專利名稱：一種白背三七的快繁方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種白背三七的快繁方法。
背景技術(shù)：
白背三七(Gynura divaricata (L. ) DC.)屬菊科三七屬植物，又名白東楓、白子草、 玉枇杷、三百棒、厚面皮、雞菜、大肥牛、白番莧、白紅菜、富貴菜、白子菜等，分布于臺(tái)灣至華 南、西南一帶。其根、莖葉均可入藥；其根性味甘、涼，能清熱涼血，散瘀消腫；其莖、葉味咸 微辛、寒，有毒，具有清熱，舒筋，止血，祛痰之功效。在福建等地，民間以其莖葉沖茶飲水服 用，用于治療糖尿病等，療效很好。白背三七富含黃酮類及其苷類化合物(黃騏等，白子菜 總黃酮含量的測(cè)定，福建師范大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，22 (4) 118-120 ；李孌等，富貴菜莖及不同發(fā) 育時(shí)期葉總黃酮含量的比較，湖南林業(yè)科技，2007,34(3) :13-14 ；胡勇等，白背三七地上部 分的化學(xué)成分，中國天然藥物，2006,4( =156-158 ；李麗梅等，白背三七化學(xué)成分研究，時(shí) 珍國醫(yī)國藥，2008，19(1) :118-119)、多糖類(姜曼花等，白背三七多糖的提取純化及含量 的測(cè)定，時(shí)珍國醫(yī)國藥，2008，19(9) :2147-2149)、醇類化合物及其衍生物(胡勇等，白背 三七地上部分的化學(xué)成分，中國天然藥物，2006,4( =156-158 ；李麗梅等，白背三七化學(xué) 成分研究，時(shí)珍國醫(yī)國藥，2008，19(1) :118-119)等，是我國重要的傳統(tǒng)保健型蔬菜和中草 藥資源(李炎林等，藥用植物富貴菜的研究現(xiàn)狀與展望，中國野生植物資源，2011，30(1) 10-13，19)。富貴菜在我種植主要分布在南方，其受生長環(huán)境的要求，其最適生長環(huán)境溫度為 20-30°C，低于15°C莖葉生長緩慢，成株可忍耐40°C的高溫、3°C的低溫，_2°C時(shí)地上部分凍 死(鄭華等，富貴菜人工栽培技術(shù)，中國蔬菜，2004，(4) :54-55)，同時(shí)經(jīng)常采收的植株很 少開花結(jié)籽，另外在我國廣東南部珠江三角洲地區(qū)只開花不結(jié)籽(賀東方，富貴菜高產(chǎn)優(yōu) 質(zhì)栽培技術(shù)，長江蔬菜，2003，(11) :29-33;趙世樂等，富貴菜及其栽培，特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)植物， 2002，(6) :36-39)。這種繁殖特性給白背三七的種質(zhì)資源保存和運(yùn)輸帶來了一定的困難， 但傳統(tǒng)的人工扦插繁殖制約著白背三七的大規(guī)模種植。因此通過白背三七再生體系構(gòu)建、 器官發(fā)生途徑、側(cè)芽叢芽誘導(dǎo)等途徑建立了白背三七的組織培養(yǎng)體系(李孌，富貴菜黃酮 含量及離體培養(yǎng)的研究，湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士論文，2007，6 ；李孌等，富貴菜離體培養(yǎng)體系的 建立，長江大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2009,6 ) :56-60 ；李孌等，富貴菜器官發(fā)生的研究，湖 南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，(6) :4-6;黃麗莉等，白子菜的組織培養(yǎng)與快速繁殖，植物生理學(xué)通訊， 46(4) :377-378)。上述4種方法以白背三七莖段或者葉片產(chǎn)生愈傷組織，然后發(fā)生器官再生形成植 株，最后生根形成完整植株；或者以側(cè)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)形成植株，但繁殖系數(shù)較低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一套利用生物技術(shù)工廠化生產(chǎn)白背三七苗木的種苗的方 法，克服上述現(xiàn)有繁殖技術(shù)或方法存在的缺陷，以便快速、高效、大規(guī)模地生產(chǎn)種性純正、健康、整齊一致的高質(zhì)量白背三七種苗。本發(fā)明的目的是通過以下方式實(shí)現(xiàn)的?！N白背三七的快繁方法，包括以下步驟(1)外植體的取材與消毒選取一年生或者當(dāng)年生的新梢白背三七莖段，剪去葉 片留葉柄，清洗、用70%酒精和2%次氯酸鈉消毒，切成0. 5-1. Ocm帶芽莖段；(2)誘導(dǎo)培養(yǎng)將消毒好的莖段帶芽外植體接種在不含任何激素的MS啟動(dòng)培養(yǎng) 基，誘導(dǎo)腋芽產(chǎn)生，培養(yǎng)條件為25°C 士 1°C，光照強(qiáng)度為20001x，光照時(shí)間為16h/d，20天后 得到5-8cm高的啟動(dòng)苗；(3)增殖和生根培養(yǎng)將啟動(dòng)苗切成單個(gè)的帶芽莖段，接種在培養(yǎng)基1/2MS+NAA 0. ang/L+蔗糖20g/L+瓊脂6g/L同時(shí)增殖和生根，培養(yǎng)條件為25°C 士 1°C，光照強(qiáng)度為 20001x，光照時(shí)間為16h/d ；(4)煉苗與移栽將生根后的苗進(jìn)行煉苗移栽。所述步驟(1)中的一年生或當(dāng)年生枝梢來源于春季白背三七萌發(fā)的新梢、任何季 節(jié)扦插枝條、老枝打頂所萌發(fā)的新梢、種子萌發(fā)芽或者組培移栽苗。所述步驟(1)清洗消毒過程具體如下先將外植體用自來水添加去污劑清洗，再 用自來水流水沖洗1個(gè)小時(shí)，在超凈工作臺(tái)內(nèi)經(jīng)70%酒精消毒1 和2%次氯酸鈉消毒 12min，無菌水沖洗5次后備用。所述步驟( 中增殖體系每4-6周繼代一次。在培養(yǎng)基1/2MS+NAA0. 2mg/L+蔗糖 20g/L+瓊脂6g/L上，在增殖培養(yǎng)2周后，外植體基部產(chǎn)生少量白色的愈傷組織，同時(shí)腋芽開 始萌動(dòng)，生根；培養(yǎng)3周后形成3cm左右的完整小苗；所述步驟(4)具體包括以下煉苗與移栽過程將生根苗的容器直接轉(zhuǎn)移到普通房 間放置2天，然后用鑷子將生根苗移出，在自來水下沖洗去掉培養(yǎng)基，移栽到煉苗基質(zhì)的苗 床上，澆透水，并搭建塑料小拱棚，保證棚內(nèi)的濕度80 %以上，于塑料大棚15-30°C培養(yǎng)，兩 周左右小苗逐漸適應(yīng)培養(yǎng)環(huán)境，可以慢慢移除小拱棚，進(jìn)行正常的肥水管理。所述的煉苗基質(zhì)為棉籽殼(食用菌生產(chǎn)后的下腳料)河沙珍珠巖的重量比為 3:1:1的混合物。該發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)外植體采集方面，污染率低，所用消毒劑無環(huán)境污染； (2)增殖培養(yǎng)通過無菌苗腋芽途徑獲得無菌苗，繁殖系數(shù)高；C3)增殖培養(yǎng)通過腋芽途徑一 步培養(yǎng)獲得完整植株，培養(yǎng)周期短；(4)生根率和定植成活率極高，遺傳穩(wěn)定性好。此方法可以實(shí)現(xiàn)快速繁殖白背三七，為規(guī)模化種植白背三七提供優(yōu)質(zhì)種苗；尤其 可以一步培養(yǎng)快速獲得完整植株，植株呈指數(shù)級(jí)增殖方式增加，，每4-6周重復(fù)繼代一次， 移栽成活率達(dá)到95%以上。通過植物組織培養(yǎng)植株可以在短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)快速繁殖和大規(guī)模 種植的目的，繁育種苗不受外界不良環(huán)境的影響，該法已經(jīng)在珍稀花卉、名貴中藥材的擴(kuò)大 種植和瀕危樹種的拯救方面得到廣泛的應(yīng)用。


圖1是本發(fā)明方法中由嫩梢莖段獲得的各階段白背三七植株，其中A.莖段的啟 動(dòng)培養(yǎng)；B.增殖與生根培養(yǎng)；C.生根苗移栽到苗床(70天后)。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例旨在進(jìn)一步說明本發(fā)明，而不會(huì)限制本發(fā)明。實(shí)施例11)外植體的取材與消毒選取20天左右的嫩梢作外植體，剪去葉片(保留葉柄)， 先用適量的去污劑清洗，再用自來水流水沖洗1個(gè)小時(shí)，在超凈工作臺(tái)內(nèi)經(jīng)70%酒精消毒 15s和2%次氯酸鈉消毒12min，無菌水沖洗5次后放在超凈工作臺(tái)內(nèi)，切成0. 5-1. Ocm帶芽 莖段備用。2)誘導(dǎo)培養(yǎng)在超凈工作臺(tái)內(nèi)將消毒好的莖段帶芽外植體接種在不含任何激素 的MS啟動(dòng)培養(yǎng)基，誘導(dǎo)腋芽產(chǎn)生，培養(yǎng)條件為25°C 士 1 °C，光照強(qiáng)度為20001x左右，光周期 為16h/8h,20天左右后得到5-8cm高的啟動(dòng)苗；(圖1，A)3)增殖與生根培養(yǎng)以啟動(dòng)苗的頂芽和帶芽莖段為外植體，接種在生根培養(yǎng)基 MS+IBAO. 3mg/L+IAA0. 3mg/L+蔗糖20g/L+瓊脂6g/L進(jìn)行誘導(dǎo)生根，9天可以生根(圖1， B)，根系數(shù)量多而長度適中，可直接進(jìn)行煉苗后移栽。植株呈指數(shù)級(jí)增殖方式增加，生根系 數(shù)達(dá)到100%。4)煉苗與移栽將生根苗的容器直接轉(zhuǎn)移到普通房間放置2天，然后用鑷子將生 根苗移出，在自來水下沖洗去掉培養(yǎng)基，移栽到煉苗基質(zhì)的苗床上，澆透水，并搭建塑料小 拱棚，保證棚內(nèi)的濕度80%以上，與塑料大棚25°C培養(yǎng)，兩周左右小苗逐漸適應(yīng)培養(yǎng)環(huán)境， 可以逐步移除小拱棚，進(jìn)行正常的肥水管理。成活的植株與實(shí)生苗無差異，完全保持母本的 遺傳特征(圖1，C)。成活率達(dá)到95%以上。
權(quán)利要求
1.一種白背三七的快繁方法，其特征在于，包括以下步驟(1)外植體的取材與消毒選取一年生或者當(dāng)年生的新梢白背三七莖段，剪去葉片留 葉柄，清洗、用70%酒精和2%次氯酸鈉消毒，切成0. 5-1. Ocm帶芽莖段；(2)誘導(dǎo)培養(yǎng)將消毒好的莖段帶芽外植體接種在不含任何激素的MS啟動(dòng)培養(yǎng)基，誘 導(dǎo)腋芽產(chǎn)生，培養(yǎng)條件為25°C 士 1°C，光照強(qiáng)度為20001x，光照時(shí)間為16h/d，20天后得到 5-8cm高的啟動(dòng)苗；(3)增殖和生根培養(yǎng)將啟動(dòng)苗切成單個(gè)的帶芽莖段，接種在培養(yǎng)基1/2MS+NAA 0. 2mg/L+蔗糖20g/L+瓊脂6g/L同時(shí)增殖和生根，培養(yǎng)條件為25°C 士 1°C，光照強(qiáng)度為 20001x，光照時(shí)間為16h/d ；(4)煉苗與移栽將生根后的苗進(jìn)行煉苗移栽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中的一年生或當(dāng)年生枝梢來源于春季白背三七萌發(fā)的新梢、任何季節(jié)扦 插枝條、老枝打頂所萌發(fā)的新梢、種子萌發(fā)芽或者組培移栽苗。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)清洗消毒過程具體如下先將外植體用自來水添加去污劑清洗，再用自 來水流水沖洗1個(gè)小時(shí)，在超凈工作臺(tái)內(nèi)經(jīng)70%酒精消毒1 和2%次氯酸鈉消毒12min， 無菌水沖洗5次后備用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(4)具體包括以下煉苗與移栽過程將生根苗的容器直接轉(zhuǎn)移到普通房間 放置2天，然后用鑷子將生根苗移出，在自來水下沖洗去掉培養(yǎng)基，移栽到煉苗基質(zhì)的苗床 上，澆透水，并搭建塑料小拱棚，保證棚內(nèi)的濕度不低于80%，于塑料大棚15-30°C培養(yǎng)，兩 周小苗適應(yīng)培養(yǎng)環(huán)境后，移除小拱棚，進(jìn)行正常的肥水管理。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的煉苗基質(zhì)為棉籽殼河沙珍珠巖的重量比為3:1:1的混合物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種白背三七的快繁方法。包括誘導(dǎo)培養(yǎng)接種在不含任何激素的MS啟動(dòng)培養(yǎng)基，誘導(dǎo)腋芽產(chǎn)生；增殖和生根培養(yǎng)將啟動(dòng)苗切成單個(gè)的帶芽莖段，接種在培養(yǎng)基1/2MS+NAA 0.2mg/L+蔗糖20g/L+瓊脂6g/L同時(shí)增殖和生根；培養(yǎng)條件均為25℃±1℃，光照強(qiáng)度為2000lx，光照時(shí)間為16h/d。本發(fā)明方法能夠快速、高效、大規(guī)模地生產(chǎn)種性純正、健康、整齊一致的高質(zhì)量白背三七種苗。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102144569SQ20111011552
公開日2011年8月10日 申請(qǐng)日期2011年5月5日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月5日
發(fā)明者何長征, 劉東波, 劉明月, 宋勇, 李炎林, 熊興耀, 秦玉芝, 胡新喜, 黃科 申請(qǐng)人:湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)