前提條件。上述現(xiàn)有技術(shù)至少存在以下缺點存在愈傷組織誘導困難、生根率和生根質(zhì)量不高、馴化移栽困難、褐化、玻璃化等 問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種愈傷組織誘導率高的牡丹花藥愈傷組織誘導方法。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的本發(fā)明的牡丹花藥愈傷組織誘導方法，包括選取牡丹外植體，采用MS培養(yǎng)基進行 愈傷組織的誘導，所述牡丹外植體為花藥，取材時期在花藥的單核中期取材；所述MS 培養(yǎng)基包括MS+2，4-D2. Omg/L+6-BAl. 5mg/L+NAAl. Omg/L,還包括濃度為 6%的蔗糖。由上述本發(fā)明提供的技術(shù)方案可以看出，本發(fā)明所述的牡丹花藥愈傷組織誘導方 法，由于采用MS培養(yǎng)基進行牡丹花藥愈傷組織的誘導，MS培養(yǎng)基中配有6-BA細胞分裂素、 NAA植物生長調(diào)節(jié)劑、2，4-D除草劑等物質(zhì)。并在適當時期取材，愈傷組織誘導率高。
具體實施例方式本發(fā)明的牡丹花藥愈傷組織誘導方法，其較佳的具體實施方式
是，包括選取牡丹外植體，采用MS培養(yǎng)基進行愈傷組織的誘導，所述MS培養(yǎng)基中配有以下一種或多種物質(zhì)6-BA細胞分裂素、NAA植物生長調(diào)節(jié)劑、2，4_D除草劑。在進行愈傷組織的誘導前，可以先進行培養(yǎng)前處理首先，對所選取的牡丹外植體進行4°C低溫處理；然后，利用2% NaClO消毒30min，70%酒精消毒30s，無菌水沖洗3_5次。具體實施例以不同的外植體為例，采用不同的培養(yǎng)基和不同的培養(yǎng)條件達到了最佳的誘導效 果。下面以不同外植體為對象分別進行闡述胚愈傷組織的誘導培養(yǎng)時期每年的9月份，種子形成后；培養(yǎng)前處理利用低溫)處理和赤霉素處理相結(jié)合的方法，利用常規(guī)的消毒 方法NaClO消毒30min，70%酒精消毒30s，無菌水沖洗3_5次)消毒后接種；最佳的培養(yǎng)基:MS+NAA0.lmg/L+6-BAl· Omg/L ；愈傷組織誘導率達到100 %。莖段愈傷組織誘導取材時期取幼嫩的莖段，春季3月底4月初，或者由種子發(fā)芽形成的幼嫩的莖 段；培養(yǎng)前處理利用常規(guī)的滅菌方法NaClO消毒30min，70%酒精消毒30s，無 菌水沖洗3-5次)進行消毒；最佳的培養(yǎng)基:MS+NAA0.05mg/L+6_BA2. Omg/L+2，4-D1. Omg/L ；愈傷組織誘導率80%以上。葉片愈傷組織誘導取材時期取幼嫩的葉片，春季3月底4月初，或者由種子發(fā)芽形成的幼嫩的葉 片；培養(yǎng)前處理利用常規(guī)的滅菌方法NaClO消毒30min，70%酒精消毒30s，無 菌水沖洗3-5次)進行消毒；最佳培養(yǎng)基:MS+6-BA0.lmg/L+2，4-DO. 5mg/L ；愈傷組織誘導率80 %左右?；ò暧鷤M織誘導取材時期在花藥的單核中期；培養(yǎng)前處理4°C條件下處理8d后，利用常規(guī)的滅菌方法NaClO消毒30min， 70%酒精消毒30s，無菌水沖洗3-5次)進行消毒接種至培養(yǎng)基；最佳培養(yǎng)基:MS+2,4-Dl.0mg/L+6-BA2mg/L+NAA0. lmg/L ；愈傷組織誘導率60 %左右?；ㄋ幱鷤M織誘導取材時期在花藥的單核中期取材；培養(yǎng)前處理4°C條件下處理8d后，利用常規(guī)的滅菌方法NaClO消毒30min，70%酒精消毒30s，無菌水沖洗3-5次)進行消毒接種至培養(yǎng)基；最佳培養(yǎng)基MS+2，4-D2.Omg/L+6-BAl. 5mg/L+NAAl. Omg/L,蔗糖濃度為 6% ；愈傷組織的誘導率50%左右。本發(fā)明中，針對不同的外植體，都有明確的培養(yǎng)基方案和激素組合。并對愈傷組織 的最佳的取材時期進行了全面的闡述。牡丹愈傷組織的誘導率均在80%以上，達到了較好 的誘導效果；花瓣和花藥愈傷組織誘導也達到了 50%以上。以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實施方式
，但本發(fā)明的保護范圍并不局限于此， 任何熟悉本技術(shù)領域的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，可輕易想到的變化或替換， 都應涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種牡丹花藥愈傷組織誘導方法，其特征在于，包括選取牡丹外植體，采用MS培養(yǎng) 基進行愈傷組織的誘導，所述牡丹外植體為花藥，取材時期在花藥的單核中期取材；所述 MS 培養(yǎng)基包括MS+2，4-D2. Omg/L+6-BAl. 5mg/L+NAAl. Omg/L，還包括濃度為 6% 的蔗糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的牡丹花藥愈傷組織誘導方法，其特征在于，包括培養(yǎng)前處理 首先，對所選取的牡丹外植體進行4°C低溫處理；然后，利用2% NaClO消毒30min，70%酒精消毒30s，無菌水沖洗3_5次。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種牡丹花藥愈傷組織誘導方法，采用MS培養(yǎng)基進行愈傷組織的誘導，MS培養(yǎng)基中配有6-BA細胞分裂素、NAA植物生長調(diào)節(jié)劑、2，4-D除草劑等物質(zhì)。針對牡丹花藥外植體有明確的培養(yǎng)基方案和激素組合。并對愈傷組織的最佳的取材時期進行了闡述。牡丹愈傷組織的誘導率均在80％以上，達到了較好的誘導效果，花藥愈傷組織誘導率達到了50％以上。
文檔編號A01H4/00GK102144563SQ20111004675
公開日2011年8月10日 申請日期2009年5月11日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月11日
發(fā)明者朱向濤, 王雁 申請人:中國林業(yè)科學研究院林業(yè)研究所