專(zhuān)利名稱(chēng)：一種液基細(xì)胞保存液組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種液基薄層細(xì)胞檢測(cè)使用的試劑，具體地說(shuō)，是一種液基細(xì)胞保存液組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
在液基薄層細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域中，目前美國(guó)賽迪公司生產(chǎn)的全自動(dòng)膜式液基超薄細(xì)胞制備系統(tǒng)新柏氏TCT2000處理器及其配套專(zhuān)用試劑細(xì)胞保存液(PreserveCyt Solution)被譽(yù)為液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)。中國(guó)實(shí)用新型專(zhuān)利號(hào)200620141836于2006 年12月30日也公開(kāi)了一種膜式液基細(xì)胞制片機(jī)，包括存放細(xì)胞液基的溶液瓶、收集溶液瓶?jī)?nèi)細(xì)胞的細(xì)胞收集裝置和控制器，所述的細(xì)胞收集裝置包括過(guò)濾器和給過(guò)濾器提供壓力的壓力供給裝置，所述的過(guò)濾器上設(shè)有用于監(jiān)測(cè)過(guò)濾器壓力的過(guò)濾器壓力傳感器，所述的過(guò)濾器壓力傳感器和壓力供給裝置都與控制器相連。因此，人們不難發(fā)現(xiàn)在膜式液基超薄細(xì)胞制備系統(tǒng)都存在著與自然沉淀法將標(biāo)本中的黏液、血液和炎性細(xì)胞分離相反的“過(guò)濾器和給過(guò)濾器提供壓力的壓力供給裝置”。中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?00910034575. 4于2010年3月10日公開(kāi)了一種液基細(xì)胞保存液，供進(jìn)口或國(guó)產(chǎn)膜式液基細(xì)胞制片機(jī)制片配套使用，它由醇類(lèi)、雙蒸水、磷酸鹽、滅菌劑苯酚、粘液分解劑N-甲基-N-環(huán)己基-2-氨基-3，5- 二澳苯甲胺鹽酸鹽組成。該發(fā)明的目的是提供一種液基細(xì)胞保存液，供進(jìn)口或國(guó)產(chǎn)膜式液基細(xì)胞制片機(jī)制片配套使用。由于這種液基細(xì)胞保存液專(zhuān)門(mén)用于膜式液基細(xì)胞制片機(jī)制片配套使用，因此它不可能達(dá)到自然沉淀法將標(biāo)本中的黏液、血液和炎性細(xì)胞分離所達(dá)到制得涂片的更高質(zhì)量及更高效率；而且這種液基細(xì)胞保存液僅能將所制標(biāo)本保存四周無(wú)變化，這對(duì)于一些疑難雜癥，需要重復(fù)制得涂片的標(biāo)本顯得勉為其難，不能符合病案研究的需要，不利于患者治療。因此已知的液基細(xì)胞保存液存在著上述種種不便和問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的，在于提出一種使醫(yī)療資源和資金匱乏的邊遠(yuǎn)地區(qū)可以使用最新的液基薄層細(xì)胞制片技術(shù)及進(jìn)行大批量基層體檢的液基細(xì)胞保存液組合物及其制備方法。本發(fā)明的另一目的，在于提出一種使用相配套的簡(jiǎn)易快速薄層液基細(xì)胞學(xué)細(xì)胞涂片制備方法、分離粘附液、粘液分解液和自然沉降裝置，根據(jù)不同細(xì)胞比重的不同，把干擾診斷的有形成分隔離在分離液中丟棄，讓需觀察的細(xì)胞有效沉降在玻片上，使制備的涂片背景更清晰的液基細(xì)胞保存液組合物及其制備方法。本發(fā)明的又一目的，在于提出一種可重復(fù)制片，制片質(zhì)量高，使標(biāo)本在室溫下保持細(xì)胞形態(tài)無(wú)顯著性差異至少3個(gè)月的液基細(xì)胞保存液組合物及其制備方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)解決方案是一種液基細(xì)胞保存液組合物，其特征在于包括以下重量百分比的組分細(xì)胞固定劑甲醛0.002 0.5%
防腐劑雙乙酸鈉2 15%
抗凝劑枸櫞酸鈉2 10%
緩沖劑氯化鈉0.1 5%
螯合劑乙二胺四乙酸(EDTA)5—80%
溶血?jiǎng)┍姿?.5 2%
水純水0.5 10%其中所述甲醛為分析純?cè)噭?，含?7 40%;雙乙酸鈉為食品添加劑級(jí)；枸櫞酸鈉為分析純?cè)噭?，氯化鈉為分析純?cè)噭?，NaCl > 99. 5%;EDTA為分析純?cè)噭?；冰醋酸為分析純?cè)噭?，CH2COOH > 99. 5%，由國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)。本發(fā)明的液基細(xì)胞保存液組合物還可以采用以下的技術(shù)措施來(lái)進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)。前述的液基細(xì)胞保存液組合物，其中還包括加快固定細(xì)胞作用的乙醇20 95wt%。前述的液基細(xì)胞保存液組合物，其中所述緩沖劑還包括氯化鉀0. 01 0. 2wt%。前述的液基細(xì)胞保存液組合物，其中所述緩沖劑還包括碳酸氫鈉0. 2 5wt%，系南昌白云藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的粉劑。一種液基細(xì)胞保存液組合物的制備方法，其特征在于包括以下步驟a、在攪拌下將碳酸氫鈉粉劑加入到純水中溶解；b、在步驟a的溶液中加入EDTA攪拌溶解；C、在攪拌下依次加入甲醛、雙乙酸鈉、枸櫞酸鈉、氯化鈉和冰醋酸，直到攪拌均勻。在本發(fā)明的液基細(xì)胞保存液組合物的制備方法中，除了上述組分之外，可在不背離本發(fā)明宗旨的范圍內(nèi)增加少量粘液分解液，所述粘液分解液包含二硫蘇糖醇(DTT)和具有加速分解的氯化鈣，使需檢測(cè)的細(xì)胞最大限度的從粘液中分離出來(lái)，分離粘附液根據(jù)不同細(xì)胞比重的不同，把干擾診斷的有形成分隔離在分離液中丟棄，讓需觀察的細(xì)胞有效沉降在玻片上。DTT由上海金璐貿(mào)易有限公司生產(chǎn)，純度> 99.4%，其為強(qiáng)還原劑，可裂解二硫鍵。在標(biāo)本中還可加入粘附分離液，所述粘附分離液包含乙醇，氯化鈉，EDTA和碳酸氫鈉， 且用冰醋酸調(diào)節(jié)PH到5. 0 7. 0。本發(fā)明的液基細(xì)胞保存液組合物可用于宮頸細(xì)胞、鼻咽細(xì)胞、痰液、尿液、胸腹水和腦脊液等人體脫落細(xì)胞的處理。采用上述技術(shù)方案后，本發(fā)明的液基細(xì)胞保存液組合物及其制備方法具有以下優(yōu)點(diǎn)。 1、可以最大限度保持細(xì)胞形態(tài)，提高診斷準(zhǔn)確率；2、所用設(shè)備簡(jiǎn)單，操作方法便捷，大幅度提高工作效率；3、可以使標(biāo)本在室溫下保持細(xì)胞形態(tài)無(wú)顯著性差異至少3個(gè)月。
具體實(shí)施方式
以下通過(guò)具體實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。實(shí)施例1液基細(xì)胞保存液組合物，包括以下重量百分比的組分
細(xì)胞固定劑甲醛2%防腐劑雙乙酸鈉0.1%抗凝齊丨J 枸櫞酸鈉2%緩沖劑氯化鈉0.5%螯合劑EDTA0.002%溶血?jiǎng)┍姿?.5%
水純水75%其中所述甲醛為分析純?cè)噭?，含?7% ；雙乙酸鈉為食品添加劑級(jí)；枸櫞酸鈉為分析純?cè)噭然c為分析純?cè)噭?，NaCl >99.5% ；EDTA為分析純?cè)噭┖捅姿釣榉治黾冊(cè)噭?，CH2COOH > 99. 5%，由國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)。在上述組分中還可加入加快固定細(xì)胞作用的乙醇20wt%。在上述緩沖劑氯化鈉組分中還可加入緩沖劑氯化鉀0. 01wt%和由南昌白云藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的粉劑緩沖劑碳酸氫鈉0. 2wt%，使它們?nèi)呓M成高效緩沖體系結(jié)構(gòu)。本實(shí)施例操作便捷，提高診斷準(zhǔn)確率，還可以使標(biāo)本在室溫下保持細(xì)胞形態(tài)無(wú)顯著性差異至少3 個(gè)月。實(shí)施例2液基細(xì)胞保存液組合物，包括以下重量百分比的組分
細(xì)胞固定劑甲醛2. 5%防腐劑雙乙酸鈉0.4%抗凝齊丨J 枸櫞酸鈉2. 5%緩沖劑氯化鈉0.7%螯合劑EDTA0.005%溶血?jiǎng)┍姿?.9%
水純水76%其中所述甲醛為分析純?cè)噭?0% ；雙乙酸鈉為食品添加劑級(jí)；枸櫞酸鈉為分析純?cè)噭?，氯化鈉為分析純?cè)噭琋aCl >99.5% ；EDTA為分析純?cè)噭┖捅姿釣榉治黾冊(cè)噭珻H2COOH > 99. 5%，由國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)。在上述組分中還可加入加快固定細(xì)胞作用的乙醇25wt%。在上述緩沖劑氯化鈉組分中還可加入緩沖劑氯化鉀0. 02wt%和由南昌白云藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的粉劑緩沖劑碳酸氫鈉0. #t%，使它們?nèi)呓M成高效緩沖體系結(jié)構(gòu)。本實(shí)施例操作便捷，提高診斷準(zhǔn)確率，還可以使標(biāo)本在室溫下保持細(xì)胞形態(tài)無(wú)顯著性差異至少3 個(gè)月。實(shí)施例3液基細(xì)胞保存液組合物，包括以下重量百分比的組分
細(xì)胞固定劑甲醛5%防腐劑雙乙酸鈉2%抗凝齊丨J 枸櫞酸鈉5%緩沖劑氯化鈉0.5%螯合劑EDTA0.004%溶血?jiǎng)┍姿?%水純水80%其中所述甲醛為分析純?cè)噭?，含?7% ；雙乙酸鈉為食品添加劑級(jí)；枸櫞酸鈉為分析純?cè)噭?，氯化鈉為分析純?cè)噭?，NaCl >99.5% ；EDTA為分析純?cè)噭┖捅姿釣榉治黾冊(cè)噭?，CH2COOH > 99. 5%，由國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)。在上述組分中還可加入加快固定細(xì)胞作用的乙醇35wt%。在上述緩沖劑氯化鈉組分中還可加入緩沖劑氯化鉀0. 02wt%和由南昌白云藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的粉劑緩沖劑碳酸氫鈉0. #t%，使它們?nèi)呓M成高效緩沖體系結(jié)構(gòu)。本實(shí)施例操作便捷，讓需觀察的細(xì)胞有效沉降在玻片上，使制備的涂片背景更清晰，提高診斷準(zhǔn)確率。實(shí)施例4一種液基細(xì)胞保存液組合物的制備方法，其特征在于包括以下步驟a、在攪拌下將規(guī)定量的碳酸氫鈉粉劑加入到純水中溶解；b、在步驟a的溶液中加入規(guī)定量的EDTA攪拌溶解；C、在攪拌下依次加入規(guī)定量的甲醛、雙乙酸鈉、枸櫞酸鈉、氯化鈉和冰醋酸，直到攪拌均勻。本實(shí)施例方法操作簡(jiǎn)便、工作效率高。以上實(shí)施例僅供說(shuō)明本發(fā)明之用，而非對(duì)本發(fā)明的限制，有關(guān)技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍的情況下，還可以作出各種變換或變化。因此，所有等同的技術(shù)方案也應(yīng)該屬于本發(fā)明的范疇，應(yīng)由各權(quán)利要求限定。
權(quán)利要求
1.一種液基細(xì)胞保存液組合物，其特征在于包括以下重量百分比的組分 細(xì)胞固定劑甲醛2 15%防腐劑雙乙酸鈉0.1 5%抗凝劑枸櫞酸鈉2 10%緩沖劑氯化鈉0.5 2%螯合劑EDTA0.002 0.5%溶血?jiǎng)┍姿?.5 10%水純水5 80%其中所述甲醛為分析純?cè)噭?，含?7 40%;雙乙酸鈉為食品添加劑級(jí)；枸櫞酸鈉為 分析純?cè)噭?，氯化鈉為分析純?cè)噭?，NaCl >99.5% ；EDTA為分析純?cè)噭┖捅姿釣榉治黾?試劑，CH2COOH > 99. 5%，由國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)。
2.如權(quán)利要求1所述的液基細(xì)胞保存液組合物，其特征在于，還包括加快固定細(xì)胞作 用的乙醇20 95wt%。
3.如權(quán)利要求1所述的液基細(xì)胞保存液組合物，其特征在干，所述緩沖劑還包括氯化 鉀 0. 01 0. 2wt%o
4.如權(quán)利要求1所述的液基細(xì)胞保存液組合物，其特征在干，所述緩沖劑還包括碳酸 氫鈉0. 2 5wt%，系南昌白云藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的粉劑。
5.一種液基細(xì)胞保存液組合物的制備方法，其特征在于包括以下步驟a、在攪拌下將碳酸氫鈉粉劑加入到純水中溶解；b、在步驟a的溶液中加入EDTA攪拌溶解；c、在攪拌下依次加入甲醛、雙乙酸鈉、枸櫞酸鈉、氯化鈉和冰醋酸，直到攪拌均勻。
全文摘要
一種液基細(xì)胞保存液組合物，其特征在于包括以下重量百分比的組分細(xì)胞固定劑甲醛2～15％，防腐劑雙乙酸鈉0.1～5％，抗凝劑枸櫞酸鈉2～10％，緩沖劑氯化鈉0.5～2％，螯合劑EDTA0.002～0.5％，溶血?jiǎng)┍姿?.5～10％，水純水5～80％，其中所述甲醛為分析純?cè)噭?，含?7～40％；雙乙酸鈉為食品添加劑級(jí)；枸櫞酸鈉為分析純?cè)噭然c為分析純?cè)噭?，NaCl＞99.5％；EDTA為分析純?cè)噭┖捅姿釣榉治黾冊(cè)噭?，H2COOH＞99.5％。本發(fā)明的液基細(xì)胞保存液組合物具有可最大限度保持細(xì)胞形態(tài)，提高診斷準(zhǔn)確率和使標(biāo)本在室溫下保持細(xì)胞形態(tài)無(wú)顯著性差異至少3個(gè)月的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A01N1/02GK102318597SQ20111024035
公開(kāi)日2012年1月18日 申請(qǐng)日期2011年8月19日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月19日
發(fā)明者張雪云, 楊麗思 申請(qǐng)人:張雪云, 楊麗思