專利名稱：一種刺五加北蟲草的培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種北蟲草的培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
北蟲草[Cordyc印s militarise (L. ) Link]是蟲寄生嗜低溫真菌，又名蛹蟲草。北蟲草營(yíng)養(yǎng)豐富，含有對(duì)人體有益的蟲草素、腺苷、蟲草多糖、蟲草酸、蛋白質(zhì)、SOD、氨基酸、維生素及多種微量元素；具有補(bǔ)肺益腎、止血化痰的功效，用于久咳虛喘、勞嗽咳血、陽(yáng)痿遺精、腰膝酸痛。刺五加具有補(bǔ)氣益精、祛風(fēng)濕、強(qiáng)筋骨、補(bǔ)氣安神，用于神經(jīng)衰弱、高血壓、冠心病、高血脂、糖尿病、動(dòng)脈硬化等有良好的療效，與北蟲草常在治療流產(chǎn)、陽(yáng)痿、腰膝酸軟、 神經(jīng)衰弱、神經(jīng)炎、眩暈癥、鼻炎等藥方中配伍應(yīng)用。中醫(yī)臨床上常將北蟲草與各種補(bǔ)益中藥配伍使用以達(dá)到協(xié)同增效的目的，但患者在配伍使用中藥時(shí)常常因?yàn)榉昧看螅貌槐銥橛芍袛嗍褂盟幬?。因此?jiǎn)化中醫(yī)配伍用藥，提高北蟲草的利用率是必須解決的問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種刺五加北蟲草的培養(yǎng)方法；目的是為了簡(jiǎn)化中醫(yī)配伍用藥，提高北蟲草的利用率，減少用藥量。刺五加北蟲草的培養(yǎng)方法，按以下步驟進(jìn)行一、將北蟲草菌株玉豐二號(hào)接種到 PDA固體培養(yǎng)基上，在生化培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)5d，得到活化的菌種；二、將活化好的菌種切成IcmX Icm的菌塊接種到300ml的液體種子培養(yǎng)基中，靜止培養(yǎng)24h后置于溫度為23°C、120r/min的條件下暗培養(yǎng)6d，得到菌懸液，然后加入200ml無(wú)菌水，得液體菌種； 三、取5ml液體菌種接種到裝有刺五加固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，置于溫度為22°C、濕度為 55% 60%的條件下暗培養(yǎng)10 14d，得菌絲體，然后移至光下并在溫度為23°C、濕度為 55% 60%、光照強(qiáng)度為180 2201x、每天光照10 12h、晝夜溫差為10°C的條件下培養(yǎng)至菌絲體全部由白色轉(zhuǎn)為黃色后，增加濕度到85 % 95 %，繼續(xù)培養(yǎng)至子實(shí)體長(zhǎng)到2cm高， 將培養(yǎng)瓶上的通氣開(kāi)關(guān)打開(kāi)，繼續(xù)培養(yǎng)至子實(shí)體生長(zhǎng)到4 8cm高、子實(shí)體表面出現(xiàn)黃色粉末狀物質(zhì)且頂端出現(xiàn)小刺，進(jìn)行采收，即完成刺五加北蟲草的培養(yǎng)；其中步驟三中刺五加固體培養(yǎng)基由40g的大米、0. 1 0. 6g的刺五加粉末和60ml 的營(yíng)養(yǎng)液組成，培養(yǎng)瓶的瓶裝量為1/4 1/3 ；所述刺五加粉末的制備將刺五加粉碎后過(guò) 20目篩；所述營(yíng)養(yǎng)液每L由20g的蛋白胨、20g的葡萄糖、Ig的KH2P04、0. 5g的MgSO4 ·7Η20、 0. 5g的硫酸鋅、200g的土豆液、5mg的維生素B1和余量的水組成；所述土豆液的制備200g 去皮馬鈴薯，切塊煮沸30min，紗布過(guò)濾后補(bǔ)足至1000ml，pH自然，121°C高壓滅菌30min。本發(fā)明刺五加北蟲草的培養(yǎng)方法，在北蟲草的培養(yǎng)基中添加刺五加，以便在北蟲草的生長(zhǎng)過(guò)程中轉(zhuǎn)入刺五加的活性成分，以達(dá)到增強(qiáng)免疫的功能，減化了服用方法，起到在使用北蟲草的同時(shí)配伍了刺五加，提高了北蟲草的利用率，增強(qiáng)了北蟲草的藥用價(jià)值。本發(fā)明在北蟲草的培養(yǎng)基中添加刺五加可以提高北蟲草的得率、縮短北蟲草的生長(zhǎng)周期、改良北蟲草的品質(zhì)，同時(shí)采用本發(fā)明方法生產(chǎn)的北蟲草可以轉(zhuǎn)入刺五加的活性成分，從而間接起到增強(qiáng)北蟲草的補(bǔ)益療效，簡(jiǎn)化中醫(yī)配伍的目的，是一種值得推廣的技術(shù)發(fā)明。本發(fā)明培養(yǎng)的刺五加北蟲草，能大幅度提高北蟲草子實(shí)體蟲草素和腺苷含量，蟲草素可達(dá)3. 4195士0. 0124mg/g,腺苷可達(dá)0. 9970士0. 003ang/g，商品價(jià)值很高；并且本發(fā)明培養(yǎng)的刺五加北蟲草中含有0. 0043 士0. 0001mg/g的金絲桃苷和0. 0008 士0. 0001mg/g的槲皮素，從而起到將刺五加有效成分轉(zhuǎn)移至北蟲草子實(shí)體中的目的，簡(jiǎn)化了中醫(yī)學(xué)中北蟲草與刺五加配伍的方法，并提高了北蟲草的營(yíng)養(yǎng)和藥用價(jià)值；另外，實(shí)施條件容易達(dá)到，能在全行業(yè)推廣。


圖1為具體實(shí)施方式
四中HPLC法測(cè)定北蟲草中腺苷和蟲草素含量的混合對(duì)照品譜圖，其中曲線1表示腺苷，曲線2表示蟲草素；圖2為具體實(shí)施方式
四中培養(yǎng)所得刺五加北蟲草子實(shí)體中腺苷和蟲草素含量的譜圖，其中曲線1表示腺苷，曲線2表示蟲草素；圖3 為具體實(shí)施方式
四中空白對(duì)照培養(yǎng)基色譜圖；圖4為具體實(shí)施方式
四中加入對(duì)照品后刺五加北蟲草子實(shí)體的色譜圖，其中曲線1表示腺苷，曲線2表示蟲草素；圖5為具體實(shí)施方式
五中HPLC法測(cè)定刺五加北蟲草子實(shí)體中刺五加的活性成分含量的混合對(duì)照品譜圖，其中曲線1為金絲桃苷，曲線2為槲皮素；圖6為具體實(shí)施方式
五中培養(yǎng)所得刺五加北蟲草中金絲桃苷和槲皮素含量的譜圖，其中曲線1為金絲桃苷，曲線2為槲皮素；圖7為具體實(shí)施方式
五中空白對(duì)照組北蟲草的色譜圖。
具體實(shí)施例方式具體實(shí)施方式
一本實(shí)施方式刺五加北蟲草的培養(yǎng)方法，按以下步驟進(jìn)行一、將北蟲草菌株玉豐二號(hào)接種到PDA固體培養(yǎng)基上，在生化培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)5d，得到活化的菌種；二、將活化好的菌種切成IcmX Icm的菌塊接種到300ml的液體種子培養(yǎng)基中，靜止培養(yǎng)24h后置于溫度為23°C、120r/min的條件下暗培養(yǎng)6d，得到菌懸液，然后加入200ml無(wú)菌水，得液體菌種；三、取5ml液體菌種接種到裝有刺五加固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，置于溫度為22°C、濕度為55% 60%的條件下暗培養(yǎng)10 14d，得菌絲體，然后移至光下并在溫度為23°C、濕度為55% 60%、光照強(qiáng)度為180 2201x、每天光照10 12h、晝夜溫差為 10°C的條件下培養(yǎng)至菌絲體全部由白色轉(zhuǎn)為黃色后，增加濕度到85% 95%，繼續(xù)培養(yǎng)至子實(shí)體長(zhǎng)到2cm高，將培養(yǎng)瓶上的通氣開(kāi)關(guān)打開(kāi)，繼續(xù)培養(yǎng)至子實(shí)體生長(zhǎng)到4 8cm高、子實(shí)體表面出現(xiàn)黃色粉末狀物質(zhì)且頂端出現(xiàn)小刺，進(jìn)行采收，即完成刺五加北蟲草的培養(yǎng)；其中步驟三中刺五加固體培養(yǎng)基由40g的大米、0. 1 0. 6g的刺五加粉末和60ml 的營(yíng)養(yǎng)液組成，培養(yǎng)瓶的瓶裝量為1/4 1/3 ；所述刺五加粉末的制備將刺五加粉碎后過(guò) 20目篩；所述營(yíng)養(yǎng)液每L由20g的蛋白胨、20g的葡萄糖、Ig的KH2P04、0. 5g的MgSO4 ·7Η20、 0. 5g的硫酸鋅、200g的土豆液、5mg的維生素B1和余量的水組成；所述土豆液的制備200g 去皮馬鈴薯，切塊煮沸30min，紗布過(guò)濾后補(bǔ)足至1000ml，pH自然，121°C高壓滅菌30min。本實(shí)施方式的步驟一是在超凈工作臺(tái)中無(wú)菌操作。本實(shí)施方式步驟一中北蟲草菌株玉豐二號(hào)，購(gòu)買自哈爾濱玉豐菌業(yè)有限責(zé)任公司。本實(shí)施方式步驟二中每300ml液體種子培養(yǎng)基中接種1個(gè)菌塊。本實(shí)施方式步驟三中暗培養(yǎng)10 14d的過(guò)程中，菌絲體長(zhǎng)滿整個(gè)培養(yǎng)基的表面并吃透培養(yǎng)基；且接種后前1周不通風(fēng)，以后每天通風(fēng)換氣1 2次。本實(shí)施方式步驟三中移至光下的培養(yǎng)過(guò)程中，如子實(shí)體向一邊倒，則調(diào)整光源方向，或每間隔3天轉(zhuǎn)換培養(yǎng)基方向，以便采光均勻，保證子實(shí)體生長(zhǎng)到4 8cm高。本實(shí)施方式步驟三中采收后，將北蟲草置于45°C下烘干至恒重。
具體實(shí)施方式
二 本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟一中PDA固體培養(yǎng)基由200g的土豆液、20g的葡萄糖、18g的瓊脂和IOOOml的水組成，pH自然；所述土豆液的制備200g去皮馬鈴薯，切塊煮沸30min，紗布過(guò)濾后補(bǔ)足至1000ml，pH自然，121°C高壓滅菌30min。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟二中液體種子培養(yǎng)基每L由200g的土豆液、20g的葡萄糖、Ig的硫酸鎂、Ig磷酸二氫鉀和余量的水組成，pH自然；所述土豆液的制備200g去皮馬鈴薯，切塊煮沸30min，紗布過(guò)濾后補(bǔ)足至1000ml，pH 自然，121°C高壓滅菌30min。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
四本實(shí)施方式刺五加北蟲草的培養(yǎng)方法，按以下步驟進(jìn)行一、將北蟲草菌株玉豐二號(hào)接種到PDA固體培養(yǎng)基上，在生化培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)5d，得到活化的菌種；二、將活化好的菌種切成IcmX Icm的菌塊接種到300ml的液體種子培養(yǎng)基中，靜止培養(yǎng)24h后置于溫度為23°C、120r/min的條件下暗培養(yǎng)6d，得到菌懸液，然后加入200ml無(wú)菌水，得液體菌種；三、取5ml液體菌種接種到裝有刺五加固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，置于溫度為22°C、濕度為60%的條件下暗培養(yǎng)12d，得菌絲體，然后移至光下并在溫度為23°C、濕度為60%、光照強(qiáng)度為2001x、每天光照12h、晝夜溫差為10°C的條件下培養(yǎng)至菌絲體全部由白色轉(zhuǎn)為黃色后，增加濕度到90%，繼續(xù)培養(yǎng)至子實(shí)體長(zhǎng)到2cm高，將培養(yǎng)瓶上的通氣開(kāi)關(guān)打開(kāi)，繼續(xù)培養(yǎng)至子實(shí)體生長(zhǎng)到7cm高、子實(shí)體表面出現(xiàn)黃色粉末狀物質(zhì)且頂端出現(xiàn)小刺，進(jìn)行采收，即完成刺五加北蟲草的培養(yǎng)；其中步驟三中刺五加固體培養(yǎng)基由40g的大米、0. 2g的刺五加粉末和60ml的營(yíng)養(yǎng)液組成，培養(yǎng)瓶的瓶裝量為1/3 ；所述刺五加粉末的制備將刺五加粉碎后過(guò)20目篩；所述營(yíng)養(yǎng)液每L由20g的蛋白胨、20g的葡萄糖、Ig的KH2P04、0. 5g的MgSO4 · 7H20、0. 5g的硫酸鋅、200g的土豆液、5mg的維生素B1和余量的水組成；所述土豆液的制備200g去皮馬鈴薯，切塊煮沸30min，紗布過(guò)濾后補(bǔ)足至1000ml，pH自然，121°C高壓滅菌30min。本實(shí)施方式步驟一中北蟲草菌株玉豐二號(hào)，購(gòu)買自哈爾濱玉豐菌業(yè)有限責(zé)任公司ο本實(shí)施方式中刺五加固體培養(yǎng)基培養(yǎng)所得子實(shí)體與空白培養(yǎng)基(即不添加刺五加粉末的培養(yǎng)基)培養(yǎng)所得子實(shí)體進(jìn)行比較將子實(shí)體分別整理干凈，用濾紙吸干表面水分，于45°C條件烘干至恒重，冷卻，分析天平稱重得干重，并確定促進(jìn)子實(shí)體生長(zhǎng)的最適濃度，結(jié)果如表1所示，與空白對(duì)照組比較，刺五加固體培養(yǎng)基中子實(shí)體得率最高。表 權(quán)利要求
1.一種刺五加北蟲草的培養(yǎng)方法，其特征在于刺五加北蟲草的培養(yǎng)方法，按以下步驟進(jìn)行一、將北蟲草菌株玉豐二號(hào)接種到PDA固體培養(yǎng)基上，在生化培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng) 5d，得到活化的菌種；二、將活化好的菌種切成IcmX Icm的菌塊接種到300ml的液體種子培養(yǎng)基中，靜止培養(yǎng)24h后置于溫度為23°C、120r/min的條件下暗培養(yǎng)6d，得到菌懸液，然后加入200ml無(wú)菌水，得液體菌種；三、取5ml液體菌種接種到裝有刺五加固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，置于溫度為22°C、濕度為55% 60%的條件下暗培養(yǎng)10 14d，得菌絲體，然后移至光下并在溫度為23°C、濕度為55% 60%、光照強(qiáng)度為180 2201x、每天光照10 12h、 晝夜溫差為10°C的條件下培養(yǎng)至菌絲體全部由白色轉(zhuǎn)為黃色后，增加濕度到85% 95%， 繼續(xù)培養(yǎng)至子實(shí)體長(zhǎng)到2cm高，將培養(yǎng)瓶上的通氣開(kāi)關(guān)打開(kāi)，繼續(xù)培養(yǎng)至子實(shí)體生長(zhǎng)到4 8cm高、子實(shí)體表面出現(xiàn)黃色粉末狀物質(zhì)且頂端出現(xiàn)小刺，進(jìn)行采收，即完成刺五加北蟲草的培養(yǎng)；其中步驟三中刺五加固體培養(yǎng)基由40g的大米、0. 1 0. 6g的刺五加粉末和60ml的營(yíng)養(yǎng)液組成，培養(yǎng)瓶的瓶裝量為1/4 1/3 ；所述刺五加粉末的制備將刺五加粉碎后過(guò)20目篩；所述營(yíng)養(yǎng)液每L由20g的蛋白胨、20g的葡萄糖、Ig的KH2P04、0. 5g的MgSO4 ·7Η20、0. 5g 的硫酸鋅、200g的土豆液、5mg的維生素B1和余量的水組成；所述土豆液的制備200g去皮馬鈴薯，切塊煮沸30min，紗布過(guò)濾后補(bǔ)足至1000ml，pH自然，121°C高壓滅菌30min。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種刺五加北蟲草的培養(yǎng)方法，其特征在于步驟一中PDA固體培養(yǎng)基由200g的土豆液、20g的葡萄糖、18g的瓊脂和IOOOml的水組成，pH自然；所述土豆液的制備200g去皮馬鈴薯，切塊煮沸30min，紗布過(guò)濾后補(bǔ)足至1000ml，pH自然，121°C 高壓滅菌30min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種刺五加北蟲草的培養(yǎng)方法，其特征在于步驟二中液體種子培養(yǎng)基每L由200g的土豆液、20g的葡萄糖、Ig的硫酸鎂、Ig磷酸二氫鉀和余量的水組成，PH自然；所述土豆液的制備200g去皮馬鈴薯，切塊煮沸30min，紗布過(guò)濾后補(bǔ)足至 1000ml, pH 自然，121°C高壓滅菌 30min。
全文摘要
一種刺五加北蟲草的培養(yǎng)方法，它涉及一種北蟲草的培養(yǎng)方法。它簡(jiǎn)化中醫(yī)配伍用藥，提高北蟲草的利用率，減少用藥量。方法一、活化菌種；二、制備液體菌種；三、液體菌種接種到刺五加固體培養(yǎng)基中暗培養(yǎng)，得菌絲體，然后然后移至光下培養(yǎng)至子實(shí)體長(zhǎng)到2cm高，通氣后繼續(xù)培養(yǎng)至子實(shí)體生長(zhǎng)到4～8cm高、子實(shí)體表面出現(xiàn)黃色粉末狀物質(zhì)且頂端出現(xiàn)小刺，進(jìn)行采收即完成。本發(fā)明將刺五加有效成分轉(zhuǎn)移至北蟲草子實(shí)體中，從而間接起到增強(qiáng)北蟲草的補(bǔ)益療效，簡(jiǎn)化了中醫(yī)學(xué)中北蟲草與刺五加配伍的方法，提高了北蟲草的利用率，并提高了北蟲草的營(yíng)養(yǎng)和藥用價(jià)值；提高北蟲草的得率、縮短北蟲草的生長(zhǎng)周期、改良北蟲草的品質(zhì)，且實(shí)施條件容易達(dá)到。
文檔編號(hào)C05G3/00GK102293122SQ20111017345
公開(kāi)日2011年12月28日 申請(qǐng)日期2011年6月24日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月24日
發(fā)明者王滿玉 申請(qǐng)人:王滿玉