專利名稱：一種層臥孔菌一級菌種的培養(yǎng)基與培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種真菌培養(yǎng)的培養(yǎng)基與培養(yǎng)方法，具體是一種層臥孔菌深層發(fā)酵一級菌種的培養(yǎng)基與培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
層臥孔菌又名斑褐孔菌，非褶菌目、多孔菌科、褐孔菌屬。形態(tài)為子實(shí)體多年生，無菌蓋，平伏貼勝于基物表面，寬可達(dá)20厘米或更大，干時龜裂，菌管多層，每層厚2-3毫米， 并逐年縮小，形成扁半球形的子實(shí)體，其總厚度達(dá)15mm，管孔表面初期銹褐色，后期由于被灰色菌絲所充塞而變?yōu)榈瓱熒磷鼗疑?，子?shí)體的邊緣灰黑色，管孔壁厚，完整，管口圓形， 每毫米6-8個。孢子球形或近球形，無色、光滑，5-8 μ m，無剛毛。生于櫟、械等闊葉樹的樹皮及腐木上，引起木材白腐。層臥孔菌是閩南地區(qū)民間治療冠心病的一種藥用真菌，目前仍處在野生狀態(tài)，藥物資源有限，需深入研究和開發(fā)。深層培養(yǎng)的菌絲體和發(fā)酵液的提取物， 經(jīng)藥理實(shí)驗(yàn)和臨床驗(yàn)證一致認(rèn)為層臥孔菌是一種很有希望的抗心肌缺血藥物，對治療冠心病和心率失常安全有效。藥用真菌是個巨大的寶庫，迄今為大眾所利用的，只是其中極少部分。就本申請來說，本申請人之前在(層臥孔菌深層培養(yǎng)的研究，沈國華等，食用菌報 1997.4(4) 43-48)發(fā)表公開了層臥孔菌的菌種分離，培養(yǎng)基配方，探索了培養(yǎng)條件，得出層臥孔菌一級種培養(yǎng)基配方為麥麩(取浸煮液)3 %、蔗糖2 %、酵母粉0.2%，培養(yǎng)條件為溫度控制在28-30°C，PH自然，三角瓶裝量200ml/500ml，轉(zhuǎn)速96轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)96-120小時， 投入中試規(guī)模批量生產(chǎn)。層臥孔菌從野生狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)楣I(yè)化生產(chǎn)是可行的，但現(xiàn)有層臥孔菌原發(fā)酵配方存在以下問題(1)層臥孔菌原液體培養(yǎng)基制作工藝繁瑣，耗能大、勞動力強(qiáng)，成本高不利于規(guī)?；a(chǎn)業(yè)生產(chǎn)。(2)原發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)的一級種的菌球個體大，球徑達(dá)3_5mm，個數(shù)少，菌球數(shù)平均為10-30個/ml，由于菌球大而少，菌絲萌發(fā)點(diǎn)少，不利于二級發(fā)酵。

發(fā)明內(nèi)容
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種層臥孔菌一級菌種的培養(yǎng)基，克服了現(xiàn)有層臥孔菌液體培養(yǎng)基培養(yǎng)的一級種的菌球個體大，球徑達(dá)2-5mm，個數(shù)少，菌球數(shù)平均為 10-30個/ml，由于菌球大而少，菌絲萌發(fā)點(diǎn)少，不利于二級發(fā)酵的問題。還解決了現(xiàn)有層臥孔菌菌種培養(yǎng)基制作工藝復(fù)雜繁瑣，耗能大、勞動力強(qiáng)，成本高不利于規(guī)?；a(chǎn)業(yè)生產(chǎn)的技術(shù)問題。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是提供一種層臥孔菌一級菌種的培養(yǎng)基，包含碳源、氮源和維生素，所述碳源為土豆、地瓜粉、面粉、淀粉、玉米粉、紅糖或蔗糖，所述氮源為酵母粉、 牛肉膏或蛋白胨，所述維生素為VB1、VB2或VB6。
本發(fā)明的有益效果是，經(jīng)所述層臥孔菌菌種培養(yǎng)基培養(yǎng)得到的菌球多而細(xì)密、菌數(shù)平均280-300個/ml、菌球直徑0. 5-1. 5mm、大小均勻、湯汁清、菌球多而細(xì)密，菌絲萌發(fā)點(diǎn)多，有利于二級發(fā)酵。所述層臥孔菌液體培養(yǎng)基所用的各個成分在市場上可以大量廉價的采購，耗能小，成本低有利于規(guī)模化產(chǎn)業(yè)生產(chǎn)。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述碳源為紅糖和玉米粉，所述氮源為蛋白胨，所述維生素為VB6。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述菌種培養(yǎng)基包含鹽類，所述鹽類為磷酸二氫鉀、硫酸鎂、氯化鈣中的一種或幾種。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述菌種培養(yǎng)基溶液每IOOml包含玉米粉3g，紅糖 2g，蛋白胨0. 3g，VB6，磷酸二氫鉀0. lg，硫酸鎂0. 05g,氯化鈣0. 05g。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的另一個技術(shù)方案是提供一種層臥孔菌一級菌種的培養(yǎng)方法，步驟為步驟1 配制菌種培養(yǎng)基溶液，所述菌種培養(yǎng)基包含碳源、氮源和維生素，所述碳源為土豆、地瓜粉、面粉、淀粉、玉米粉、紅糖或蔗糖，所述氮源為酵母粉、牛肉膏或蛋白胨，所述維生素為VB1、VB2或VB6，按所述培養(yǎng)基稱取各配料加水?dāng)嚢杈鶆?，裝入三角瓶 150ml/500ml，調(diào)節(jié) ρΗ5· 5-6. 0,0. IMpa 殺菌 30 分鐘。步驟2 所述步驟1菌種培養(yǎng)基溶液，置恒溫往復(fù)式搖床，溫度控制在27-31°C，轉(zhuǎn)速180轉(zhuǎn)/分-220轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)時間80小時-120小時，即可得到層臥孔菌一級菌種。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，上述技術(shù)方案所述碳源為紅糖和玉米粉，所述氮源為蛋白胨，所述維生素為VB6。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，上述技術(shù)方案所述菌種培養(yǎng)基包含鹽類，所述鹽類為磷酸二氫鉀、硫酸鎂、氯化鈣中的一種或幾種。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，上述技術(shù)方案菌種培養(yǎng)基溶液每IOOml包含玉米粉 3g，紅糖2g，蛋白胨0. 3g，VB610mg，磷酸二氫鉀0. lg，硫酸鎂0. 05g，氯化鈣0. 05g。本發(fā)明的有益效果是，經(jīng)所述層臥孔菌一級菌種的培養(yǎng)方法培養(yǎng)得到的菌球多而細(xì)密、菌球平均280-300個/ml、菌球直徑0. 5-1. 5mm、大小均勻、湯汁清、菌球多而細(xì)密，菌絲萌發(fā)點(diǎn)多，有利于二級發(fā)酵。此方法所需勞動力少，成本低有利于規(guī)模化產(chǎn)業(yè)生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式為詳細(xì)說明本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容、所實(shí)現(xiàn)目的及效果，以下結(jié)合實(shí)施方式詳予說明。實(shí)施例1層臥孔菌菌種由三明三真生物科技有限公司提供，母種斜面PDA培養(yǎng)基。層臥孔菌一級菌種的培養(yǎng)基為玉米粉3%、紅糖2%、蛋白胨0. 3%、VB60.01%、 磷酸二氫鉀0. 1 %、硫酸鎂0.05%、氯化鈣0.05%。培養(yǎng)基制作方法按配方稱取各配料加水?dāng)嚢杈鶆?，裝入三角瓶150ml/500ml， pH5. 0-6. 0,0. IMpa 殺菌 30 分鐘。層臥孔菌深層培養(yǎng)一級菌種培養(yǎng)條件搖瓶溫度控制在27-31 °C，裝量 150ml/500ml，最適pH為5. 5 6. 0，轉(zhuǎn)速180轉(zhuǎn)/分-220轉(zhuǎn)/分·培養(yǎng)時間80小時-120 小時左右.得到菌球多而細(xì)密、菌數(shù)平均280-300個/ml，菌球直徑0. 5-1. 5mm，大小均勻、湯汁清、菌絲萌發(fā)點(diǎn)多的層臥孔菌一級菌種。現(xiàn)有的(層臥孔菌深層培養(yǎng)的研究，沈國華等，食用菌報1997.4(4) :43_48)發(fā)表公開了層臥孔菌的菌種分離，培養(yǎng)基配方，發(fā)酵培養(yǎng)的一級種的菌球個體大，球徑達(dá)2-5mm， 個數(shù)少，菌球數(shù)平均為10-30個/ml，由于菌球大而少，菌絲萌發(fā)點(diǎn)少，不利于二級發(fā)酵。而實(shí)施例1得到的一級菌種有利于二級發(fā)酵。此培養(yǎng)方法所需勞動力少，成本低有利于規(guī)?；a(chǎn)業(yè)生產(chǎn)。實(shí)施例21、層臥孔菌菌種由三明三真生物科技有限公司提供，母種斜面PDA培養(yǎng)基。培養(yǎng)方法一級搖瓶250ml三角錐形瓶，裝液量150ml，接種一塊0. 5cm菌種。置旋轉(zhuǎn)式搖床，轉(zhuǎn)速180轉(zhuǎn)/分，溫度27-31°C，每種試驗(yàn)三個重復(fù)，結(jié)果取其平均值。生物量樣品制備發(fā)酵結(jié)束后將培養(yǎng)液取IOOml經(jīng)2000轉(zhuǎn)/分，離心沉降30分鐘，去上清液，取菌絲體稱量菌絲濕重測定生物量。2.培養(yǎng)基成分對液體發(fā)酵菌絲體產(chǎn)量的影響。2. 1碳源選擇試驗(yàn)將基礎(chǔ)培養(yǎng)基(基礎(chǔ)培養(yǎng)基含有真菌生長繁殖所需的基本營養(yǎng)物質(zhì)，可供大多數(shù)真菌生長)中的淀粉碳源分別換成3%玉米粉、土豆、地瓜粉、面粉、玉米粉測定菌絲球濕重。表1淀粉碳源對層臥孔菌菌絲體生物量的影響
權(quán)利要求
1.一種層臥孔菌一級菌種的培養(yǎng)基，其特征在于，包含碳源、氮源和維生素，所述碳源為土豆、地瓜粉、面粉、淀粉、玉米粉、紅糖或蔗糖中的一種或幾種，所述氮源為酵母粉、牛肉膏或蛋白胨中的一種或幾種，所述維生素為VB1、VB2或VB6中的一種或幾種。
2.按權(quán)利要求1所述的層臥孔菌一級菌種的培養(yǎng)基，其特征在于，所述碳源為紅糖和玉米粉，所述氮源為蛋白胨，所述維生素為VB6。
3.按權(quán)利要求1所述的層臥孔菌一級菌種的培養(yǎng)基，其特征在于，所述一級菌種的培養(yǎng)基進(jìn)一步包含鹽類，所述鹽類為磷酸二氫鉀、硫酸鎂或氯化鈣。
4.按權(quán)利要求1所述的層臥孔菌一級菌種的培養(yǎng)基，其特征在于，所述菌種培養(yǎng)基溶液每IOOml包含蛋白胨0. 3g，紅糖2g，玉米粉3g，VB610mg,磷酸二氫鉀0. Ig,硫酸鎂 0. 05g，氯化鈣 0. 05g。
5.一種層臥孔菌一級菌種的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述培養(yǎng)方法包括以下步驟步驟1 配制菌種培養(yǎng)基溶液，所述菌種培養(yǎng)基包含碳源、氮源和維生素，所述碳源為土豆、地瓜粉、面粉、淀粉、玉米粉、紅糖或蔗糖中的一種或幾種，所述氮源為酵母粉、牛肉膏、蛋白胨其中的一種或幾種，所述維生素為VB1、VB2、VB6中的一種或幾種，選擇上述培養(yǎng)基溶液的一種組合稱取各配料加水?dāng)嚢杈鶆?，調(diào)節(jié)PH5. 5-6. 0，三角瓶裝量150ml/500ml， 0. IMpa殺菌30分鐘；步驟2:將步驟1中配制的菌種培養(yǎng)基溶液，置于恒溫往復(fù)式搖床中，溫度控制在 27-31°C，轉(zhuǎn)速180轉(zhuǎn)/分-220轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)時間80小時-120小時，得到層臥孔菌一級菌種。
6.按權(quán)利要求5所述的層臥孔菌一級菌種的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述碳源為紅糖和玉米粉，所述氮源為蛋白胨，所述維生素為VB6。
7.按權(quán)利要求5所述的層臥孔菌一級菌種的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述菌種培養(yǎng)基進(jìn)一步包含鹽類，所述鹽類為磷酸二氫鉀、硫酸鎂、氯化鈣中的一種或幾種。
8.按權(quán)利要求5所述的層臥孔菌一級菌種的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述每IOOml菌種培養(yǎng)基溶液包含蛋白胨0. 3g，紅糖2g，玉米粉3g，VB610mg，磷酸二氫鉀0. lg，硫酸鎂 0. 05g，氯化鈣 0. 05g。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種層臥孔菌深層發(fā)酵一級菌種的培養(yǎng)基配方與培養(yǎng)方法，層臥孔菌培養(yǎng)基選用紅糖和玉米粉為發(fā)酵的碳源，選用蛋白胨為發(fā)酵的氮源，選用維生素VB6為發(fā)酵營養(yǎng)。采用所述層臥孔菌發(fā)酵培養(yǎng)基得到的一級菌種菌球數(shù)平均280-300個/ml、菌球直徑0.5-1.5mm、大小均勻、湯汁清，菌球多而細(xì)密、菌絲萌發(fā)點(diǎn)多，有利于二級發(fā)酵。所述層臥孔菌液體培養(yǎng)基制作工藝簡單，耗能小，有利于規(guī)?；a(chǎn)業(yè)生產(chǎn)。
文檔編號C05G1/00GK102219590SQ20111012751
公開日2011年10月19日 申請日期2011年5月13日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月13日
發(fā)明者鄭秀蓮 申請人:三明市三真生物科技有限公司