專利名稱：農(nóng)桿菌介導(dǎo)的玫瑰遺傳轉(zhuǎn)化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種以‘唐白’品種為例，以繼代增殖的體細(xì)胞胚為轉(zhuǎn)化受體材料，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)進(jìn)行玫瑰遺傳轉(zhuǎn)化的方法。
背景技術(shù)：
玫瑰(Rosa rugosa)是薔薇科(Rosaceae)薔薇屬(Rosa)落葉直立叢生灌木，原產(chǎn)中國北部，其色艷花香，含油量高，是我國重要的經(jīng)濟(jì)植物，也是世界上重要的觀賞與生產(chǎn)兩型花卉之一。但玫瑰一年只開一次花，且花期不長，無法滿足市場的需由。采用傳統(tǒng)的雜交育種的方法選育新品種，周期長，工作量大，并且會受到育種材料自身變異的限制，改良幅度有限。隨著生物技術(shù)的快速發(fā)展，植物細(xì)胞工程和基因工程技術(shù)日趨成熟，可以在保持品種的其他性狀相對穩(wěn)定的基礎(chǔ)上，利用外源基因?qū)ζ渌刂频男誀钸M(jìn)行定向改良，提高了育種的效率，從而為培育玫瑰新品種提供了新的途徑。玫瑰遺傳轉(zhuǎn)化的研究是基因工程育種的基礎(chǔ)，但是目前國內(nèi)外還沒有玫瑰遺傳轉(zhuǎn)化成功的報(bào)道。華中農(nóng)業(yè)大學(xué)的專利申請“玫瑰再生為完整植株的方法”(申請?zhí)枮?201110099811. 8)，提出以玫瑰未成熟葉片為外植體，通過體細(xì)胞胚發(fā)生途徑，建立玫瑰再生體系的方法，但其不具有遺化轉(zhuǎn)化步驟，無法實(shí)現(xiàn)品種改良。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了解決上述技術(shù)問題，提供一種以玫瑰未成熟葉片為外植體， 以體細(xì)胞胚為轉(zhuǎn)化受體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的玫瑰遺傳轉(zhuǎn)化的方法，，具有方法簡單、培養(yǎng)周期短的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明的農(nóng)桿菌介導(dǎo)的玫瑰遺傳轉(zhuǎn)化方法，以玫瑰未成熟葉片誘導(dǎo)得到的體細(xì)胞胚為受體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法，按下述步驟進(jìn)行處理(1)體細(xì)胞誘導(dǎo)以玫瑰未展開帶葉柄小葉為外植體，將其接種于體細(xì)胞胚誘導(dǎo)培養(yǎng)，直接誘導(dǎo)出體細(xì)胞胚；(2)轉(zhuǎn)化受體的繼代增殖培養(yǎng)將誘導(dǎo)得到的體細(xì)胞胚接種于體細(xì)胞胚繼代增殖培養(yǎng)基中繼代增殖培養(yǎng)，為遺傳轉(zhuǎn)化提供轉(zhuǎn)化受體材料；(3)遺傳轉(zhuǎn)化將經(jīng)繼代增殖培養(yǎng)的體細(xì)胞胚作為轉(zhuǎn)化受體材料轉(zhuǎn)入制備好的農(nóng)桿菌菌液中進(jìn)行侵染，所述侵染時間為50-60min ；(4)然后將侵染后的體細(xì)胞胚進(jìn)行共培養(yǎng)，選擇增殖培養(yǎng)、選擇萌發(fā)成苗培養(yǎng)，最終獲得玫瑰的轉(zhuǎn)基因植株。步驟⑴中所述體細(xì)胞胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添加2，4-D 3. 0-4. Omg/L、葡萄糖 30. Og/L、GEL 3. Omg/L，加蒸餾水至 1L，pH 6. 0。步驟O)中所述體細(xì)胞胚繼代增殖培養(yǎng)基包括:MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添加 2,4-D 1. 0mg/L、葡萄糖 30. 0g/L、GEL 3. 0mg/L，加蒸餾水至 1L，pH 6. 0，每 4 周更新一次培養(yǎng)基，并選擇在更新的體細(xì)胞繼代增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)了 2周的體細(xì)胞胚作為遺傳轉(zhuǎn)化的受體；所述培養(yǎng)條件為溫度M±2°C、光照強(qiáng)度為50-1001X。所述步驟(3)中侵染時間為60min。所述步驟中，先將侵染后的體細(xì)胞胚轉(zhuǎn)入共培養(yǎng)培養(yǎng)基中，在M±2°C、黑暗條件下進(jìn)行共培養(yǎng)，共培養(yǎng)2天后轉(zhuǎn)入體細(xì)胞胚選擇增殖培養(yǎng)基在M±2°C、光照強(qiáng)度為 50-1001x條件下進(jìn)行選擇增殖培養(yǎng)10周，每2周更新一次培養(yǎng)基，篩選得到抗性體胚；將在選擇增殖培養(yǎng)基中篩選得到的抗性體胚轉(zhuǎn)入選擇萌發(fā)成苗培養(yǎng)基中，每三周更新一次培養(yǎng)基，在對士21、光照強(qiáng)度為1000-15001X下萌發(fā)成苗，最終獲得玫瑰的轉(zhuǎn)基因植株。所述共培養(yǎng)培養(yǎng)基包括MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基、添加2，4-D1.0mg/L，AS ΙΟΟμπιοΙ/L，葡萄糖30. Og/L, GEL 3. Omg/L，加蒸餾水至1L，pH 5. 8 ；所述體細(xì)胞胚選擇增殖培養(yǎng)基包括MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，并添加2，4-D 1. Omg/L, Km75-100mg/L, Cef300mg/ L，葡萄糖30. Og/L, GEL 3. Omg/L，加蒸餾水至1L，pH 6. 0 ；所述選擇萌發(fā)成苗培養(yǎng)基包括 1/2MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，并添加BAl. 0，Km 75mg/L, Cef 300mg/L，葡萄糖30g/L，GEL 3. 0mg/L，加蒸餾水至 1L，pH 6. 0。所述的Km是卡那霉素(Kanamycin)用無菌蒸餾水配制成100mg/L的母液，Cef是頭孢霉素(Cefotaxime)用無菌蒸餾水配制成200mg/L的母液，AS是乙酰丁香酮稱取一定量的AS，用甲醇溶解，最后用無菌蒸餾水定容，配制成10 μ mol/ml的母液，以上三種生化試劑均采用0. 45 μ m濾膜過濾滅菌，于-20°C保存；所述的MS是基本培養(yǎng)基，2，4_D是2，4_ 二氯苯氧乙酸，BA是6_芐基腺嘌呤， Glucose是葡萄糖，GEL是植物凝膠。本發(fā)明中，玫瑰的侵染時間必須嚴(yán)格控制在50-60min，優(yōu)選為60min。侵染時間過短，農(nóng)桿菌無法吸附到受體材料的傷口或組織表面，降低了轉(zhuǎn)化效率；侵染時間過長，農(nóng)桿菌對受體材料傷害過大，使受體材料褐化死亡；所述農(nóng)桿菌菌液的制備可以采用常規(guī)方法進(jìn)行，優(yōu)選OD6tltl值為0. 1-0. 6，更為優(yōu)選為0. 3。共培養(yǎng)階段是農(nóng)桿菌T-DNA轉(zhuǎn)移到植物細(xì)胞的一個重要階段，共培養(yǎng)時間對轉(zhuǎn)化率有著重要影響，玫瑰最適合的共培養(yǎng)時間為2d。共培養(yǎng)時間過短，遺傳轉(zhuǎn)化的效率降低， 無法得到轉(zhuǎn)化植株；共培養(yǎng)時間超過2d，農(nóng)桿菌過度生長，植物細(xì)胞容易受到毒害而死亡；研究表明，玫瑰的體細(xì)胞胚選擇增殖培養(yǎng)過程必須在弱光照條件(光照強(qiáng)度為 50-1001x)下進(jìn)行，玫瑰的體細(xì)胞胚對光照敏感，在正常光照條件下，體細(xì)胞胚無法增殖，會逐漸萌發(fā)，影響了對抗性體細(xì)胞胚的篩選過程；篩選的過程是遺傳轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵步驟，直接影響轉(zhuǎn)化的成敗，玫瑰遺傳轉(zhuǎn)化后的篩選過程必須嚴(yán)格經(jīng)過體細(xì)胞胚選擇增殖培養(yǎng)，篩選出抗性的體細(xì)胞胚，然后再進(jìn)入選擇萌發(fā)成苗培養(yǎng)階段進(jìn)一步的篩選成苗。如果直接進(jìn)入萌發(fā)成苗階段則無法得倒轉(zhuǎn)化植株，只能得到假陽性植株。另外，本研究表明，玫瑰的選擇萌發(fā)和選擇成苗是同時進(jìn)行，直接進(jìn)行選擇萌發(fā)成苗即可，可以使用同一選擇壓力(Km 75mg/L)；選擇增殖培養(yǎng)、選擇萌發(fā)成苗培養(yǎng)過程中相應(yīng)培養(yǎng)基中選擇壓力(卡那霉素含量)的控制對提高轉(zhuǎn)化效率也具有重要影響，本研究表明，體細(xì)胞胚選擇增殖培養(yǎng)基中卡那霉素含量為75-100mg/L，優(yōu)選100mg/L，選擇萌發(fā)成苗培養(yǎng)基中卡那霉素含量為75mg/L。一些以體細(xì)胞胚再生體系為基礎(chǔ)的遺傳轉(zhuǎn)化研究中，多使用胚性愈傷為轉(zhuǎn)化受體材料，而本發(fā)明利用經(jīng)繼代增殖培養(yǎng)的體細(xì)胞胚作為轉(zhuǎn)化受體材料，侵染后可直接進(jìn)行體細(xì)胞胚選擇增殖培養(yǎng)，減少了工藝步驟，較現(xiàn)有的以胚性愈傷組織為受體材料進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化得到轉(zhuǎn)基因植株方法的培養(yǎng)周期相比，可減少4-8周時間，從而縮短了培養(yǎng)周期，并成功獲得了玫瑰轉(zhuǎn)基因植株。有益效果1、通過本發(fā)明方法成功實(shí)現(xiàn)以玫瑰體細(xì)胞胚為轉(zhuǎn)化受體材料，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化，獲得了含有GUS報(bào)告基因的轉(zhuǎn)基因植株，為玫瑰基因工程育種打下了良好的基石出。2、工藝簡單、培養(yǎng)周期較短。3、本發(fā)明所采用的外植體來源不受季節(jié)限制，可以周年進(jìn)行玫瑰的組織和細(xì)胞培養(yǎng)。


圖1 本發(fā)明的遺傳轉(zhuǎn)化流程示意圖。圖2 本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因植株葉片和莖段⑶S活性檢測圖。其中，a為陰性對照(未轉(zhuǎn)化植株)；b、C、d為轉(zhuǎn)化植株的葉片和莖段染色。圖3a 為陰性對照(未轉(zhuǎn)化植株)的轉(zhuǎn)基因植株幼苗GUS活性檢測圖。圖北轉(zhuǎn)化植株的幼苗染色的轉(zhuǎn)基因植株幼苗GUS活性檢測圖。
具體實(shí)施例方式試驗(yàn)材料選擇、培養(yǎng)基設(shè)計(jì)與遺傳轉(zhuǎn)化過程1.試驗(yàn)材料來源及其處理1)受體材料玫瑰‘唐白’未成熟葉片誘導(dǎo)得到的體細(xì)胞胚經(jīng)過增殖繼代培養(yǎng)后， 選擇生長旺盛的體細(xì)胞胚轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)2周的體細(xì)胞胚為受體材料；2)菌株和質(zhì)粒實(shí)驗(yàn)所用農(nóng)桿菌菌株為EHA105，攜帶載體pBI121質(zhì)粒，該質(zhì)粒于 35s組成型表達(dá)啟動子后攜帶gus和npt II基因，gus基因含有內(nèi)含子，以確保其只在植物細(xì)胞中表達(dá)而不在農(nóng)桿菌中表達(dá)。3)培養(yǎng)基設(shè)計(jì)表1列出了本發(fā)明的各種培養(yǎng)基的成分及其用量。表1玫瑰的離體培養(yǎng)基設(shè)計(jì)培養(yǎng)基名稱
培養(yǎng)基成分
MS基本培養(yǎng)基，2, 4-D 3. 0-4. Omg/L,葡萄糖 30. Og/L, GEL 3. 0 mg/L,加蒸餾水至 IL, pH 6. 0
MS基本培養(yǎng)基，2, 4-D 1. Omg/L,葡萄糖 30. Og/L, GEL 3. 0 mg/L,加蒸餾水至 IL, pH 6. 0 MS 基本培養(yǎng)基，2, 4-D 1. Omg/L, AS 200jumol/L, 葡萄糖30. 0g/L, GEL 3. 0mg/L,加蒸餾水至1L,
pH 6. 0
誘導(dǎo)培養(yǎng)基 體細(xì)胞胚增殖培養(yǎng)
基
共培養(yǎng)培養(yǎng)基
體細(xì)胞胚選擇增殖MS基本培養(yǎng)基，2, 4-D 1. Omg/L, Km75-100mg/L, 培養(yǎng)基Cef 300mg/L,葡萄糖30. Og/L, GEL 3.0 mg/L,
加蒸餾水至1L, pH 6. O 1/2MS 基本培養(yǎng)基，BAl. Omg/L, Km75mg/L,
體細(xì)胞胚選擇萌發(fā)
Cef300mg/L,葡萄糖 30. Og/L, GEL 3.0 mg/L,
成苗培養(yǎng)基
加蒸餾水至1L, pH 6. Q注MS基本培養(yǎng)基的配制參見MurashigeΤ. and F. Skoog. Physiol. Plant, 1962， 15 :473-497。表1中的卡那霉素(Kanamycin, Km)、頭孢霉素(Cefotaxime, Cef)、乙酰丁香酮 (AS)均采用0. 45 μ m濾膜過濾滅菌，培養(yǎng)基高溫滅菌后加入。培養(yǎng)基中各種成分的代號如下2，4_ 二氯苯氧乙酸0，4-D)、6_芐基腺嘌呤 (6-BA)、卡那霉素(Kanamyc in，Km)、頭孢霉素(Cefotaxime，Cef)、乙酰丁香酮(AS)、植物凝膠(GEL)均可以從商業(yè)上購買。2.培養(yǎng)條件培養(yǎng)室培養(yǎng)溫度M±2°C，正常光照強(qiáng)度1000-15001x，光照周期為14h ；弱光光照強(qiáng)度50-1001x，光照周期14h ；黑暗培養(yǎng)溫度M±2°C。3.⑶S染液配制50mmol/L 磷酸鈉緩沖液(pH 7. 0)中含有0. lmol/L K3 [Fe (CN) 6]，0. lmol/L K4 [Fe (CN)6],1 Ommo 1/L Na2EDTA,0. 001% (v/v) TritonX-100，20 % 甲醇，0. 5mg/L X-Gluc0 (參照植物基因工程，王關(guān)林，方宏筠主編)4.遺傳轉(zhuǎn)化過程1)受體材料的準(zhǔn)備以玫瑰‘唐白’未展開帶葉柄小葉為外植體，將其接種于胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基，直接誘導(dǎo)體細(xì)胞胚，將誘導(dǎo)得到的體細(xì)胞胚轉(zhuǎn)入體細(xì)胞胚增殖繼代培養(yǎng)基中增殖繼代培養(yǎng)，將繼代培養(yǎng)2周后生長旺盛的體細(xì)胞胚用于遺傳轉(zhuǎn)化；2)農(nóng)桿菌菌液的制備農(nóng)桿菌在含100mg/L卡那霉素的LB固體培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)并保存，每隔2個月繼代活化一次。轉(zhuǎn)化前挑取單菌落接種到含100mg/L卡那霉素的液體LB培養(yǎng)基中，于振蕩培養(yǎng)(180-200r/min)過夜，至對數(shù)生長期。然后將菌液于 4000r/min條件下離心lOmin，并用農(nóng)桿菌重懸培養(yǎng)基(MS培養(yǎng)基+100 μ Μ)重新懸浮菌液， 使其OD6tltl值為0. 1-0. 6 ；所述含100mg/L Km固體或液體LB培養(yǎng)基，其主要配方是10g/L 蛋白胨+5g/L酵母提取物+10g/L氯化鈉，固體培養(yǎng)基中加15g/L瓊脂粉，pH值為7. 0。3)侵染將步驟1)中準(zhǔn)備好的體細(xì)胞胚直接投入步驟2、中制備好的菌液中侵染，使菌液與體細(xì)胞胚充分接觸，侵染時間為50-60min ；4)共培養(yǎng)將侵染后的體細(xì)胞胚置于無菌濾紙上吸去表面多余菌液，接入共培養(yǎng)培養(yǎng)基中，置于M±2°C，黑暗條件下培養(yǎng)2d ；5)選擇培養(yǎng)將經(jīng)過2d共培養(yǎng)的體細(xì)胞胚轉(zhuǎn)入選擇培養(yǎng)基，于M±2°C、弱光(光照強(qiáng)度50-1001X)條件下進(jìn)行抗性體細(xì)胞胚的篩選，每兩周更新一次培養(yǎng)基，培養(yǎng)10周；將篩選得到的抗性體細(xì)胞胚接種到體細(xì)胞胚選擇萌發(fā)成苗培養(yǎng)基中，置于對士21、正常光照 (光照強(qiáng)度1000-15001X)條件下培養(yǎng)，每三周更新一次培養(yǎng)基，直至獲得完整植株；6)轉(zhuǎn)基因植株檢測將得到的轉(zhuǎn)基因植株和未轉(zhuǎn)化植株置于GUS染液中，進(jìn)行GUS 活性檢測，以未轉(zhuǎn)化的植株為陰性對照；以轉(zhuǎn)化植株葉片為材料，采用CTAB法提取總DNA， 進(jìn)行PCR檢測。5.試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)中進(jìn)行轉(zhuǎn)化的體細(xì)胞胚總數(shù)為600，經(jīng)過GUS活性檢測和PCR檢測，共獲得8 個轉(zhuǎn)基因植株，轉(zhuǎn)化效率為1.33%。
權(quán)利要求
1.一種農(nóng)桿菌介導(dǎo)的玫瑰遺傳轉(zhuǎn)化方法，其特征在于，以玫瑰未成熟葉片誘導(dǎo)得到的體細(xì)胞胚為受體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法，按下述步驟進(jìn)行處理(1)體細(xì)胞誘導(dǎo)以玫瑰未展開帶葉柄小葉為外植體，將其接種于體細(xì)胞胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，直接誘導(dǎo)出體細(xì)胞胚；(2)轉(zhuǎn)化受體的繼代增殖培養(yǎng)將誘導(dǎo)得到的體細(xì)胞胚接種于體細(xì)胞胚繼代增殖培養(yǎng)基中繼代增殖培養(yǎng)，為遺傳轉(zhuǎn)化提供轉(zhuǎn)化受體材料；(3)遺傳轉(zhuǎn)化將經(jīng)繼代增殖培養(yǎng)的體細(xì)胞胚作為轉(zhuǎn)化受體材料轉(zhuǎn)入制備好的農(nóng)桿菌菌液中進(jìn)行侵染，所述侵染時間為50-60min ；(4)然后將侵染后的體細(xì)胞胚進(jìn)行共培養(yǎng)，選擇增殖培養(yǎng)、選擇萌發(fā)成苗培養(yǎng)，最終獲得玫瑰的轉(zhuǎn)基因植株。
2.如權(quán)利要求1所述的農(nóng)桿菌介導(dǎo)的玫瑰遺傳轉(zhuǎn)化方法，其特征在于，步驟(1)中所述體細(xì)胞胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添加2，4-D 3. 0-4. Omg/L、葡萄糖 30. 0g/L、GEL 3. Omg/L，加蒸餾水至 1L, pH 6. O0
3.如權(quán)利要求1所述的農(nóng)桿菌介導(dǎo)的玫瑰遺傳轉(zhuǎn)化方法，其特征在于，步驟O)中所述體細(xì)胞胚繼代增殖培養(yǎng)基包括MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添加2，4-D 1. Omg/L、葡萄糖 30. 0g/L、GEL 3. Omg/L，加蒸餾水至lL，pH 6. 0，每4周更新一次培養(yǎng)基，并選擇在更新的體細(xì)胞繼代增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)了 2周的體細(xì)胞胚作為遺傳轉(zhuǎn)化的受體；所述培養(yǎng)條件為溫度M±2°C、光照強(qiáng)度為50-1001x。
4.如權(quán)利要求1所述的農(nóng)桿菌介導(dǎo)的玫瑰遺傳轉(zhuǎn)化方法，其特征在于，所述步驟(3)中侵染時間為60min。
5.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的農(nóng)桿菌介導(dǎo)的玫瑰遺傳轉(zhuǎn)化方法，其特征在于，所述步驟(4)中，先將侵染后的體細(xì)胞胚轉(zhuǎn)入共培養(yǎng)培養(yǎng)基中，在M±2°C、黑暗條件下進(jìn)行共培養(yǎng)，共培養(yǎng)2天后轉(zhuǎn)入體細(xì)胞胚選擇增殖培養(yǎng)基在對士2°C、光照強(qiáng)度為50-1001X條件下進(jìn)行選擇增殖培養(yǎng)10周，每2周更新一次培養(yǎng)基，篩選得到抗性體胚；將在選擇增殖培養(yǎng)基中篩選得到的抗性體胚轉(zhuǎn)入選擇萌發(fā)成苗培養(yǎng)基中，每三周更新一次培養(yǎng)基，在M±2°C、 光照強(qiáng)度為1000-15001X下萌發(fā)成苗，最終獲得玫瑰的轉(zhuǎn)基因植株。
6.如權(quán)利要求5所述的農(nóng)桿菌介導(dǎo)的玫瑰遺傳轉(zhuǎn)化方法，其特征在于，所述共培養(yǎng)培養(yǎng)基包括MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基、添加2，4-D1. Omg/L，AS 100 μ mol/L，葡萄糖30. Og/ L，GEL 3. 0mg/L，加蒸餾水至1L，pH 5. 8 ；所述體細(xì)胞胚選擇增殖培養(yǎng)基包括MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，并添加 2，4-D 1. 0mg/L, Km75-100mg/L, Cef300mg/L,葡萄糖 30. Og/L, GEL 3. 0mg/L，加蒸餾水至lL，pH 6. 0 ；所述選擇萌發(fā)成苗培養(yǎng)基包括1/2MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，并添加 BAl. 0mg/L，Km 75mg/L, Cef 300mg/L，葡萄糖 30g/L，GEL 3. 0mg/L，加蒸餾水至 1L, pH 6. 0。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種農(nóng)桿菌介導(dǎo)的玫瑰遺傳轉(zhuǎn)化方法，以玫瑰未成熟葉片誘導(dǎo)得到的體細(xì)胞胚為受體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法，經(jīng)體胞胚誘導(dǎo)、轉(zhuǎn)化受體的繼代增殖培養(yǎng)、遺傳轉(zhuǎn)化，共培養(yǎng)，選擇增殖培養(yǎng)、選擇萌發(fā)成苗培養(yǎng)，最終獲得玫瑰的轉(zhuǎn)基因植株。本發(fā)明方法簡單，培養(yǎng)周期較短，成功實(shí)現(xiàn)玫瑰轉(zhuǎn)基因植株的培育，填補(bǔ)了目前無法實(shí)現(xiàn)玫瑰轉(zhuǎn)基因植株的培育的空白。
文檔編號A01H4/00GK102286523SQ20111020240
公開日2011年12月21日 申請日期2011年7月19日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月19日
發(fā)明者包滿珠, 包穎, 寧國貴, 邢文 申請人:華中農(nóng)業(yè)大學(xué)