專利名稱：一種香蕉組培苗種源的低溫保存方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)方法，具體涉及一種香蕉組培苗種源的低溫保存方法。
背景技術(shù)：
我國是香蕉主產(chǎn)國之一，也是世界上栽培香蕉歷史最悠久的國家之一，我國香蕉的品種資源十分豐富，對世界的香蕉產(chǎn)業(yè)作出了重大貢獻(xiàn)。我國人口眾多，香蕉消費(fèi)量巨大，但目前每年每人香蕉消耗量平均不足4kg，隨著交通運(yùn)輸、香蕉保鮮技術(shù)的改善及人民生活水平的提高，香蕉的需求量仍會大大增加，我國的香蕉的生產(chǎn)規(guī)模也必然會繼續(xù)擴(kuò)大。 為提高我國香蕉產(chǎn)業(yè)的競爭力，發(fā)展其相關(guān)的高新生物技術(shù)并加以推廣和應(yīng)用十分迫切和必要。香蕉組培苗的成功推廣和周年栽培技術(shù)的應(yīng)用，使種植香蕉比種植水稻等其他作物的效益高，取得了明顯的經(jīng)濟(jì)和社會的效益，達(dá)到了香蕉高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、高效的目的。我國香蕉生產(chǎn)已基本上實(shí)現(xiàn)了種植品種的良種化，種苗生產(chǎn)的工廠化。目前國內(nèi)香蕉種植的良種覆蓋率已達(dá)90%以上，通過香蕉組培育苗技術(shù)，培育出大量優(yōu)質(zhì)無病毒、生長整齊的香蕉試管苗代替了傳統(tǒng)的吸芽苗，從而大幅度地提高了我國香蕉的生產(chǎn)水平。進(jìn)一步有計(jì)劃地引進(jìn)品質(zhì)好、產(chǎn)量高、抗逆性強(qiáng)的外來名優(yōu)新品種，并通過組織培養(yǎng)進(jìn)行種苗的規(guī)?；a(chǎn)， 實(shí)現(xiàn)區(qū)域化、標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，可推進(jìn)我國香蕉產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展。但是，我國在香蕉組培苗的生產(chǎn)中存在著一些問題，如變異株的識別和控制、組培苗種源的保存、生產(chǎn)成本的控制、組培苗質(zhì)量的穩(wěn)定等方面。特別是在組培苗種源的保存方面極少見報(bào)道。由于香蕉種苗需求的季節(jié)性和不穩(wěn)定性，有時種源大多，市場上不需要種苗時將會造成大量的浪費(fèi)，而當(dāng)市場上突然需要大量種苗時，又沒有足夠的種源可用于生產(chǎn)， 因此，組培苗種源的保存在香蕉的規(guī)?；a(chǎn)中有時會起到關(guān)鍵性的作用。在目前，國內(nèi)外還沒有香蕉組培苗種源保存的報(bào)道，也未見香蕉組培苗種源保存的專利申請。本發(fā)明采用獨(dú)特的培養(yǎng)基和合適的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)光照等培養(yǎng)條件進(jìn)行香蕉組培苗種源的有效保存。本實(shí)驗(yàn)中采用的香蕉材料有皇帝蕉、巴西蕉、粉蕉等?；实劢?Musa paradisiaca AA)，原產(chǎn)印度尼西亞，是獨(dú)特的食用二倍體(AA型)香蕉。在東南亞廣為栽培，古時為泰國、 越南進(jìn)貢我國皇帝的佳果而又被稱為貢蕉，在緬甸因其甜度高又稱其為甜蕉?；实劢豆。?長約10厘米左右，無籽，皮薄、熟后皮金黃色，色澤鮮艷，外型美觀，果肉橙黃、清甜芬芳、香甜可口，在我國一上市就十分暢銷?；实劢豆麑?shí)營養(yǎng)豐富，據(jù)報(bào)道，每100克可食部分含碳水化合物20克，蛋白質(zhì)1. 2克，脂肪0. 6克，還含有多種維生素，是世界上公認(rèn)的高檔香蕉品種之一。巴西蕉(Musa AAA Giant Cavendish cv. Baxi)是我國目前生產(chǎn)規(guī)模最大的香蕉品種，基因型為AAA，產(chǎn)量高，果實(shí)品質(zhì)好。而粉蕉(Musa ABB)是芭蕉屬的雜交栽培種，又名西貢蕉、安南蕉和奶蕉等，其基因型是ABB，抗風(fēng)、 抗寒、抗旱能力較強(qiáng)，粉蕉果皮金黃，皮薄， 果肉乳白色或淺橙色，口感嫩滑甜蜜，微香，可食率高，近年來在我國種植面積迅速擴(kuò)大。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種保存成本低、操作簡單、保存效果好的，能有效的對香蕉組培苗種源進(jìn)行保存的方法，利用該方法可以先對香蕉組培苗種源進(jìn)行保存，當(dāng)需要進(jìn)行香蕉種苗大規(guī)模生長時，可以將該低溫保存的香蕉組培苗種源經(jīng)種源恢復(fù)生長、繼代增殖和生根培養(yǎng)后，在短時間內(nèi)獲得大量的試管苗，為香蕉種苗的適時生產(chǎn)提供一條有效的途徑。本發(fā)明的香蕉組培苗種源的低溫保存方法，包括以下步驟(1)種源的低溫保存將香蕉通過組織培養(yǎng)獲得的叢生芽切割后接種到低溫保存培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為14 18°C，培養(yǎng)光照為500 8001x，光照時間6 10小時/天，所述的低溫保存培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基含有6-芐氨基腺嘌呤0. 1 0. 5mg、丁酰胼60 90mg， 蔗糖10 20g、瓊脂6 7g、余量為1/2MS，pH 5. 5 5. 8，由此而保存了香蕉組培苗的種源；繼代周期為3 4個月，保存過程中有時會有少量根產(chǎn)生，每周期的增殖系數(shù)為1. 8 (2)種源的恢復(fù)生長將低溫保存的組培苗種源切割后接種到恢復(fù)生長培養(yǎng)基中，8 10天種源能恢復(fù)正常生長，30 35天時，將恢復(fù)正常生長的種源接種到新的恢復(fù)生長培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖快繁獲得叢生芽，增殖倍數(shù)可達(dá)2. 5 3倍，培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度 25 30°C，光照度1500 20001x，光照時間12 16小時/天，所述的恢復(fù)生長培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基含有6-芐氨基腺嘌呤3 5mg、吲哚丁酸0. 2 0. 5mg、蔗糖20 30g、瓊脂6 7g、余量為MS, pH 5. 5 5. 8 ；叢生芽經(jīng)常規(guī)生根培養(yǎng)獲得試管苗。試管苗經(jīng)常規(guī)移植、煉苗后獲得栽培苗，栽培苗可用于生產(chǎn)栽培。所述的步驟(1)中的將香蕉通過組織培養(yǎng)獲得的叢生芽優(yōu)選是通過以下方法獲得，外植體的選擇和培養(yǎng)選取生長健壯、無病害的香蕉植株的40 50cm高的吸芽作為外植體，用水洗凈，切除上部的外假蓮，留下4 8cm高的莖和下部外假莖，無菌條件下，逐層剝?nèi)グ谇o外的葉鞘，每剝一層用體積分?jǐn)?shù)70 75%的酒精水溶液擦1次，當(dāng)外植體為 2cmX2cmX2cm時，浸泡在體積分?jǐn)?shù)為70 75%的酒精水溶液中10 15秒，再用質(zhì)量體積百分濃度為0. 05% 0. 2%升汞溶液消毒1 2次，每次3 6分鐘，無菌水沖洗4 5 次，切去基部變褐的部分，再將外植體剝至生長點(diǎn)，接種到腋芽啟動培養(yǎng)基中培養(yǎng)，當(dāng)腋芽長出時，將其切下在新的腋芽啟動培養(yǎng)基上進(jìn)行叢生芽增殖；培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度25 30°C，光照度1500 20001x，光照時間12 16小時/ 天，所述的腋芽啟動培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基含有6-芐氨基腺嘌呤4 6mg、吲哚丁酸0. 1 0. 5mg、蔗糖20 30g、瓊脂6 7g、余量為MS, pH 5. 5 5. 8。叢生芽增殖的繼代周期為30 40天，更優(yōu)選當(dāng)增殖到第3 4代時，每個外植體有20 30個芽，取樣2 4個進(jìn)行“巴拿馬”病的病毒免疫學(xué)檢測，檢測無病菌的株系用于種源保存和隨后的生長步驟(2)中所述的生根培養(yǎng)優(yōu)選步驟為將在新的恢復(fù)生長培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖快繁獲得叢生芽切成單芽后，再轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中生根培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25 30°C，光照度 1500 20001x，光照時間12 16小時/天，直至長成試管苗，所述的生根培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基含有吲哚丁酸1. 0 2. Omg、萘乙酸0. 2 0. 8mg、蔗糖20 30g、瓊脂6 7g，余量為 MS, pH 5. 5 5. 8。經(jīng)生根培養(yǎng)后，芽的生根率可達(dá)100%。所述的MS為國際通用的培養(yǎng)基，其成分和配制方法參看文獻(xiàn)(譚文澄、戴策剛主編.觀賞植物組織培養(yǎng)技術(shù).北京中國林業(yè)出版社，1991)；所述的1/2MS是將MS中的大量元素濃度減半，而其他成分濃度不變而形成的培養(yǎng)基。本發(fā)明采用獨(dú)特的培養(yǎng)基、合適的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)光照等培養(yǎng)條件對叢生芽(種源)進(jìn)行低溫保存處理，使叢生芽由原來的繼代周期為30 40天變成低溫保存的繼代周期3 4個月，由于繼代周期的延長，使得叢生芽的保存時間延長，當(dāng)需要試管苗時，可將低溫保存的叢生芽經(jīng)種源恢復(fù)生長、繼代增殖又獲得叢生芽，叢生芽經(jīng)生根培養(yǎng)后，在短時間內(nèi)獲得大量的試管苗，為香蕉種苗的適時生產(chǎn)提供一條有效的途徑。本發(fā)明具有保存成本低、操作簡單和保存效果好等優(yōu)點(diǎn)，在需要進(jìn)行種苗大規(guī)模生長的時候，能在短時間內(nèi)，將低溫保存的種源經(jīng)恢復(fù)生長、繼代增殖又獲得叢生芽，叢生芽經(jīng)生根培養(yǎng)后，在短時間內(nèi)獲得大量的試管苗，為香蕉種苗的適時生產(chǎn)提供一條有效的途徑。
具體實(shí)施例方式以下是對本發(fā)明的進(jìn)一步說明，而不是對本發(fā)明的限制。實(shí)施例1 皇帝蕉組培苗種源的低溫保存(1)外植體的選擇和培養(yǎng)在無病害的皇帝蕉種植基地，在生長季節(jié)選取生長健壯、無病害的植株的40-50cm 高的吸芽為外植體，在自來水下沖洗干凈表面的泥土后，切除上部的外假莖，留下4-8cm高的莖和下部外假莖。在超凈工作臺無菌條件下再逐層剝?nèi)グ谇o外的葉鞘，每剝一層用體積分?jǐn)?shù)為70%酒精水溶液擦1次，當(dāng)外植體為2CmX2CmX2Cm大小時，浸泡在體積分?jǐn)?shù)為70%酒精水溶液中10秒，再用質(zhì)量體積百分比濃度為0. 05%的升汞溶液消毒2次，每次6分鐘，無菌水沖洗4次，切去基部變褐的部分，再將外植體剝至高約0. 5cm左右生長點(diǎn)，接種到腋芽啟動培養(yǎng)基中培養(yǎng)，該腋芽啟動培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基含有6-芐氨基腺嘌呤 (6-BA)4mg、吲哚丁酸(IBA)O. lmg、蔗糖20g、瓊脂6g、其余為MS，pH 5. 5，培養(yǎng)溫度25°C，光照度15001x，光照時間12小時/天，當(dāng)腋芽長出時，將其切下在新的腋芽啟動培養(yǎng)基上進(jìn)行叢生芽增殖，培養(yǎng)溫度25°C，光照度15001x，光照時間12小時/天。繼代周期為40天，當(dāng)增殖到第4代，每個外植體有20個芽，取2個進(jìn)行“巴拿馬”病的病毒免疫學(xué)檢測，檢測無病菌的株系才能用于種源保存和隨后的生產(chǎn)。(2)種源的低溫保存將上一步驟繼代培養(yǎng)獲得的，經(jīng)檢測無病菌的株系的叢生芽(種源)切割后接種到低溫保存培養(yǎng)基中，該低溫保藏培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基含有6-芐氨基腺嘌呤 (6-BA)0. lmg、丁酰胼(比久，B9)60mg、蔗糖10g、瓊脂6g、余量為1/2MS，pH 5. 5，培養(yǎng)溫度為14°C，培養(yǎng)光照為5001x，光照時間10小時/天，繼代周期為4個月。保存過程中有時有少量根產(chǎn)生，每周期的增殖系數(shù)為1. 8，由此而保存了組培苗的種源。(3)種源的恢復(fù)生長將上一步驟經(jīng)低溫保存的組培苗種源切割后接種到恢復(fù)生長培養(yǎng)基中，該恢復(fù)生長 培養(yǎng)基為每升含有6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)3mg、吲哚丁酸(IBA)O. 2mg、蔗糖20g、瓊脂 6g、其余為MS, pH 5. 5，培養(yǎng)溫度25°C，光照度15001x，光照時間16小時/天，10天能恢復(fù)正常生長，35天時再轉(zhuǎn)入新的恢復(fù)生長培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖快繁，增殖倍數(shù)可達(dá)2. 5倍。
(4)生根培養(yǎng)將上一步驟增殖所獲得的叢生芽切成單芽后再轉(zhuǎn)入到生根培養(yǎng)基中，該生根培養(yǎng)基為每升含有吲哚丁酸(IBA) 1. Omg、萘乙酸(NAA)O. 2mg、蔗糖20g、瓊脂6g、其余為MS，pH 5. 5，培養(yǎng)培養(yǎng)溫度25°C，光照度15001x，光照時間16小時/天，經(jīng)生根培養(yǎng)，生根率可達(dá) 100%，而后長成試管苗。實(shí)施例2 巴西蕉組培苗種源的低溫保存(1)外植體的選擇和培養(yǎng) 在無病害的巴西蕉種植基地，在生長季節(jié)選取生長健壯、無病害的的植株的 40-50cm高的吸芽為外植體，在自來水下沖洗干凈表面的泥土后，切除上部的外假莖，留下 4-8cm高的莖和下部外假莖。在超凈工作臺無菌條件下再逐層剝?nèi)グ谇o外的葉鞘，每剝一層用體積分?jǐn)?shù)為75%酒精水溶液擦1次，當(dāng)外植體為2CmX2CmX2Cm大小時，浸泡在體積分?jǐn)?shù)為75%酒精水溶液中15秒，再用質(zhì)量體積百分比濃度為0. 2%升汞溶液消毒1次，每次 3分鐘，無菌水沖洗5次，切去基部變褐的部分，再將外植體剝至高約0. 5cm左右生長點(diǎn)，接種到腋芽啟動培養(yǎng)基，該腋芽啟動培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基含有6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)6mg、 吲哚丁酸(IBA)O. 5mg、蔗糖30g、瓊脂7g、其余為MS、pH 5. 8，當(dāng)腋芽長出時，將其切下在新的腋芽啟動培養(yǎng)基上進(jìn)行叢生芽增殖，上述培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度30°C，光照度20001x，光照時間16小時/天。繼代周期為30天，當(dāng)增殖到3代，每個外植體有30個芽，取2個進(jìn)行 “巴拿馬”病的病毒免疫學(xué)檢測，檢測無病菌的株系才能用于種源保存和隨后的生產(chǎn)。(2)種源的低溫保存將繼代培養(yǎng)獲得的、經(jīng)檢測無病菌的株系的叢生芽作為種源切割后接種到低溫保存培養(yǎng)基中，該低溫保藏培養(yǎng)基為每升含有6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)0. 5mg、丁酰胼(比久， B9)90mg、蔗糖20g、瓊脂7g、其余為1/2MS，pH5. 8，培養(yǎng)溫度為18°C，培養(yǎng)光照為8001x，光照時間6小時/天。繼代周期為3個月，保存過程中有時有少量根產(chǎn)生，每周期的增殖系數(shù)為2. 2，由此而保存了組培苗的種源。(3)種源恢復(fù)生長將上一步驟低溫保存的組培苗種源切割后接種到恢復(fù)生長培養(yǎng)基中，該恢復(fù)生長培養(yǎng)基每升培養(yǎng)基含有6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)5mg、吲哚丁酸(IBA)O. 5mg、蔗糖30g、瓊脂7g、其余為MS, pH 5. 8，培養(yǎng)溫度30°C，光照度20001x，光照時間12小時/天，8天能恢復(fù)正常生長，30天時再轉(zhuǎn)入新的恢復(fù)生長培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖快繁，培養(yǎng)溫度30°C，光照度 20001x，光照時間12小時/天，增殖倍數(shù)可達(dá)3. O倍。(4)生根培養(yǎng)將上一步驟增殖所獲得的叢生芽切成單芽后再轉(zhuǎn)入到生根培養(yǎng)基中，該生根培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基含有吲哚丁酸(IBA) 2. Omg、萘乙酸(NAA)O. 8mg、蔗糖30g、瓊脂7g，其余為 MS，pH 5. 8，培養(yǎng)溫度30°C，光照度2000Ix，光照時間12小時/天，經(jīng)生根培養(yǎng)，生根率可達(dá) 100%，而后長成試管苗。實(shí)施例3 粉蕉組培苗種源的低溫保存(1)外植體的選擇和培養(yǎng)在無病害的粉蕉種植基地，在生長季節(jié)選取生長健壯、無病害的的植株的40-50cm 高的吸芽為外植體，在自來水下沖洗干凈表面的泥土后，切除上部的外假莖，留下4-8cm高的莖和下部外假莖。在超凈工作臺無菌條件下再逐層剝?nèi)グ谇o外的葉鞘，每剝一層用體積分?jǐn)?shù)為72%的酒精水溶液擦1次，當(dāng)外植體為2CmX2CmX2Cm大小時，浸泡在體積分?jǐn)?shù)為72%的酒精水溶液中12秒，再用質(zhì)量體積百分比濃度為0. 升汞溶液消毒2次，每次5 分鐘，無菌水沖洗4次，切去基部變褐的部分，再將外植體剝至高約0. 5cm左右生長點(diǎn)，接種到腋芽啟動培養(yǎng)基，該腋芽啟動培養(yǎng)基為每升含有6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)5mg、吲哚丁酸 (IBA)O. 3mg、蔗糖25g、瓊脂6. 5g、其余為MS，pH 5. 6，培養(yǎng)溫度28°C，光照度18001x，光照時間14小時/天。當(dāng)腋芽長出時，可將其切下在新的腋芽啟動培養(yǎng)基進(jìn)行叢生芽增殖，，培養(yǎng)溫度28°C，光照度18001x，光照時間14小時/天。繼代周期為35天，當(dāng)增殖到第4代， 每個外植體有25個芽，取4個進(jìn)行“巴拿馬”病的病毒免疫學(xué)檢測，檢測無病菌的株系才能用于種源保存和隨后的生產(chǎn)。(2)種源的低溫保存將上一步驟繼代培養(yǎng)獲得的、經(jīng)檢測無病菌的株系的叢生芽切割后接種到低溫保存培養(yǎng)基中，該低溫保藏培養(yǎng)基為每升含有6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)0. 2mg、丁酰胼(比久， B9)80mg、蔗糖15g、瓊脂6. 5g、其余為1/2MS，pH 5. 6，培養(yǎng)溫度為16°C，培養(yǎng)光照為7001x, 光照時間8小時/天，繼代周期為100天。保存過程中有時有少量根產(chǎn)生，每周期的增殖系數(shù)為2. 0，由此而保存了組培苗的種源。(3)種源恢復(fù)生長將上一步驟低溫保存的組培苗的種源切割后接種到恢復(fù)生長培養(yǎng)基中，該恢復(fù)生長培養(yǎng)基每升含有6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)4mg、吲哚丁酸(IBA) 0. 4mg、蔗糖25g、瓊脂 6. 5g、其余為MS，pH 5. 6，培養(yǎng)溫度28°C，光照度18001x，光照時間14小時/天，9天能恢復(fù)正常生長，35天時再轉(zhuǎn)入新的恢復(fù)生長培養(yǎng)基中上進(jìn)行增殖快繁，培養(yǎng)溫度28°C，光照度 18001x，光照時間14小時/天，增殖倍數(shù)可達(dá)2. 8倍。(4)生根培養(yǎng)將上一步驟增殖所獲得的叢生芽切成單芽后再轉(zhuǎn)入到生根培養(yǎng)基中，該生根培養(yǎng)基每升 含有吲哚丁酸(IBA) 1.5mg、萘乙酸(NAA)O. 4mg、蔗糖25g、瓊脂6. 5g、其余為MS，pH 5. 6，培養(yǎng)培養(yǎng)溫度28°C，光照度18001x，光照時間14小時/天，經(jīng)生根培養(yǎng)，其生根率可達(dá) 100%，而后長成試管苗。
權(quán)利要求
1.一種香蕉組培苗種源的低溫保存方法，其特征在于，包括以下步驟(1)種源的低溫保存將香蕉通過組織培養(yǎng)獲得的叢生芽切割后接種到低溫保存培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為14 18°C，培養(yǎng)光照為500 8001X，光照時間6 10小時/天，所述的低溫保存培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基含有6-芐氨基腺嘌呤0. 1 0. 5mg、丁酰胼60 90mg，蔗糖 10 20g、瓊脂6 7g、余量為1/2MS，pH 5. 5 5. 8，由此而保存了香蕉組培苗的種源；(2)種源的恢復(fù)生長將低溫保存的組培苗種源切割后接種到恢復(fù)生長培養(yǎng)基中， 30 35天時，將恢復(fù)正常生長的種源接種到新的恢復(fù)生長培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖快繁獲得叢生芽，培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度25 30°C，光照度1500 2000lx，光照時間12 16小時/天，所述的恢復(fù)生長培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基含有6-芐氨基腺嘌呤3 5mg、吲哚丁酸0. 2 0. 5mg、 蔗糖20 30g、瓊脂6 7g、余量為MS，pH 5. 5 5. 8 ；叢生芽經(jīng)常規(guī)生根培養(yǎng)獲得試管苗。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的香蕉組培苗種源的低溫保存方法，其特征在于，所述的步驟 (1)中的將香蕉通過組織培養(yǎng)獲得的叢生芽是通過以下方法獲得，外植體的選擇和培養(yǎng) 選取生長健壯、無病害的香蕉植株的40 50cm高的吸芽作為外植體，用水洗凈，切除上部的外假莖，留下4 8cm高的莖和下部外假莖，無菌條件下，逐層剝?nèi)グ谇o外的葉鞘，每剝一層用體積分?jǐn)?shù)70 75%的酒精水溶液擦1次，當(dāng)外植體為2CmX2CmX2Cm時，浸泡在體積分?jǐn)?shù)為70 75%的酒精水溶液中10 15秒，再用質(zhì)量體積百分濃度為0. 05% 0. 2% 升汞溶液消毒1 2次，每次3 6分鐘，無菌水沖洗4 5次，切去基部變褐的部分，再將外植體剝至生長點(diǎn)，接種到腋芽啟動培養(yǎng)基中培養(yǎng)，當(dāng)腋芽長出時，將其切下在新的腋芽啟動培養(yǎng)基上進(jìn)行叢生芽增殖；培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度25 30°C，光照度1500 20001x，光照時間12 16小時/天，所述的腋芽啟動培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基含有6-芐氨基腺嘌呤4 6mg、吲哚丁酸0. 1 0. 5mg、 蔗糖20 30g、瓊脂6 7g、余量為MS，pH 5. 5 5. 8。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的香蕉組培苗種源的低溫保存方法，其特征在于，所述的在新的腋芽啟動培養(yǎng)基上進(jìn)行叢生芽增殖是在當(dāng)叢生芽增殖到第3 4代時，每個外植體有 20 30個芽，取樣2 4個進(jìn)行“巴拿馬”病的病毒免疫學(xué)檢測，檢測無病菌的株系用于種源低溫保存。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的香蕉組培苗種源的低溫保存方法，其特征在于，步驟(2)中所述的生根培養(yǎng)步驟為將在新的恢復(fù)生長培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖快繁獲得叢生芽切成單芽后，再轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中生根培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25 30°C，光照度1500 20001x，光照時間 12 16小時/天，直至長成試管苗，所述的生根培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基含有吲哚丁酸1. 0 2. Omg、萘乙酸0. 2 0. 8mg、蔗糖20 30g、瓊脂6 7g，余量為MS，pH 5. 5 5. 8。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種香蕉組培苗種源的低溫保存方法。它是將香蕉經(jīng)組培獲得的叢生芽切割后接種到低溫保存培養(yǎng)基中，在合適的條件下培養(yǎng)，然后將低溫保存的種源切割后接種到恢復(fù)生長培養(yǎng)基中，在合適的條件下增殖快繁獲得叢生芽，叢生芽經(jīng)生根培養(yǎng)獲得試管苗。本發(fā)明采用獨(dú)特的培養(yǎng)基、合適的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)光照等培養(yǎng)條件對叢生芽(種源)進(jìn)行低溫保存處理，使叢生芽由原來的繼代周期為30～40天變成低溫保存的繼代周期3～4個月，由于繼代周期的延長，使得叢生芽的保存時間延長，當(dāng)需要試管苗時，可將低溫保存的叢生芽經(jīng)種源恢復(fù)生長、繼代增殖又獲得叢生芽，叢生芽經(jīng)生根培養(yǎng)后，在短時間內(nèi)獲得大量的試管苗，為香蕉種苗的適時生產(chǎn)提供一條有效的途徑。
文檔編號A01H4/00GK102217537SQ20111009979
公開日2011年10月19日 申請日期2011年4月20日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月20日
發(fā)明者吳坤林, 張建霞, 曾宋君, 段俊 申請人:中國科學(xué)院華南植物園