專利名稱：一種新的煙草黑脛病抗性快速鑒定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于作物抗病性鑒定技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及煙草黑脛病抗性鑒定，特別是涉及一種煙草黑脛病抗性的苗期快速鑒定方法。
背景技術(shù)：
煙草黑脛病是煙草(Nicotiana tabacum)生產(chǎn)上的毀滅性病害之一，是制約我國各煙區(qū)煙葉生產(chǎn)的最重要因素，可以危害烤煙、晾煙、曬煙、白肋煙、香料煙等所有的栽培煙草。美國北卡羅萊納州每年因煙草黑脛病損失的煙葉約占總產(chǎn)量的 2%，1995年和 1996年兩年間因黑脛病造成的損失就達(dá)3610萬美元，占病害總損失的35. 13%，居各病害之首。該病在我國分布范圍很廣，除黑龍江省尚未發(fā)現(xiàn)之外，其余各植煙省區(qū)(含臺(tái)灣省) 均有發(fā)生。平均發(fā)病率為5% 12%，嚴(yán)重田塊發(fā)病率高達(dá)75%，甚至造成絕收。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，我國煙草黑脛病平均每年發(fā)病面積高達(dá)76373hm2，產(chǎn)量損失2869. 26萬千克，產(chǎn)值損失超過1. 23億元人民幣。生產(chǎn)實(shí)踐表明，防治黑脛病最經(jīng)濟(jì)、有效、環(huán)保的措施就是選育抗病品種，抗性鑒定自然成為抗源挖掘利用、抗病育種、抗性監(jiān)測等工作中重要的一環(huán)?，F(xiàn)有的煙草抗性鑒定方法主要有溫室苗期鑒定接種法和病圃活體菌株人工接種鑒定法。苗期鑒定法通常采用游動(dòng)孢子或菌絲體懸浮液浸根接種，病圃活體菌株人工接種鑒定是目前常用的鑒定方法，現(xiàn)有的接種方法采用莖基部創(chuàng)傷接種法，缺點(diǎn)是移栽緩苗后接種，時(shí)間長，工作量大，傷口大小不一致，接種過程繁瑣，不易操作。接種體需要經(jīng)過固體培養(yǎng)、菌谷培養(yǎng)，時(shí)間長，工作量大。我國煙草普遍采用漂浮育苗，漂浮育苗是當(dāng)前國際上先進(jìn)的育苗新技術(shù)，具有壯苗率高、操作簡便、專業(yè)化程度高、省工節(jié)時(shí)、方便管理、有利環(huán)境保護(hù)等許多優(yōu)點(diǎn)，近年來， 在我省得到了大面積推廣應(yīng)用，因此，在漂浮育苗基礎(chǔ)上，建立新的煙草黑脛病抗性的漂浮池水培接種快速鑒定方法，對(duì)抗病種質(zhì)資源篩選、抗性遺傳特性研究和抗病育種具有重要
意義ο

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種新的煙草黑脛病抗性快速鑒定方法，包括育苗、煙苗移植及日常管理、接種體制備及煙苗切莖接種黑脛菌、病情調(diào)查與分級(jí)等步驟。本方法直接采用漂浮育苗，不需要移栽緩苗，用漂浮池恒溫水培接種鑒定結(jié)果代替?zhèn)鹘y(tǒng)的土壤盆栽和大田鑒定結(jié)果，采用莖部切斷創(chuàng)傷接種法代替?zhèn)鹘y(tǒng)的莖基部創(chuàng)傷接種法。減少環(huán)境溫度和濕度對(duì)鑒定結(jié)果的影響，避免其他病害對(duì)鑒定結(jié)果的干擾，提高鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性，減少菌種培養(yǎng)和接種后發(fā)病調(diào)查時(shí)間，大大減少工作量，同時(shí)可節(jié)省場地、資源和試驗(yàn)成本，縮短接種鑒定時(shí)間。采用菌絲片直接接種，菌種只需要固體培養(yǎng)，時(shí)間短而工作量小，接種時(shí)間和接種后發(fā)病時(shí)間短，采用莖部切斷創(chuàng)傷法接種傷口大小基本一致，接種時(shí)易于操作，避免由于不同人員操作引起的傷口大小差異，從而減少人為誤差。本發(fā)明通過以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)
1)煙苗移植及日常管理煙苗三次剪葉后，苗齡60d，每個(gè)待鑒定材料挑選45株，移植到新的漂浮盤中。以小黃金1025作對(duì)照，紅花大金元作輔助對(duì)照。漂浮池營養(yǎng)液的氮素濃度控制在100mg/kg 250mg/kg。根據(jù)池水蒸發(fā)量，經(jīng)常補(bǔ)充池水至初始水深。2)接種體制備及接種煙草黑脛病菌活化后，接種燕麥固體培養(yǎng)基培養(yǎng)2周。莖部高度5cm處用無菌解剖刀切斷，用打孔器打取0. 5cm菌絲塊，貼于莖部切斷處，菌絲面朝下，每株接種1個(gè)菌絲片，上套移5mL液槍槍頭保濕，每品種設(shè)3個(gè)重復(fù)，每重復(fù)接種15株。接種后將育苗盤放入恒溫池，日常管理。；3)病情調(diào)查接種后2d調(diào)查發(fā)病情況，以后每隔2d調(diào)查一次發(fā)病情況。記錄發(fā)病率及病情指數(shù)。以感病對(duì)照發(fā)病率達(dá)到70%左右的病情指數(shù)作為品種抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。4)病害嚴(yán)重度分級(jí)以株為單位分級(jí)調(diào)查。0級(jí)莖部綠色，無病斑。1級(jí)莖部病斑不超過莖圍。3級(jí)；莖部病斑環(huán)繞莖圍，病斑高度不超過莖高的三分之一。5級(jí)莖部病斑環(huán)繞莖圍，病斑高度占莖高的三分之一至三分之二。7級(jí)莖部病斑環(huán)繞莖圍，病斑高度超過莖高的三分之二以上。9級(jí)莖部全部變色，基本死亡。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)和有益效果1)直接采用漂浮育苗，不需要移栽緩苗，減少勞動(dòng)量。2)采用菌絲片直接接種，菌種只需要固體培養(yǎng)，時(shí)間短而工作量小， 接種時(shí)間和接種后發(fā)病時(shí)間短?；貌捎们o部切斷創(chuàng)傷法接種傷口大小基本一致，接種時(shí)易于操作，避免由于不同人員操作引起的傷口大小差異，從而減少人為誤差。該方法的實(shí)用性在于占地面積小，在幾十平方米的面積上一次可同時(shí)鑒定上千株煙苗；用漂浮池恒溫水培接種鑒定結(jié)果代替?zhèn)鹘y(tǒng)的土壤盆栽和大田鑒定結(jié)果，采用莖部切斷創(chuàng)傷接種法代替?zhèn)鹘y(tǒng)的莖基部創(chuàng)傷接種法，結(jié)果重復(fù)性高，能有效排除土壤溫度差異和其他病害對(duì)抗性結(jié)果的干擾，有利于年度間和不同實(shí)驗(yàn)室間結(jié)果重現(xiàn)和比較，提高鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性，減少菌種培養(yǎng)，大大減少工作量，同時(shí)可節(jié)省場地、資源和試驗(yàn)成本，縮短接種鑒定時(shí)間，發(fā)病迅速，從接種到調(diào)查結(jié)束可在一周內(nèi)完成；結(jié)果可靠性高，抗感品種的發(fā)病率和病情指數(shù)差異明顯。該方法在抗病資源和育種中間材料的抗性鑒定、抗性遺傳規(guī)律研究中應(yīng)用潛力較大。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但不是對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限定。實(shí)施例11材料與方法1. 1供試材料
供試煙草材料包括1-；35、NC1071、NC729、SC 71、Virginia 182、筑波 1 號(hào)、 Burley2UBanket A_l、Tennessee90、Virginia509、TI245、安麻山曬煙 _3、祥云土煙-1、克撒錫巴斯瑪、土耳其巴斯瑪、希臘巴斯瑪、紅大、小黃金1025，其中小黃金1025和紅花大金元為國內(nèi)外報(bào)道的感黑脛病資源。接種用黑脛菌強(qiáng)致病力菌株162#，分離自云南省文山州文山縣。1.2室內(nèi)苗期抗性鑒定1.2. 1莖部切斷創(chuàng)傷接種法煙苗三次剪葉后，苗齡60d，每個(gè)待鑒定材料挑選45株，移植到新的漂浮盤中。以紅花大金元品種、小黃金1025為對(duì)照。漂浮池營養(yǎng)液的氮素濃度控制在100mg/kg 250mg/ kg。根據(jù)池水蒸發(fā)量，經(jīng)常補(bǔ)充池水至初始水深。煙草黑脛病菌活化后，接種燕麥固體培養(yǎng)基培養(yǎng)2周。莖部高度5cm處用無菌解剖刀切斷，用打孔器打取0. 5cm菌絲塊，貼于莖部切斷處，菌絲面朝下，每株接種1個(gè)菌絲片，上套移液槍槍頭(5mL)保濕，每品種設(shè)3個(gè)重復(fù)，每重復(fù)接種15株。接種后將育苗盤放入恒溫池，日常管理。接種后2d調(diào)查發(fā)病情況，以后每隔2d調(diào)查一次發(fā)病情況。記錄發(fā)病率及病情指數(shù)。以感病對(duì)照發(fā)病率達(dá)到70% 左右的病情指數(shù)作為品種抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。病害嚴(yán)重度分級(jí)以株為單位分級(jí)調(diào)查。0級(jí)莖部綠色，無病斑。1級(jí)莖部病斑不超過莖圍。3級(jí)；莖部病斑環(huán)繞莖圍，病斑高度不超過莖高的三分之一。5級(jí)莖部病斑環(huán)繞莖圍，病斑高度占莖高的三分之一至三分之二。7級(jí)莖部病斑環(huán)繞莖圍，病斑高度超過莖高的三分之二以上。9級(jí)莖部全部變色，基本死亡。1. 2. 2莖基部創(chuàng)傷接種鑒定法在塑料拱棚溫室內(nèi)進(jìn)行。盆栽苗齡50d煙苗，每材料30株。采用直徑12cm的一次性黑色塑料花盆，每盆裝紅壤土約500g。移栽成活后，在煙株兩側(cè)將刀刮傷煙苗莖基部， 每株傷口處接種5g菌谷。通過溫室通風(fēng)簾控制室內(nèi)白天溫度、傍晚關(guān)閉通風(fēng)簾保溫。接種后每周觀察一次發(fā)病情況，在感病對(duì)照發(fā)病率達(dá)到20%左右詳細(xì)調(diào)查病情，以感病對(duì)照發(fā)病率達(dá)到75%左右的調(diào)查結(jié)果作為品種抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。病害嚴(yán)重度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 23222-2008的規(guī)定。0級(jí)全株無?。?級(jí)莖部病斑不超過莖圍得三分之一，或三分之一以下葉片萎焉；3級(jí)頸部病斑環(huán)繞莖圍三分之一至二分之一，或三分之一至二分之一葉片輕度凋萎，或下部少數(shù)葉片出現(xiàn)病斑；5級(jí)莖部病斑超過莖圍得二分之一，但未全部環(huán)繞莖圍，獲二分之一至三分之二葉片凋萎；7級(jí)莖部病斑全部環(huán)繞莖圍，或三分之二以上葉片凋萎；9級(jí)病株基本枯死。2結(jié)果與分析2. 1兩種不同接種方法抗性鑒定結(jié)果相關(guān)性比較表1兩種不同黑脛病抗性鑒定方法發(fā)病情況
權(quán)利要求
1. 一種新的煙草黑脛病抗性快速鑒定方法，其特征在于步驟為(1)煙苗移植及日常管理煙苗三次剪葉后，苗齡60d，每個(gè)待鑒定材料挑選45株，移植到新的漂浮盤中；以小黃金1025作對(duì)照，紅花大金元作輔助對(duì)照，漂浮池營養(yǎng)液的氮素濃度控制在100 mg/kg 250 mg/kg,根據(jù)池水蒸發(fā)量，經(jīng)常補(bǔ)充池水至初始水深；(2)接種體制備及接種煙草黑脛病菌活化后，接種燕麥固體培養(yǎng)基，28°C培養(yǎng)2周；莖部高度5cm處用無菌解剖刀切斷，用打孔器打取0. 5cm菌絲塊，貼于莖部切斷處，菌絲面朝下，每株接種1個(gè)菌絲片，上套5mL移液槍槍頭保濕，每品種設(shè)3個(gè)重復(fù)，每重復(fù)接種15株；接種后將育苗盤放入恒溫池，日常管理；(3)病情調(diào)查接種后2 d調(diào)查發(fā)病情況，以后每隔2d調(diào)查一次發(fā)病情況；記錄發(fā)病率及病情指數(shù)，以感病對(duì)照發(fā)病率達(dá)到70%左右的病情指數(shù)作為品種抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)；(4)病害嚴(yán)重度分級(jí)以株為單位分級(jí)調(diào)查，0級(jí)莖部綠色，無病斑；1級(jí)莖部病斑不超過莖圍；3級(jí)；莖部病斑環(huán)繞莖圍，病斑高度不超過莖高的三分之一；5級(jí)莖部病斑環(huán)繞莖圍，病斑高度占莖高的三分之一至三分之二 ；7級(jí)莖部病斑環(huán)繞莖圍，病斑高度超過莖高的三分之二以上；9級(jí)莖部全部變色，基本死亡。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種新的煙草黑脛病抗性快速鑒定方法，包括育苗、煙苗移植及日常管理、接種體制備及煙苗切莖接種黑脛菌、病情調(diào)查與分級(jí)等步驟。本發(fā)明直接采用漂浮育苗，不需要移栽緩苗，用漂浮池恒溫水培接種鑒定結(jié)果代替?zhèn)鹘y(tǒng)的土壤盆栽和大田鑒定結(jié)果，采用莖部切斷創(chuàng)傷接種法代替?zhèn)鹘y(tǒng)的莖基部創(chuàng)傷接種法。減少環(huán)境溫度和濕度對(duì)鑒定結(jié)果的影響，避免其他病害對(duì)鑒定結(jié)果的干擾，提高鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性，減少菌種培養(yǎng)和接種后發(fā)病調(diào)查時(shí)間，采用莖部切斷創(chuàng)傷法接種傷口大小基本一致，接種時(shí)易于操作，避免由于不同人員操作引起的傷口大小差異，從而減少人為誤差。
文檔編號(hào)A01G31/00GK102498878SQ201110343658
公開日2012年6月20日 申請(qǐng)日期2011年11月3日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月3日
發(fā)明者冷曉東, 劉勇, 盧秀萍, 李梅云, 李永平, 李祥, 肖炳光, 高家合 申請(qǐng)人:云南省煙草農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院