專利名稱：一種復合生物制劑及其制備方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領域，具體涉及一種含海藻生理活性物質(zhì)和根際促生菌的復合生物制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
海藻是生長在海洋中的低等隱花植物，由于其特殊的生長環(huán)境，營養(yǎng)成分與陸生植物存在很大的不同，其含有一般陸生植物無法比擬的豐富的礦物元素及維生素等，其中的多種成分例如氨基酸、礦物質(zhì)、多糖、維生素及細胞分裂素、植物生長素和脫落酸等生理活性物質(zhì)，可以建立類似雞尾酒的施肥體系，增大植物莖桿的維管束細胞，幫助植物建立健壯強大的根系，促進植物對土壤養(yǎng)分、水分與氣體的吸收利用；能促進植物細胞分裂，延遲細胞衰老，增加植物葉綠素含量，有效提高光合作用效率；能增強作物抗旱、抗寒、抗病蟲等多種抗逆功能，提高作物產(chǎn)量，改善作物品質(zhì)；還能改善土壤結(jié)構(gòu)，提高土壤保水能力等多種功效。從海藻中提取的生理活性物質(zhì)近年來已被作為重要的液面噴施劑，應用于很多作物，包括很多草類、谷物，花卉及蔬菜品種，均取得抗病增產(chǎn)、增效等較好的效果。近年來海藻對農(nóng)作物效果的研究多集中在對作物生長的促進及品質(zhì)的改善方面， 但施用海藻類肥料會對土壤及土壤微生物有一定程度的影響，然而關于這方面的研究甚少。雖然微生物的生物量僅構(gòu)成土壤有機質(zhì)的一小部分，但它對農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展有貢獻， 因為微生物的高周轉(zhuǎn)率促進養(yǎng)分的釋放，從而促進植物對養(yǎng)分的吸收利用、減少病害發(fā)生及抑制病害。微生物的功能多樣性很重要，因為土壤中80-90%的反應都是在微生物的參與下進行的。微生物種群結(jié)構(gòu)和功能多樣性可很好地描述土壤質(zhì)量，是土壤健康評價的重要指標之一。農(nóng)作物根際微生物種類繁多且活躍，構(gòu)成特有的根際土壤微生物區(qū)系，其中能夠促進植物生長，防治病害、增加作物產(chǎn)量的微生物被成為促生菌(plant growth-promoting rhizobacteria,簡稱PGPR)，根際促生菌PGPR對土壤中有害病原微生物與非寄生性根際有害微生物(Deleterious rhizosphere microorganisms,簡稱DRM0)都有生防作用，對植物吸收利用礦物質(zhì)營養(yǎng)也有促進作用，并可以產(chǎn)生有益植物生長的代謝產(chǎn)物，從而促進植物的生長發(fā)育。自從1978年Burr等人首先報道馬鈴薯PGPR以來，國內(nèi)外已經(jīng)發(fā)現(xiàn)包括熒光假單胞菌、芽孢桿菌、沙雷氏等20多種屬的根際微生物具有防病促生的潛能，并有眾多的PGPR 產(chǎn)品投入使用，在防治作物土傳染病害方面發(fā)揮愈來愈重要的作用，尤其是能夠誘導植物的非專一性抗病性(induced systemic resistance, ISR)的PGPR,則更為理想。傳統(tǒng)的農(nóng)業(yè)生態(tài)系統(tǒng)下，化學肥料的大量施用和高強度利用，導致土壤微生物的生物量降低、生物種群和功能多樣性衰減、土壤的生物化學過程強度減弱，有機碳轉(zhuǎn)化和養(yǎng)分供應的能力下降，土壤結(jié)塊現(xiàn)象嚴重
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供了一種復合生物制劑。本發(fā)明的另一目的還提供了一種制備該復合生物制劑的方法。為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供的一種復合生物制劑，其由海藻生理活性物質(zhì)提取液和根際促生菌菌液按照體積比(I 20) 100混合而成。優(yōu)選地，本發(fā)明的復合生物制劑由海藻生理活性物質(zhì)提取液和根際促生菌菌液按照體積比優(yōu)選為(8 12) 100。所述海藻生理活性物質(zhì)包括細胞分裂素、植物生長素和脫落酸等。所述根際促生菌包括固氮菌、有機磷細菌、無機磷細菌和解鉀菌，菌液中含菌數(shù)不低于IO8個/mL。原始菌種可以市售獲得。其中固氮菌優(yōu)選陰溝腸桿菌，有機磷細菌優(yōu)選地衣芽孢桿菌或枯草芽孢桿菌，無機磷細菌優(yōu)選銅綠假單胞桿菌，解鉀菌優(yōu)選膠質(zhì)芽孢桿菌。根際促生菌和海藻生理活性物質(zhì)兩者能起到互相促進的作用，海藻提取物對PGPR 的生長有不同程度的影響，尤其是對固氮菌、無機磷細菌和硅酸鹽細菌的影響較顯著，有明顯的促進作用；另外PGPR能產(chǎn)生植物激素、ACC脫氨酶、揮發(fā)性物質(zhì)(volatiles)等，更進一步增加了復合制劑中活性物質(zhì)的種類和含量。此制劑的有效保存時間可以比單純的菌肥或海藻肥延長至I年。所述海藻為海帶、巨藻、泡葉藻、海囊藻或滸苔中的一種或幾種。本發(fā)明提供的制備上述復合生物制劑的方法，包括如下步驟(I)制備海藻生理活性物質(zhì)提取液；(2)定植馴化根際促生菌，并進行高密度培養(yǎng)；(3)將海藻生理活性物質(zhì)提取液與根際促生菌菌液按比例復配成復合生物制劑。所述海藻生理活性物質(zhì)提取液可以市售獲得(市售一般是海藻粉，活性成分不太確定)，也可以通過套泡處理方法提取。優(yōu)選套泡處理方法提取，具體提取步驟如下(I)將海藻清洗、壓榨，使藻體破碎呈塊狀藻渣，藻渣直徑小于2cm ；(2)將藻渣放入淡水池中進行套泡處理首先將藻渣放在A池中浸泡60_80min，浸泡后將藻渣撈出放入B池中再浸泡60-80min，同時將A池中的浸泡液放入待處理的容器中， 并重新將A池加入海藻重量4-6倍的自來水，經(jīng)A、B池兩次浸泡后將藻渣撈出；第二輪開始時A、B池順序互換，此時A池中為干凈的淡水，B池中為藻渣二次浸泡后的浸泡液，新的同質(zhì)量藻渣首先放入B池中浸泡60-80min，浸泡后將藻渣撈出放入A池中再浸泡60_80min， 同時將B池中的浸泡液放入待處理的容器中，并重新將B池加入海藻重量4-6倍的自來水， 經(jīng)B、A池兩次浸泡后將藻渣撈出；A、B兩池可往復使用；淡水指常溫自來水；所用淡水池為兩個以上；(3)套泡后的藻渣用稀酸溶液水解，水解液離心去掉鹽分；稀酸優(yōu)選為鹽酸溶液， 其pH值為2. 5-5. 5，優(yōu)選pH值為3. O ;水解條件優(yōu)選為50_70°C下水解5_10h ;離心條件優(yōu)選為 4000rpm/min, 5_8min ；(4)將步驟(2)的浸泡液與步驟(3)的離心液混合，50°C蒸發(fā)濃縮至淡黃色稍黏稠狀為止，即得到海藻生理活性物質(zhì)提取液。提取液中的主要活性成分的含量如下玉米素(ZT)29. 38 40. 72 μ g/kg · Fff吲哚乙酸(IAA)80. 42 230. 67 μ g/kg · Fff
脫落酸(ABA)28. 45 42. 58 μ g/kg · Fff吲哚丁酸(IBA)17. 55 52. 12 μ g/kg · Fff褐藻酸18.72 20. 98 μ g/kg · Fff0所述根際促生菌，原始菌種可市售獲得，所述定植馴化步驟如下(I)選擇四種根際促生菌，包括陰溝腸桿菌，枯草芽孢桿菌(或地衣芽孢桿菌)， 銅綠假單胞桿菌和膠質(zhì)芽孢桿菌，混合接種于50-80mL培養(yǎng)液中，每種菌的接種量為IO6/ mL，在已滅菌的培養(yǎng)皿的底部放一張濾紙，將以上處理的50-80mL培養(yǎng)液倒入其中，再放入 50-100粒小油菜的種子，上部蓋一張濕濾紙，然后在無菌室30±2°C進行培養(yǎng)催芽；3天后揭掉上層濾紙，繼續(xù)培養(yǎng)。(2)再培養(yǎng)2-4天后，將幼苗根尖上的混合細菌用培養(yǎng)液洗下來，然后接種于新鮮的種子上進行下一輪的富集循環(huán)(操作同第一步)。共進行三輪操作。經(jīng)過此定植馴化后， 以上選擇的四種根際促生菌的定植效果可達到IO7-IO8個/cm根系，各種菌的定植比例如下陰溝腸桿菌20 % -30%,枯草芽孢桿菌20 %~35%,地衣芽孢桿菌30 %~45%,銅綠假單胞桿菌15% -30%，膠質(zhì)芽孢桿菌10% -20%。(3)將以上定植馴化的四種菌株從幼苗根系上用培養(yǎng)液沖洗下來，并在培養(yǎng)液中進行高密度培養(yǎng)24±4h，溫度為37±2°C。培養(yǎng)液中的菌種密度高于IO9個/mL。所述種子培養(yǎng)液為土壤浸提液(或取蒸餾水)，每IOOOmL包括如下成分 K2HPO4L 6-2. 0g, (NH4)2HPO4 2. 0-4. Og,酵母粉 2. 0-5. 0g，MgS047H20 O. 2-0. 5g, MgCl2 O. 4-1. 0g, NaCl O. 15-0. 30g, CaCl2 0. 4-0. 6g, FeCl3 0. 04-0. 07g, (NH4)2NO3 2. 0-5. Og, K2Si032. 0-4. Og0本發(fā)明的有益效果是(I)本發(fā)明中采用了高效物理破碎與化學處理工藝相結(jié)合的方法提取海藻海藻生理活性物質(zhì)和營養(yǎng)物質(zhì)，并采用了二次套泡工藝，最大程度保留了鮮海藻中的各植物促生長劑和多種營養(yǎng)成分。(2)本發(fā)明利用共培養(yǎng)技術(shù)的混合增效和互補作用增強了菌劑在生產(chǎn)應用中的增產(chǎn)節(jié)肥效果。(3)本發(fā)明中的菌株經(jīng)過馴化，遺傳穩(wěn)定性高，同時確定了海藻提取液與馴化菌液的最適混合比例，消除了單純海藻制劑對土壤微生物的影響，同時還起到抑制有害病原菌的作用，起到以菌制菌的目的。(4)本發(fā)明的原料廉價易得，制備工藝簡單，生產(chǎn)效率高，成本低，對環(huán)境污染少。(5)本發(fā)明廣泛適用于全國各地區(qū)。根據(jù)提取液中促生菌株的有效活菌數(shù)和活性物質(zhì)的含量，并結(jié)合根際促生菌在植物根系的定植效果，確定適宜的海藻提取液和定植馴化菌液的混合比例，制造出復合生物制劑，并確定施用量。其中海藻生理活性中的生物促生劑可提高作物對肥料中及土壤中養(yǎng)分的利用率；其中的多糖成分可螯合重金屬離子，增加有效成分的持久性和有效性，還可增加土壤透氣和聚結(jié)的能力，明顯促進土壤團粒結(jié)構(gòu)的形成。而且不同于化學肥料，海藻提取物可被生物降解毒，無污染，對人類、動物和鳥類無危險性。此種制劑對農(nóng)作物的成熟、產(chǎn)量和質(zhì)量的提高、水果的保鮮以及抵抗病蟲害等方面均產(chǎn)生了明顯的積極作用。總之，本發(fā)明提供的復合生物制劑含有多種生理活性物質(zhì)及根際促生菌群，具有抗病增產(chǎn)、活土、無公害等許多優(yōu)點。


圖I是本發(fā)明二次套泡的工藝流程；圖2是本發(fā)明復合生物制劑有效活菌數(shù)含量變化；圖3是本發(fā)明復合生物制劑有效活菌數(shù)含量變化。
具體實施例方式以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。實施例I套泡處理工藝(I)將采集的海帶沖洗去除雜物，稱取200kg，將海帶破碎直徑2cm以下；(2)首先將IOOkg藻渣放在A池中浸泡60min，浸泡后將藻渣撈出放入B池中再浸泡60min，同時將A池中的浸泡液放入待處理的容器中并重新將A池中加入500kg的自來水，經(jīng)A、B池兩次浸泡后將藻渣撈出；第二輪開始時A、B池順序互換，此時A池中為干凈的淡水，B池中為藻洛二次浸泡后的浸泡液,新的IOOkg藻洛首先放入B池中浸泡60min,浸泡后將藻渣撈出放入A池中再浸泡60min，同時將B池中的浸泡液放入待處理的容器中并重新將B池加入500kg的自來水，經(jīng)B、A池兩次浸泡后將藻渣撈出進行下一步的水解；A、B池往復使用，此為套泡處理。具體步驟如圖I所示。實施例2根際促生菌定植馴化及高密度培養(yǎng)的步驟(I)將四種根際促生菌(陰溝腸桿菌(Enterobacter cloacae 10014),地衣芽孢桿菌(Bacillus Iicheniformis 23584),銅綠假單胞桿菌(Pseudomonas aeruginosa),膠質(zhì)芽孢桿菌(Bacillus Mucilaginosus))?；旌辖臃N于50mL培養(yǎng)液中，每種菌的接種量為 106/mL，在已滅菌的培養(yǎng)皿的底部放一張濾紙，將以上處理的50mL培養(yǎng)液倒入其中，再放入 50粒小油菜的種子，上部蓋一張濕濾紙，然后在無菌室30°C進行培養(yǎng)催芽；3天后揭掉上層濾紙，繼續(xù)培養(yǎng)。(2)再培養(yǎng)3天，將幼苗根尖上的混合細菌用培養(yǎng)液洗下來，然后接種于新鮮的種子上進行下一輪的富集循環(huán)(操作同步驟(I))。共進行三輪操作。經(jīng)過此定植馴化后，以上選擇的四種根際促生菌的定植效果可達到IO8個/cm根系，各種菌的定植比例如下陰溝腸桿菌21 %，地衣芽孢桿菌30 %，枯草芽孢桿菌21 %，銅綠假單胞桿菌18 %，膠質(zhì)芽孢桿菌 9%，雜菌1%。(3)將以上定植馴化的四種菌株從幼苗根系上用培養(yǎng)液沖洗下來，并在培養(yǎng)液中 37±2°C的條件下進行高密度培養(yǎng)24h。培養(yǎng)液中的菌種密度為IO9個/mL。實施例3復合制劑的制備方法I(I)套泡處理將采集的海帶沖洗去除雜物，稱取200kg，將海帶破碎直徑2cm以下；將其中IOOkg 藻渣放在在A池中浸泡60min，浸泡后將藻渣撈出放入B池中再浸泡60min，同時將A池中的浸泡液50°C蒸發(fā)濃縮，A池中重新加入500kg的自來水，經(jīng)A、B池兩次浸泡后將藻渣撈出；第二輪開始時A、B池順序互換，此時A池中為干凈的淡水，B池中為藻渣二次浸泡后的浸泡液，剩余的IOOkg藻洛首先放入B池中浸泡60min,浸泡后將藻洛撈出放入A池中再浸泡60min，同時將B池中的浸泡液50°C蒸發(fā)濃縮，合并濃縮液；(2)水解處理將套泡處理后的藻渣在50°C下pH值為2. 5的鹽酸溶液中水解6h，水解液離心處理，離心條件為4000rpm/min下離心6min ；取離心上清液與套泡液濃縮液合并，在50°C蒸發(fā)濃縮至淡黃色稍黏稠狀為止，即得到海藻生理活性物質(zhì)提取液。經(jīng)檢測，其中的海藻生理活性物質(zhì)的含量如下玉米素(ZT)39. 38 μ g/kg · Fff吲哚乙酸(IAA)115. 34 μ g/kg · Fff脫落酸(ΑΒΑ)35. 64 μ g/kg · Fff吲哚丁酸(IBA)43. 62 μ g/kg · Fff褐藻酸19.02 μ g/kg · Fff(3)定植馴化步驟市售獲得菌株，陰溝腸桿菌(Enterobacter cloacae 10014),枯草芽孢桿菌 (Bacillus subtilis23643),銅綠假單胞桿菌(Pseudomonas aeruginosa),膠質(zhì)芽抱桿菌 (Bacillus Mucilaginosus),將以上四種菌株混合接種于50mL培養(yǎng)液中，每種菌的接種量為IO6個/mL，在已滅菌的培養(yǎng)皿的底部放一張濾紙，將以上處理的50mL培養(yǎng)液倒入其中， 再放入50粒小油菜的種子，上部蓋一張濕濾紙，然后在無菌室30°C進行培養(yǎng)催芽；3天后揭掉上層濾紙，繼續(xù)培養(yǎng)4天后，將幼苗根尖上的混合細菌用培養(yǎng)液洗下來，然后接種于新鮮的種子上進行下一輪的富集循環(huán)(操作同第一步)。共進行三輪操作。經(jīng)過此定植馴化后， 以上選擇的四種根際促生菌的定植效果可達到IO8個/cm根系，各種菌的定植比例如下陰溝腸桿菌30 %，枯草芽孢桿菌42 %，銅綠假單胞桿菌18 %，膠質(zhì)芽孢桿菌9 %，雜菌I %。將以上定植馴化的四種菌株從幼苗根系上用培養(yǎng)液沖洗下來，并在培養(yǎng)液中37±2°C的條件下進行高密度培養(yǎng)24h。經(jīng)檢測培養(yǎng)液中菌種的密度為IO9個/mL。其中培養(yǎng)液為土壤浸提液IOOOmL, K2HPO4 I. 6g，(NH4)2HPO4 2. 0g，酵母粉 2. Og, MgSO4 7H20 0. 3g，MgCl2 0. 4g，NaCl 0. 20g, CaCl2 0. 5g, FeCl3 0. 05g, (NH4)2NO3 3. Og, K2SiO3 2. Og0(4)復合生物制劑的準備將海帶生理活性物質(zhì)和根際促生菌定植馴化菌液分別按照I : 100、5 100、 8 100、12 100和20 100的比例混合，分別于存放I個月、3個月、6個月、I年的時間檢測其中的有效活菌數(shù)和活性成分的含量。經(jīng)檢測5種比例下，其活性成分的含量變化不大。有效活菌數(shù)的變化為前半年穩(wěn)定上升，后半年呈下降趨勢，但活菌數(shù)仍然超過2X IO8 個/mL。最大值出現(xiàn)在12 100的比例下，其有效活菌數(shù)最大值為(6個月時)5X108個 /mL。以此確定海帶活性成分和根際促生菌定植馴化菌液的最佳比例為12 100。具體結(jié)果請參見圖2。實施例4復合制劑的制備方法2(I)套泡處理將采集的滸苔沖洗去除雜物，稱取200kg，將滸苔破碎直徑2cm以下；將其中IOOkg 藻渣放在在A池中浸泡SOmin (根據(jù)其物理特性，浸泡時間適當延長至80min)，浸泡后將藻渣撈出放入B池中再浸泡80min，同時將A池中的浸泡液50°C蒸發(fā)濃縮，重新將A池中加入 500kg的自來水，經(jīng)A、B池兩次浸泡后將藻渣撈出；第二輪開始時A、B池順序互換，此時A 池中為干凈的淡水，B池中為藻渣二次浸泡后的浸泡液，剩余的IOOkg藻渣首先放入B池中浸泡80min，浸泡后將藻渣撈出放入A池中再浸泡80min，同時將B池中的浸泡液50°C蒸發(fā)濃縮，合并濃縮液。(2)水解處理將套泡處理的藻渣放入pH值為3.0的鹽酸溶液中60°C下水解7h，將水解液 4000rpm/min下離心8min,取上清液與套泡濃縮液合并,在50°C蒸發(fā)濃縮至淡黃色稍黏稠狀為止，即得到海藻生理活性物質(zhì)提取液。經(jīng)檢測，其中的滸苔生理活性物質(zhì)的含量如下玉米素(ZT)30. 21 μ g/kg · Fff吲哚乙酸(IAA)159. 93 μ g/kg · Fff脫落酸(ΑΒΑ)40. 60 μ g/kg · Fff吲哚丁酸(IBA)51. 32 μ g/kg · Fff
褐藻酸18. 41 μ g/kg · Fff(3)根際促生菌進行定植馴化和高密度培養(yǎng)。市售獲得菌株，陰溝腸桿菌 (Enterobacter cloacae 10014),地衣芽抱桿菌(Bacillus Iicheniformis 23584),銅綠假單胞桿菌(Pseudomonas aeruginosa),膠質(zhì)芽抱桿菌(Bacillus Mucilaginosus),將以上四種菌株混合接種于60mL培養(yǎng)液中，每種菌的接種量為IO6個/mL，在已滅菌的培養(yǎng)皿的底部放一張濾紙，將以上處理的60mL培養(yǎng)液倒入其中，再放入50粒小油菜的種子，上部蓋一張濕濾紙，然后在無菌室30°C進行培養(yǎng)催芽；3天后揭掉上層濾紙，繼續(xù)培養(yǎng)3天后， 將幼苗根尖上的混合細菌用培養(yǎng)液洗下來，然后接種于新鮮的種子上進行下一輪的富集循環(huán)(操作同第一步)。共進行三輪操作。經(jīng)過此定植馴化后，以上選擇的四種根際促生菌的定植效果可達到IO8個/cm根系，各種菌的定植比例如下各種菌的比例如下陰溝腸桿菌20 %，地衣芽孢桿菌50 %，銅綠假單胞桿菌20 %，膠質(zhì)芽孢桿菌8 %，雜菌2 %。將以上定植馴化的四種菌株從幼苗根系上用培養(yǎng)液沖洗下來，并在培養(yǎng)液中37±2°C的條件下進行高密度培養(yǎng)24h。經(jīng)檢測培養(yǎng)液中菌種的密度為IO9個/mL。其中培養(yǎng)液為土壤浸提液 IOOOmL, K2HPO4 2. 0g, (NH4)2HPO4 4. 0g，酵母粉 3. 0g, MgSOJH2O 0. 2g, MgCl2 0. 6g NaCl 0. 30g, CaCl2 0. 6g, FeCl3 0. 04g, (NH4)2NO3 2. Og, K2SiO3 4. Ogo(4)復合生物制劑的制備將滸苔生理活性物質(zhì)和根際促生菌馴化菌液分別按照I 100,5 100,8 100、 12 100和20 100的比例混合，保證根際促生菌的總的有效活菌數(shù)不得低于2父108個/ mL。分別于存放I個月、3個月、6個月、I年的時間檢測其中的有效活菌數(shù)和活性成分的含量。經(jīng)檢測5中比例下，其活性成分的含量變化不大。有效活菌數(shù)的變化趨勢同含海帶活性成分的復合制劑。最大值出現(xiàn)在8 100的比例下，其有效活菌數(shù)最大值為出個月時) 4X IO8個/mL。具體結(jié)果請參見圖3。應用實例I選用12 100比例的復合制劑進行應用試驗。所測地區(qū)的土壤，選擇煙臺市福山區(qū)10年樹齡的蘋果園，土壤為棕壤土，在離樹干0. 3-0. 8米m左右的位置，將制劑稀釋1000倍后對作物進行灌根處理，并配合一定的肥料，制劑用量設定500mL/畝、800mL/畝、 IOOOmL/畝、和1500mL/畝。利用電鏡掃描技術(shù)檢測根際促生菌的定植效果，具體結(jié)果如表 I所示，以此確定此種制劑的最佳施用量1000 1500mL/畝較好。結(jié)果還顯示，施加此種制劑后，土壤促生菌的生物量顯著增大，其活性也顯著提高，并且有害病原菌的生物量大大降低，起到了以菌制菌的效果，作物品質(zhì)明顯改善。表I根際促生菌的定植效果
權(quán)利要求
1.一種復合生物制劑，其由海藻生理活性物質(zhì)提取液和根際促生菌菌液按照體積比 (I 20) 100混合而成。
2.如權(quán)利要求I所述的復合生物制劑，其特征在于，所述海藻生理活性物質(zhì)提取液和根際促生菌菌液體積比為(8 12) 100。
3.如權(quán)利要求I或2所述的復合生物制劑，其特征在于，所述海藻生理活性物質(zhì)包括細胞分裂素、植物生長素和脫落酸。
4.如權(quán)利要求I或2所述的復合生物制劑，其特征在于，所述海藻生理活性物質(zhì)提取液中包括如下含量的活性成分玉米素 29. 38 40. 72 μ g/kg · Fff吲哚乙酸 80. 42 230. 67 μ g/kg · Fff脫落酸 28. 45 42. 58 μ g/kg · Fff吲哚丁酸 17. 55 52. 12 μ g/kg · Fff褐藻酸 18. 72 20. 98 μ g/kg · Fff0
5.如權(quán)利要求I或2所述的復合生物制劑，其特征在于，所述根際促生菌包括固氮菌、 有機磷細菌、無機磷細菌和解鉀菌，菌液中含菌數(shù)不低于IO8個/mL。
6.如權(quán)利要求5所述的復合生物制劑，其特征在于，所述固氮菌為陰溝腸桿菌，所述有機磷細菌為地衣芽孢桿菌或枯草芽孢桿菌，所述無機磷細菌為銅綠假單胞桿菌，所述解鉀菌為膠質(zhì)芽孢桿菌。
7.如權(quán)利要求I或2所述的復合生物制劑，其特征在于，所述海藻為海帶、巨藻、泡葉藻、海囊藻或滸苔中的一種或幾種。
8.制備權(quán)利要求1-7任意一項所述復合生物制劑的方法，包括如下步驟(1)制備海藻生理活性物質(zhì)提取液；(2)定植馴化根際促生菌，并進行高密度培養(yǎng)；(3)將海藻生理活性物質(zhì)提取液與根際促生菌菌液按比例復配成復合生物制劑。
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述海藻生理活性物質(zhì)的制備方法為套泡處理方法提取，其具體步驟如下(1)將海藻清洗、壓榨，使藻體破碎呈塊狀藻渣；(2)將藻洛放入淡水池中進行套泡處理首先將藻洛放在A池中浸泡60-80min,浸泡后將藻渣撈出放入B池中再浸泡60-80min，同時將A池中的浸泡液放入待處理的容器中，并重新將A池加入海藻重量4-6倍的自來水，經(jīng)A、B池兩次浸泡后將藻渣撈出；第二輪開始時A、B池順序互換，此時A池中為干凈的淡水，B池中為藻渣二次浸泡后的浸泡液，新的同質(zhì)量藻渣首先放入B池中浸泡60-80min，浸泡后將藻渣撈出放入A池中再浸泡60_80min， 同時將B池中的浸泡液放入待處理的容器中，并重新將B池加入海藻重量4-6倍的自來水， 經(jīng)B、A池兩次浸泡后將藻渣撈出；(3)套泡后的藻洛用稀酸溶液水解,水解液離心去掉鹽分；(4)將步驟(2)的浸泡液與步驟(3)的水解液混合，50°C蒸發(fā)濃縮至淡黃色稍黏稠狀為止，即得到海藻生理活性物質(zhì)提取液。
10.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述根際促生菌定植馴化所用的種子培養(yǎng)液每 IOOOmL 包括如下成分:土壤浸提液 IOOOmLjK2HPO4 I. 6-2. 0g, (NH4)2HPO4 2. 0-4. 0g，酵0So ^-0 'C eOIS2)! i^o -g-0 'C ε0Ν2 (^HN) ‘仏0 -W) O εΙ3^ iSg -f ·ο zIDTSD iSQC O-ST ΙΟ^Ν ‘另0 .H O zIDsVi ‘3S -Ζ O OsHfOS翊‘另0 .S-O ·Ζ 槐· V 6SC^8SS0I NO
全文摘要
本發(fā)明涉及一種復合生物制劑及其制備方法。所述復合生物制劑由海藻生理活性物質(zhì)提取液和根際促生菌菌液按照體積比(1～20)∶100混合而成。本發(fā)明提供的復合生物制劑含有多種生理活性物質(zhì)及根際促生菌群，具有抗病增產(chǎn)、活土、無公害等許多優(yōu)點。
文檔編號C05F11/08GK102584359SQ20111041837
公開日2012年7月18日 申請日期2011年12月14日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月14日
發(fā)明者蘇群 申請人:山東寶源生物有限公司