專利名稱：黃精組培繁殖方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種中藥材栽培技術領域，特別是一種黃精的組培繁殖方法。
背景技術：
黃精是百合科黃精屬多年生草本植物，有黃精，滇黃精和多花黃精等，其干燥根莖入藥。根據傳統(tǒng)醫(yī)藥經典記載，黃精屬于名貴中藥，具有寬中益氣、益腎填精、滋陰潤肺，生津補脾之功效。主治肺燥干咳、體虛乏力、心悸氣短、久病津虧口干、糖尿病、高血壓等病癥。 對治療心血管疾病、結核病、慢性肝炎以及在抗菌、解毒、抗疲勞、抗衰老、降血糖、降血脂、 抗腫瘤等方面均有較好作用，既可入藥，又可作為保健食品，自古以來，人們把黃精作為延年益壽的佳品，因而對黃精的需求量很大。長期以來，黃精藥材來源主要以野生采集為主，黃精的栽培技術沒有引起更多的關注。隨著市場對藥材黃精需求量的增加和野生資源的急劇減少，采集野生黃精不但不能滿足市場需求，反而破壞了生態(tài)環(huán)境和黃精野生資源。由此人們逐漸開始對黃精的野生變家種栽培技術、高產栽培技術等加以實踐。目前黃精的繁殖技術主要為種子繁殖和根莖繁殖兩種方式。由于黃精種子難收集，種子發(fā)芽率低，而且種子繁殖，育苗時間長，大大增加了黃精的栽培成本，不利于黃精的人工大面積種植。所以在當前的人工栽培中，繁殖主要依靠根莖繁殖，但該方法繁殖系數低，種根莖用量大，既不經濟，又限制了黃精的產量潛力，不便栽植管理推廣，因而擴大種植面積受到抑制。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一種黃精組培繁殖方法，提高黃精的擴大繁殖速度，實現黃精栽培的規(guī)范化和規(guī)模化發(fā)展。為實現這一目的，發(fā)明人經過試驗，成功研究了繁殖黃精的各種組織培養(yǎng)基質配方和培養(yǎng)方法，對組織培養(yǎng)基質配方和生產工藝，以及黃精的特殊生長習性進行了大量研究和反復試驗，獲得了獨創(chuàng)的培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)方法。為解決上述技術問題，本發(fā)明所采用的技術方案是黃精組培繁殖方法，包括引種滅菌、組織誘導、繼代培養(yǎng)、分化培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)和生根培養(yǎng)，具體方法如下。..引種滅菌取帶芽的黃精根莖，用刀切成0.5-1. Ocm的小段，放入洗潔精水溶液中浸泡5分鐘，然后用自來水沖洗干凈；再用75%乙醇擦洗表面，再用自來水沖洗干凈；然后進入超凈工作臺中操作，放入75%乙醇中半分鐘，滅菌去離子水涮洗兩次；再放入 2. 5%的次氯酸鈉中5分鐘，滅菌去離子水涮洗2次；接著又放入5%的次氯酸鈉中5分鐘， 滅菌去離子水連續(xù)涮洗3-5次，然后用刀切去傷口壞死部分。組織誘導將消毒處理后的根莖接種在誘導培養(yǎng)基上，每瓶接種1-3塊，進行愈傷組織誘導培養(yǎng)，28-32天根莖切口處有少量愈傷組織開始萌動，50-60天出現淡黃色致密的愈傷組織，誘導率達50%。繼代培養(yǎng)將誘導產生的生長狀態(tài)良好的淡黃色顆粒狀的愈傷組織接種于繼代培養(yǎng)基中，每瓶接種2-3塊，進行繼代培養(yǎng)，第觀-32天可觀察到繼代培養(yǎng)基中又有新的愈傷組織產生，第43-47天，可觀察到愈傷組織比原來增大1倍。分化培養(yǎng)將繼代增殖產生的生長狀態(tài)良好的淡黃色顆粒狀愈傷組織轉接到分化培養(yǎng)基上，每瓶接種2-3塊，進行分化培養(yǎng)，9-11天可觀察到愈傷組織開始生長分化，顏色變綠，19-21天可觀察到淡黃綠色不定芽，45-50天開始產生叢生芽，出芽率66%，平均每塊愈傷組織分化5個芽，芽的平均長度為12mm。壯苗培養(yǎng)將分化培養(yǎng)的叢生芽轉接到壯苗培養(yǎng)基中進行壯苗培養(yǎng)，30天可觀察到叢生芽發(fā)育成了 2. 0-4. Ocm的叢生苗。生根培養(yǎng)將壯苗培養(yǎng)的叢生苗轉接到生根培養(yǎng)基上誘導生根，15天可觀察到苗根開始萌發(fā)，30天可觀察到86%的苗均生根，根須平均長度km，每株苗平均生根6條；然后可出瓶煉苗，移栽。上述黃精組培繁殖方法中，所提到的各發(fā)育生長階段的培養(yǎng)條件是人工氣候培養(yǎng)箱，光照周期起止時間是8 00-20 00，培養(yǎng)溫度日溫25°C，夜溫18°C，培養(yǎng)濕度是60%，光照強度是2000-24001x。上述黃精組培繁殖方法中，所提到的各發(fā)育生長階段的基本培養(yǎng)基是MS+30g/L 蔗糖+5g/L瓊脂粉，PH值為5. 8-6. 0。上述黃精組培繁殖方法中，所提到的各發(fā)育生長階段培養(yǎng)基的配方是。誘導培養(yǎng)基:MS+6-BA2. Omg/L+2, 4-D1. Omg/L。繼代培養(yǎng)基:MS+6-BA2. Omg/L+2, 4-D2. Omg/L。分化培養(yǎng)基:MS+6-BA3. Omg/L+IAAl. Omg/L。壯苗培養(yǎng)基:MS+6-BA2. Omg/L+IAAO. 5mg/L。生根培養(yǎng)基:MS+IAA0. 5mg/L。本發(fā)明的有益效果是將塊莖反復多次短時滅菌清洗，污染較少，降低了滅菌劑對外植體的損傷；通過組織培養(yǎng)，可以大量生產種苗，從塊莖到培養(yǎng)成生根苗，只需7個月，大大縮短了種苗生產時間和成本，提高了擴繁速度。
具體實施例方式下面結合實施例對本發(fā)明作進一步說明。首先預備如下材料?；九囵B(yǎng)基MS+30g/L蔗糖+5g/L瓊脂粉，PH值為5. 8-6. 0。人工氣候培養(yǎng)箱控制光照周期起止時間8:00-20:00，日溫25°C，夜溫18°C，濕度 60%，光照強度 2000-24001x。誘導培養(yǎng)基:MS+6-BA2.Omg/L+2, 4-D1. 0mg/L。繼代培養(yǎng)基:MS+6-BA2.Omg/L+2, 4-D2. 0mg/L·。分化培養(yǎng)基:MS+6-BA3.Omg/L+IAAl. Omg/L。壯苗培養(yǎng)基:MS+6-BA2.Omg/L+IAAO. 5mg/L。生根培養(yǎng)基:MS+IAA0.5mg/L。100段0.7cm的黃精根莖。然后開始進行組培工作。
取帶芽的黃精根莖，用刀切成0. 5-1. Ocm的小段，放入洗潔精水溶液中浸泡5分鐘，然后用自來水沖洗干凈；再用75%乙醇擦洗表面，再用自來水沖洗干凈；然后進入超凈工作臺中操作，放入75%乙醇中半分鐘，滅菌去離子水涮洗兩次；再放入2. 5%的次氯酸鈉中5分鐘，滅菌去離子水涮洗2次；接著又放入5%的次氯酸鈉中5分鐘，滅菌去離子水連續(xù)涮洗2次；然后用刀切去傷口壞死部分。將切成小段的黃精根莖消毒處理后，接種在誘導培養(yǎng)基上，每瓶接種2塊，進行愈傷組織誘導培養(yǎng)，30天后觀察到根莖切口處有少量愈傷組織開始萌動，55天出現淡黃色致密的愈傷組織，經統(tǒng)計發(fā)現誘導率達50%。將誘導產生的生長狀態(tài)良好的淡黃色顆粒狀的愈傷組織接種于繼代培養(yǎng)基中，每瓶接種2塊，進行繼代培養(yǎng)，第30天可觀察到繼代培養(yǎng)基中又有新的愈傷組織產生，第45 天，觀察到愈傷組織比原來增大1倍。將繼代增殖產生的生長狀態(tài)良好的淡黃色顆粒狀愈傷組織轉接到分化培養(yǎng)基上， 每瓶接種2塊，進行分化培養(yǎng)，第10天觀察到愈傷組織開始生長分化，顏色變綠，20天觀察到淡黃綠色不定芽，45天觀察到開始產生叢生芽，第50天統(tǒng)計出芽率66%，平均每塊愈傷組織分化5個芽，芽的平均長度12mm。將分化培養(yǎng)的叢生芽轉接到壯苗培養(yǎng)基中進行壯苗培養(yǎng)，30天觀察到叢生芽發(fā)育成了 2. 0-4. Ocm的叢生苗。將壯苗培養(yǎng)的叢生苗轉接到生根培養(yǎng)基上誘導生根，15天觀察到苗根開始萌發(fā)， 30天觀察統(tǒng)計到86%的苗均生根，根須平均長度km，每株苗平均生根6條。
權利要求
1.黃精組培繁殖方法，包括引種滅菌、組織誘導、繼代培養(yǎng)、分化培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)和生根培養(yǎng)，其特征在于具體方法如下引種滅菌取帶芽的黃精根莖，用刀切成0. 5-1. Ocm的小段，放入洗潔精水溶液中浸泡5分鐘，然后用自來水沖洗干凈；再用75%乙醇擦洗表面，再用自來水沖洗干凈；然后進入超凈工作臺中操作，放入75%乙醇中半分鐘，滅菌去離子水涮洗兩次；再放入2. 5%的次氯酸鈉中5分鐘，滅菌去離子水涮洗2次；接著又放入5%的次氯酸鈉中5分鐘，滅菌去離子水連續(xù)涮洗3-5次，然后用刀切去傷口壞死部分；組織誘導將消毒處理后的根莖接種在誘導培養(yǎng)基上，每瓶接種1-3塊，進行愈傷組織誘導培養(yǎng)，28-32天根莖切口處有少量愈傷組織開始萌動，50-60天出現淡黃色致密的愈傷組織；-繼代培養(yǎng)將誘導產生的生長狀態(tài)良好的淡黃色顆粒狀的愈傷組織接種于繼代培養(yǎng)基中，每瓶接種2-3塊，進行繼代培養(yǎng)，第觀-32天可觀察到繼代培養(yǎng)基中又有新的愈傷組織產牛,第43-47天，可觀察到愈傷組織比原來增大1倍；二分化培養(yǎng)將繼代增殖產生的生長狀態(tài)良好的淡黃色顆粒狀愈傷組織轉接到分化培養(yǎng)基上，每瓶接種2-3塊，進行分化培養(yǎng)，9-11天可觀察到愈傷組織開始生長分化，顏色變綠，19-21天可觀察到淡黃綠色不定芽，45-50天開始產生叢生芽，平均每塊愈傷組織分化5 個芽，芽的平均長度為12mm;壯苗培養(yǎng)將分化培養(yǎng)的叢生芽轉接到壯苗培養(yǎng)基中進行壯苗培養(yǎng)，30天可觀察到叢生芽發(fā)育成了 2. 0-4. Ocm的叢生苗；-生根培養(yǎng)將壯苗培養(yǎng)的叢生苗轉接到生根培養(yǎng)基上誘導生根，15天可觀察到苗根開始萌發(fā)，30天可觀察到86%的苗均生根，根須平均長度km，每株苗平均生根6條；然后可出瓶煉苗，移栽。
2.根據權利要求1所述的黃精組培繁殖方法，其特征在于組培過程中各發(fā)育生長階段的培養(yǎng)條件是人工氣候培養(yǎng)箱，光照周期起止時間是8 00-20 00，培養(yǎng)溫度日溫25V，夜溫18°C，培養(yǎng)濕度是60%，光照強度是2000-24001x。
3.根據權利要求1所述的黃精組培繁殖方法，其特征在于組培過程中各發(fā)育生長階段的基本培養(yǎng)基是MS+30g/L蔗糖+5g/L瓊脂粉，PH值為5. 8-6. 0。
4.根據權利要求1所述的黃精組培繁殖方法，其特征在于組培過程中各發(fā)育生長階段培養(yǎng)基的配方是:ι 誘導培養(yǎng)基:MS+6-BA2. Omg/L+2, 4-D1. Omg/L ； 二繼代培養(yǎng)基:MS+6-BA2. Omg/L+2, 4-D2. Omg/L ； .分化培養(yǎng)基:MS+6-BA3. Omg/L+IAAl. Omg/L ； 壯苗培養(yǎng)基:MS+6-BA2. 0mg/L+IAA0. 5mg/L ； 生根培養(yǎng)基:MS+IAA0. 5mg/L。
全文摘要
黃精組培繁殖方法，包括引種滅菌、組織誘導、繼代培養(yǎng)、分化培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)和生根培養(yǎng)，其有益效果是通過組織培養(yǎng)，可以大量生產種苗，從塊莖到培養(yǎng)成生根苗，只需7個月，大大縮短了種苗生產時間和成本，提高了擴繁速度。
文檔編號A01H4/00GK102550409SQ201110450738
公開日2012年7月11日 申請日期2011年12月29日 優(yōu)先權日2011年12月29日
發(fā)明者何全慧, 向廷軍, 楊再江, 祝利, 趙勇彪 申請人:重慶市秀山紅星中藥材開發(fā)有限公司