專利名稱：蝴蝶文心蘭優(yōu)質種苗快速繁殖方法
技術領域：
本發(fā)明涉及蝴蝶文心蘭的繁殖方法。具體地說，涉及蝴蝶文心蘭種苗的組織培養(yǎng)試管繁殖方法。
背景技術：
蝴蝶文心蘭，擬蝶唇蘭屬(Psychopsis)植物及其雜交種的總稱，原產(chǎn)于中南美洲，分布于特尼特島、哥倫比亞、哥斯達尼加、秘魯、巴拿馬等地，多作為珍稀蘭花盆栽觀賞。 本屬植物共有5個原生種并育成了 50多個雜交種。蝴蝶文心蘭是蘭科植物中造型獨特、極富觀賞價值的一類蘭花，它的花序為無限花序，常年開花，在開花期內，隨花序軸的生長不斷離心地產(chǎn)生花芽，即在一朵花凋謝后，另一朵花接著開放。蝴蝶文心蘭的花形酷似一只鮮艷蝴蝶，細長的花瓣就像蝴蝶長長的觸須，側萼片就像黃褐斑紋的翅膀，每朵花花期約2 3周。蝴蝶文心蘭為我國近年來引進的珍稀蘭花，種苗昂貴。它的常規(guī)繁殖常采用分株繁殖，但分株繁殖系數(shù)極低，遠遠不能滿足市場的需要。采用無菌播種和組織培養(yǎng)能進行蝴蝶文心蘭規(guī)?；焖俜敝?，但采用無菌播種難以保持一些優(yōu)良株系特別是一些優(yōu)良雜種株系的優(yōu)良性狀，以蝴蝶文心蘭的花莖為外植體，采用組織培養(yǎng)培養(yǎng)技術能有效地解決這些問題。目前，國內外尚無蝴蝶文心蘭組織培養(yǎng)種苗繁殖的報道。也沒有蝴蝶文心蘭種苗組織培養(yǎng)專利的申請。

發(fā)明內容
本發(fā)明提供了一種繁殖速度快，可在短期內獲得大量試管苗，不會對母株產(chǎn)生損傷，能保持母株優(yōu)良性狀的蝴蝶文心蘭的組織培養(yǎng)繁殖方法。本發(fā)明主要應用植物組織細胞的全能性和植物組織培養(yǎng)技術，以蝴蝶文心蘭的花梗節(jié)段為外植體，利用獨特的培養(yǎng)基誘導出花梗苗，再以花梗苗的莖尖進行原球莖的誘導和分化、然后進行壯苗培養(yǎng)，生產(chǎn)出優(yōu)質的蝴蝶文心蘭種苗，從而實現(xiàn)了本發(fā)明的目的。本發(fā)明的蝴蝶文心蘭種苗繁殖方法，其特征包括以下的步驟(1)開花時選取生長健壯的蝴蝶文心蘭的帶節(jié)花梗為外植體；(2)將外植體依次用酒精浸泡，升汞溶液消毒，無菌水漂洗后接種到花梗苗誘導培養(yǎng)基上培養(yǎng)，30 40天時能誘導花梗苗的產(chǎn)生。所述的花梗苗誘導培養(yǎng)基每升含花寶1 號(HYPONeX 1) 1 2g，肌醇80 120mg，甘氨酸1. 5 2. 5mg,鹽酸硫胺素(VBl) 0. 05 0. 2mg,鹽酸吡哆醇(VB6) 0. 4 0. 8mg,煙酸0. 4 0. 8mg,檸檬酸鈉50 200mg，萘乙酸 (NAA) 0. 2 lmg，10 20%的椰子汁，蔗糖15 30g，瓊脂6 7g。(3)將由花梗誘導的小苗轉移到類原球莖誘導培養(yǎng)基培養(yǎng)，40 60天能誘導類原球莖的形成，在相同的培養(yǎng)基上能進行類原球莖的增殖，增殖倍數(shù)3 5倍，增殖周期30 40天。所述的類原球莖誘導和增殖培養(yǎng)基為每升含花寶2號1 2g，肌醇80 120mg，甘氨酸1. 5 2. 5mg,鹽酸硫胺素(VBl) 0. 05 0. 2mg,鹽酸吡哆醇(VB6) 0. 4 0. 8mg,煙酸
0.4 0. 8mg，檸檬酸鈉50 200mg，6-節(jié)基腺嘌呤(6-BA) 2 5mg，萘乙酸(NAA)O. 2 lmg，10% 20%的椰子汁，蔗糖15 30g，瓊脂6 7g。(4)將增殖而來的類原球莖接種到分化培養(yǎng)基培養(yǎng)，40 50天能分化出小苗。所述的原球莖分化培養(yǎng)基為每升含花寶1號1 2g，肌醇80 120mg，甘氨酸1. 5 2. 5mg, 鹽酸硫胺素(VBl) 0. 05 0. 2mg,鹽酸吡哆醇(VB6) 0. 4 0. 8mg,煙酸0. 4 0. 8mg，萘乙酸 (NAA) 0. 5 1. 5mg，活性炭0. 5 Ig,蔗糖15 30g,瓊脂6 7g。(5)將類原球莖分化出的小植株接種到壯苗培養(yǎng)培養(yǎng)，40 50天能試管苗的形成，所述的壯苗培養(yǎng)基為每升含花寶1號1 2g，花寶2號1 2g，肌醇80 120mg，甘氨酸
1.5 2. 5mg,鹽酸硫胺素(VBl) 0. 05 0. 2mg,鹽酸吡哆醇(VB6) 0. 4 0. 8mg,煙酸0. 4 0. 8mg，萘乙酸(NAA) 1 2mg,蔗糖20 30g,香蕉汁50 IOOg,活性碳0. 5 Ig,瓊脂6 7g。(6)將試管苗在溫室的自然光下煉苗，然后洗凈根部的培養(yǎng)基，在用樹皮、蘭石和泥炭的混合基質(體積比2 2 1)中栽培，得到種苗。上述步驟⑵ (5)中培養(yǎng)基pH 5. 4 5. 6，培養(yǎng)溫度M ，光照的照度為 1500 20001x，光照時間為12 16小時/天。2.根據(jù)權利要求1所述的一種蝴蝶文心蘭種苗繁殖方法，步驟( 所述的酒精濃度是體積分數(shù)70% 80%，浸泡時間是30 60秒，所述的升汞溶液的濃度是質量分數(shù) 0. 0. 2%，消毒時間是10 20分鐘，所述的無菌水的漂洗次數(shù)是4 6次。步驟O) ( 培養(yǎng)基中使用的花寶1號和花寶2號均可從市場上購得。步驟(6)所述的試管苗高3 km，煉苗時間為7 14天，光照強度為5000 60001x。3.根據(jù)權利要求1或2所述的一種蝴蝶文心蘭種苗繁殖方法，其特征在于步驟 (1)所述的外植體為魔鬼文心蘭(Psychopsis papilio)、維氏蝴蝶文心蘭(Psychopsis versteegiana) - 禾中 11 蟲胡蟲f(Psychopsis Carolina Yellow Butterfly)白勺胃節(jié)花梗。利用本專利能成功地進行優(yōu)良品種的蝴蝶文心蘭優(yōu)質種苗的組織培養(yǎng)和快速繁殖，此發(fā)明生產(chǎn)出的蝴蝶文心蘭種苗具有遺傳穩(wěn)定性高，出苗快，種苗品質好、生長良好等特點。具有投入少，產(chǎn)出高等優(yōu)勢，是利用植物組織細胞的全能性和植物組織培養(yǎng)等生物技術進行植物優(yōu)質種苗的規(guī)?；a(chǎn)。目前，國內外還沒有蝴蝶文心蘭種苗組織培養(yǎng)快速繁殖論文的報道，也沒有蝴蝶文心蘭種苗組織培養(yǎng)專利的申請。具體實施方法以下實施例是對本發(fā)明的進一步說明，不是對本發(fā)明的限制。實施例中使用的花寶1號(HYPONeX 1)和花寶2號(HYPONeX 2)均為美國生產(chǎn)臺灣臺和園藝企業(yè)股份有限股份有限公司分裝產(chǎn)品。實施例1 (1)開花時選取生長健壯的魔鬼文心蘭(Psychopsis papilio)的帶節(jié)花梗為外植體，將外植體用70%的酒精浸泡60秒后，再用0. 1 %升汞溶液消毒20分鐘，無菌水漂洗4次后接種到花梗苗誘導培養(yǎng)基上培養(yǎng)，40天時能誘導花梗苗的產(chǎn)生。所述的花梗苗誘導培養(yǎng)基每升含花寶1號(HYPONeX 1) Ig,肌醇80mg,甘氨酸1. 5mg,鹽酸硫胺素(VBl) 0. 05mg, 鹽酸吡哆醇(VB6)0. %ig，煙酸0. %ig，檸檬酸鈉50mg，萘乙酸(NAA)O. 2mg, 10%的椰子汁，蔗糖15g，瓊脂7g。(2)將由花梗誘導的小苗轉移到類原球莖誘導培養(yǎng)基培養(yǎng)，60天能誘導類原球莖的形成，在相同的培養(yǎng)基上能進行類原球莖的增殖，增殖倍數(shù)3倍，增殖周期40天。所述的類原球莖誘導和增殖培養(yǎng)基為每升含花寶2號lg，肌醇80mg，甘氨酸1. 5mg,鹽酸硫胺素(VBl)O. 05mg，鹽酸吡哆醇作86)0.%^，煙酸0.%^，檸檬酸鈉50mg，6_芐基腺嘌呤 (6-BA)ang，萘乙酸(NAA)O. 2mg，10%的椰子汁，蔗糖15g，瓊脂7g。(3)將增殖而來的類原球莖接種到分化培養(yǎng)基培養(yǎng)，50天能分化出小苗。所述的原球莖分化培養(yǎng)基為每升含花寶1號lg，肌醇80mg，甘氨酸1.5mg，鹽酸硫胺素 (VBl)O. 05mg，鹽酸吡哆醇(VB6) 0. 4mg，煙酸 0. 4mg，萘乙酸(NAA) 0. 5mg，活性炭 0. 5 Ig, 蔗糖15 30g，瓊脂6 7g。(4)將類原球莖分化出的小植株接種到壯苗培養(yǎng)培養(yǎng)，50天能試管苗的形成，所述的壯苗培養(yǎng)基為每升含花寶1號lg，花寶2號lg，肌醇80mg，甘氨酸1. 5mg,鹽酸硫胺素(VBl)O. 05mg，鹽酸吡哆醇(VB6) 0. 48mg，煙酸0. 4mg，萘乙酸(NAA) lmg，蔗糖20g，香蕉汁 50g，活性碳0. 5g，瓊脂7g。(5)將3 km高的試管苗在溫室的自然光下煉苗，光照強度為5000 60001x， 然后洗凈根部的培養(yǎng)基，在用樹皮、蘭石和泥炭的混合基質(體積比2 2 1)中栽培，得到種苗，成活率為90%。上述步驟(2) (4)中培養(yǎng)基pH 5. 4，培養(yǎng)溫度，光照的照度為15001x，光照時間為12小時/天。實施例2 (1)開花時選取生長健壯的維氏蝴蝶文心蘭(Psychopsis versteegiana)的帶節(jié)花梗為外植體，將外植體用75%的酒精浸泡45秒后，再用0. 15%升汞溶液消毒15分鐘， 無菌水漂洗5次后接種到花梗苗誘導培養(yǎng)基上培養(yǎng)，45天時能誘導花梗苗的產(chǎn)生。所述的花梗苗誘導培養(yǎng)基每升含花寶1號(HYPONeX 1) 1. 5g，肌醇lOOmg，甘氨酸ang，鹽酸硫胺素 (VBl)O. lmg，鹽酸吡哆醇(VB6) 0. 6mg，煙酸 0. 6mg，檸檬酸鈉 75mg，萘乙酸(NAA) 0. 5mg,15% 的椰子汁，蔗糖20g，瓊脂6. 5g。(2)將由花梗誘導的小苗轉移到類原球莖誘導培養(yǎng)基培養(yǎng)，50天能誘導類原球莖的形成，在相同的培養(yǎng)基上能進行類原球莖的增殖，增殖倍數(shù)4倍，增殖周期35天。所述的類原球莖誘導和增殖培養(yǎng)基為每升含花寶2號1. 5g，肌醇lOOmg，甘氨酸ang，鹽酸硫胺素(VBl)O. Img,鹽酸吡哆醇(VB6)0. 6mg,煙酸0. 6mg,檸檬酸鈉75mg，6_芐基腺嘌呤 (6-BA);3mg，萘乙酸(NAA)O. 5mg，15% 的椰子汁，蔗糖 20g，瓊脂 6. 5g。(3)將增殖而來的類原球莖接種到分化培養(yǎng)基培養(yǎng)，45天能分化出小苗。所述的原球莖分化培養(yǎng)基為每升含花寶1. 5號lg，肌醇lOOmg，甘氨酸ang，鹽酸硫胺素 (VBl)O. lmg，鹽酸吡哆醇(VB6) 0. 6mg，煙酸 0. 6mg，萘乙酸(NAA) 0. 75mg，活性炭 0. 75g，蔗糖 20g，瓊脂 6. 5g。(4)將類原球莖分化出的小植株接種到壯苗培養(yǎng)培養(yǎng)，45天能試管苗的形成，所述的壯苗培養(yǎng)基為每升含花寶1. 5號lg，花寶2號1. 5g，肌醇lOOmg，甘氨酸ang，鹽酸硫胺素(VBl)O. lmg，鹽酸吡哆醇(VB6)0. 6mg，煙酸0. 6mg，萘乙酸(NAA) 1. 5mg，蔗糖25g，香蕉汁 75g，活性碳0. 75g，瓊脂6. 5g。(5)將3 km高的試管苗在溫室的自然光下煉苗，光照強度為5000 60001x， 然后洗凈根部的培養(yǎng)基，在用樹皮、蘭石和泥炭的混合基質(體積比2 2 1)中栽培，得到種苗，成活率為95%。上述步驟(2) (4)中培養(yǎng)基pH 5. 5，培養(yǎng)溫度，光照的照度為18001x，光照時間為14小時/天。實施例3 (1)開花時選取生長健壯的黃花蝴蝶文心蘭(Psychopsis Carolina Yellow Butterfly)的帶節(jié)花梗為外植體，將外植體用80%的酒精浸泡30秒后，再用0. 2%升汞溶液消毒10分鐘，無菌水漂洗6次后接種到花梗苗誘導培養(yǎng)基上培養(yǎng)，30天時能誘導花梗苗的產(chǎn)生。所述的花梗苗誘導培養(yǎng)基每升含花寶1號(HYPONeX 1) 2g，肌醇120mg，甘氨酸 ang，鹽酸硫胺素(VBl)O. ang，鹽酸吡哆醇(VB6)0. 8mg，煙酸0. 8mg，檸檬酸鈉lOOmg，萘乙酸 (NAA) lmg, 20 %的椰子汁，蔗糖30g，瓊脂6g。(2)將由花梗誘導的小苗轉移到類原球莖誘導培養(yǎng)基培養(yǎng)，40天能誘導類原球莖的形成，在相同的培養(yǎng)基上能進行類原球莖的增殖，增殖倍數(shù)4倍，增殖周期30天。所述的類原球莖誘導和增殖培養(yǎng)基為每升含花寶2號2g，肌醇120mg，甘氨酸ang，鹽酸硫胺素(VBl)O. 2mg，鹽酸吡哆醇(VB6)0.8mg，煙酸0.8mg，檸檬酸鈉lOOmg，6-芐基腺嘌呤 (6-BA) 5mg，萘乙酸(NAA) lmg, 20 %的椰子汁，蔗糖30g，瓊脂6g。(3)將增殖而來的類原球莖接種到分化培養(yǎng)基培養(yǎng)，40天能分化出小苗。所述的原球莖分化培養(yǎng)基為每升含花寶1號2g，肌醇120mg，甘氨酸ang，鹽酸硫胺素(VBl) 0. 2mg, 鹽酸吡哆醇作86)0.&1^，煙酸0.&1^，萘乙酸(NAA) 1.5mg，活性炭lg，蔗糖30g，瓊脂6g。(4)將類原球莖分化出的小植株接種到壯苗培養(yǎng)培養(yǎng)，40天能試管苗的形成，所述的壯苗培養(yǎng)基為每升含花寶1號2g，花寶2號2g，肌醇120mg，甘氨酸ang，鹽酸硫胺素 (VBl) 0. 2mg,鹽酸吡哆醇(VB6) 0. 8mg,煙酸 0. 8mg，萘乙酸(NAA) 2mg,蔗糖 30g,香蕉汁 100g, 活性碳lg，瓊脂6g。(5)將3 km高的試管苗在溫室的自然光下煉苗，光照強度為5000 60001x， 然后洗凈根部的培養(yǎng)基，在用樹皮、蘭石和泥炭的混合基質(體積比2 2 1)中栽培，得到種苗，成活率為98%。上述步驟(2) (4)中培養(yǎng)基pH 5. 6，培養(yǎng)溫度，光照的照度為20001x，光照時間為16小時/天。
權利要求
1.一種蝴蝶文心蘭種苗繁殖方法，其特征包括以下的步驟(1)開花時選取生長健壯的蝴蝶文心蘭的帶節(jié)花梗為外植體；(2)將外植體依次用酒精浸泡，升汞溶液消毒，無菌水漂洗后接種到花梗苗誘導培養(yǎng)基上培養(yǎng)，30 40天時能誘導花梗苗的產(chǎn)生。所述的花梗苗誘導培養(yǎng)基每升含花寶1號 (HYPONeX 1) 1 2g，肌醇80 120mg，甘氨酸1. 5 2. 5mg,鹽酸硫胺素(VBl)O. 05 0. 2mg,鹽酸吡哆醇(VB6) 0. 4 0. 8mg,煙酸0. 4 0. 8mg,檸檬酸鈉50 200mg，萘乙酸 (NAA) 0. 2 lmg，10 20%的椰子汁，蔗糖15 30g，瓊脂6 7g。(3)將由花梗誘導的小苗轉移到類原球莖誘導培養(yǎng)基培養(yǎng)，40 60天能誘導類原球莖的形成，在相同的培養(yǎng)基上能進行類原球莖的增殖，增殖倍數(shù)3 5倍，增殖周期30 40天。所述的類原球莖誘導和增殖培養(yǎng)基為每升含花寶2號1 2g，肌醇80 120mg，甘氨酸1. 5 2. 5mg,鹽酸硫胺素(VBl) 0. 05 0. 2mg,鹽酸吡哆醇(VB6) 0. 4 0. 8mg,煙酸 0. 4 0. 8mg,檸檬酸鈉50 200mg，6_節(jié)基腺嘌呤(6-BA) 2 5mg，萘乙酸(NAA)O. 2 lmg，10% 20%的椰子汁，蔗糖15 30g，瓊脂6 7g。(4)將增殖而來的類原球莖接種到分化培養(yǎng)基培養(yǎng)，40 50天能分化出小苗。所述的原球莖分化培養(yǎng)基為每升含花寶1號1 2g，肌醇80 120mg，甘氨酸1. 5 2. 5mg，鹽酸硫胺素(VBl)O. 05 0. 2mg,鹽酸吡哆醇(VB6) 0. 4 0. 8mg,煙酸0. 4 0. 8mg，萘乙酸 (NAA) 0. 5 1. 5mg，活性炭0. 5 Ig,蔗糖15 30g,瓊脂6 7g。(5)將類原球莖分化出的小植株接種到壯苗培養(yǎng)培養(yǎng)，40 50天能試管苗的形成，所述的壯苗培養(yǎng)基為每升含花寶1號1 2g，花寶2號1 2g，肌醇80 120mg，甘氨酸1. 5 2. 5mg，鹽酸硫胺素(VBl) 0. 05 0. 2mg,鹽酸吡哆醇(VB6) 0. 4 0. 8mg,煙酸0. 4 0. 8mg, 萘乙酸(NAA) 1 ang，蔗糖20 30g，香蕉汁50 100g，活性碳0. 5 lg，瓊脂6 7g。(6)將試管苗在溫室的自然光下煉苗，然后洗凈根部的培養(yǎng)基，在用樹皮、蘭石和泥炭的混合基質(體積比2 2 1)中栽培，得到種苗。上述步驟⑵ (5)中培養(yǎng)基pH 5. 4 5. 6，培養(yǎng)溫度M ^°C，光照的照度為 1500 20001x，光照時間為12 16小時/天。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種蝴蝶文心蘭種苗繁殖方法，步驟( 所述的酒精濃度是體積分數(shù)70 % 80 %，浸泡時間是30 60秒，所述的升汞溶液的濃度是質量分數(shù)0. 1 % 0.2%，消毒時間是10 20分鐘，所述的無菌水的漂洗次數(shù)是4 6次，步驟(6)所述的試管苗高3 km，煉苗時間為7 14天，光照強度為5000 60001x。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的一種蝴蝶文心蘭種苗繁殖方法，其特征在于步驟 (1)所述的外植體為魔鬼文心蘭(Psychopsis papilio)、維氏蝴蝶文心蘭(Psychopsis versteegiana) - 禾中 11 蟲胡蟲f(Psychopsis Carolina Yellow Butterfly)白勺胃節(jié)花梗。
全文摘要
本發(fā)明公開了蝴蝶文心蘭(Pschopsis)種苗的組織培養(yǎng)繁殖方法，旨在提供一種繁殖速度快，可在短期內獲得大量試管苗，對母株不會產(chǎn)生損傷，能保持母株優(yōu)良性狀的蝴蝶文心蘭的組織培養(yǎng)繁殖方法。本方法包括選擇生長旺盛的蝴蝶文心蘭優(yōu)良株系的花莖帶節(jié)切段為外植體，對外植體進行消毒，在花梗苗誘導培養(yǎng)基中進行不定芽的誘導，再將花梗苗莖尖接入原球莖誘導和增殖培養(yǎng)基中進行原球莖的誘導和繼代增殖，然后在原球莖分化培養(yǎng)基上進行原球莖的分化，再將由原球莖能分化出小苗接種到壯苗培養(yǎng)基上培養(yǎng)，當試管苗長至3～4厘米高時，在溫室中的自然光照下煉苗7～14天，取出試管苗，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入樹皮、蘭石和泥炭的混合基質中，進一步栽培成種苗，移栽的成活率90-98％。本發(fā)明為蝴蝶文心蘭的種苗的繁殖開辟了一條新的途徑，能為市場提供大量的蝴蝶文心蘭種苗。
文檔編號A01H4/00GK102273408SQ20111017167
公開日2011年12月14日 申請日期2011年6月23日 優(yōu)先權日2011年6月23日
發(fā)明者吳坤林, 張建霞, 曾宋君, 李冬梅, 段俊, 陳之林 申請人:中國科學院華南植物園