專利名稱：以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體及其培育方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體及其培育方法。
背景技術(shù)：
1、蛹蟲草Cordyc印s militaris (La. :Fr)，又名北冬蟲夏草，為麥角菌目，麥角菌科，真菌，是我國醫(yī)藥學寶庫中的冬蟲夏草一類珍稀藥用真菌，經(jīng)醫(yī)藥科學工作者多年研究證明，蛹蟲草所含蟲草素、蟲草多糖、蟲草酸、SOD酶等生理活性物質(zhì)和營養(yǎng)成份的含量都高于或接近冬蟲夏草，現(xiàn)已被衛(wèi)生部批準為新資源食品。人工培育蛹草大都以大米或蟲蛹為培養(yǎng)基，由于家蠶蟲草的人工培養(yǎng)尚無真正形成蟲體內(nèi)僵化和形成子實體長度2cm以上的相關(guān)報導(dǎo)。對我國養(yǎng)蠶業(yè)的開發(fā)具有廣闊的應(yīng)用前景。2、中國發(fā)明專利申請200510101348. O公開了一種以黃粉蟲蛹為寄主的蛹蟲草子實體及其培育方法，采用蛹蟲草菌向黃粉蟲蛹前胸注入0. 05-0. 2ml后，將受侵感染的黃粉蟲蛹置于無菌的培養(yǎng)基當中進行保濕培養(yǎng)50-60天，其在黃粉蟲上長出子實體。3、中國發(fā)明專利94112056. 2公開了一種快速高產(chǎn)人工培育蠶蛹蟲草的方法。其實蛹草菌的分生孢子懸濁液，用昆蟲針等提取菌液刺入蠶蛹，待營養(yǎng)菌在體內(nèi)充分生長，蠶蛹僵硬后，在適當溫度、光線下培養(yǎng)即可獲得大量蛹蟲草。以上2、3都是以昆蟲蛹為寄主培育蛹蟲草子實體而本專利用蠶幼蟲為寄主，所用的昆蟲材料不同，家蠶蟲草難度更大。4、中國發(fā)明專利申請200910049298. 4公開了以幼蟲為寄主人工培育的活體蟲草及其培育方法。采用大麥蟲幼為寄主的蛹蟲草子實體培育方法，通過蛹蟲草菌的分離，培養(yǎng)大麥蟲的養(yǎng)殖，喂養(yǎng)蟲草菌液，在一定溫度下，使其蟲體僵化，并在其頭部長出蟲草子實體。以上4專利是用大麥蟲、幼蟲與本專利用家蠶幼蟲是不同科目，所以有本質(zhì)的不同。5、食用菌2007 (1)《活蟲體人工培養(yǎng)泰山蛹蟲草技術(shù)試驗》文章，“蛹蟲菌采用泰安農(nóng)科院在泰山采得野生蟲草，分離純化，人工復(fù)壯，對不同桑蠶幼蟲3-5齡幼蟲、蛹，采用活蟲體噴菌液，桑葉噴菌液，菌液注射、活體扎孔等6種接種方法，不同蟲齡幼蟲接種感染效果，由表2可知，4齡幼蟲利用噴菌液和帶桑葉喂食都能感菌且感染率較5齡蟲高，但蟲體感菌后迅速縮小，無利用價值，注射活體扎孔接種后，4齡5齡蠶都能感菌，但感染率都低于 50%，無開發(fā)價值，活蟲體滅菌接種能達到100%的感染率，但形成的子實體短，“全草”利用， 外觀商品性差?！?br> 上述5文章中家蠶幼蟲體內(nèi)都沒有形成僵化，所以感染后迅速縮小，無開發(fā)利用價值。滅菌的幼蟲也沒有形成體內(nèi)僵化，形成子實體短，以上文章所述實驗不能算家蠶幼蟲蟲草感染蟲草菌稼接成功，本發(fā)明的家蠶幼蟲被蟲草菌感染后，形成體內(nèi)僵化，蟲體整齊飽滿。頭部子實體2cm以上，是真正的家蠶幼蟲蟲草。6、中國發(fā)明專利200810013831. 7用原產(chǎn)于青藏高原的野生天然“冬蟲夏草菌株” 孢子接種到有機活體蠶蛹上人工培育而成蠶蛹蟲草。
上訴6培育蠶蛹蟲草是用的青藏高原“冬蟲夏草菌株”與本專利所用“蛹蟲草菌株”產(chǎn)于東北，兩種菌珠不同，菌株產(chǎn)地不同，所以有本質(zhì)區(qū)別。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體及其培育方法。為了達到上述目的，本發(fā)明提供了一種以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體的培育方法，其特征在于，具體步驟為
第一步將蛹蟲草子實體消毒、清洗后，切成段后接種于固體培養(yǎng)基中于18°C 25°C 培養(yǎng)10 20天得到菌塊；將所得的菌塊接種至一級液體菌種培養(yǎng)基中培養(yǎng)于18°C 25°C 培養(yǎng)4 7天得到一級液體菌種；
第二步將第一步所得的一級液體菌種按體積比1 :5 20用無菌水稀釋得到一級液體菌種稀釋液；將珍珠巖和輊石按重量比1 :0. 5 1. 5混合，滅菌后與上述的一級液體菌種稀釋液混合，得到蟲草混合培養(yǎng)土 ；
第三步將4 5齡家蠶幼蟲用酒精擦蟲體后，用一次性針筒吸入第二步所得的一級液體菌種，注射到家蠶體內(nèi)；將接種后的家蠶幼蟲插進第二步所得的蟲草混合培養(yǎng)土中，幼蟲頭部朝上，露出0. 5 1. 5厘米，在溫度為18°C 、濕度為70% 90%、每天光照不少于 10小時的條件下培養(yǎng)50 60天后采收，得到以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體。優(yōu)選地，所述第一步中的固體培養(yǎng)基由馬鈴薯過濾液、瓊脂、葡萄糖、蛋白胨、 KH2PO4^MgSO4 · TH2O^VB1 和無菌水按比例 200ml :20g :20g :10g :3g :2g :0. Ig :1000ml 混合， 121°C滅菌20 50分鐘得到。優(yōu)選地，所述第一步中的一級液體菌種培養(yǎng)基由馬鈴薯過濾液、瓊脂、葡萄糖、蛋白胨、KH2P04、MgSO4 .7H2CKVB1 和無菌水按比例 200ml :0. Ig :20g :10g :3g :2g :0. Ig :1000ml 混合，121°C滅菌20 50分鐘得到。本發(fā)明還提供了采用上述培育方法培育得到的以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體，其特征在于，其長度大于2cm以上。優(yōu)選地，所述的以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體中包含腺苷0. 07 0. 09wt%, 多糖8 9. 8wt%。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點是
1、本發(fā)明采用了珍珠巖和輊石構(gòu)成蟲草混合培養(yǎng)土基質(zhì)，其具有透氣、松軟、保濕等優(yōu)點，能夠模擬大自然外部環(huán)境，利于蟲草生長，所述的混合培養(yǎng)土中添加有菌種稀釋液，有利于蟲草的培養(yǎng)；
2、本發(fā)明采用了家蠶幼蟲，其無毒，可入藥，營養(yǎng)成分高；
3、本發(fā)明的家蠶幼蟲被蟲草菌感染后，形成體內(nèi)僵化，蟲體整齊飽滿，頭部子實體長度2cm以上，有效成分含量高。


圖1為以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體示意圖。
具體實施方式
下面結(jié)合實施例來具體說明本發(fā)明。 實施例一種以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體的培育方法，具體步驟為
(1)將上海農(nóng)科院自主培養(yǎng)的蛹蟲草(Cordyc印Smilitaris (La. :Fr)Link)子實體用75voW)的酒精消毒、用滅菌水沖洗后，切成小段后，接種于固體培養(yǎng)基中于20°C培養(yǎng)15 天得到菌塊；所述固體培養(yǎng)基由馬鈴薯過濾液200ml、瓊脂20g、葡萄糖20g、蛋白胨10g、 KH2P043g、MgSO4 · 7H20 2g、VB1O. Ig 和 1000ml 無菌水混合，121°C滅菌 30 分鐘得到，所述的馬鈴薯過濾液的制備方法為將200g馬鈴薯切成小塊，加入無菌水IOOOmL,燒開30分， 用紗布過濾后備用；將長勢好、轉(zhuǎn)勢快的菌塊接種至一級液體菌種培養(yǎng)基中培養(yǎng)于20°C培養(yǎng)5天得到一級液體菌種；所述的一級液體菌種培養(yǎng)基由馬鈴薯過濾液200ml、瓊脂0. lg、 葡萄糖 20g、蛋白胨 10g、KH2P043g、MgSO4 · 7H20 2g、VB1O. Ig 和 1000ml 無菌水混合，121 °C 滅菌30分鐘得到，所述的馬鈴薯過濾液的制備方法為將200g馬鈴薯切成小塊，加入無菌水 IOOOmL,燒開30分，用紗布過濾后備用；
(2)將第一步所得的一級液體菌種按體積比1:10用無菌水稀釋得到一級液體菌種稀釋液；將珍珠巖和輊石按重量比1 :1混合，滅菌后與上述的一級液體菌種稀釋液混合，得到蟲草混合培養(yǎng)土，裝在一次性塑料杯內(nèi)備用；
(3 )將4 5齡家蠶幼蟲用75vd%酒精擦蟲體后，用25ml —次性針筒吸入一級液體菌種，注射到家蠶(鱗翅目，蠶蛾科，Bombyxmori Linaeus)體內(nèi)；將接種后的家蠶幼蟲插進第二步所得的蟲草混合培養(yǎng)土中，幼蟲頭部朝上，露出1厘米，在溫度為20°C、濕度為85%、每天光照不少于10小時的條件下培養(yǎng)55天后采收，得到以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體， 感染成功率70%以上。如圖1所示，為以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體示意圖，從上到下分別為1號蟲草、2號蟲草、3號蟲草、4號蟲草，其中，1號蟲草的家蠶幼蟲1長5. 5cm,子實體2長4. 5cm, 2號蟲草的家蠶幼蟲1長5. 5cm,子實體2長3. 5cm, 3號蟲草的家蠶幼蟲1長 7cm，子實體2長2. 5cm, 4號蟲草的家蠶幼蟲1長6. 5cm,子實體2長4. 5cm。
本發(fā)明方法培養(yǎng)的家蠶蟲草的質(zhì)量對比如下
權(quán)利要求
1.一種以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體的培育方法，其特征在于，具體步驟為第一步將蛹蟲草子實體消毒、清洗后，切成段后接種于固體培養(yǎng)基中于18°C 25V培養(yǎng)10 20天得到菌塊；將所得的菌塊接種至一級液體菌種培養(yǎng)基中培養(yǎng)于18°C 25°C 培養(yǎng)4 7天得到一級液體菌種；第二步將第一步所得的一級液體菌種按體積比1 :5 20用無菌水稀釋得到一級液體菌種稀釋液；將珍珠巖和輊石按重量比1 :0. 5 1. 5混合，滅菌后與上述的一級液體菌種稀釋液混合，得到蟲草混合培養(yǎng)土 ；第三步將4 5齡家蠶幼蟲用酒精擦蟲體后，用一次性針筒吸入第二步所得的一級液體菌種，注射到家蠶體內(nèi)；將接種后的家蠶幼蟲插進第二步所得的蟲草混合培養(yǎng)土中，幼蟲頭部朝上，露出0. 5 1. 5厘米，在溫度為18°C 、濕度為70% 90%、每天光照不少于 10小時的條件下培養(yǎng)50 60天后采收，得到以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體。
2.如權(quán)利要求1所述的以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體的培育方法，其特征在于， 所述第一步中的固體培養(yǎng)基由馬鈴薯過濾液、瓊脂、葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4 JgSO4WH2OJB1 和無菌水按比例 200ml :20g :20g :10g :3g :2g :0. Ig :1000ml 混合，121°C滅菌 20 50 分鐘得到。
3.如權(quán)利要求1所述的以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體的培育方法，其特征在于，所述第一步中的一級液體菌種培養(yǎng)基由馬鈴薯過濾液、瓊脂、葡萄糖、蛋白胨、kh2PO4、 MgSO4 · 7H20、VB1 和無菌水按比例 200ml :0. Ig :20g :10g :3g :2g :0. Ig :1000ml 混合，121 °C 滅菌20 50分鐘得到。
4.采用權(quán)利要求1所述的培育方法培育得到的以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體，其特征在于，其長度大于2cm以上。
5.如權(quán)利要求4所述的以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體，其特征在于，所述的以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體中包含腺苷0. 07 0. 09wt%,多糖8 9. 8wt%。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體及其培育方法。所述的培育方法具體步驟為將蛹蟲草子實體消毒、清洗后，切成段后接種于固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到菌塊；將所得的菌塊接種至一級液體菌種培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到一級液體菌種；將所得的一級液體菌種用無菌水稀釋得到一級液體菌種稀釋液；將珍珠巖和輊石混合，滅菌后與上述的一級液體菌種稀釋液混合，得到蟲草混合培養(yǎng)土；將4～5齡家蠶幼蟲用酒精擦蟲體后，用一次性針筒吸入所得的一級液體菌種，注射到家蠶體內(nèi)；將接種后的家蠶幼蟲插進所得的蟲草混合培養(yǎng)土中，幼蟲頭部朝上，培養(yǎng)后采收，得到以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體。本發(fā)明頭部子實體長度2cm以上，有效成分含量高。
文檔編號A01G1/04GK102523912SQ20111038139
公開日2012年7月4日 申請日期2011年11月27日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月27日
發(fā)明者徐正華, 徐窕, 沈娟麗, 沈金德 申請人:桐鄉(xiāng)市中泰蟲草專業(yè)合作社