專利名稱：一種蘭花組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種蘭花組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
蘭花為多年生草本，單子葉植物。根長(zhǎng)筒狀。葉自莖部簇生，線狀披針形，稍具革質(zhì)，2至3片成一束。蘭花是中國(guó)傳統(tǒng)名花，是一種以香著稱的花卉。蘭花以它特有的葉、 花、香獨(dú)具四清(氣清、色清、神清、韻清)，具高潔、清雅的特點(diǎn)。古今名人對(duì)它品價(jià)極高， 被喻為花中君子。在古代文人中常把詩(shī)文之美喻為“蘭章”，把友誼之真喻為“蘭交”，把良友喻為“蘭客”。紹興是蘭花的故鄉(xiāng)。由于蘭花漂亮，種植較簡(jiǎn)單是一些家庭養(yǎng)殖的首選品種，市場(chǎng)需求很大。使用組織培養(yǎng)法繁殖蘭花的優(yōu)點(diǎn)可以大量繁殖蘭花苗，而且后代可保持與親本相同的優(yōu)良性狀。1838年，德國(guó)植物學(xué)家khleiden發(fā)表《植物發(fā)生論》論文，提出植物細(xì)胞學(xué)說(shuō)； 1840年，Link首先證實(shí)了蘭科植物根部具有內(nèi)生真菌；1886年，Wahrlich對(duì)來(lái)自世界各地的500多種蘭花進(jìn)行研究，證實(shí)內(nèi)生真菌普遍存在，并研究了真菌在寄主細(xì)胞內(nèi)的消解變化；1899年，法國(guó)Bernard發(fā)現(xiàn)蘭花種子萌發(fā)需要真菌侵染，提出真菌共生萌發(fā)假說(shuō)，并于1902-1909年，公布了這方面的成果，認(rèn)為真菌能改進(jìn)蘭花種子和幼苗的營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)，初步證實(shí)共生萌發(fā)假說(shuō)。1900年，德國(guó)Hos Burgeff認(rèn)為，真菌可侵染正常種子，他分離并命名了許多真菌，提出了真菌的消解是提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)給蘭花的重要途徑的理論，他還研究了蘭花根系被侵染的方式，指出多種蘭科植物通過(guò)真菌獲取碳源的增加與葉片面積減少是平行的，有時(shí)還伴有光合色素的減少；以上的研究結(jié)果，發(fā)展與完善了當(dāng)時(shí)的種子繁殖蘭花的共生萌發(fā)法，并在許多蘭花中得到應(yīng)用。1902年，德國(guó)植物學(xué)家G. Haberlandt發(fā)表《植物細(xì)胞培養(yǎng)》論文，提出植物細(xì)胞培養(yǎng)學(xué)說(shuō)，認(rèn)為單一細(xì)胞可以發(fā)育成為獨(dú)立的個(gè)體；1922 年，Kimdson成功在含糖培養(yǎng)基上用種子培養(yǎng)出蘭花幼苗，建立一套蘭花種子無(wú)菌萌發(fā)的方法與培養(yǎng)基配方，此法為今后的雜交育種和蘭花工業(yè)發(fā)展提供了必備的條件；1935年， Cappellati認(rèn)為，維生素C是蘭花種子發(fā)芽所必需的。他進(jìn)一步證實(shí)，蘭花新鮮種子可以無(wú)菌萌發(fā)，但陳舊的種子需加入生長(zhǎng)激素才能發(fā)芽；以上Hos Burgeff, Kundson, Cappellati 等人的研究結(jié)果被總結(jié)為在適合礦物質(zhì)營(yíng)養(yǎng)，可溶性糖和適宜的PH條件下，蘭花種子可以無(wú)菌萌發(fā)。1937年，White首先建立綜合培養(yǎng)基，證實(shí)了 IAA與B族維生素(如硫胺素，煙酸等)在組培中的調(diào)控作用，組培開(kāi)始緩慢向前發(fā)展；1943年，White出版第一本組培專著 《植物組培培養(yǎng)手冊(cè)》，組培技術(shù)進(jìn)一步普及；1948年，美國(guó)科學(xué)家F. Skoog與崔澄發(fā)現(xiàn)腺嘌呤或腺苷/生長(zhǎng)素比例是控制芽和根形成的主要條件之一，完善了激素調(diào)控理論；1949年， Gavino Roter首先將蘭花組織培養(yǎng)獲得成功，他將蝴蝶蘭莖節(jié)接上于Kimdson C培養(yǎng)基上獲得再生苗；同年，美國(guó)Swamy首先對(duì)蘭花胚胎學(xué)進(jìn)行系統(tǒng)研究；1957年，Hans首次采用蘭花莖尖為外植體培養(yǎng)獲得成功，認(rèn)為此法對(duì)蘭花無(wú)性繁殖行之有效；1958年，Steward實(shí)驗(yàn)證實(shí)細(xì)胞全能性假說(shuō)，植物組培技術(shù)進(jìn)入實(shí)用階段；I960年，G. Morel開(kāi)創(chuàng)了蘭花莖尖組織培養(yǎng)工業(yè)化生產(chǎn)技術(shù)，并被蘭花生產(chǎn)者應(yīng)用到新品種的快速繁殖中來(lái)，蘭花工業(yè)從此興起。組織培養(yǎng)的不同階段對(duì)營(yíng)養(yǎng)的要求是不一樣的，初代培養(yǎng)作為植株后期生長(zhǎng)來(lái)說(shuō)是十分重要的，但目前并沒(méi)有專門針對(duì)于蘭花初代培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種適于蘭花組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基，尤其適合蘭花初代培養(yǎng)。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種蘭花組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基由硝酸銨、硝酸鉀、氯化鈣、硫酸鎂、硫酸亞鐵、硫酸鋅、硼酸、鉬酸鈉、煙酸、肌醇、6-卡氨基嘌呤、碘化鉀、香蕉、土豆、蛋白胨、花寶、花肥、活性碳、瓊脂粉、白糖和椰汁組成。一種蘭花組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基，其中各組分在2000毫升椰汁中的含量分別為硝酸銨25. 0-40. 0g、硝酸鉀20. 0-30. 0g、氯化鈣7. 0-9. 0g、硫酸鎂5_6g、硫酸亞鐵5_6g、硫酸鋅 7. 5-9. 0g、硼酸 6. 5-7. 8g、鉬酸鈉 1. 0-2. 0g、煙酸 0. 05-0. 2g、肌醇 9. 0-11. 0g、6_ 卡氨基嘌呤 0. 5-1. 5g、碘化鉀 0. 2-0. 3g、香蕉 300-500g、土豆 200_400g、蛋白胨 10_30g、花寶 7_9g、 花肥6-9g、活性碳14-16g、瓊脂粉40-55g、白糖140_160g。—種蘭花組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基，其中各組分在2000毫升椰汁中優(yōu)選的含量分別為硝酸銨30. 0-35. 0g、硝酸鉀25. 0-28. 0g、氯化鈣7. 5-8. 5g、硫酸鎂5. 8-5. 95g、硫酸亞鐵 5. 5-5. 8g、硫酸鋅 8. 3-8. 8g、硼酸 7. 0-7. 5g、鉬酸鈉 1. 2-1. 5g、煙酸 0. 08-0. 15g、肌醇 9. 5-10. 5g、6-卡氨基嘌呤 0. 9-1. 2g、碘化鉀 0. 22-0. 2 、香蕉 350_450g、土豆 250_350g、 蛋白胨15-25g、花寶7. 5-8. 5g、花肥7. 5-8. 5g、活性碳14. 5-15. 5g、瓊脂粉45_52g、白糖 145-155g。一種蘭花組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基，其中各組分在2000毫升椰汁中最佳的含量分別為 硝酸銨31g、硝酸鉀27g、氯化鈣8g、硫酸鎂5. 9g、硫酸亞鐵5. 7g、硫酸鋅8. 5g、硼酸7. 3g、 鉬酸鈉1. 25g、煙酸0. lg、肌醇10. lg、6-卡氨基嘌呤1. 0g、碘化鉀0. Mg、香蕉400g、土豆 300g、蛋白胨20g、花寶Sg、花肥Sg、活性碳15g、瓊脂粉50g、白糖150g。其中所述的花寶為美國(guó)產(chǎn)的全元素復(fù)合肥，是世界家庭園藝用肥第一品牌。其中所述的花肥是收集的爛花葉、樹(shù)葉發(fā)酵制得。硝酸銨、硝酸鉀、氯化鈣、硫酸鎂、硫酸亞鐵、硫酸鋅、硼酸、鉬酸鈉、煙酸、肌醇、 6-卡氨基嘌呤、碘化鉀是植物生長(zhǎng)所需要的營(yíng)養(yǎng)要素?？梢源龠M(jìn)苗發(fā)根，是相輔相成的，互相作用。蛋白胨和瓊脂粉是起到是液體固態(tài)作用的。香蕉、土豆、白糖甜度適中，因?yàn)楹m是喜酸性的，這些都起到降低變異率的作用?；ǚ?、花寶是肥料，可以保證生長(zhǎng)過(guò)程的基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)。培養(yǎng)基的制作工藝包括如下步驟1、稱取一定量的硝酸銨、硝酸鉀、氯化鈣、硫酸鎂、硫酸亞鐵、硫酸鋅、硼酸、鉬酸鈉、煙酸、肌醇、6-卡氨基嘌呤、碘化鉀放入一定量的椰汁溶解。2、稱取土豆蒸熟后粉碎，將香蕉粉碎，加入白糖，用椰汁調(diào)勻。3、稱取一定量的花肥、花寶用椰汁調(diào)勻，椰汁補(bǔ)足量。4、將步驟1-3的溶液混合后加入蛋白胨、活性炭、瓊脂，加熱煮沸，使其溶化。5、分裝，可用漏斗將液狀培養(yǎng)基注入培養(yǎng)瓶，注入量視培養(yǎng)瓶容量大小而定，通常為容器的1/5左右。6、封瓶口。7、高壓蒸汽滅菌。120°C，1. 5Mpa，消毒 15 20min。8、滅菌后的培養(yǎng)基放入接種室內(nèi)靜置，讓其降溫后凝固。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1按下述比例取原料(按2000毫升椰汁計(jì))硝酸銨31g、硝酸鉀27g、氯化鈣8g、硫酸鎂5. 9g、硫酸亞鐵5. 7g、硫酸鋅8. 5g、 硼酸7. 3g、鉬酸鈉1. 25g、煙酸0. lg、肌醇10. lg、6-卡氨基嘌呤1. 0g、碘化鉀0. Mg、香蕉 400g、土豆300g、蛋白胨20g、花寶8g、花肥8g、活性碳15g、瓊脂粉50g、白糖150g。實(shí)施例2按下述比例取原料(按2000毫升椰汁計(jì))硝酸銨40. 0g、硝酸鉀20. 0g、氯化鈣9. 0g、硫酸鎂5g、硫酸亞鐵5g、硫酸鋅9. 0g、 硼酸6. 5g、鉬酸鈉1. 0g、煙酸0. 2g、肌醇9. 0g、6-卡氨基嘌呤1. 5g、碘化鉀0. 3g、香蕉300、 土豆200g、蛋白胨30g、花寶7g、花肥6g、活性碳14g、瓊脂粉55g、白糖140g。實(shí)施例3按下述比例取原料(按2000毫升椰汁計(jì))硝酸銨30. 0g、硝酸鉀25. 0g、氯化鈣8. 5g、硫酸鎂5. 8g、硫酸亞鐵5. 8g、硫酸鋅 8. 3g、硼酸7. 0g、鉬酸鈉1. 5g、煙酸0. 08g、肌醇9. 5g、6_卡氨基嘌呤1. 2g、碘化鉀0. 2 、香蕉350g、土豆350g、蛋白胨25g、花寶8. 5g、花肥8. 5g、活性碳14. 5g、瓊脂粉45g、白糖155g。制備方法如下1、稱取一定量的硝酸銨、硝酸鉀、氯化鈣、硫酸鎂、硫酸亞鐵、硫酸鋅、硼酸、鉬酸鈉、煙酸、肌醇、6-卡氨基嘌呤、碘化鉀放入一定量的椰汁溶解。2、稱取土豆蒸熟后粉碎，將香蕉粉碎，加入白糖，用椰汁調(diào)勻。3、稱取一定量的花肥、花寶用椰汁調(diào)勻，椰汁補(bǔ)足量。4、將步驟1-3的溶液混合后加入蛋白胨、活性炭、瓊脂，加熱煮沸，使其溶化。5、分裝，可用漏斗將液狀培養(yǎng)基注入培養(yǎng)瓶，注入量視培養(yǎng)瓶容量大小而定，通常為容器的1/5左右。6、封瓶口。7、高壓蒸汽滅菌。120°C，1. 5Mpa，消毒 15 20min。 8、滅菌后的培養(yǎng)基放入接種室內(nèi)靜置，讓其降溫后凝固。
權(quán)利要求
1.一種蘭花組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基由硝酸銨、硝酸鉀、氯化鈣、硫酸鎂、硫酸亞鐵、硫酸鋅、硼酸、鉬酸鈉、煙酸、肌醇、6-卡氨基嘌呤、碘化鉀、香蕉、土豆、蛋白胨、花寶、花月巴、活性碳、瓊脂粉、白糖和椰汁組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蘭花組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基，其中各組分在2000毫升椰汁中的含量分別為硝酸銨25. 0-40. 0g、硝酸鉀20. 0-30. 0g、氯化鈣7. 0-9. 0g、硫酸鎂5_6g、 硫酸亞鐵5-6g、硫酸鋅7. 5-9. 0g、硼酸6. 5-7. 8g、鉬酸鈉1. 0-2. 0g、煙酸0. 05-0. 2g、肌醇 9. 0-11. 0g、6-卡氨基嘌呤 0. 5-1. 5g、碘化鉀 0. 2-0. 3g、香蕉 300_500g、土豆 200_400g、蛋白胨 10-30g、花寶 7-9g、花肥 6-9g、活性碳 14-16g、瓊脂粉 40_55g、白糖 140_160g。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蘭花組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基，其中各組分在2000毫升椰汁中的含量分別為硝酸銨30. 0-35. 0g、硝酸鉀25. 0-28. 0g、氯化鈣7. 5-8. 5g、硫酸鎂 5. 8-5. 95g、硫酸亞鐵 5. 5-5. 8g、硫酸鋅 8. 3-8. 8g、硼酸 7. 0-7. 5g、鉬酸鈉 1. 2-1. 5g、煙酸 0. 08-0. 15g、肌醇 9. 5-10. 5g、6_ 卡氨基嘌呤 0. 9-1. 2g、碘化鉀 0. 22-0. 28g、香蕉 350_450g、 土豆 250-350g、蛋白胨 15-25g、花寶 7. 5-8. 5g、花肥 7. 5-8. 5g、活性碳 14. 5-15. 5g、瓊脂粉 45-52g、白糖 145-155g。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蘭花組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基，其中各組分在2000毫升椰汁中的含量分別為硝酸銨31g、硝酸鉀27g、氯化鈣Sg、硫酸鎂5. 9g、硫酸亞鐵5. 7g、硫酸鋅 8. 5g、硼酸7. 3g、鉬酸鈉1. 25g、煙酸0. lg、肌醇10. lg、6_卡氨基嘌呤1. 0g、碘化鉀0. 24g、 香蕉400g、土豆300g、蛋白胨20g、花寶Sg、花肥Sg、活性碳15g、瓊脂粉50g、白糖150g。
全文摘要
本發(fā)明提供一種蘭花組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基由硝酸銨、硝酸鉀、氯化鈣、硫酸鎂、硫酸亞鐵、硫酸鋅、硼酸、鉬酸鈉、煙酸、肌醇、6-卡氨基嘌呤、碘化鉀、香蕉、土豆、蛋白胨、花寶、花肥、活性碳、瓊脂粉、白糖和椰汁組成。最佳配比是2000毫升椰汁中硝酸銨31g、硝酸鉀27g、氯化鈣8g、硫酸鎂5.9g、硫酸亞鐵5.7g、硫酸鋅8.5g、硼酸7.3g、鉬酸鈉1.25g、煙酸0.1g、肌醇10.1g、6-卡氨基嘌呤1.0g、碘化鉀0.24g、香蕉400g、土豆300g、蛋白胨20g、花寶8g、花肥8g、活性碳15g、瓊脂粉50g、白糖150g。此培養(yǎng)基適合蘭花的組織培養(yǎng)，可以將蘭花進(jìn)行大規(guī)模繁殖。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102524062SQ20111039734
公開(kāi)日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2011年12月5日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月5日
發(fā)明者常本金, 李富文, 李恩舉, 李樹(shù)剛, 李樹(shù)鑫, 王金柱, 許曉飛, 辛恩蘭 申請(qǐng)人:天津市華泰蘭園種養(yǎng)殖專業(yè)合作社