專利名稱：利用玉米芯生產(chǎn)生物蛋白飼料的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種利用玉米芯生產(chǎn)生物蛋白飼料的制作方法。
背景技術(shù)：
近年來，我國隨著養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展，飼料業(yè)也取得了很大的發(fā)展，雖然飼料業(yè)發(fā)展前景誘人，但競爭十分激烈，飼料原料價格大幅上漲，蛋白資源緊缺已成為該行業(yè)發(fā)展面臨的重大挑戰(zhàn)之一。因此開發(fā)新的蛋白資源已成為我國飼料エ業(yè)當(dāng)前迫切而艱巨的任務(wù)之
o我國每年玉米產(chǎn)量超過I. 3億噸，副產(chǎn)物玉米芯的量在4000萬噸左右。目前只有 少部分用于培養(yǎng)食用菌，生產(chǎn)木糖、糠醛等或直接作為營養(yǎng)價值極低的飼料，但絕大部分未得到充分利用，或棄之于田間或焚燒，造成了環(huán)境污染。玉米芯的結(jié)晶性小，木質(zhì)素含量較低，主要由纖維素、半纖維素組成，其中半纖維素含量較高，其代表性的分析結(jié)果為半纖維素38-40%、纖維素33-35%、木質(zhì)素15-17%、灰分2%、膠質(zhì)4%。黑曲霉是公認(rèn)的安全菌株，具有蛋白酶、液化型淀粉酶、糖化型淀粉酶、纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶、植酸酶等多種酶，酶系齊全，培養(yǎng)條件粗放，多數(shù)為胞外酶，水解酶系隨條件的改變而改變。目前，還未見有關(guān)利用玉米芯生產(chǎn)生物蛋白飼料的制作方法。本研究以玉米芯為主要原料固態(tài)法培養(yǎng)黑曲霉，黑曲霉所產(chǎn)生的半纖維素酶和纖維素酶可將玉米芯分解產(chǎn)生戊糖(主要是木糖)和六碳糖等還原糖，通過接種啤酒酵母、添加豆柏和共同發(fā)酵，產(chǎn)品粗蛋白含量明顯提高，同時黑曲霉豐富的酶系可將植物蛋白復(fù)雜的大分子物質(zhì)消化分解為小分子物質(zhì)，較大程度降低了大豆蛋白中的抗?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)如胰蛋白酶抑制劑、脲酶、血凝素等，有效消除了大豆蛋白的抗原性，増加寡肽、氨基酸，維生素、酶類等有用代謝產(chǎn)物，使物料適ロ性改善，營養(yǎng)價值提高。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述存在的問題及玉米芯、黑曲霉、酵母菌的優(yōu)點(diǎn)，本發(fā)明提供ー種利用玉米芯生產(chǎn)生物蛋白飼料的制作方法，不但產(chǎn)品粗蛋白含量明顯提高，而且較大程度降低了大豆蛋白中的抗?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)如胰蛋白酶抑制劑、脲酶、血凝素等，有效消除了大豆蛋白的抗原 性，増加寡肽、氨基酸，維生素、酶類等有用代謝產(chǎn)物，使物料適ロ性改善，營養(yǎng)價值提高。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是—種利用玉米芯生產(chǎn)生物蛋白飼料的制作方法，所述的飼料是由玉米芯和麩皮以70-80 20-30及營養(yǎng)鹽質(zhì)量比混合后，加水煮制得到的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，并在固體發(fā)酵培養(yǎng)基上接種黑曲霉，培養(yǎng)48-72h后接種啤酒酵母菌，繼續(xù)培養(yǎng)24h后添加20%的蒸煮豆柏和一定量的水，再培養(yǎng)48h，結(jié)束后將發(fā)酵產(chǎn)物干燥、粉碎制得所述的生物蛋白飼料。優(yōu)選的所述生物蛋白飼料，其特征在于所述的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基按如下方面制得接種黑曲霉培養(yǎng)基為玉米芯和麩皮以70-80 20-30及營養(yǎng)鹽((NH4)2S042%，MgSO4 7H20 0. 05%, KH2PO4O. 01% )混合后，加入 70-80%的水，于 126°C高壓處理 2h，得到黑曲霉發(fā)酵固體培養(yǎng)基；含豆柏的黑曲霉與啤酒酵母共發(fā)酵培養(yǎng)基為接種黑曲霉培養(yǎng)基培養(yǎng)72-96h(接種啤酒酵母24h)后添加20%的蒸煮豆柏和一定量的水，使總加水量達(dá)培養(yǎng)基量的90-100%，得到含豆柏的共發(fā)酵培養(yǎng)基；ー種生物蛋白飼料的制備方法，所述方法是將黑曲霉和啤酒酵母先后接種到固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，于30°c下發(fā)酵培養(yǎng)120-144h，結(jié)束后將發(fā)酵產(chǎn)物干燥，粉碎至60目即得到所述的生物蛋白飼料；各菌種的接種量可不受限制，通常選擇其常規(guī)接種量即可，優(yōu)選的所述菌種接種量以種液占固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基干重質(zhì)量百分比計，黑曲霉種子液為10%，啤酒酵母種子液為 10% O所述的黑曲霉種子培養(yǎng)基為=NaNO32g，K2HPO4 lg, KCl 0. 5g，MgSO4 0. 5g，F(xiàn)eSO4
0.Olg,鹿糖 30g,水 1000ml, pH 自然,121°C滅菌 20min。所述黑曲霉種子液的制備保存的優(yōu)選的黑曲霉轉(zhuǎn)接1-2次，用無菌移液管吸取5-8mL無菌水加至斜面上，用接種環(huán)輕輕刮下菌苔，并充分?jǐn)噭颍脽o菌移液管吸取3-5mL的菌液，轉(zhuǎn)接于裝有IOOmL黑曲霉種子培養(yǎng)基的250mL錐形瓶中，在轉(zhuǎn)速150r/min、溫度30°C條件下培養(yǎng)72-96h，得到黑曲霉種子液。所述的啤酒酵母種子培養(yǎng)基為木糖50g/l,尿素3g/l,硫銨I. 5g/l, KH2PO4lg/1,MgSO4 7H20 0. 5g/l，酵母膏 lg/1,0. IMPa 滅菌 20min。所述啤酒酵母種子液的制備保存的優(yōu)選的啤酒酵母轉(zhuǎn)接1-2次，用無菌移液管吸取5-8mL無菌水加至斜面上，用接種環(huán)輕輕刮下菌苔，并充分?jǐn)噭?，用無菌移液管吸取3-5mL的菌液，轉(zhuǎn)接于裝有IOOmL啤酒酵母種子培養(yǎng)基的250mL錐形瓶中，在轉(zhuǎn)速150r/min、溫度30°C條件下培養(yǎng)24_36h，得到啤酒酵母種子液。優(yōu)選的，所述黑曲霉篩選培養(yǎng)基為羧甲基纖維素納20g，Na2HPO4 2. 5g，KH2PO4
1.6g，蛋白胨2. 6g，酵母膏0. 8g，蒸餾水1000ml，瓊脂20g，pH呈中性。鹽城工學(xué)院生物中心保存的黑曲霉接種在適用于黑曲霉的固體培養(yǎng)基上，30°C下活化24-36h后，稀釋并涂布于篩選培養(yǎng)基上培養(yǎng)72-96h，然后經(jīng)lg/1的剛果紅處理，挑取菌圈最大的菌株，作斜面保存。優(yōu)選的,所述的啤酒酵母固體培養(yǎng)基為木糖20g/l,酵母膏10g/l,蛋白胨10g/l,pH5. 5，瓊脂2%，0. IMPa滅菌20min。鹽城工學(xué)院生物中心保存的啤酒酵母接種在啤酒酵母的固體培養(yǎng)基上，在30°C活化24-36h后，在固體培養(yǎng)基平板上劃線培養(yǎng)，30°C培養(yǎng)72_96h后，挑選生長旺盛的菌株作斜面保存。本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在I、我國毎年副產(chǎn)大量的玉米芯，但是卻沒有被廣泛利用，絕大部分作為農(nóng)家燃料被白白燒掉，既浪費(fèi)資源又污染環(huán)境。但通過微生物發(fā)酵的方式生產(chǎn)生物蛋白飼料，對節(jié)約飼料用糧和減輕農(nóng)村環(huán)境污染有一定的作用；2、近年來，飼料エ業(yè)隨著養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展而迅速發(fā)展，但飼料原料的價格大幅度上漲，蛋白資源供應(yīng)緊張已成為該行業(yè)發(fā)展面臨的重大挑戰(zhàn)之一，利用玉米芯生產(chǎn)生物蛋白 飼料，既緩解飼料蛋白源緊張的問題，還能降低飼料成本和増加農(nóng)民收入；3、黑曲霉是公認(rèn)的安全菌株，具有蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶、植酸酶等多種酶。黑曲霉所產(chǎn)生的半纖維素酶和纖維素酶可將玉米芯分解產(chǎn)生戊糖(主要是木糖)和六碳糖等還原糖，以10%的接種量將黑曲霉種子液接種到經(jīng)高溫處理的玉米芯為主要原料的培養(yǎng)基上，在溫度30°C、pH5. 5的條件下培養(yǎng)48-72h，每日翻拌一次，培養(yǎng)基表面出現(xiàn)大量黒色孢子頭，還原糖含量達(dá)9. 5-10. 1%。
4、玉米芯原料淺盤培養(yǎng)黑曲霉48_72h后接種10 %啤酒酵母，每日翻拌一次，在30 V繼續(xù)培養(yǎng)24h后添加20 %豆柏，再培養(yǎng)48h，產(chǎn)品中粗蛋白含量達(dá)25. 3-27. 2 %，粗蛋白凈增量達(dá)10. 8-12. 7%。黑曲霉中所具有的蛋白酶的發(fā)酵作用與豆柏多肽的酶解有機(jī)地結(jié)合，較大程度降低了大豆蛋白中的抗?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)如胰蛋白酶抑制劑、脲酶、血凝素等，有效消除了大豆蛋白的抗原性，増加寡肽、氨基酸，維生素、酶類等有用代謝產(chǎn)物，產(chǎn)品蛋白質(zhì)水解度達(dá)8. 8-9. 4%，飼料無苦味，適ロ性好，營養(yǎng)價值提高。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例II、種子液的制備(I)黑曲霉，鹽城工學(xué)院生物中心保存。斜面培養(yǎng)基為(查氏培養(yǎng)基)=NaNO32g，K2HPO4 lg，KCl 0. 5g，MgSO4 7H20 0. 5g,FeSO4 O.Olg，蔗糖30g，瓊脂20g，蒸餾水定容至1000mL，pH值自然，121°C滅菌20分鐘。接種黑曲霉，30°C培養(yǎng)36h，得到活化的黑曲霉。篩選培養(yǎng)基為羧甲基纖維素納20g，Na2HPO4 2. 5g，KH2PO4 I. 6g，蛋白胨2. 6g，酵母膏0. 8g，瓊脂20g，蒸餾水1000ml,pH中性，121°C滅菌20分鐘。接種活化的黑曲霉，30°C培養(yǎng)72h后，經(jīng)lg/1的剛果紅處理，挑取菌圈最大的菌株保存，得到優(yōu)選的黑曲霉。種子培養(yǎng)基=NaNO32g，K2HPO4 lg, KCl 0. 5g，MgSO4 0. 5g，F(xiàn)eSO4 0. Olg，蔗糖 30g，蒸餾水1000ml，pH自然，121°C滅菌20min。用無菌移液管吸取5mL無菌水加至優(yōu)選的黑曲霉斜面上，用接種環(huán)輕輕刮下菌苔，并充分?jǐn)噭?，用無菌移液管吸取3mL的菌液，轉(zhuǎn)接于裝有種子培養(yǎng)基的250mL錐形瓶中，在轉(zhuǎn)速150r/min、30°C條件下培養(yǎng)72h，得到黑曲霉種子液。(2)啤酒酵母，鹽城工學(xué)院生物中心保存。固體培養(yǎng)基為木糖20g，酵母膏10g，蛋白胨10g，pH 5.5，瓊脂2(^，0.現(xiàn)Pa滅菌20min。將啤酒酵母原貯菌種，在30°C活化24h后，在固體培養(yǎng)基平板上劃線培養(yǎng)，30°C培養(yǎng)72h后，挑選生長旺盛的菌株保存，得到優(yōu)選的啤酒酵母。種子培養(yǎng)基木糖50g/l，尿素 3g/l，硫銨 I. 5g/l，KH2PO4 lg/1，MgSO4 7H200. 5g/I，酵母膏l(xiāng)g/l，0. IMPa滅菌20min。用無菌移液管吸取5mL無菌水加至優(yōu)選的啤酒酵母斜面上，用接種環(huán)輕輕刮下菌苔，并充分?jǐn)噭?，用無菌移液管吸取3mL的菌液，轉(zhuǎn)接于裝有種子培養(yǎng)基的250mL錐形瓶中，于搖瓶轉(zhuǎn)速150r/min、30°C下培養(yǎng)啤酒酵母24h，得到啤酒酵母種子液。2、發(fā)酵原料處理稱取粉碎后的玉米芯粉800g，添加200g的麩皮和營養(yǎng)鹽溶液(MM)2SO4 20g，MgSO4WH2O 0. 5g, KH2PO4 0. lg，加水量為 800ml，調(diào) pH 5. 5，在 126°C下高壓處理 2h，處理時間到后，切斷電源，讓滅菌鍋內(nèi)的溫度自然下降，當(dāng)壓カ表的壓カ降到“0”時，打開排氣閥，打開蓋子，取出培養(yǎng)基，得到固態(tài)發(fā)酵初始培養(yǎng)基。發(fā)酵培養(yǎng)基接種黑曲霉72h (接種啤酒酵母24h)后，添加200g的豆柏和200ml的水，繼續(xù)進(jìn)行共發(fā)酵。3、接種和培養(yǎng)上述經(jīng)預(yù)處理的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，通風(fēng)冷卻至35°C以下時，先接種IOOml黑曲霉種子液，在30°C下進(jìn)行淺盤固體培養(yǎng)，48h后接種IOOml啤酒酵母種子液，在30°C下繼續(xù)培養(yǎng)24h后添加20%豆柏和200ml的水，再培養(yǎng)48h。4、干燥發(fā)酵結(jié)束后，發(fā)酵產(chǎn)物采用低溫干燥，粉碎至60目即得到所述的生物蛋白飼料，廣品中粗蛋白含量達(dá)26. I %，粗蛋白凈增量達(dá)11. 6*%，蛋白水解度可達(dá)9. 4*%，詞料無古味，適ロ性好，營養(yǎng)價值提高。 5、應(yīng)用效果試驗(yàn)研究了飼料中不同含量的玉米芯生物蛋白飼料對異育銀鯽生長性能、魚體品質(zhì)的影響。將240尾健康的異育銀鯽魚種，平均體重(18. 06±2. 13) g,飼養(yǎng)于IOOcmX80cmX60cm的水族箱內(nèi)，玉米芯生物蛋白飼料分別以5%、10%、15%和20% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))的比例添加到基礎(chǔ)飼料中，連續(xù)飼養(yǎng)60d。試驗(yàn)結(jié)果表明在異育銀鯽飼料中添加10%玉米芯生物蛋白飼料，其增重率、總消化率、蛋白質(zhì)消化率和魚體粗灰分、鈣含量與對照組比較沒有顯著性差異(P > 0. 05)，但隨著玉米芯生物蛋白飼料添加量的上升，以上指標(biāo)逐漸降低。表明在異育銀鯽魚種配合飼料中，玉米芯生物蛋白飼料的最適添加量為10%，對魚體的生產(chǎn)性能、魚體品質(zhì)不會產(chǎn)生顯著影響(P > 0. 05)。實(shí)施例2I、種子液的制備(I)黑曲霉，鹽城工學(xué)院生物中心保存。斜面培養(yǎng)基為(查氏培養(yǎng)基)=NaNO32g，K2HPO4 lg，KCl 0. 5g，MgSO4 7H20 0. 5g,FeSO4 O.Olg，蔗糖30g，瓊脂20g，蒸餾水定容至1000mL，pH值自然，121°C滅菌20分鐘。接種黑曲霉，30°C培養(yǎng)36h，得到活化的黑曲霉。篩選培養(yǎng)基為羧甲基纖維素納20g，Na2HPO4 2. 5g，KH2PO4 I. 6g，蛋白胨2. 6g，酵母膏0.8g，蒸餾水1000ml，瓊脂20g，pH呈中性，121°C滅菌20分鐘。接種活化的黑曲霉，30°C培養(yǎng)72h后，經(jīng)lg/1的剛果紅處理，挑取菌圈最大的菌株，得到優(yōu)選的黑曲霉。種子培養(yǎng)基=NaNO32g，K2HPO4 lg, KCl 0. 5g，MgSO4 0. 5g，F(xiàn)eSO4 0. Olg，蔗糖 30g，蒸餾水1000ml，pH自然，121°C滅菌20min。用無菌移液管吸取5mL無菌水加至優(yōu)選的黑曲霉斜面上，用接種環(huán)輕輕刮下菌苔，并充分?jǐn)噭?，用無菌移液管吸取3mL的菌液，轉(zhuǎn)接于裝有種子培養(yǎng)基的250mL錐形瓶中，于搖瓶轉(zhuǎn)速150r/min、30°C下培養(yǎng)72h，得到黑曲霉種子液。(2)啤酒酵母，鹽城工學(xué)院生物中心保存。固體培養(yǎng)基為木糖20g，酵母膏10g，蛋白胨10g，？冊.5，瓊脂2(^，0. IMPa滅菌20min。啤酒酵母原貯菌種在30°C活化24h后，在固體培養(yǎng)基平板上劃線培養(yǎng)，30°C培養(yǎng)72h后，挑選生長旺盛的菌株，得到優(yōu)選的啤酒酵母。種子培養(yǎng)基木糖50g/l，尿素 3g/l，硫銨 I. 5g/l，KH2PO4 lg/1，MgSO4 7H200. 5g/I，酵母膏l(xiāng)g/l，0. IMPa滅菌20min。用無菌移液管吸取5mL無菌水加至優(yōu)選的啤酒酵母斜面上，用接種環(huán)輕輕刮下菌苔，并充分?jǐn)噭颍脽o菌移液管吸取3mL的菌液，轉(zhuǎn)接于裝有種子培養(yǎng)基的250mL錐形瓶中，于搖瓶轉(zhuǎn)速150r/min、30°C下培養(yǎng)啤酒酵母36h，得到啤酒酵母種子液2、發(fā)酵原料處理稱取粉碎后的玉米芯粉700g，添加營養(yǎng)鹽溶液(MM)2SO4 20g, MgSO4 7H200. 5g，KH2PO4 0. Ig和300g的麩皮，加水量為800ml，調(diào)pH 5. 5，在126°C下高壓處理2h，處理時間到后，切斷電源，讓滅菌鍋內(nèi)的溫度自然下降，當(dāng)壓カ表的壓カ降到“0”時，打開排氣閥，打開蓋子，取出培養(yǎng)基，得到固態(tài)發(fā)酵初始培養(yǎng)基。發(fā)酵培養(yǎng)基接種黑曲霉72h(接種啤酒酵母24h)后，添加200g的豆柏和200ml的水，繼續(xù)進(jìn)行共發(fā)酵。3、接種和培養(yǎng)上述經(jīng)預(yù)處理的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，通風(fēng)冷卻至35°C以下時，先接種IOOml黑曲霉種子液，30°C下進(jìn)行淺盤固體培養(yǎng)，毎日翻拌一次，48h后接種IOOml啤酒酵母種子液，在30°C下繼續(xù)培養(yǎng)24h后添加20%豆柏和200ml的水，再培養(yǎng)48h。4、干燥發(fā)酵結(jié)束后，發(fā)酵產(chǎn)物采用低溫干燥，粉碎至60目即得到所述的生物蛋白飼料，產(chǎn)品中粗蛋白含量達(dá)27. 2%，粗蛋白凈增量達(dá)12. 7%，蛋白水解度可達(dá)9. 8%，飼料無苦味，適ロ性好，營養(yǎng)價值提高。5、應(yīng)用效果試驗(yàn)研究了飼料中不同含量的玉米芯生物蛋白飼料對異育銀鯽生長性能、魚體品質(zhì)的影響。將240尾健康的異育銀鯽魚種，平均體重(15. 78± I. 96) g,飼養(yǎng)于IOOcmX80cmX60cm的水族箱內(nèi)，玉米芯生物蛋白飼料分別以5%、10%、15%和20% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))的比例添加到基礎(chǔ)飼料中，連續(xù)飼養(yǎng)50d。試驗(yàn)結(jié)果表明在異育銀鯽飼料中添加10%玉米芯生物蛋白飼料，其增重率、總消化率、蛋白質(zhì)消化率和魚體粗灰分、鈣含量與對照組比較沒有顯著性差異(P > 0. 05)，以后隨著玉米芯生物蛋白飼料添加量的上升，以上指標(biāo)都逐漸降低。表明在異育銀鯽魚種配合飼料中，玉米芯生物蛋白飼料的最適添加量為10%，對魚體的生產(chǎn)性能、魚體品質(zhì)不會產(chǎn)生顯著影響(P > 0. 05)。
權(quán)利要求
1.ー種利用玉米芯生產(chǎn)生物蛋白飼料的制作方法，所述的飼料是由玉米芯和麩皮以70-80 20-30及營養(yǎng)鹽質(zhì)量比混合后加水煮制的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，并在固體發(fā)酵培養(yǎng)基上接種黑曲霉，培養(yǎng)48-72h后，接種啤酒酵母菌，繼續(xù)培養(yǎng)24h后添加20%的蒸煮豆柏，再發(fā)酵48h，發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵產(chǎn)物干燥、粉碎制得所述的生物蛋白飼料。
2.如權(quán)利要求I所述的生物蛋白飼料，其特征在于所述的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基按如下方面制得 接種黑曲霉的培養(yǎng)基為玉米芯和麩皮以70-80 20-30及營養(yǎng)鹽((NH4)2S042%，MgSO4 7H20 0. 05%, KH2PO4 0. 01% )混合后，加入 70-80%的水，于 126°C高壓處理 2h，得到黑曲霉發(fā)酵固體培養(yǎng)基； 含豆柏的黑曲霉與啤酒酵母共發(fā)酵培養(yǎng)基為接種黑曲霉培養(yǎng)基的培養(yǎng)72-96小時(接種啤酒酵母24h)后添加20%的蒸煮豆柏和一定量的水，使總加水量達(dá)培養(yǎng)基量的90-100%，得到含豆柏的共發(fā)酵培養(yǎng)基；
3.一種發(fā)酵蛋白飼料的制備方法，所述方法是將黑曲霉和啤酒酵母先后接種到固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基上，在30°C下發(fā)酵培養(yǎng)120-144h，期間添加豆柏和水，發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵產(chǎn)物干燥，粉碎至60目即得到所述的生物蛋白飼料；
4.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于所述菌種接種量以種液占固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基干重質(zhì)量百分比計，黑曲霉種子液為10%,啤酒酵母種子液為10% ； 所述的黑曲霉篩選培養(yǎng)基為羧甲基纖維素納20g，Na2HPO4 2. 5g，KH2PO4L 6g，蛋白胨2. 6g，酵母膏0. 8g，蒸餾水1000ml，瓊脂20g, pH呈中性，121°C滅菌20min ； 所述的黑曲霉種子培養(yǎng)基為NaN03 2g，K2HPO4 lg，KCl 0. 5g, MgSO4 0. 5g, FeSO40.Olg,鹿糖 30g,水 1000ml, pH 自然,121°C滅菌 20min。
所述黑曲霉的種子液的制備黑曲霉原貯菌種在30°C活化24-36h后，稀釋并涂布于篩選培養(yǎng)基上培養(yǎng)72-96h，經(jīng)lg/1的剛果紅處理，挑取菌圈最大的菌株，作斜面保存。優(yōu)選的黑曲霉轉(zhuǎn)接1-2次，用無菌移液管吸取5-8mL無菌水加至斜面上，用接種環(huán)輕輕刮下菌苔，并充分?jǐn)噭?，用無菌移液管吸取3-5mL的菌液，分別轉(zhuǎn)接于裝有黑曲霉IOOmL種子培養(yǎng)基的250mL錐形瓶中，于150r/min、30°C下培養(yǎng)72-96h，得到黑曲霉種子液。
所述的啤酒酵母固體培養(yǎng)基為木糖20g/l，酵母膏10g/l，蛋白胨10g/l，pH5. 5，瓊脂2%,0. IMPa 滅菌 20min。
所述的啤酒酵母種子培養(yǎng)基為木糖50g/l，尿素3g/l，硫銨1.5g/l，KH2PO4lg/1,MgSO4 7H20 0. 5g/l，酵母膏 lg/1,0. IMPa 滅菌 20min。
所述啤酒酵母種子液的制備將啤酒酵母原貯菌種在30°C活化24-36h后，在固體培養(yǎng)基平板上劃線，30°C培養(yǎng)72-96h后，挑選生長旺盛的菌株作斜面保存。優(yōu)選的啤酒酵母轉(zhuǎn)接1-2次，用無菌移液管吸取5-8mL無菌水加至斜面上，用接種環(huán)輕輕刮下菌苔，并充分?jǐn)噭?，用無菌移液管吸取3-5mL的菌液，轉(zhuǎn)接于裝有啤酒酵母IOOmL種子培養(yǎng)基的250mL錐形瓶中，于30°C溫度下培養(yǎng)24-36h，搖瓶轉(zhuǎn)速150r/min，得到啤酒酵母種子液。
5.如權(quán)利3和4所述的方法，其特征在于所述初始固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基由玉米芯和麩皮以70-80 20-30及營養(yǎng)鹽質(zhì)量比混合后，加入70-80%的水，于126°C高壓處理2h，得到黑曲霉發(fā)酵固體培養(yǎng)基；接種啤酒酵母時的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基為上述固體發(fā)酵培養(yǎng)基接種黑曲霉培養(yǎng)48-72h后的培養(yǎng)基，最后共培養(yǎng)培養(yǎng)基是以初始固態(tài)培養(yǎng)基接種黑曲霉72-96h (接種啤酒酵母24h)的培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，添加20%的蒸煮豆柏和一定量的水，使總加水量達(dá)培養(yǎng)基量的90-100%，從而得到含豆柏的共發(fā)酵培養(yǎng)基。
6.如權(quán)利3和4所述的方法，其特征在于以10%的接種量將黑曲霉種子液接種到經(jīng)處理的玉米芯上進(jìn)行淺盤固體培養(yǎng)，在PH5. 5、溫度30°C的條件下，毎日翻拌一次，48-72h后培養(yǎng)基表面出現(xiàn)大量黒色孢子頭，還原糖含量達(dá)9. 5-10. 1%。
7.如權(quán)利3和4所述的方法，玉米芯原料淺盤培養(yǎng)黑曲霉48-72h后接種10%啤酒酵母種子液，毎日翻拌一次，在溫度30°C下繼續(xù)培養(yǎng)24h后添加20%豆柏， 再培養(yǎng)48h，產(chǎn)物中粗蛋白含量達(dá)25. 3-27. 2%，粗蛋白凈增量達(dá)10. 8-12. 7%，產(chǎn)品蛋白質(zhì)水解度達(dá)8. 6-9. 8%,飼料無苦味，適ロ性好，營養(yǎng)價值提高，可大幅度降低同類飼料產(chǎn)品的生產(chǎn)成本。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種利用玉米芯生產(chǎn)生物蛋白飼料的制作方法，其固態(tài)發(fā)酵過程為玉米芯自然干燥后粉碎，過60目，然后添加麩皮、營養(yǎng)鹽和水，在126℃下高壓處理2h，黑曲培養(yǎng)48-72h后接種啤酒酵母，繼續(xù)培養(yǎng)24h后添加20％的豆粕，再發(fā)酵時間48h，發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵產(chǎn)物干燥粉碎得到玉米芯蛋白飼料。本發(fā)明的生物蛋白飼料產(chǎn)品粗蛋白含量達(dá)25.3％以上，凈蛋白增量為10.8％以上。另外，黑曲霉豐富的酶系較大程度降低了大豆蛋白中的抗?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)如胰蛋白酶抑制劑、脲酶、血凝素等，有效消除了大豆蛋白的抗原性，增加寡肽、氨基酸，維生素、酶類等有用代謝產(chǎn)物，使物料適口性改善，營養(yǎng)價值提高。本發(fā)明通過微生物發(fā)酵的方式生產(chǎn)生物蛋白飼料，對減輕農(nóng)村環(huán)境污染、緩解蛋白資源供應(yīng)緊張、節(jié)約飼料用糧、降低飼料成本和增加農(nóng)民收入有一定的作用，可以做飼料的原料。
文檔編號A23K1/14GK102652532SQ20111004919
公開日2012年9月5日 申請日期2011年3月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月2日
發(fā)明者封功能, 徐艷春, 殷玉崗, 王愛民, 邵榮 申請人:鹽城工學(xué)院