專利名稱：用于治療腱病的血小板衍生生長因子組合物和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于治療以下腱病(tendinopathy)的組合物和方法，例如腱鞘炎、腱退變(tendinosis)或腱炎，包括跟腱病(Achilles tendinopathy)、館腱病、外上媒炎(lateral epicondylitis)即“網(wǎng)球肘”、內(nèi)上髁炎即“高爾夫球員肘”、足底筋膜炎和肌腱套腱病，具體地講，涉及通過給予包含血小板衍生生長因子(TOGF)的組合物治療腱病的方
法。
背景技術(shù)：
肌腱是一種堅韌的纖維性結(jié)締組織帶，通常將肌肉與骨連接。肌腱的彈性特性調(diào)節(jié)運動期間的力，在無主動工作的情況下提供額外的穩(wěn)定性。它們還以高效率儲存和恢復(fù)能量。正常的健康肌腱主要由緊密壓在一起的平行排列的I型膠原纖維組成，但也包括少量彈性蛋白和蛋白聚糖。由其高度特化的超微結(jié)構(gòu)、低水平的血管形成和緩慢的膠原更新所致，肌腱如果受損則痊愈非常緩慢，并且很難恢復(fù)其最初的強度。部分撕裂通過快速產(chǎn)生無序的III型膠原而愈合，無序的III型膠原比正常肌腱弱。肌腱受損區(qū)域的損傷復(fù)發(fā)是普遍的。腱病是肌腱的慢性病癥或損傷，似乎由分解代謝和合成代謝反應(yīng)之間的不平衡導(dǎo)致，這種不平衡是由過度使用或老化致使肌腱逐步磨損而引起的。這種不平衡的結(jié)果是肌腱變性、衰弱、撕裂和疼痛。相比之下，急性肌腱損傷例如肌腱破裂或從骨上脫落十分突然，通常需要手術(shù)修復(fù)破裂或使肌腱與骨再附著。任何人都可能發(fā)生腱病，但在其工作、運動或常規(guī)日?；顒又汹呌谝辉龠M(jìn)行相同動作的人更可能發(fā)生腱病。腱病通常在受累部位引起疼痛、僵硬和喪失強度。術(shù)語腱病是指兩種類型的肌腱損傷腱退變和腱炎。該術(shù)語還包括腱鞘炎，一種發(fā)生在某些肌腱例如屈肌腱和跟腱中的肌腱外襯腱病。腱退變是肌腱的非炎性損傷，其特征在于因過度使用引起的通常呈在肌腱中和肌腱周圍的組織微撕裂形式的肌腱的肌腱內(nèi)變性，導(dǎo)致?lián)p傷區(qū)域周圍肌腱修復(fù)細(xì)胞的數(shù)目增力口。肌腱的變性是由肌腱的膠原纖維、細(xì)胞和血管成分的損傷或結(jié)構(gòu)破壞引起的，其可降低肌腱的抗張強度，如果不治療的話，可導(dǎo)致肌腱破裂。膠原組構(gòu)的變化的特征在于纖維分離/松散/卷曲、平行取向喪失、纖維直徑減小和膠原總體密度降低。此外，也可發(fā)生被紅細(xì)胞、血纖蛋白和纖連蛋白沉積物包繞的膠原微撕裂。另一方面，存在III型(修復(fù)性)膠原增加。這些基質(zhì)組構(gòu)變化可導(dǎo)致在偏振光顯微術(shù)下雙折射降低。除膠原含量和組構(gòu)以外，腱退變的特征還在于在受累區(qū)域粘液樣基質(zhì)(蛋白聚糖)增加和細(xì)胞密度改變。一些區(qū)域含有異常豐富的肌腱細(xì)胞，其有成圓形的核和蛋白聚糖和蛋白質(zhì)產(chǎn)生增加的超微結(jié)構(gòu)跡象。相比之下，受累肌腱的其它區(qū)域可含有比正常少的肌腱細(xì)胞，其具有小的固縮核。腱退變的另一個特有特征是毛細(xì)血管和微動脈增生。通過電子顯微鏡術(shù)鑒定出腱退變中肌腱變性的若干亞類(1)低氧變性，(2)透明變性，(3)粘液樣變性(mucoid或myxoiddegeneration)，(4)纖維蛋白樣變性，(5)類脂質(zhì)變性，(6)鈣化，和(7)纖維軟骨和骨轉(zhuǎn)化。這些病理可以不同的發(fā)生率共存，這取決于解剖部位和引起這些病理的損傷的性質(zhì)(例如缺氧與機械載荷；急性與慢性損傷)。例如，粘液樣變性區(qū)域通過光學(xué)顯微鏡術(shù)、大的粘液斑和纖維之間的空泡表征。然而，類脂質(zhì)變性的特征在于肌腱內(nèi)脂質(zhì)蓄積異常，導(dǎo)致膠原纖維結(jié)構(gòu)被破壞。在一些情況下，腱退變伴發(fā)肌腱局灶性壞死或鈣化。它是引起關(guān)節(jié)周圍慢性疼痛的一個十分常見的原因。腱退變的特征還在于缺乏初期炎癥反應(yīng)。炎性細(xì)胞被認(rèn)為是修復(fù)過程的早期介質(zhì)，沒有它腱退變可能變成慢性病況。與腱退變有關(guān)的含水量的特征性增加和膠原基質(zhì)的結(jié)構(gòu)破壞可通過超聲檢查或磁共振成像診斷。癥狀可從肌腱局部區(qū)域的單純疼痛和僵硬到受損肌腱附近整個關(guān)節(jié)周圍的燒灼感而不同。對于許多患者，疼痛常常在活動期間和活動之后惡化，肌腱和關(guān)節(jié)區(qū)域在次日可能變得更僵硬，因為腫脹對肌腱的活動有重大影響。
腱炎是肌腱的炎性損傷，其特征在于像在腱退變中觀察到的變性，但還伴有伴發(fā)血管破壞和炎性修復(fù)反應(yīng)的肌腱炎癥。腱炎常常伴有成纖維細(xì)胞和成肌纖維細(xì)胞增殖，以及出血和組織化肉芽組織。腱炎一般通過所涉及的身體部位來命名，例如跟腱炎(影響跟腱)或髕腱炎(亦稱為“跳躍膝”，影響髕腱)，但是有某些例外，例如外上髁炎(亦稱為“網(wǎng)球肘”，影響橈側(cè)腕短伸肌腱)。癥狀可從持續(xù)性疼痛或疼痛和局部僵硬到發(fā)炎肌腱附近整個關(guān)節(jié)周圍的燒灼感而不同。在一些情況下，腱炎的特征在于腫脹，有時伴有發(fā)熱和發(fā)紅；在關(guān)節(jié)周圍還可有可見結(jié)節(jié)。對于許多患者，疼痛通常在活動期間和活動之后惡化，次日肌腱和關(guān)節(jié)區(qū)域可變得僵硬，因為肌肉因肌腱活動而收緊。現(xiàn)行治療在性質(zhì)上主要是治標(biāo)的，治療在傳統(tǒng)上集中在抗炎方法上，包括用非甾體抗炎藥(NSAID)治療、類固醇注射和物理治療，盡管腱退變往往與炎癥反應(yīng)不相關(guān)的事實。最近，測試了沖擊波療法、水平激光療法、硬化療法和其它實驗性治療。對于大部分，似乎一些治療(例如NSAID和可的松注射)提供短期緩解，而現(xiàn)行治療的長期益處尚不清楚。因此，需要與現(xiàn)有治療方式相比提供長期益處的治療腱病的改進(jìn)方法。TOGF存儲于血小板的α-顆粒中，并在組織修復(fù)期間由局部活化細(xì)胞(包括巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞)分泌。I3DGF-BB是急性肌腱損傷出血和炎癥的主要產(chǎn)物之一。血小板衍生生長因子-BB (I3DGF-BB)是一種傷口愈合蛋白質(zhì)，已知其對于包括骨(成骨細(xì)胞)和肌腱(肌腱細(xì)胞)細(xì)胞在內(nèi)的間充質(zhì)源細(xì)胞是趨化性的(細(xì)胞遷移)和促有絲分裂的(細(xì)胞增殖)。此外，已表明I3DGF-BB增量調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)，導(dǎo)致血管生成(血管重建)增加，這是成功再生過程所必需的。跟腱是人體中最厚和最強的肌腱，這允許它支持高載荷。其中跟腱起作用的機械載荷環(huán)境使之易于破裂。跟腱破裂可作為各種因素的結(jié)果而發(fā)生，然而破裂常常與退行性病變有關(guān)。(Mafulli N, Wong J, Almekinders L. Types and epidemiologyof tendinopathy (腱病的類型和流行病學(xué))· Clinics in Sports Medicine.2003; 22:675-692) 0在修復(fù)過程后，破裂的跟腱顯示I型膠原減少，而III型膠原的量相對增加。這種組成的變化導(dǎo)致交聯(lián)較少和抗張強度降低。甚至在愈合后，破裂的跟腱由于細(xì)胞過多、結(jié)構(gòu)破壞和膠原交聯(lián)減少而仍舊較弱(Maffulli N，Moller HDj Evans CH.Tendon Healing: Can it be Optimized (肌腱愈合可能最優(yōu)化嗎)？ British Journalof Sports Medicine, 2002 ; 36:315-316) 0對于跟腱破裂的最佳治療存在爭論，對保守(非手術(shù))和手術(shù)治療兩者有贊成的也有反對的。非手術(shù)治療導(dǎo)致較高的再破裂率且強度降低，但卻避免了與手術(shù)有關(guān)的費用和風(fēng)險。(Inglis AEj Scott WNj Sculco TP等· Ruptures of the tendo achillis: an objective assessment of surgical andnon-surgical treatment (跟腱破裂手術(shù)和非手術(shù)治療的客觀評價)· J Bone JointSurg Am. 1976;58:990—993 ;Nistor L. Surgical and Nonsurgical treatment ofAchilles tendon rupture: a prospective randomized trial (足艮鍵破裂的手術(shù)和非手術(shù)治療前瞻性隨機試驗)· J Bone Joint Surg Am 1981 63(3) :394-9 ；Chalmers J.Review Article: Treatment of Achilles tendon ruptures (綜述文章跟腱破裂的治療).Journal of Orthopaedic Surgery 2008 (I) : 97-99)。手術(shù)修復(fù)伴有手術(shù)和麻醉風(fēng)險；然而它提供增強的強度、較低的再破裂率和較早恢復(fù)體育活動。(Nistor L. Surgicaland Nonsurgical treatment of Achilles tendon rupture: a prospective randomizedtrial (跟腱破裂的手術(shù)和非手術(shù)治療前瞻性隨機試驗).J Bone Joint Surg Am 198163(3):394-9 ；Rettig A， Liotta FJj Klootwyk TE， Porter DAj Mieling P. Potential Risk of Rerupture in Primary Achilles Tendon Repair in Athletes Younger than 30years of Age (30歲以下運動員重大跟腱修復(fù)中再破裂的潛在風(fēng)險).Am J of SportsMed 2005:33(1) : 119-123)。不論臨床醫(yī)生對急性跟腱破裂的治療的偏愛，手術(shù)修復(fù)在活躍患者群的這些損傷的各種治療中將繼續(xù)占有一席之地。與現(xiàn)行的治療方式相比，強化生物修復(fù)過程從而改善肌腱愈合，可能導(dǎo)致更快恢復(fù)活動并改進(jìn)臨床結(jié)局。有關(guān)肌腱愈合的生物學(xué)增強已有若干體內(nèi)和體外研究。參見例如=SeehermanHJj Archambault JMj Rodeo SAj 等.rhBMP-12 accelerates healing of rotatorcuff repairs in a sheep model (rhBMP-12加快綿羊模型的肌腱套修復(fù)的愈合)· J Bone Joint Surg Am. 2008; 90 (10) :2206-2219 ；Chan BPj Fu SC，Qin L等.Supplementation-time dependence of growth factors in promoting tendonhealing (促進(jìn)肌腱愈合中的生長因子的補充-時間依賴性).Clin Orthop Relat Res·2006;448:240-247 ；Uggen JCj Dines J， Uggen CW等· Tendon gene therapy modulatesthe local repair enviroment in the shoulder (肌腱基因治療調(diào)節(jié)肩部的局部修復(fù)環(huán)境)· J Am Osteopath Assoc. 2005; 105 (I) : 20-21 ；Gelberman R，ThomopoulosSj Sakiyama-EIbert S 等.The early effects of sustained platelet-derivedgrowth factor administration on the functional and structural properties ofrepaired intrasynovial flexor tendons: an in vivo biomechanic study at 3 weeksin canines (持續(xù)給予血小板衍生生長因子對經(jīng)修復(fù)的滑膜內(nèi)屈肌腱的功能和結(jié)構(gòu)性質(zhì)的早期作用犬中三周的體內(nèi)生物力學(xué)).J Hand Surg Am. 2007; 32 (3) :373-379 ；Thomopoulos S， Das Rj Silva MJ 等.Enhanced flexor tendon healing throughcontrolled delivery of PDGF-BB (通過受控遞送 PDGF-BB 加快屈肌腱愈合)· J OrthopRes· 2009; 27 (9) : 1209-1215 ;Thomopoulos S，Zaegel M，Das R等· PDGF-BB releasedin tendon repair using a novel delivery system promotes cell proliferation andcollagen remodeling (采用新的遞送系統(tǒng)在肌腱修復(fù)中釋放的F1DGF-BB促進(jìn)細(xì)胞增殖和膠原重建)· J Orthop Res. 2007; 25 (10) : 1358-1368 ；Dines J, Grande D, Dines D.Tissue Engineering and Rotator Cuff Tendon Healing (組織工程學(xué)和肌腱套肌腱愈合)· J Shoulder Elbow Surg, 2007 年 9 月 /10 月204S-206S。以足夠的劑量并在合適的時程內(nèi)將rhTOGF-BB遞送至修復(fù)部位在實現(xiàn)所需臨床效果中很重要。若干研究描述了用生物成分(biologies)涂覆的縫線。參見例如RickertM, Jung M, Adiyaman M, Richter ff, Wimank HG. Growth and differentiation factor
5coated suture stimulates tendon healing in an Achilles tendon model inrats (生長和分化因子5涂覆的縫線刺激大鼠跟腱模型的肌腱愈合).Growth Factors2001; 19: 115-126 ；ffeiler A, Forster C, Hunt P, Falk R, Jung T, UnterhauserFN, Bergmann V, Schmidmaier G, Haas NP. The Influence of Locally AppliedPlatelet-Derived Growth Factor-BB on Free Tendon Graft Remodeling AfterAnterior Cruciate Ligament Reconstruction (前十字韌帶重建后局部施用血小板衍生生長因子-BB對游離肌腱移植物重建的影響).American Journal of Sports Medicine 2004; 32(4):881-891 ；Dines J, Weber L, Razzano P 等· The Effect of GrowthDifferentiation Factor-5-Coated Sutures on Tendon Repair in a Rat Model (大鼠模型中生長分化因子-5涂覆的縫線對肌腱修復(fù)的作用).J Shoulder Elbow Surg2007; 16:215S-221S ；Uggen C，Dines J, McGarry M 等· The effect of RecombinantHuman Platelet Derived growth Factor BB coated sutures on Rotator cuff Healingin a Sheep Model (綿羊模型中重組人血小板衍生生長因子BB涂覆的縫線對肌腱套愈合的作用)· Arthroscopy: 2010:26(11) : 1456-1462。所需要的是用于將TOGF遞送至肌腱以用于例如修復(fù)破裂的肌腱(例如破裂的跟腱)的改良縫線。概述
一方面，本文提供治療腱病的方法，所述方法包括給予受累部位有效量的包含TOGF和緩沖液的組合物。在一些實施方案中，腱病是腱退變。在一些實施方案中，腱病是腱炎。在一些實施方案中，腱病是腱鞘炎。在一些實施方案中，PDGF選自TOGF-AA、TOGF-BB、TOGF-AB、TOGF-CC和TOGF-DD。在一些實施方案中，TOGF是TOGF-BB。在一些實施方案中，TOGF是重組人(rh) PDGF-BB0在一些實施方案中，有效量的組合物包含介于每劑量約75 yg和約7，500 μ g之間的TOGF-BB。在一些實施方案中，有效量的組合物包含介于每劑量約500μ g-約1，000 μ g之間的TOGF-BB。在一些實施方案中，有效量的組合物包含介于每劑量約5，000 μ g至約7，500 μ g之間的H)GF-BB。在一些實施方案中，有效量的組合物包含介于每劑量約450 μ g-約3000 μ g之間的H)GF-BB。在一些實施方案中，有效量的組合物包含介于每劑量約400 μ g-約1000 μ g之間的H)GF-BB。在一些實施方案中，有效量的組合物包含介于每劑量約500 μ g-約900 yg之間的H)GF-BB。在一些實施方案中，有效量的組合物包含介于每劑量約600 μ g-約800 yg之間的H)GF-BB。在一些實施方案中，有效量的組合物包含介于每劑量約650 μ g-約750 yg之間的TOGF-BB。在一些實施方案中，有效量的組合物包含每劑量約700 μ g的TOGF-BB。在一些實施方案中，組合物的體積為約I. O-約2. O ml/劑量。在一些實施方案中，組合物的體積為約I. 5 ml/劑量。在一些實施方案中，緩沖液選自磷酸緩沖鹽溶液(“PBS”)、乙酸鈉、乙酸銨、乙酸、檸檬酸、檸檬酸鈉、三(羥甲基)氨基乙烷(“tris”)、N-2-羥乙基哌嗪-N’ -2-乙磺酸(“HEPES”)、3_(N_嗎啉代)丙磺酸(“MOPS”)、2-(N-嗎啉代)乙磺酸(“MES”)、N-(2-乙酰氨基)亞氨基二乙酸(“ADA”)、哌嗪-N，N’ -雙(2-乙磺酸)(“PIPES”)和N-(2-乙酰氨基)_2_氨基乙烷磺酸(“ACES”)。在一些實施方案中，緩沖液是乙酸鈉。在一些實施方案中，乙酸鈉的濃度介于約10 mM和約100 mM之間。在一些實施方案中，乙酸鈉的濃度約為20禮。在一些實施方案中，組合物的pH介于約4. O和約7. O之間。在一些實施方案中，組合物的pH約為6。在一些實施方案中，通過直接注射至受累部位來給藥。在一些實施方案中，受累部位是骨-肌腱連接處。在一些實施方案中，受累部位是肌腱。在一些實施方案中，腱病選自跟腱病、髕腱病、外上髁炎、內(nèi)上髁炎、足底筋膜炎和肌腱套腱病。在一些實施方案中，腱病是外上髁炎。在一些實施方案中，以單劑量給予組合物。在一些實施方案中，通過單次注射給予組合物。在一些實施方案中，以不止一個劑量給予組合物。在一些實施方案中，通過單次注射一周一次給予組合物達(dá)4周。在一些實施方案中，與基線相比，該方法導(dǎo)致在給藥約7天內(nèi)肌腱強度提高至少約60%。在一些實施方案中，與基線相比，該方法導(dǎo)致在給藥約7天內(nèi)肌腱強度提高至少約65%。在一些實施方案中，與基線相比，該方法導(dǎo)致在給藥約7天內(nèi)肌腱強度提高至少約70%。在一些實施方案中，該方法導(dǎo)致肌腱在給藥約7天內(nèi)達(dá)到其最終強 度的至少約80%，其中在給藥后約21天測量最終強度。在一些實施方案中，該方法導(dǎo)致肌腱在給藥約7天內(nèi)達(dá)到其最終強度的至少約85%，其中在給藥后約21天測量最終強度。在一些實施方案中，該方法導(dǎo)致肌腱在給藥約7天內(nèi)達(dá)到其最終強度的至少約90%，其中在給藥后約21天測量最終強度。另一方面，本文提供治療腱病的方法，所述方法包括給予受累部位有效量的由TOGF和緩沖液組成的組合物。在一些實施方案中，腱病是腱退變。在一些實施方案中，腱病是腱炎。在一些實施方案中，腱病是腱鞘炎。在一些實施方案中，I3DGF選自TOGF-AA、PDGF-BB、PDGF-AB, PDGF-CC 和 PDGF-DD。在一些實施方案中，PDGF 是 PDGF-BB。在一些實施方案中，I3DGF是重組人(rh) PDGF-BB0在一些實施方案中，有效量的組合物包含介于每劑量約75 μ g和約7，500 yg之間的TOGF-BB。在一些實施方案中，有效量的組合物包含介于每劑量約500 μ g-約1，000 μ g之間的TOGF-BB。在一些實施方案中，有效量的組合物包含介于每劑量約5，000 μ g至約7，500 μ g之間的H)GF-BB。在一些實施方案中，有效量的組合物包含介于每劑量約450 μ g-約3000 μ g之間的TOGF-BB。在一些實施方案中，有效量的組合物包含介于每劑量約400 μ g-約1000 yg之間的H)GF-BB。在一些實施方案中，有效量的組合物包含介于每劑量約500 μ g-約900 yg之間的H)GF-BB。在一些實施方案中，有效量的組合物包含介于每劑量約600 μ g-約800 yg之間的H)GF-BB。在一些實施方案中，有效量的組合物包含介于每劑量約650 μ g-約750 μ g之間的TOGF-BB。在一些實施方案中，有效量的組合物包含每劑量約700 yg的TOGF-BB。在一些實施方案中，組合物的體積為約I. O-約2. O ml/劑量。在一些實施方案中，組合物的體積為約I. 5ml/劑量。在一些實施方案中，緩沖液選自磷酸緩沖鹽溶液(“PBS”)、乙酸鈉、乙酸銨、乙酸、檸檬酸、檸檬酸鈉、三(羥甲基)氨基乙烷(“廿匕”)、^2-羥乙基哌嗪4’-2_乙磺酸(“HEPES”)、3-(N-嗎啉代)丙磺酸(“MOPS”)、2_(N_ 嗎啉代)乙磺酸(“MES”)、N_(2_ 乙酰氨基)亞氨基二乙酸(“ADA”)、哌嗪-N，N’-雙(2-乙磺酸)(“PIPES”)和N-(2-乙酰氨基)-2-氨基乙烷磺酸(“ACES”)。在一些實施方案中，緩沖液是乙酸鈉。在一些實施方案中，乙酸鈉的濃度介于約10 mM和約100 mM之間。在一些實施方案中，乙酸鈉的濃度約為20 mM。在一些實施方案中，組合物的pH介于約4. O和約7. O之間。在一些實施方案中，組合物的pH約為6。在一些實施方案中，通過直接注射至受累部位來給藥。在一些實施方案中，受累部位是骨-肌腱連接處。在一些實施方案中，受累部位是肌腱。在一些實施方案中，腱病選自跟腱病、髕腱病、外上髁炎、內(nèi)上髁炎、足底筋膜炎和肌腱套腱病。在一些實施方案中，腱病是外上髁炎。在一些實施方案中，以單劑量給予組合物。在一些實施方案中，通過單次注射給予組合物。在一些實施方案中，以不止一個劑量給予組合物。在一些實施方案中，通過單次注射一周一次給予組合物達(dá)4周。在一些實施方案中，與基線相比，該方法導(dǎo)致在給藥約7天內(nèi)肌腱強度提高至少約60%。在一些實施方案中，與基線相比，該方法導(dǎo)致在給藥約7天內(nèi)肌腱強度提高至少約65%。在一些實施方案中，與基線相比，該方法導(dǎo)致在給藥約7天內(nèi)肌腱強度提高至少約70%。在一些實施方案中該方法導(dǎo)致肌腱在給藥約7天內(nèi)達(dá)到其最終強度的至少約80%，其中在給藥后約21天測量最終強度。在一些實施 方案中，該方法導(dǎo)致肌腱在給藥約7天內(nèi)達(dá)到其最終強度的至少約85%，其中在給藥后約21天測量最終強度。在一些實施方案中，該方法導(dǎo)致肌腱在給藥約7天內(nèi)達(dá)到其最終強度的至少約90%，其中在給藥后約21天測量最終強度。在一些實施方案中，該方法由給予受累部位有效量的由I3DGF和緩沖液組成的組合物組成。另一方面，本文提供用于治療腱病的包含有效量的I3DGF和緩沖液的組合物。在一些實施方案中，腱病是腱退變。在一些實施方案中，腱病是腱炎。在一些實施方案中，腱病是腱鞘炎。在一些實施方案中，PDGF 選自 PDGF-AA、PDGF-BB, PDGF-AB, PDGF-CC 和 PDGF-DD。在一些實施方案中，I3DGF是TOGF-BB。在一些實施方案中，I3DGF是重組人(rh) PDGF-BB0在一些實施方案中，有效量包含介于每劑量約75 μ g和約7，500 yg之間的H)GF-BB。在一些實施方案中，有效量包含介于每劑量約500 μ g-約1,000 yg之間的H)GF-BB。在一些實施方案中，有效量包含介于每劑量約5，000 yg至約7，500 μ g之間的H)GF-BB。在一些實施方案中，有效量包含介于每劑量約450 μ g-約3000 μ g之間的H)GF-BB。在一些實施方案中，有效量包含介于每劑量約400 μ g-約1000 yg之間的H)GF-BB。在一些實施方案中，有效量包含介于每劑量約500 μ g-約900 yg之間的H)GF-BB。在一些實施方案中，有效量包含介于每劑量約600 μ g-約800 yg之間的H)GF-BB。在一些實施方案中，有效量包含介于每劑量約650 μ g-約750 yg之間的H)GF-BB。在一些實施方案中，有效量包含每劑量約700 μ g的TOGF-BB。在一些實施方案中，組合物的體積為約I. O-約2. Oml/劑量。在一些實施方案中，組合物的體積為約1.5 ml/劑量。在一些實施方案中，緩沖液選自磷酸緩沖鹽溶液(“PBS”)、乙酸鈉、乙酸銨、乙酸、檸檬酸、檸檬酸鈉、三(羥甲基)氨基乙烷(“tris”)、N-2-羥乙基哌嗪-N’ -2-乙磺酸(“HEPES”)、3_(N_嗎啉代)丙磺酸(“MOPS”)、2-(N-嗎啉代)乙磺酸(“MES”)、N_(2_乙酰氨基)亞氨基二乙酸(“ADA”)、哌嗪-N, N，-雙(2-乙磺酸)(“PIPES”)和N-(2-乙酰氨基)_2_氨基乙烷磺酸(“ACES”)。在一些實施方案中，緩沖液是乙酸鈉。在一些實施方案中，乙酸鈉的濃度介于約10 mM和約100 mM之間。在一些實施方案中，乙酸鈉的濃度約為20禮。在一些實施方案中，組合物的pH介于約4. O和約7. O之間。在一些實施方案中，組合物的pH約為6。在一些實施方案中，治療包括通過直接注射到受累部位來給予組合物。在一些實施方案中，受累部位是骨-肌腱連接處。在一些實施方案中，受累部位是肌腱。在一些實施方案中，腱病選自跟腱病、髕腱病、外上髁炎、內(nèi)上髁炎、足底筋膜炎和肌腱套腱病。在一些實施方案中，腱病是外上髁炎。在一些實施方案中，以單劑量給予組合物。在一些實施方案中，通過單次注射給予組合物。在一些實施方案中，以不止一個劑量給予組合物。在一些實施方案中，通過單次注射一周一次給予組合物達(dá)4周。在一些實施方案中，與基線相比，治療導(dǎo)致在給藥約7天內(nèi)肌腱強度提高至少約60%。在一些實施方案中，與基線相比，治療導(dǎo)致在給藥約7天內(nèi)肌腱強度提高至少約65%。在一些實施方案中，與基 線相比，治療導(dǎo)致在給藥約7天內(nèi)肌腱強度提高至少約70%。在一些實施方案中，治療導(dǎo)致肌腱在給藥約7天內(nèi)達(dá)到其最終強度的至少約80%，其中在給藥后約21天測量最終強度。在一些實施方案中，治療導(dǎo)致肌腱在給藥約7天內(nèi)達(dá)到其最終強度的至少約85%，其中在給藥后約21天測量最終強度。在一些實施方案中，治療導(dǎo)致肌腱在給藥約7天內(nèi)達(dá)到其最終強度的至少約90%，其中在給藥后約21天測量最終強度。在一些實施方案中，組合物由有效量的I3DGF和緩沖液組成。另一方面，本文提供與本文所述方法關(guān)聯(lián)的本文所述I3DGF組合物的用途，除非另有說明或如從具體的上下文來看是顯然的。本文所述TOGF組合物還可用于制備用于本文所述方法的藥物。附圖簡述
圖I表示rhroGF-BB治療對肌腱細(xì)胞細(xì)胞遷移的作用。圖2表示rhH)GF-BB治療對肌腱細(xì)胞細(xì)胞增殖的作用，通過BrdU摻入測定。圖3表示右腿肌腱-跟骨(calcaneous)連接處的注射部位。用使用28. 5G針的胰島素注射器進(jìn)行注射。圖4表示在處理用于生物力學(xué)測試的試驗動物后大鼠趾-跟-腓腸肌復(fù)合體的代表性圖像。圖5表示跟骨(C)-跟腱⑴附著部位側(cè)邊矢狀切面的代表性圖像。圖6A表示治療后7天膠原酶誘導(dǎo)的大鼠跟腱損傷模型中，肌腱內(nèi)施用重組人血小板衍生生長因子同種型BB (“rhroGF-BB”)的總體觀察的肌腱生長的劑量反應(yīng)研究結(jié)果。rhPDGF-BB治療后7天，單次注射中等(10. 2 μ g)或高(102 μ g)劑量的rhH)GF-BB引起肌腱大小顯著增加。圖6B表示rhH)GF-BB治療后21天同一研究的結(jié)果。治療后21天，單次注射高(102 μ g)劑量的rhroGF-BB對肌腱大小的作用與僅用乙酸鈉緩沖液注射的作用相當(dāng)。圖7是與圖6A和圖6B相同的數(shù)據(jù)的不同圖示，表示在rhH)GF-BB治療后7天和21天總體肌腱大小(O =無生長至3 =強烈生長)。圖8表示在rhH)GF-BB治療后7天和21天跟骨附著部的肌腱寬度(μ m 土 SEM)。圖9表示在rhH)GF-BB治療后7天和21天肌腱體處的肌腱寬度(μ m 土 SEM)。


圖10表示在rhH)GF-BB治療后7天和21天rhH)GF-BB對細(xì)胞增殖速率(細(xì)胞計數(shù)土 SEM)的作用。
圖11表示跟腱的機械性質(zhì)在rhH)GF-BB治療后7天和21天的最大破裂載荷(N土 SEM)。
圖12表不IV給藥后的平均血清rhFOGF-BB濃度-時間值(concentration-timevalue)。
圖13表示在IT給藥后的平均血清rhH)GF-BB濃度-時間值。
圖14A表示在各個時間點從Vicryl縫線釋放的rhTOGF-BB的量的體外釋放概況。
圖14B表示在48小時內(nèi)體外從4_0 Vicryl縫線累積釋放的rhTOGF-BB (平均值土 SEM)。
圖14C表示rhroGF-BB的估計體內(nèi)累積劑量對比縫線涂覆溶液中的起始rhPDGF-BB 濃度。
圖14D表示植入的4-0 Vicryl縫線長度。詳述
本文引用的所有參考文獻(xiàn)，包括而不限于專利、專利申請和科技參考文獻(xiàn)，均在此通過引用以其整體結(jié)合到本文中。 本發(fā)明的組合物和方法出人意料地導(dǎo)致腱病治療得到改進(jìn)。在一些實施方案中，本發(fā)明的組合物和方法導(dǎo)致肌腱的強度提高和肌腱強度復(fù)原的速度加快。在一些實施方案中，本發(fā)明的組合物和方法導(dǎo)致肌腱的強度提高。在一些實施方案中，本發(fā)明的組合物和方法導(dǎo)致肌腱強度復(fù)原的速度加快。例如，隨著肌腱在損傷后愈合，肌腱的生物力學(xué)強度隨著肌腱愈合的過程而提高。給予本發(fā)明的組合物可導(dǎo)致更快地提高肌腱強度。雖不希望受理論束縛，但強度的這種更快速的提高可能有助于促進(jìn)肌腱的愈合；只要承載不進(jìn)一步加大肌腱損傷，肌腱上的承載一般提高肌腱的愈合反應(yīng)，因為它一般引起組織重建和重構(gòu)改進(jìn)。肌腱強度的較快的初始提高(例如因給予本發(fā)明的組合物引起)可導(dǎo)致更快地在肌腱上開始承載的能力，因此進(jìn)一步提高肌腱愈合反應(yīng)。雖不希望受理論束縛，可通過細(xì)胞增殖和/或胞外基質(zhì)的產(chǎn)生增加，和/或通過組織的組構(gòu)改進(jìn)(例如胞外基質(zhì)組構(gòu)的改進(jìn))引起肌腱強度的改善。此外，雖不希望受理論束縛，但本發(fā)明人出人意料地發(fā)現(xiàn)當(dāng)將本發(fā)明的組合物直接給予肌腱(例如通過注射)時，PDGF保持定位于給藥部位(例如在注射部位)。例如，如在下面的實施例5中的進(jìn)一步詳述，預(yù)料不到的是給予由緩沖液中的TOGF組成的組合物可引起I3DGF保持定位于注射部位。定義
本文所用術(shù)語“治療”是指設(shè)計以改變待治療病癥(例如腱病，例如腱退變、腱炎或腱鞘炎)的臨床病理的天然進(jìn)程的臨床干預(yù)。所需治療效果包括例如以下的一種或多種減輕受累關(guān)節(jié)或肢體的疼痛或僵硬、提高受累關(guān)節(jié)或肢體的活動性和強度、減緩腱病進(jìn)展的速率、減輕炎癥、提高肌腱強度、提高肌腱強度恢復(fù)的速率、改善或減輕病癥狀態(tài)和緩解或改善預(yù)后。例如，如果與腱病相關(guān)的一種或多種癥狀減輕或消除，則個體被成功“治療”。本文所用術(shù)語“有效量”是指對達(dá)到所需治療或預(yù)防效果有效(以劑量計且持續(xù)所需的時間)的最低限度的量?？梢砸淮位蚨啻谓o藥來提供有效量。本文提及的值或參數(shù)前的“約”也包括(和描述)涉及該值或參數(shù)本身的實施方案。本文和隨附權(quán)利要求書中所用的單數(shù)形式包括復(fù)數(shù)所指物，除非文中另明確說明。例如，提及“roGF同二聚體”是提及一個或多個roGF同二聚體，并包括其本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的等同物等。要理解的是，本文所述本發(fā)明的所有方面和實施方案包括“包含”、“包括”各方面和實施方案及“基本由各方面和實施方案組成”。要理解的是，“基本由所述要求組成的”的方法或組合物只包括規(guī)定的步驟或材料和不會在實質(zhì)上影響所述方法和組合物的基本特征和新的特征的步驟或材料(例如給予受累部位有效量的基本上由roGF和緩沖液組成的組合物或基本上由有效量的緩沖溶液中的roGF組成的組合物)。血小板衍生生長因子及其組合物
本文所用術(shù)語“血小板衍生生長因子”或“roGF”是指4種不同的TOGF同種型的任一種，其通過兩種不同的受體激活細(xì)胞反應(yīng)。所述同種型包括A (觀察到作為同二聚體(命名為PDGF-AA)并作為與B同種型的異二聚體(命名為TOGF-AB)的一部分)、B (觀察到作為同二聚體(命名為TOGF-BB)并作為與A同種型的異二聚體(命名為TOGF-AB)的一部分)、C(觀察到為同二聚體，其命名為I3DGF-CC)和D (觀察到為同二聚體，其命名為TOGF-DD)。在 本文中總的來說，術(shù)語“roGF” 一般是指已知的TOGF同二聚體和異二聚體(例如roGF-AA、PDGF-BB、PDGF-AB、PDGF-CC 和 PDGF-DD)。本文提供治療個體的腱病的方法和用于這些方法的組合物?？傮w來說，治療方法包括將包含F(xiàn)1DGF的組合物給予患有腱病的個體的受累部位。準(zhǔn)確地講,治療方法包括將包含TOGF和緩沖液的組合物給予腱病的部位。在一些實施方案中，組合物包含I3DGF和緩沖液(例如I3DGF的緩沖溶液)。在一些實施方案中，組合物包含I3DGF和緩沖液。在一些實施方案中，PDGF包括選自 PDGF-AA、PDGF-BB、PDGF-AB、PDGF-CC、PDGF-DD 的 PDGF 二聚體及其混合物和衍生物。在一些實施方案中，PDGF 二聚體是同二聚體。在一些實施方案中，PDGF同二聚體選自H)GF-AA、PDGF-BB、PDGF-CC和PDGF-DD。在一些實施方案中，PDGF同二聚體是PDGF-BB。在一些實施方案中，PDGF 二聚體是異二聚體。在一些實施方案中，PDGF異二聚體是TOGF-AB。在一些實施方案中，PDGF可獲自天然來源。在一些實施方案中，PDGF可通過重組DNA技術(shù)產(chǎn)生。在一些實施方案中，可采用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的肽合成技術(shù)例如固相肽合成，來產(chǎn)生I3DGF或其片段。當(dāng)從天然來源獲得時，TOGF可來源于生物流體。在一些實施方案中，生物流體可包括與活體有關(guān)的任何處理或未處理的流體(包括血液)。生物流體還可包括血液成分，包括血小板濃縮液、單采血液成分提取的血小板、富集血小板的血漿、血漿、血清和新鮮冷凍的血漿。生物流體可包括從血漿分離并重新懸浮于生理液體或緩沖液的血小板。當(dāng)通過重組DNA技術(shù)產(chǎn)生時，可將編碼單一單體(例如TOGF B鏈或A鏈)的DNA序列插入培養(yǎng)的用于表達(dá)的原核細(xì)胞或真核細(xì)胞中，以便隨后產(chǎn)生同二聚體(例如PDGF-BB或TOGF-AA)。在一些實施方案中，PDGF包括I3DGF同二聚體(例如I3DGF-AA、PDGF-BB, PDGF-CC或TOGF-DD)。在一些實施方案中，PDGF異二聚體可如下產(chǎn)生將編碼異二聚體的兩個單體單元的DNA序列插入培養(yǎng)的原核細(xì)胞或真核細(xì)胞中，使翻譯的單體單元通過細(xì)胞加工產(chǎn)生異二聚體(例如H)GF-AB)。在一些實施方案中，I3DGF包含TOGF異二聚體(例如I3DGF-AB)。市售的重組人I3DGF-BB可獲自許多商業(yè)來源，包括但不限于LeincoTechnologies, Inc. (St. Louis, MO)和 R&D Systems, Inc. (Minneapolis, MN) 0在本文描述的一些實施方案中，PDGF包含重組人TOGF (“rhTOGF”)。在一些實施方案中，重組人 PDGF ( “rhPDGF” )是選自 rhPDGF_AA、rhPDGF-BB、rhPDGF_AB、rhPDGF_CC、rhPDGF-DD的I3DGF 二聚體及其混合物和衍生物。在一些實施方案中，重組人I3DGF是rhPDGF同二聚體。在一些實施方案中，重組人I3DGF同二聚體選自rhH)GF-AA、rhPDGF-BB,rhPDGF-CC和rhTOGF_DD。在一些實施方案中，重組人TOGF同二聚體是rhTOGF_BB。在一些實施方案中，重組人I3DGF是rhTOGF異二聚體。在一些實施方案中，重組人I3DGF異二聚體是 rhPDGF-AB。在一些實施方案中，PDGF-B包含一個或多個下列片段完整人B鏈的氨基酸1_31、1-32、33-108、33-109和/或1-108。美國專利號5，516，896的
圖15中提供人PDGF B鏈的完整氨基酸序列(氨基酸1-109)。要理解的是，本發(fā)明的TOGF-BB組合物可包含完整人TOGF-B (氨基酸1-109)及其片段的組合?？墒褂肐3DGF的其它片段，例如美國專利號5，516，896中公開的片段。在一些實施方案中，PDGF-BB包含全長人TOGF-B (氨基酸1-109)的至少65%。在一些實施方案中，PDGF-BB包含全長人TOGF-B (氨基酸1-109)的至少75%、80%、85%、90%、95% 或 99%。在一些實施方案中，組合物包含選自PDGF-AA、PDGF-BB、PDGF-AB、PDGF-CC和PDGF-DD的TOGF 二聚體(例如rhTOGF 二聚體)，且組合物包含以下濃度范圍的I3DGF 二聚體約O. 01 mg/ml-約 10. O mg/ml、約O. 05 mg/ml-約 5. O mg/ml、約O. I mg/ml-約 I. O mg/ml 或約 O. I mg/ml-約 2. O mg/ml、約 O. I mg/ml-約 3. O mg/ml、約 O. I mg/ml-約 4. O mg/ml、約 O. I mg/ml-約 O. 4 mg/ml、約 O. I mg/ml-約 5. O mg/ml、約 O. 9 mg/ml-約 I. 5 mg/ml。在一些實施方案中，組合物包含濃度為約3.4 mg/ml的TOGF 二聚體。在一些實施方案中，組合物包含濃度為約1.0 mg/ml的I3DGF 二聚體。在一些實施方案中，組合物包含濃度為約
O.34 mg/ml的I3DGF 二聚體。在一些實施方案中，組合物包含任一以下濃度的I3DGF 二聚體約 O.05 mg/ml、約 O.I mg/ml、約 O.15 mg/ml、約 O.2 mg/ml、約 O.25 mg/ml、約 O.3 mg/ml、約 O.35 mg/ml、約O.4 mg/ml、約O.45 mg/ml、約 O.5 mg/ml、約O.55 mg/ml、約 O.6 mg/ml、約 O.65 mg/ml、約O.7 mg/ml、約O.75 mg/ml、約O.8 mg/ml、約O.85 mg/ml、約 O.9 mg/ml、約 O. 95 mg/ml、約 I. O mg/ml、約 I. 5 mg/ml、約 2. O mg/ml、約 2. 5 mg/ml、約 3. O mg/ml、約3. 5 mg/ml、約4. O mg/ml、約4. 5 mg/ml或約5. O mg/ml。要理解的是,這些濃度只是具體實施方案的實例，PDGF 二聚體的濃度可落入上述任何濃度范圍內(nèi)。在一些實施方案中，PDGF 二聚體(例如rhTOGF 二聚體)是TOGF-BB。在一些實施方案中，組合物包含以下濃度范圍的I3DGF-BB :約O. 01 mg/ml-約10. O mg/ml、約O. 05 mg/ml-約 5. O mg/ml、約 O. I mg/ml-約 I. O mg/ml 或約 O. I mg/ml-約 2. O mg/ml、約 O. I mg/ml-約 3. O mg/ml、約 O. I mg/ml-約 4. O mg/ml、約 O. I mg/ml-約 5. O mg/ml、約 O. I mg/ml-約O. 4 mg/ml、約O. 9 mg/ml-約1.5 mg/ml。在一些實施方案中，組合物包含濃度為約3. 4 mg/ml的TOGF-BB。在一些實施方案中，組合物包含濃度為約I. O mg/ml的TOGF-BB。在一些實施方案中，組合物包含濃度為約O. 34 mg/ml的TOGF-BB。在一些實施方案中，組合物包含任一種下列濃度的 PDGF-BB :約 O. 05 mg/ml、約 O. I mg/ml、約 O. 15 mg/ml、約 O. 2 mg/ml、約O.25 mg/ml、約O.3 mg/ml、約O.35 mg/ml、約O.4 mg/ml、約 O.45 mg/ml、約O.5 mg/ml、約O.55 mg/ml、約 O.6 mg/ml、約O.65 mg/ml、約O.7 mg/ml、約O.75 mg/ml、約O.8 mg/ml、約 O. 85 mg/ml、約 O. 9 mg/ml、約 O. 95 mg/ml、約 I. O mg/ml、約 I. 5 mg/ml、約 2. O mg/ml、約 2. 5 mg/ml、約 3. O mg/ml、約 3. 5 mg/ml、約 4. O mg/ml、約 4. 5 mg/ml 或約 5. O mg/ml。要理解的是，這些濃度只是具體實施方案的實例，且rhH)GF-BB的濃度可落入上述任何濃度范圍內(nèi)。
在一些實施方案中，PDGF選自 PDGF-AA、PDGF-BB, PDGF-AB, PDGF-CC 和 PDGF-DD。不同量的roGF可用于本發(fā)明的組合物?？刹捎玫膔oGF的量包括但不限于以下范圍的量約 I Ug-約 50 mg、約 10 μ g-約 25 mg、約 100 μ g-約 10 mg、約 250 μ g-約 5 mg 和約450 Ug-約3 mg。在一些實施方案中，PDGF是TOGF-BB。不同量的I3DGF-BB可用于本發(fā)明的組合物。可采用的I3DGF-BB的量包括但不限于以下范圍的量約I μ g_約50 mg、約10μ g-約 25 mg、約 100 μ g-約 10 mg、約 250 μ g-約 5 mg 和約 450 μ g-約 3 mg。在本發(fā)明的一些實施方案中，可通過采用例如美國專利號6，221，625,5, 747，273和5，290，708中描述的酶聯(lián)免疫測定法或本領(lǐng)域已知的用于測定TOGF濃度的任何其它測定法，來測定 PDGF (例如 rhPDGF)(包括 PDGF-AA、PDGF-BB、PDGF-AB、PDGF-CC 和 PDGF-DD)的濃度。當(dāng)提供于本文中時，rhTOGF的摩爾濃度根據(jù)TOGF同二聚體的分子量(例如PDGF-BB, MW 約 25 kDa)確定。在本發(fā)明的一些實施方案中，PDGF (例如rhTOGF)可以是高度純化的形式。在加到本發(fā)明的溶液中之前，本文使用的純化I3DGF包括具有大于約95% (重量)TOGF的組合物。溶液可采用任何藥學(xué)上可接受的緩沖劑或稀釋劑制備。在一些實施方案中，PDGF可以 是基本純的。在加入本發(fā)明的溶液中之前，本文使用的基本純化的I3DGF包括具有約5%-約95% (重量)TOGF的組合物。在一個實施方案中，在加入本發(fā)明的溶液中之前，基本純化的I3DGF包括具有約65%-約95% (重量)roGF的組合物。在一些實施方案中，在加入本發(fā)明的溶液中之前，基本純化的I3DGF包括具有約70%-約95%、約75%-約95%、約80%-約95%、約85%-約95%或約90%-約95% (重量)PDGF的組合物?？蓪⒓兓腎3DGF和基本純化的PDGF加入組合物中。在又一個實施方案中，I3DGF可以是部分純化的。在富集血小板的血漿、新鮮冷凍的血漿或需要收集和分離以產(chǎn)生roGF的任何其它血液產(chǎn)品的情況下，本文使用的部分純化的roGF包括具有roGF的組合物。本發(fā)明的實施方案預(yù)期，本文提供的任何roGF同種型(包括同二聚體和異二聚體)可以是純化的或部分純化的。本發(fā)明的包含roGF混合物的組合物可以部分純化的比例包含roGF同種型或TOGF片段。在一些實施方案中，可按照美國申請順序號11/159，533 (美國專利公布號2006/0084602 Al)中披露的方法制備部分純化的和純化的H)GF。在本文所述的任何實施方案中，高度純化的或部分純化的I3DGF選自TOGF-AA、PDGF-BB,PDGF-AB,PDGF-CC和TOGF-DD。在本文所述的任何實施方案中，高度純化的或部分純化的 I3DGF 是 I3DGF-BB。緩沖液
在一些實施方案中，組合物包含roGF和緩沖液，優(yōu)選藥學(xué)上可接受的緩沖液。適用于本發(fā)明的roGF溶液的緩沖液可包括但不限于碳酸鹽、磷酸鹽(例如磷酸緩沖鹽溶液)、鹽水、組氨酸、乙酸鹽(例如乙酸鈉或乙酸銨)、酸性緩沖液(例如乙酸、檸檬酸、檸檬酸鈉和HCl)和有機緩沖液例如賴氨酸、TriS緩沖液(例如三(羥甲基)氨基乙烷)、N-2-羥乙基哌嗪-N’ -2-乙磺酸(HEPES)、3-(N-嗎啉代)丙磺酸(MOPS)、2_(N_嗎啉代)乙磺酸(MES)、N-(2-乙酰氨基)亞氨基二乙酸(“ADA”)、哌嗪-N，N’-雙(2-乙磺酸)(PIPES)和N-(2-乙酰氨基)_2_氨基乙燒磺酸(ACES)?？筛鶕?jù)與TOGF的生物相容性及緩沖液阻止不良蛋白質(zhì)修飾的能力來選擇緩沖液。另外，可根據(jù)與宿主組織的相容性和藥學(xué)上的可接受性來選擇緩沖液。在一些實施方案中，PDGF組合物包含乙酸鈉緩沖液中的H)GF。在一些實施方案中，乙酸鈉緩沖液中的I3DGF選自PDGF-AA、PDGF-BB, PDGF-AB, PDGF-CC和PDGF-DD。在一些實施方案中，乙酸鈉緩沖液中的 PDGF 是 rhPDGF-BB?？梢圆煌哪枬舛仁褂镁彌_液，例如約O. I mM-約100 mM、約I mM_約100 mM、約 10 mM-約 100 mM、約 I mM-約 50 mM、約 5 mM-約 40 mM、約 10 mM-約 30 mM 或約 15mM-約25 mM或這些范圍內(nèi)的任何摩爾濃度。在一些實施方案中，以約20 mM的摩爾濃度使用乙酸鹽緩沖液?？梢圆煌臐舛仁褂镁彌_液，例如約O. 01 mg/ml-約10 mg/ml、0. 05mg/ml-約 5 mg/ml、約 O. 5 mg/ml-約 5 mg/ml>O. I mg/ml-約 I mg/ml 和約 O. 5 mg/ml-約I mg/ml或這些范圍內(nèi)的任何濃度。在另一個實施方案中，包含I3DGF的溶液可通過將凍干的I3DGF溶于水中制備，其中在溶解前，將roGF從合適的緩沖液中凍干。
按照本發(fā)明的一些實施方案，包含I3DGF和緩沖液的組合物的pH的范圍可為約3. O-約8. O或約4. O-約7. O。在一些實施方案中，包含I3DGF和緩沖液的組合物的pH的范圍為約5. O-約8. 0，更優(yōu)選約5. 5-約7. 0，最優(yōu)選約5. 5-約6. 5或這些范圍內(nèi)的任何值。在本文描述的一些實施方案中，PDGF組合物的pH介于約4. O和約7. O之間。在本文描述的一些實施方案中，I3DGF組合物的pH介于約5. O和約7. O之間。在本文描述的一些實施方案中，PDGF組合物的pH為約4. O、約5. O、約6. O或約7. O。在一些實施方案中，包含I3DGF和緩沖液的組合物的PH可與I3DGF或任何其它所需要的生物活性劑的持久穩(wěn)定性和功效相容。TOGF —般在酸性環(huán)境中更穩(wěn)定。因此，按照一些實施方案，本文提供I3DGF組合物的酸性貯存制劑。按照一些實施方案，包含I3DGF和緩沖液的組合物的pH優(yōu)選為約3. O-約7. 0，更優(yōu)選約4. O-約6. 5。然而，在具有中性pH范圍的溶液中可使TOGF的生物活性最佳。因此，在一些實施方案中，本文提供包含I3DGF和緩沖液的組合物的中性pH制劑。按照該實施方案，組合物的PH優(yōu)選為約5. O-約8. 0，更優(yōu)選約5. 5-約7. 0，最優(yōu)選約5. 5-約6. 5。在一些實施方案中，可通過本文所述緩沖液控制包含I3DGF的溶液的pH。不同的蛋白質(zhì)顯示不同的PH范圍，在此范圍內(nèi)蛋白質(zhì)是穩(wěn)定的。蛋白質(zhì)穩(wěn)定性主要受蛋白質(zhì)的等電點和電荷影響。PH范圍可影響蛋白質(zhì)的構(gòu)象結(jié)構(gòu)以及蛋白質(zhì)對蛋白水解降解、水解、氧化和可引起蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和/或生物活性改變的其它過程的敏感性。在一些實施方案中，本文提供的I3DGF組合物包含選自TOGF-AA、PDGF-BB,PDGF-CC、PDGF-DD和PDGF-AB的PDGF和選自PBS、乙酸鈉、乙酸銨、乙酸、檸檬酸、檸檬酸鈉、三(羥甲基)氨基乙烷、HEPES, MOPS、MES、ADA、PIPES和ACES的緩沖液。在一些實施方案中，本文提供的I3DGF組合物包含rhH)GF-BB和選自PBS、乙酸鈉、乙酸銨、乙酸、檸檬酸、檸檬酸鈉、三(羥甲基)氨基乙烷、HEPES, MOPS、MES、ADA、PIPES和ACES的緩沖液。在一些實施方案中，I3DGF組合物包含rhH)GF-BB和PBS。在一些實施方案中，I3DGF組合物包含rhH)GF-BB和乙酸鈉。在一些實施方案中，I3DGF組合物包含rhPDGF-BB和乙酸銨。在一些實施方案中，I3DGF組合物包含rhH)GF-BB和乙酸。在一些實施方案中，I3DGF組合物包含rhH)GF-BB和檸檬酸。在一些實施方案中，I3DGF組合物包含rhH)GF-BB和檸檬酸鈉。在一些實施方案中，PDGF組合物包含rhH)GF-BB和三(羥甲基)氨基乙烷。在一些實施方案中，rhPDGF組合物包含I3DGF-BB和HEPES。在一些實施方案中，PDGF組合物包含rhH)GF-BB和MOPS。在一些實施方案中，roGF組合物包含rhroGF-BB和MES。在一些實施方案中，I3DGF組合物包含rhH)GF-BB和ADA。在一些實施方案中，PDGF組合物包含rhH)GF-BB和PIPES。在一些實施方案中，PDGF組合物包含rhH)GF-BB和ACES。在本文描述的一些實施方案中，緩沖液的濃度介于I mM和1000 mM之間。在本文描述的一些實施方案中，緩沖液的濃度介于10 mM和1000 mM之間。在本文描述的一些實施方案中，緩沖液的濃度介于100 mM和1000 mM之間。在本文描述的一些實施方案中，緩沖液的濃度介于5 mM和500 mM之間。在本文描述的一些實施方案中，緩沖液的濃度介于50 mM和500 mM之間。在本文描述的一些實施方案中，緩沖液的濃度介于10 mM和100 mM之間。在本文描述的一些實施方案中，緩沖液的濃度介于20 mM和200 mM之間。在本文描述的一些實施方案中，緩沖液的濃度為10 mM、20 mM、30 mM、40 mM、50 mM、60 mM、70 mM、80mM、90mM 或 100 mM。在一些實施方案中，PDGF組合物包含rhH)GF-AA和約pH=6. O的20 mM乙酸鈉。在一些實施方案中，PDGF組合物包含rhPDGF-AB和約pH=6. O的20 mM乙酸鈉。在一些實施方案中，PDGF組合物包含rhH)GF-BB和約pH=6. O的20 mM乙酸鈉。在一些實施方案中，PDGF組合物包含rhH)GF-CC和約pH=6. O的20 mM乙酸鈉。在一些實施方案中，PDGF組合物包含rhPDGF-DD和約pH=6. O的20 mM乙酸鈉。劑量和給藥方案
可根據(jù)肌腱治療面積的相對大小，由在大鼠肌腱模型中鑒定的roGF的有效劑量推算用于其它個體(例如人)的有效量。例如，人跟腱的治療面積約為大鼠跟腱治療面積的69倍，因此用于人患者的roGF的有效量或劑量可約為在大鼠肌腱模型中確定的roGF的有效量或劑量的69倍。通過給予本文提供的roGF組合物遞送的示例性有效量或劑量包括但不限于約450 μ g-約3，000 μ g/劑量、約I μ g_約10，000 μ g/劑量，包括例如以下的任一種約Iμ g-約 7，500 μ g/劑量、約 I μ g-約 5，000 Ug/劑量、約 I μ g-約 2，500 yg/劑量、約
Iμ g-約1,000 μ g/劑量、約I μ g-約500 Ug/劑量、約I μ g_約250 Ug/劑量、約Iμ g_ 約 100 μ g/劑量、約 10 μ g-約 10，000 Ug/劑量、約 10 μ g_ 約 7，500 μ g/劑量、約 10 μ g-約 5，000 μ g/劑量、約 10 μ g-約 2，500 μ g/劑量、約 10 μ g-約 1,000 μ g/劑量、約10 μ g-約500 μ g/劑量、約10 μ g-約250 μ g/劑量、約10 μ g_約100 μ g/劑量、約 25 μ g-約 10，000 μ g/劑量、約 25 μ g-約 7，500 μ/劑量、約 25 μ g-約 5，000μ g/劑量、約 25 μ g-約 2，500 μ g/劑量、約 25 μ g-約 1，000 μ g/劑量、約 25 yg-約500 μ g/劑量、約25 μ g-約250 μ g/劑量、約25 μ g-約100 μ g/劑量、約50 Ug-約
10.000μ g/劑量、約 50 μ g-約 7，500 Ug/劑量、約 50 μ g-約 5，000 Ug/劑量、約 50μ g-約 2，500 μ g/劑量、約 50 μ g-約 1,000 μ g/劑量、約 50 μ g_ 約 500 Ug/劑量、約50 μ g-約250 μ g/劑量、約50 μ g-約100 μ g/劑量、約50 μ g-約100 Ug/劑量、約75 μ g-約 10，000 μ g/劑量、約 75 μ g-約 7，500 Ug/劑量、約 75 μ g-約 5，000 μ g/劑量、約 75 μ g-約 2，500 μ g/劑量、約 75 μ g-約 1，000 μ g/劑量、約 75 μ g-約 500μ g/劑量、約 75 μ g-約 250 μ g/劑量、約 75 μ g-約 125 μ g/劑量、約 100 μ g-約 200μ g/劑量、約200 μ g-約300 μ g/劑量、約300 μ g-約500 μ g/劑量、約500 yg-約
1.000μ g/劑量、約 1,000 μ g-約 2，500 yg/劑量、約 1,000 μ g-約 5，000 μ g/劑量、約 1,000 μ g-約 7，500 μ g/劑量、約 1,000 μ g-約 10，000 yg/劑量、約 2，500 μ g-約
5,000μ g/劑量、約 2，500 μ g-約 7，500 Ug/劑量、約 5，000 μ g-約 7，500 μ g/劑量、約 10，000 μ g-約 50，000 μ g/劑量、約 50,000 μ g-約 100，000 μ g/劑量、約 100，000μ g-約 200，000 μ g/劑量、約 200,000 μ g-約 300，000 μ g/劑量、約 300，000 μ g-約400, 000 μ g/劑量或約 400，000 μ g-約 500，000 μ g/劑量。在一些實施方案中，以約400 μ g-約1000 μ g/劑量、約500 μ g-約900 μ g/劑量、約600 μ g-約800 μ g、約650 μ g-約750 μ g/劑量、約700 Ug/劑量給予TOGF。在一些實施方案中，以50 μ LUOO μ LU50 μ L、200 μ L、250 μ L、300 μ L、 350μ L、400 μ L、450 μ L、500 μ L、550 μ L、600 μ L、650 μ L、700 μ L、750 μ L、800 μ L、850 uL,900 yL、950 μ LU000 μ L或更大的體積給予本文提供的劑量。在一些實施方案中，以 100 μ L>200 μ L、300 μ L、400 μ L、500 μ L、600 μ L、700 μ L、800 μ L、900 μ L、1000 μ LUlOO μ LU200 μ LU300 μ LU400 μ LU500 μ LU600 μ LU700 μ LU800uLU900 uL,2000 μ L或更大的體積給予本文提供的劑量。在一些實施方案中，以約1000μ L-約 2000 μ L、約 1250-約 1750 μ L、約 1300 μ L-約 1600 μ L 或約 1500 μ L 的體積給予本文提供的劑量。本文提供的TOGF組合物可以單次日劑量給予，或者總?cè)談┝靠梢苑珠_的劑量給予，例如每日2次、3次或4次。在一些實施方案中，本文提供的I3DGF組合物的單次日劑量可一天一次給予達(dá)1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14天或更多天。PDGF組合物還可以低于每日的頻率給予，例如一周6次、一周5次、一周4次、一周3次、一周2次、一周I次、每兩周一次、每3周一次、每月一次、每兩月一次、每3月一次、每4月一次、每5月一次或每6月一次。在一些實施方案中，在一定時間內(nèi)間隔給予I3DGF組合物。在一些實施方案中，一周一次給予I3DGF組合物達(dá)1、2、3、4、5、6或更多個月。在一些實施方案中，一月兩次給予I3DGF組合物達(dá)1、2、3、4、5、6或更多個月。在一些實施方案中，每月一次給予TOGF組合物達(dá)1、2、3、4、5、6或更多個月。治療腱病的方法
本文所用術(shù)語“腱病”是指慢性肌腱損傷，例如腱退變、腱炎和腱鞘炎。示例性腱病包括但不限于跟腱病、髕腱病、外上髁炎即“網(wǎng)球肘”、內(nèi)上髁炎、足底筋膜炎和肌腱套腱病。本文所用術(shù)語“腱退變”是指肌腱的非炎性損傷，其特征在于因過度使用引起的通常呈在肌腱中和肌腱周圍的組織微撕裂形式的肌腱的肌腱內(nèi)變性，導(dǎo)致?lián)p傷區(qū)域周圍肌腱修復(fù)細(xì)胞數(shù)目增加。肌腱的變性由肌腱的膠原纖維、細(xì)胞和血管成分的損傷或結(jié)構(gòu)破壞引起，其可降低肌腱的抗張強度，如果不治療的話，可導(dǎo)致肌腱破裂。在一些情況下，腱退變伴發(fā)肌腱的局灶性壞死或鈣化。本文所用術(shù)語“腱炎”是指肌腱的炎性損傷，其特征在于像在腱退變觀察到的變性，但還伴有肌腱炎癥、血管破壞和炎性修復(fù)反應(yīng)。腱炎常常與成纖維細(xì)胞和成肌纖維細(xì)胞增殖以及出血和組織化肉芽組織有關(guān)。一般腱炎通過所涉及的身體部位來命名，例如跟腱炎(影響跟腱)或髕腱炎(亦稱為“跳躍膝”，影響髕腱)，但是有某些例外，例如外上髁炎(亦稱為“網(wǎng)球肘”，影響橈側(cè)腕短伸肌腱)?？赏ㄟ^本發(fā)明的方法治療的腱病包括人體或哺乳動物體中任何肌腱的腱病。在一些實施方案中，腱病是腱退變。在一些實施方案中，腱病是腱炎。在一些實施方案中，腱病是腱鞘炎。可通過本發(fā)明的方法治療的肌腱包括人體或哺乳動物體的任何肌腱。肌腱的非限制性實例包括髕腱、脛骨前肌腱、跟腱、胭繩肌腱、半腱肌腱、股薄肌腱、外展肌腱、內(nèi)收肌腱、岡上肌腱、R下肌腱、肩胛下肌腱、小圓肌腱、屈肌腱、股直肌腱、脛骨后肌腱和股四頭肌膜。在一些實施方案中，肌腱是足或踝的肌腱。在一些實施方案中，足或踝的肌腱選自蹲長伸肌、蹲長屈肌、趾長伸肌、趾短伸肌、腓骨長肌、腓骨短肌、跗短屈肌、趾長屈肌、脛骨后肌、跟腱和跖腱膜。 在一些實施方案中，肌腱是腿部肌腱。在一些實施方案中，腿部肌腱選自髕腱、脛骨前肌腱、跟腱、胭繩肌腱、半腱肌腱、股薄肌腱、外展肌腱和內(nèi)收肌腱。在一些實施方案中，肌腱選自屈肌腱、股直肌腱、脛骨后肌腱和股四頭肌腱。在一些實施方案中，肌腱是肩部肌腱。在一些實施方案中，肩部肌腱選自R上肌 腱、岡下肌腱、肩胛下肌腱和小圓肌腱(肌腱套復(fù)合體)。在一些實施方案中，肌腱是肘部肌腱。在一些實施方案中，肘部肌腱選自二頭肌腱、三頭肌腱、橈側(cè)腕短伸肌腱、伸肌總腱、指伸肌腱、小指伸肌腱、尺側(cè)腕伸肌腱、旋后肌腱、屈肌總腱、旋前圓肌腱、橈側(cè)腕屈肌腱、掌長肌腱、尺側(cè)腕屈肌腱和屈指淺肌腱。在一些實施方案中，肌腱是腕部肌腱。在一些實施方案中，腕部肌腱選自二頭肌腱、三頭肌腱、橈側(cè)腕短伸肌腱、伸肌腱總腱、指伸肌腱、小指伸肌腱、尺側(cè)腕伸肌腱、旋后肌腱、屈肌腱總腱、旋前圓肌腱、橈側(cè)腕屈肌腱、掌長肌腱、尺側(cè)腕屈肌腱、屈指淺肌腱、拇短屈肌腱、拇長屈肌腱、拇短展肌腱、拇長展肌腱、指深屈肌腱、指淺屈肌腱、拇短伸肌腱和拇長伸肌腱。在一些實施方案中，肌腱是手部肌腱。在一些實施方案中，手部肌腱選自拇短屈肌腱、拇長屈肌腱、拇短展肌腱、拇長展肌腱、指深屈肌腱、指淺屈肌腱、拇短伸肌腱和拇長伸肌腱。在一些實施方案中，腱病是肌腱套腱病。在一些實施方案中，肌腱套腱病選自岡上肌腱病、R下肌腱病、肩胛下肌腱病和小圓肌腱病。在一些實施方案中，腱病是在肱骨外髁附著部的伸肌肌群起點、主要在橈側(cè)腕短伸肌(ECRB)肌腱中的外上髁炎即“網(wǎng)球肘”。在一些實施方案中，患有外上髁炎的受試者患有相關(guān)疼痛(例如持續(xù)至少約6個月)，如經(jīng)視覺模擬評分法(Visual Analog Score, VAS)報告為=50的疼痛所證明。在一些實施方案中，患有外上媒炎的受試者患有相關(guān)疼痛例如持續(xù)至少約6個月，該疼痛隨外上髁上的壓力和/或腕伸展受阻而加重。在一些實施方案中，腱病是位于旋前圓肌和肱骨內(nèi)髁的橈側(cè)腕屈肌起點之間界面上的內(nèi)上髁炎即“高爾夫球員肘”。在一些實施方案中,腱病是館腱病。在一些實施方案中，腱病是跟腱病。在一些實施方案中，腱病是足底筋膜炎。在一些實施方案中，腱病是足底內(nèi)側(cè)筋膜炎。在一些實施方案中，腱病是足底外側(cè)筋膜炎。另一方面，本文提供治療腱病的方法，所述方法包括將有效量的包含I3DGF和緩沖液的組合物給予受累部位。在一些實施方案中，I3DGF選自roGF-AA、PDGF-BB, PDGF-AB,PDGF-CC和TOGF-DD。在一些實施方案中，I3DGF是TOGF-BB。在一些實施方案中，有效量的組合物包含介于每劑量約75 μ g和約7，500 yg之間的H)GF-BB。在一些實施方案中，有效量的組合物包含介于每劑量約500 μ g-約1，000 μ g之間的roGF-BB。在一些實施方案中，有效量的組合物包含介于每劑量約450 μ g至約3，000 μ g之間的H)GF。在一些實施方案中，有效量的組合物包含介于每劑量約5，000 μ g至約7，500 μ g之間的TOGF-BB。在一些實施方案中，緩沖液選自磷酸緩沖鹽溶液(“PBS”)、乙酸鈉、乙酸銨、乙酸、檸檬酸、檸檬酸鈉、三(羥甲基)氨基乙烷(“廿匕”)、^2-羥乙基哌嗪4’-2_乙磺酸(“HEPES”)、3-(N-嗎啉代)丙磺酸(“MOPS”)、2_(N_ 嗎啉代)乙磺酸(“MES”)、N_(2_ 乙酰氨基)亞氨基二乙酸(“ADA”)、哌嗪-N，N’ -雙(2-乙磺酸)(“PIPES”)和N-(2-乙酰氨基)-2_氨基乙烷磺酸(“ACES”)。在一些實施方案中，緩沖液是乙酸鈉。在一些實施方案中，乙酸鈉的濃度介于約10 mM和約100 mM之間。在一些實施方案中，乙酸鈉的濃度約為20禮。在一些實施方案中，乙酸鈉的pH介于約4. O和約7. O之間。在一些實施方案中，乙酸鈉處于約pH 6。在一些實施方案中，通過直接注射至受累部位來給藥。在一些實施方案中，采用在有或沒有超聲引導(dǎo)的“密擊技術(shù)(peppering technique) ”完成直接注射?！懊軗艏夹g(shù)”是 在把針插入觸痛區(qū)域后，在不使針露出皮膚的情況下，通過抽拉、重新定向針并將針重新插入來進(jìn)行多次少量注射的注射方法。在一些實施方案中，受累部位是骨-肌腱連接處。在一些實施方案中，受累部位是肌腱。在一些實施方案中，腱病選自跟腱病、髕腱病、外上髁炎、內(nèi)上髁炎、足底筋膜炎和肌腱套腱病。在一些實施方案中，通過單次注射給予組合物。在一些實施方案中，通過單次注射一周一次給予組合物達(dá)4周。在一些實施方案中，腱病是腱退變。在一些實施方案中，腱退變選自跗長伸肌腱退變、K長屈肌腱退變、趾長伸肌腱退變、趾短伸肌腱退變、腓骨長肌腱退變、腓骨短肌腱退變、歸短屈肌腱退變、趾長屈肌腱退變、脛骨后肌腱退變、跟腱腱退變和跖腱膜腱退變。在一些實施方案中，腱退變選自髕骨腱退變、脛腓前腱退變、胭繩肌腱退變、半腱肌腱退變、股薄肌腱退變、展肌腱退變和收肌腱退變。在一些實施方案中，腱退變選自屈肌腱退變、股直肌腱退變、脛骨后肌腱退變和股四頭肌腱退變。在一些實施方案中，腱退變選自R上肌腱退變、R下肌腱退變、肩胛下肌腱退變和小圓肌腱退變。在一些實施方案中，腱退變選自二頭肌腱退變、三頭肌腱退變、橈側(cè)腕短伸肌腱退變、伸肌總腱腱退變、指伸肌腱退變、小指伸肌腱退變、尺側(cè)腕伸肌腱退變、旋后肌腱退變、屈肌總腱腱退變、旋前圓肌腱退變、橈側(cè)腕屈肌腱退變、掌長肌腱退變、尺側(cè)腕屈肌腱退變和屈指淺肌腱退變。在一些實施方案中，腱退變選自二頭肌腱退變、三頭肌腱退變、橈側(cè)腕短伸肌腱退變、伸肌總腱腱退變、指伸肌腱退變、小指伸肌腱退變、尺側(cè)腕伸肌腱退變、旋后肌腱退變、屈肌總腱腱退變、旋前圓肌腱退變、橈側(cè)腕屈肌腱退變、掌長肌腱退變、尺側(cè)腕屈肌腱退變、屈指淺肌腱退變、拇短屈肌腱退變、拇長屈肌腱退變、拇短展肌腱退變、拇長展肌腱退變、指深屈肌腱退變、指淺屈肌腱退變、拇短伸肌腱退變和拇長伸肌腱退變。在一些實施方案中，腱退變選自拇短屈肌腱退變、拇長屈肌腱退變、拇短展肌腱退變、拇長展肌腱退變、指深屈肌腱退變、指淺屈肌腱退變、拇短伸肌腱退變和拇長伸肌腱退變。在一些實施方案中，腱病是腱炎。在一些實施方案中，腱炎選自_長伸肌腱炎、長屈肌腱炎、趾長伸肌腱炎、趾短伸肌腱炎、腓骨長肌腱炎、腓骨短肌腱炎、Pf短屈肌腱炎、趾長屈肌腱炎、脛骨后肌腱炎、跟腱腱炎和跖腱膜腱炎。在一些實施方案中，腱炎選自髕腱炎、脛腓前腱炎、胭繩肌腱腱炎、半腱肌腱炎、股薄肌腱炎、展肌腱炎和收肌腱炎。在一些實施方案中，腱炎選自屈肌腱炎、股直肌腱炎、脛骨后肌腱炎和股四頭肌腱炎。在一些實施方案中，腱炎選自網(wǎng)上肌腱炎、網(wǎng)下肌腱炎、肩胛下肌腱炎和小圓肌腱炎。在一些實施方案中，腱炎選自二頭肌腱炎、三頭肌腱炎、橈側(cè)腕短伸肌腱炎、伸肌總腱腱炎、指伸肌腱炎、小指伸肌腱炎、尺側(cè)腕伸肌腱炎、旋后肌腱炎、屈肌總腱炎、旋前圓肌腱炎、橈側(cè)腕屈肌腱炎、掌長肌腱炎、尺側(cè)腕屈肌腱炎和屈指淺肌腱炎。在一些實施方案中，腱炎選自二頭肌腱炎、三頭肌腱炎、橈側(cè)腕短伸肌腱炎、伸肌總腱腱炎、指伸肌腱炎、小指伸肌腱炎、尺側(cè)腕伸肌腱炎、旋后肌腱炎、屈肌總腱炎、旋前圓肌腱炎、橈側(cè)腕屈肌腱炎、掌長肌腱炎、尺側(cè)腕屈肌腱炎、屈指淺肌腱炎、拇短屈肌腱炎、拇長屈肌腱炎、拇短展肌腱炎、拇長展肌腱炎、指深屈肌腱炎、指淺屈肌腱炎、拇短伸肌腱炎和拇長伸肌腱炎。在一些實施方案中，腱炎選自拇短屈肌腱炎、拇長屈肌腱炎、拇短展肌腱炎、拇長展肌腱炎、指深屈肌腱炎、指淺屈肌腱炎、拇短伸肌腱炎和拇長伸肌腱炎。本發(fā)明的方法可導(dǎo)致以下一種或多種的改善減輕受累關(guān)節(jié)或肢體的疼痛、減少 受累關(guān)節(jié)或肢體的僵硬、增加受累關(guān)節(jié)或肢體的活動性、提高受累關(guān)節(jié)或肢體的強度、降低腱病進(jìn)展的速率、減輕炎癥、提高肌腱強度或提高肌腱強度恢復(fù)的速率。用于測量治療的療效的各種方法包括但不限于臂肩手失能評分(Arm, Shoulder and Hand Score, DASH)、視覺模擬評分法(VAS)和握力測試。在一些實施方案中，治療導(dǎo)致DASH的治療前評分降低至少25%。在一些實施方案中，治療導(dǎo)致VAS的治療前評分降低至少25%。在一些實施方案中，治療導(dǎo)致隨施加壓力和/或關(guān)節(jié)屈曲的疼痛減輕。在一些實施方案中，治療導(dǎo)致隨施加壓力和/或關(guān)節(jié)屈曲的疼痛減輕且關(guān)節(jié)活動性增加。在一些實施方案中，治療不會導(dǎo)致任何異常的骨生長。在一些實施方案中，治療不會導(dǎo)致任何異常的肌腱生長。在一些實施方案中，治療是安全的，且為受試者所耐受。在一些實施方案中，通過由以下的一種或多種方法鑒定的不良事件或異常情況的缺乏來評價組合物的安全性和耐受性身體檢查、生命體征測定、實驗室測試、X射線和/或MRI成像。在一些實施方案中，治療導(dǎo)致肌腱的強度提高。在一些實施方案中，治療導(dǎo)致更快速的肌腱強度恢復(fù)速率。在一些實施方案中，與基線相比，治療導(dǎo)致在給予本發(fā)明的組合物約 4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20 或 21 天內(nèi)，肌腱強度提高至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%。在一些實施方案中，與基線相比，治療導(dǎo)致在給予本發(fā)明的組合物約7天內(nèi)肌腱強度提高至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%。在一些實施方案中，與基線相比，治療導(dǎo)致在給予本發(fā)明的組合物約7天內(nèi)肌腱強度提高至少約60%。在一些實施方案中，與基線相比，治療導(dǎo)致在給予本發(fā)明的組合物約7天內(nèi)肌腱強度提高至少約65%。在一些實施方案中，與基線相比，治療導(dǎo)致在給予本發(fā)明的組合物約7天內(nèi)肌腱強度提高至少約70%。在一些實施方案中，在給予本發(fā)明的組合物約4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14天內(nèi)，肌腱達(dá)到其最終強度的至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約95%，其中在治療后約21天測量最終強度。在一些實施方案中，肌腱在給予本發(fā)明的組合物約7天內(nèi)達(dá)到其最終強度的至少約80%，其中在治療后約21天測量最終強度。在一些實施方案中，肌腱在給予本發(fā)明的組合物約7天內(nèi)達(dá)到其最終強度的至少約85%，其中在治療后約21天測量最終強度。在一些實施方案中，肌腱在給予本發(fā)明的組合物約7天內(nèi)達(dá)到其最終強度的至少約90%，其中在治療后約21天測量最終強度?？稍诶鐒游锬Ｐ椭?，例如在大鼠膠原酶模型中測量肌腱強度，其中肌腱強度為測定的破裂載荷。實施例3中更詳細(xì)地描述了測量肌腱強度的實例。藥盒
另一方面，本文提供包括裝有包含I3DGF和緩沖液的組合物的藥盒。在一些實施方案中，藥盒包括裝有凍干I3DGF的第一容器和裝有用于溶解凍干I3DGF的緩沖液的第二容器。在一些實施方案中，藥盒包括裝有凍干I3DGF和緩沖液的第一容器，和裝有用于溶解凍干I3DGF和緩沖液的水的第二容器。在一些實施方案中，緩沖液選自磷酸緩沖鹽溶液(“PBS”)、乙酸鈉、乙酸銨、乙酸、檸檬酸、檸檬酸鈉、三(羥甲基)氨基乙烷(“tris”)、N-2-羥乙基 哌嗪-N’ -2-乙磺酸(“HEPES”)、3-(N-嗎啉代)丙磺酸(“MOPS”)、2_(N-嗎啉代)乙磺酸(“MES”)、N-(2-乙酰氨基)亞氨基二乙酸(“ADA”)、哌嗪-N，N’ -雙(2-乙磺酸)(“PIPES”)和N-(2-乙酰氨基)-2-氨基乙烷磺酸(“ACES”)。在一些實施方案中，緩沖液是乙酸鈉。在一些實施方案中，乙酸鈉的濃度介于約10 mM和約100 mM之間。在一些實施方案中，乙酸鈉的濃度約為20 mM。在一些實施方案中，乙酸鈉的pH介于約4. O和約7. O之間。在一些實施方案中，乙酸鈉約處于pH 6。在一些實施方案中，藥盒還包括從商業(yè)、治療和用戶角度而言是需要的其它材料，包括其它緩沖液、稀釋劑、濾器、針、注射器和有使用說明的包裝說明書。本文所用術(shù)語“包裝說明書”是指通常包括在藥物商品包裝中的用法說明，內(nèi)有有關(guān)適應(yīng)癥、用法、劑量、給藥、禁忌、與包裝產(chǎn)品組合的其它藥物和/或有關(guān)使用這種藥物的警告事項的信息?？p線
還提供roGF涂覆的縫線和制作這種縫線的方法?？p線可用于例如治療個體的肌腱(例如治療肌腱撕裂)。合適的縫線包括例如由丙交酯和乙交酯共聚物制成的縫線(例如Vicryl縫線(例如4-0 Vicryl縫線))。合適的涂覆方法包括例如浸潰涂布方法,例如描述于 Dines J, Weber L, Razzano P 等.The Effect of Growth DifferentiationFactor-5-Coated Sutures on Tendon Repair in a Rat Model (生長分化因子-5 涂覆的縫線對大鼠模型的肌腱修復(fù)的作用).J Shoulder Elbow Surg 2007; 16:215S-221S的浸潰涂布方法，其可任選改變以清除明膠。本申請人出人意料地發(fā)現(xiàn)，在缺乏明膠時可將高劑量的I3DGF涂覆到某些類型的縫線上。在一些實施方案中，縫線不含明膠。在一些實施方案中，縫線涂層不含明膠。在一些實施方案中，縫線涂層不含聚乳酸、聚乙醇酸或乳酸-乙醇酸共聚物。在一些實施方案中，涂覆縫線的方法不包括利用明膠。在一些實施方案中，縫線涂層基本由I3DGF組成。在一些實施方案中，縫線涂層由TOGF和緩沖液組成。在一些實施方案中，縫線涂層由I3DGF組成。還可使用縫線治療個體，例如哺乳動物?？墒褂帽景l(fā)明的縫線治療的哺乳動物的非限制性實例包括人、寵物(例如狗、貓、兔、倉鼠等)、實驗室動物(例如小鼠、大鼠)、農(nóng)場動物(例如馬、牛、綿羊、山羊等)。在一些實施方案中，加載到縫線上的roGF的量為至少約10 ng TOGF/cm縫線。在一些實施方案中，加載到縫線上的I3DGF的量為至少約100 ng TOGF/cm縫線。在一些實施方案中，加載到縫線上的I3DGF的量為至少約1000 ng TOGF/cm縫線。在一些實施方案中，加載到縫線上的I3DGF的量為至少約5000 ng TOGF/cm縫線。在一些實施方案中，加載到縫線上的I3DGF的量為至少約6000 ng TOGF/cm縫線。在一些實施方案中，加載到縫線上的roGF的量為約10-約20，OOO ng TOGF/cm縫線。在一些實施方案中，加載到縫線上的I3DGF的量為約100-約10，000 ng TOGF/cm縫線。在一些實施方案中，加載到縫線上的I3DGF的量為約500-約8，000 ng TOGF/cm縫線。在一些實施方案中，加載到縫線上的I3DGF的量為約1000-約8，000 ng PDGF/cm縫線。在一些實施方案中，加載到縫線上的I3DGF的量為約4000-約8，000 ng TOGF/cm縫線。在一些實施方案中，加載到縫線上的I3DGF的量為約6000-約 7，000 ng PDGF/cm 縫線。在一些實施方案中，體外測量的48小時內(nèi)從縫線釋放的I3DGF的累積量為至少約10 ng TOGF/cm縫線。在一些實施方案中，體外測量的48小時內(nèi)從縫線釋放的TOGF的累積量為至少約100 ng roGF/cm縫線。在一些實施方案中，體外測量的48小時內(nèi)從縫線釋放的I3DGF的累積量為至少約1000 ng TOGF/cm縫線。在一些實施方案中，體外測量的48小時內(nèi)從縫線釋放的I3DGF的累積量為至少約5000 ng TOGF/cm縫線。在一些實施方案中，體外測量的48小時內(nèi)從縫線釋放的TOGF的累積量為至少約6000 ng TOGF/cm縫線。在一些實施方案中，體外測量的48小時內(nèi)從縫線釋放的I3DGF的累積量為約10-約20，000 ngTOGF/cm縫線。在一些實施方案中，體外測量的48小時內(nèi)從縫線釋放的I3DGF的累積量為約 100-約10，000 ng TOGF/cm縫線。在一些實施方案中，體外測量的48小時內(nèi)從縫線釋放的PDGF的累積量為約500-約8，000 ng TOGF/cm縫線。在一些實施方案中，體外測量的48小時內(nèi)從縫線釋放的I3DGF的累積量為約1000-約8，000 ng TOGF/cm縫線。在一些實施方案中，體外測量的48小時內(nèi)從縫線釋放的I3DGF的累積量為約4000-約8，000 ng PDGF/cm縫線。在一些實施方案中，體外測量的48小時內(nèi)從縫線釋放的I3DGF的累積量為約6000-約
7,000ng TOGF/cm縫線。測量I3DGF體外累積釋放的合適方法包括例如實施例7中描述的方法。本發(fā)明的涂覆縫線可有利地提供體內(nèi)連續(xù)給藥。提供下面的實施例僅用于說明目的，而不以任何方式意圖限制本發(fā)明的范圍。實施例實施例I :正常的和患病的原代人肌腱細(xì)胞因響應(yīng)rhH)GF-BB而增殖
本項研究測定了 rhH)GF-BB是否直接激活來源于腱病患者的原代肌腱細(xì)胞的增殖和/或趨化性。該結(jié)論可支持rhH)GF-BB在腱病中的治療潛力的構(gòu)想?；颊吲c方法
患者
10名腱病患者參與了該項研究，包括5名跟腱腱病患者和5名脛后肌腱(PTT)的腱病患者。還包括進(jìn)行了全膝關(guān)節(jié)置換的另外5名患者。肌腱細(xì)胞的原代培養(yǎng)
本應(yīng)棄去的肌腱組織獲自在對臨床適應(yīng)癥進(jìn)行的重建手術(shù)期間的正常和受損肌腱。這些組織包括跟腱或PTT的腱病部分，以及屈趾長肌(FDL)肌腱組織、跟腱組織和髕腱組織的健康(無腱病)部分。原代肌腱細(xì)胞外植體培養(yǎng)完獲自這些組織并在傳代3-5次時進(jìn)行了試驗。通過在實時PCR測定法中用特異性引物，評價肌腱細(xì)胞特異性基因scleraxis和膠原al(I)、a2(I)和al (III)基因的表達(dá)，來證實肌腱細(xì)胞身份。細(xì)胞增殖
將肌腱細(xì)胞單層培養(yǎng)物用胰蛋白酶消化，重新懸浮于含有O. 5%透析胎牛血清的DMEM/Fl2培養(yǎng)基中，使之貼壁過夜，然后與已滴定濃度的rhH)GF-BB溫育24小時。采用市售可得的測定法(Roche Applied Science, Indianapolis, IN),根據(jù)在細(xì)胞DNA合成期間摻入的BrdU,評價細(xì)胞增殖速率的改變。對于每種劑量的rhH)GF-BB，對各培養(yǎng)物進(jìn)行一式三份的測定。細(xì)胞遷移
肌腱細(xì)胞單層培養(yǎng)物用胰蛋白酶消化，重新懸浮于含有O. 5%透析胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基中，并接種到96孔ChemoTx —次性細(xì)胞遷移系統(tǒng)(Neuro Probe, Gaithersburg,MD)的上室。下室裝有已滴定濃度的rhH)GF-BB。使 肌腱細(xì)胞跨分隔各室的膜遷移48小時。然后將96孔板離心，凍融三次以裂解遷移的細(xì)胞。采用市售可獲自Promega (Madison, WI)的試劑盒，根據(jù)胞質(zhì)的乳酸脫氫酶(LDH)，測量有活力的遷移細(xì)胞的量。統(tǒng)計分析
應(yīng)用單因素方差分析確定用rhH)GF-BB刺激是否以劑量依賴性方式刺激影響肌腱細(xì)胞增殖。結(jié)果
僅肌腱細(xì)胞培養(yǎng)物而非對照肺成纖維細(xì)胞培養(yǎng)物或?qū)φ赵鶷淋巴細(xì)胞培養(yǎng)物表達(dá)scleraxis mRNA，而肌腱細(xì)胞和成纖維細(xì)胞而非淋巴細(xì)胞表達(dá)膠原基因mRNA。在所有情況下，參與或不參與疾病進(jìn)程的肌腱組織的肌腱細(xì)胞通過加快BrdU摻入而對rhH)GF-BB刺激起反應(yīng)(P < O. 05，單因素方差分析)。該反應(yīng)是劑量依賴性的，并在10、50和150 ng/mL的rhH)GF-BB下觀察到。即使所有細(xì)胞培養(yǎng)物對rhH)GF-BB刺激起反應(yīng)，但患者中在rhH)GF-BB刺激后摻入BrdU的量仍有顯著差異。與對照無刺激的培養(yǎng)物相比，BrdU的摻入增加至最小2. I 土 O. 2倍到最大10. 7 土 O. 5倍。5名患者的肌腱細(xì)胞的反應(yīng)自相矛盾，其中較低rhH)GF-BB濃度(10 ng/mL)而非較高rhH)GF-BB濃度(50和150 ng/mL)在BrdU摻入方面的增加較大。在來源于這些患者的腱病組織和正常組織兩者的肌腱細(xì)胞中觀察到這種自相矛盾的反應(yīng)。在響應(yīng)rhH)GF-BB刺激時，來源于4名患者的健康肌腱的肌腱細(xì)胞摻入的BrdU是來源于患病組織的肌腱細(xì)胞摻入的BrdU的2倍。在響應(yīng)rhTOGF刺激時，一名患者中，來自患病組織的肌腱細(xì)胞摻入的BrdU是未參與疾病過程的組織的肌腱細(xì)胞摻入的BrdU的4倍。圖2表示對于健康和患病肌腱細(xì)胞在第I天、第4天和第8天加入培養(yǎng)基的O、10、50和150 ng/ml PDGF的BrdU摻入(y軸，吸光度)。吸光度的增加與增殖增加一致，其中健康和患病肌腱細(xì)胞兩者在第I天響應(yīng)于TOGF。在所有情況下，肌腱細(xì)胞對50 ng/mL和150 ng/mL的rhH)GF-BB都有趨化反應(yīng)。未將肌腱細(xì)胞暴露于10 ng/mL rhH)GF-BB中進(jìn)行趨化性實驗，因為在預(yù)實驗中反應(yīng)低下。此外，反應(yīng)是劑量依賴性的，對150 ng/mL rhPDGF-BB的趨化性大于對50 ng/mL rhPDGF-BB的趨化性。然而，與對150 ng/mL rhH)GF-BB作出的反應(yīng)相比，5名患者的肌腱細(xì)胞以更大的趨化性對50 ng/mL rhH)GF-BB作出反應(yīng)，150 ng/mL rhH)GF-BB中遷移細(xì)胞的數(shù)目顯著下降(P < 0. 05，雙側(cè)斯氏t檢驗)。與無刺激對照相比，患者中對rhH)GF-BB的最大趨化應(yīng)答有變化，增加至I. 4 土 0.1倍到4. O 土 0.5倍。在來源于腱病或健康肌腱組織的匹配肌腱細(xì)胞培養(yǎng)物中，肌腱細(xì)胞對rhroGF-BB的趨化性沒有統(tǒng)計顯著性差異(P > 0.05)。圖I表示培養(yǎng)在濃度為0、50或150 ng/ml的TOGF中的細(xì)胞的趨化性(y軸表示光密度增加)。用1250,2500,5000和10000個初始細(xì)胞評價遷移。
結(jié)論
這些實驗的結(jié)果表明，來源于健康和腱病組織的肌腱細(xì)胞通過提高增殖速率和趨化率(chemotaxis rate)而對rhFOGF-BB起反應(yīng)。重要的是,一些患者的肌腱細(xì)胞顯示對F1DGF的自相矛盾的反應(yīng)，其中比起較低的劑量，較高劑量引起較少作用。同樣重要的是，在某些情況下，相對于來自健康肌腱的肌腱細(xì)胞，來自患病肌腱的肌腱細(xì)胞對I3DGF的反應(yīng)有差別，這就表明在臨床背景中適當(dāng)給藥可能是最重要的。實施例2 rhPDGF-BB的安全性研究 局部注射試驗。本項研究的目的是確定在跟腱內(nèi)遞送給大鼠后rhroGF-BB的局部毒性。跟腱內(nèi)給藥模擬臨床中用于治療外上髁炎的rhH)GF-BB的給藥途徑。在跟腱-跟骨連接處的注射部位模擬橈側(cè)腕短伸肌腱和外上髁骨的附著部位。本項研究使用Sprague Dawley大鼠。在研究期間將動物關(guān)養(yǎng)在相同的實驗室設(shè) 施中。所有的關(guān)養(yǎng)和飼養(yǎng)管理都符合動物福利法(Animal Welfare Act)和“實驗室動物護(hù)理和使用指南(Guide for the Care and Use of Laboratory Animals) ”。按照標(biāo)準(zhǔn)方案給大鼠供食和供水。因適當(dāng)?shù)难芯肯嚓P(guān)事件(例如麻醉)而撤除食物和水。在研究前使動物適應(yīng)設(shè)施最少5天。該適應(yīng)期允許動物適應(yīng)研究室環(huán)境。三批不同濃度的無菌重組人I3DGF-BB用于研究(I) 10. 3 mg/ml rhH)GF-BB，在20 mM乙酸鈉緩沖液(pH 6. 0±0. 5)中；(2) 5.2 mg/ml rhPDGF-BB，在20 mM乙酸鈉緩沖液(pH 6·0±0·5)中；和(3) I. 7 mg/ml rhPDGF-BB，在 20 mM 乙酸鈉緩沖液(pH 6·0±0·5)中。溶媒對照樣品為無菌20 mM乙酸鈉緩沖液(pH 6. 0±0. 5)，其按照標(biāo)準(zhǔn)方法制備。采用用于處理試驗品和對照品的標(biāo)準(zhǔn)實驗室安全規(guī)程。準(zhǔn)確地講，在制備和給予劑量時戴上手套、面罩、實驗服(即實驗工作服)和護(hù)目用具。將動物隨機分成4組，每組n=60，每組有30只雄性和30只雌性。每組每只在四頭肌的骨腱連接處接受單次肌腱內(nèi)注射下列化合物(1) 20 mM乙酸鈉；(2) 20 mM乙酸鈉中的 51 μ g rhPDGF-BB ； (3) 20 mM 乙酸鈉中的 156 μ g rhPDGF-BB ;或(4) 20 mM 乙酸鈉中的515 μ g rhH)GF-BB。用配置了 28. 5G針的胰島素注射器進(jìn)行注射。所有動物在第I天通過單次跟腱內(nèi)注射接受試驗品。第I組動物接受乙酸鈉(NaOAc)，而第2-4組動物接受劑量水平分別為 36. 69、112. 23 和 370. 50 μ g/mm2 的 rhPDGF-BB。在rhH)GF-BB注射后I天、2周和6周處死每組的三分之一。在完成生命期治療組后，按照美國農(nóng)業(yè)部動物福利法及實驗室動物護(hù)理和使用指南(USDA Animal WelfareAct, The Guide for Care and Use of Laboratory Animals) (ILAR出版，1996,NationalAcademy Press)和HSS獸醫(yī)規(guī)程(HSS veterinary procedures),使動物安樂死后，收獲組織。通過過量給予CO2使動物安樂死。通過缺乏反射(眨眼、回縮等)來證實死亡。評價標(biāo)準(zhǔn)包括臨床觀察、身體評價、體重和食物消耗測量、臨床病理、尸體剖檢、器官重量及注射和未注射后腿踝的組織病理學(xué)評價，包括檢查肌腱毒性和骨毒性。對動物進(jìn)行血液學(xué)評價、凝血研究和各種臨床化學(xué)研究。血液學(xué)評價包括下列測量白細(xì)胞計數(shù)(WBC);紅細(xì)胞計數(shù)(RBC);測定血紅蛋白(Hb)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白(MCH)水平、血細(xì)胞比容(HCT)和平均紅細(xì)胞Hb濃度(MCHC);血小板計數(shù)；測定紅細(xì)胞平均體積(MCV)和評價白細(xì)胞差異，包括嗜中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、％嗜中性粒細(xì)胞、％淋巴細(xì)胞、％單核細(xì)胞和％嗜酸性粒細(xì)胞)。凝血研究測量活化部分凝血活酶時間(APTT)和凝血酶原時間(PT)。臨床化學(xué)研究包括下列分析堿性磷酸酶(ALP)、葡萄糖(GLU)、白蛋白(ALB)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、總膽紅素(TBIL)、球蛋白(Glob)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酸(AST)、膽固醇(CHOL)、鉀(K)、Y谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)、甘油三酯(TRIG)、氯離子(Cl)、肌酸酐(CREAT)、血液尿素氮(BUN)、鈉(Na)、無機磷(PHOS)、鈣(Ca)、A/G比和總蛋白質(zhì)(TPROT)。益果
以36. 69 μ g/mm2、112. 23 μ g/mm2,370. 50 μ g/mm2的劑量水平給大鼠單次跟腱內(nèi)注射rhH)GF-BB對死亡率或瀕死率無影響。此外，在臨床觀察、對體重或食物消耗的作用方面沒有與試驗品相關(guān)的生物學(xué)顯著差異。第2天，與對照(第I組)相比時，在對治療大鼠任何組進(jìn)行分析的血液學(xué)或尿液分析參數(shù)的任一個沒有統(tǒng)計學(xué)或生物學(xué)上的顯著差異。在白細(xì)胞和凝血參數(shù)方面觀察到變化，但這些變化與注射外源蛋白質(zhì)的最低急性炎癥反應(yīng)一致。此外，在幾個血清化學(xué)參數(shù)中 還觀察到最小變化。然而，這些變化被視為個體動物變異的結(jié)果，不被視為是生物學(xué)上顯著的，并且不與任何器官特異性毒性有關(guān)。在第16和43天，與對照(第I組)相比時，對治療大鼠任何組進(jìn)行分析的血液學(xué)、白細(xì)胞、凝血或尿液分析參數(shù)的任一個，都無生物學(xué)上顯著的差異。沒有試驗品相關(guān)的宏觀觀察；所有宏觀觀察均被視為是偶然發(fā)生的。在第2天，在大鼠的對照和治療組中觀察到急性出血和亞急性炎癥，雖然似乎頻率和嚴(yán)重程度在大鼠治療組中較大。在第16天，急性出血消退，且亞急性炎癥很少發(fā)生。大鼠治療組顯示，除淺屈肌腱和跟腱的肌腱細(xì)胞肥大和增生以外，上述肌腱的腱旁組織(paratendon)有纖維組織形成和新血管形成。到第43天，纖維組織形成和新血管形成的嚴(yán)重性得到改善；在大多數(shù)治療大鼠中，肌腱細(xì)胞仍顯示肥大和增生。第二物種局部注射試驗。本項研究的目的在于確定在跟腱內(nèi)遞送給狗后，重組人血小板衍生生長因子(rhH)GF-BB)的局部毒性。本研究使用比格犬(Beagle dog)。在研究期間將動物關(guān)養(yǎng)在相同的實驗室設(shè)施中。所有的關(guān)養(yǎng)和飼養(yǎng)管理都符合動物福利法和“實驗室動護(hù)管理和使用指南”。按照標(biāo)準(zhǔn)方案給狗供食和供水。因適當(dāng)?shù)难芯肯嚓P(guān)事件(例如麻醉)而撤除食物和水。在研究前使動物適應(yīng)設(shè)施最少5天。該適應(yīng)期允許動物適應(yīng)研究室環(huán)境。三批不同濃度的無菌重組人I3DGF-BB用于研究(I) 10 mg/ml rhTOGF-BB，在20mM乙酸鈉緩沖液(pH 6. 0±0. 5)中；(2) 3 mg/ml rhH)GF-BB，在20 mM乙酸鈉緩沖液(pH6·0±0·5)中；和(3) I mg/ml rhPDGF-BB，在 20 mM 乙酸鈉緩沖液(pH 6·0±0·5)中。溶媒對照樣品是無菌20 mM乙酸鈉緩沖液(pH 6.0±0. 5)，其按照標(biāo)準(zhǔn)方法制備。采用用于處理試驗品和對照品的標(biāo)準(zhǔn)實驗室安全規(guī)程。準(zhǔn)確地講，在制備和給予劑量時戴上手套、面罩、實驗服(即實驗工作服)和護(hù)目用具。將動物隨機分成4組，每組n=24，每組有12只雄性和12只雌性。每組各個在四頭肌的骨腱連接處接受單次肌腱內(nèi)注射下列組合物(1) 20 mM乙酸鈉；(2) 20 mM乙酸鈉中的 I. 5 mg rhPDGF-BB ； (3) 20 mM 乙酸鈉中的 4. 5 mg rhPDGF-BB ;或(4) 20 mM 乙酸鈉中的15 mg rhH)GF-BB。用配置28. 5G針的具有I. 5 ml固定劑量體積的胰島素注射器進(jìn)行注射。在rhH)GF-BB注射后I天、2周和6周處死每組的三分之一。在完成生命期治療組后，按照美國農(nóng)業(yè)部動物福利法及實驗室動物護(hù)理和使用指南(ILAR出版，1996，National Academy Press)和HSS獸醫(yī)規(guī)程,使動物安樂死后，收獲組織。在用戍巴比妥鈉(Fatal-Plus 或合適的替代品)誘導(dǎo)的深度麻醉下通過放血使動物安樂死。對動物進(jìn)行血液學(xué)評價、凝血研究和各種臨床化學(xué)研究。血液學(xué)評價包括下列測量白細(xì)胞計數(shù)(WBC);紅細(xì)胞計數(shù)(RBC);測定血紅蛋白(Hb)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白(MCH)水平、血細(xì)胞比容(HCT)和平均紅細(xì)胞Hb濃度(MCHC);血小板計數(shù)；測定紅細(xì)胞平均體積(MCV)和評價白細(xì)胞差異，包括嗜中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、 單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、％嗜中性粒細(xì)胞、％淋巴細(xì)胞、％單核細(xì)胞和％嗜酸性粒細(xì)胞)。凝血研究測量活化部分凝血活酶時間(APTT)和凝血酶原時間(PT)。臨床化學(xué)研究包括下列分析堿性磷酸酶(ALP)、葡萄糖(GLU)、白蛋白(ALB)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、總膽紅素(TBIL)、球蛋白(Glob)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酸(AST)、膽固醇(CHOL)、鉀(K)、Y谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)、甘油三酯(TRIG)、氯離子(Cl)、肌酸酐(CREAT)、血液尿素氮(BUN)、鈉(Na)、無機磷(PHOS)、鈣(Ca)、A/G比和總蛋白質(zhì)(TPROT)。還評價了局部組織的組織病理學(xué)，包括檢查肌腱毒性和骨毒性。rhPDGF-BB 對狗無毒性。急性全身性毒性。本項研究的目的是確定通過靜脈內(nèi)注射給予的rhH)GF-BB的全身毒性。本研究使用Sprague-Dawley大鼠。在研究期間將動物關(guān)養(yǎng)在相同的實驗室設(shè)施中。所有的關(guān)養(yǎng)和飼養(yǎng)管理都符合動物福利法和“實驗室動物護(hù)理和使用指南”。按照標(biāo)準(zhǔn)方案給動物供食和供水。因適當(dāng)?shù)难芯肯嚓P(guān)事件(例如麻醉)而撤除食物和水。在研究前使動物適應(yīng)設(shè)施最少5天。該適應(yīng)期允許動物適應(yīng)研究室環(huán)境。在本研究中使用在20 mM乙酸鈉緩沖液(pH 6. 0±0. 5)中的3. O mg/ml和O. 3 mg/ml的無菌重組人F1DGF-BB。給藥當(dāng)天,將部分O. 3 mg/mL溶液1:10稀釋于20 mM乙酸鈉緩沖液中以產(chǎn)生同樣用于研究的O. 03 mg/ml溶液。對照樣品是無菌20 mM乙酸鈉緩沖液(pH6. 0±0. 5)，其按照標(biāo)準(zhǔn)方法制備。采用用于處理試驗品和對照品的標(biāo)準(zhǔn)實驗室安全規(guī)程。準(zhǔn)確地講，在制備和給予劑量時戴上手套、面罩、實驗服(即實驗工作服)和護(hù)目用具。將動物隨機分成4組，每組n=40 (20只雄性和20只雌性/組)。劑量組I接受體積為I. 4 ml/kg的20 mM乙酸鈉(pH 6. 0±0. 5)的單次靜脈內(nèi)注射；劑量組2接受體積為
I.4 ml/kg的20 mM乙酸鈉(pH 6. 0±0. 5)中的3. O mg/ml rhPDGF-BB的單次靜脈內(nèi)注射；劑量組3接受體積為I. 4 ml/kg的20 mM乙酸鈉(pH 6·0±0·5)中的O. 3 mg/ml rhPDGF-BB的單次靜脈內(nèi)注射；劑量組4接受體積為I. 4 ml/kg的20 mM乙酸鈉(pH 6. 0±0. 5)中的O. 03 mg/ml rhFOGF-BB的單次靜脈內(nèi)注射。評價動物的死亡和嚴(yán)重毒性的其它體征。在研究期間，觀察動物的成活率、臨床檢查、體重、食物消耗、眼科檢查和臨床病理。在第2天和第14天的尸體剖檢(10只雄性和10只雌性/組/時間點)時，對動物進(jìn)行臨床病理評價，包括血液學(xué)、凝血、血清化學(xué)和尿液分析以及完整的尸體剖檢。實施例3 :膠原酶誘導(dǎo)的大鼠跟腱損傷模型中肌腱內(nèi)(IT)施用rhH)GF-BB的劑量反應(yīng)
本項研究的目的是測定大鼠肌腱膠原酶模型中肌腱內(nèi)施用rhH)GF-BB的劑量反應(yīng)，以證實rhH)GF-BB對跟腱損傷和重建的修復(fù)作用。我們假設(shè)肌腱內(nèi)遞送rhH)GF-BB可通過增量調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和恢復(fù)肌腱的生物力學(xué)強度引起肌腱修復(fù)。對于間充質(zhì)源的細(xì)胞例如成骨細(xì)胞、肌腱細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞，重組人血小板衍生生長因子BB (rhH)GF-BB)是促有絲分裂的和趨化性的。因此，當(dāng)引入損傷的肌骨骼部位時，rhH)GF-BB將結(jié)締組織細(xì)胞和祖細(xì)胞吸引至治療部位，刺激其增殖，導(dǎo)致細(xì)胞數(shù)目增加，所述細(xì)胞隨后沉積基質(zhì)以使受損組織再生。此外，如上述實施例I所述，暴露于PDGF-BB的肌腱細(xì)胞顯示DNA合成和趨化增加。膠原酶誘導(dǎo)的大鼠跟腱損傷模型
沒有單獨的充分確立的模型用于評價腱病。然而，膠原酶誘導(dǎo)的大鼠跟腱損傷模型被廣泛用于跟腱損傷。該模型引起被視為等同于腱炎的變性肌腱反應(yīng)，并且與上坡踏車(uphill treadmill)過度使用模型(4個月)相比,快速形成腱炎損傷(3天內(nèi))。因此,它是篩選rhroGF-BB對肌腱損傷的作用的快速模型。因此，該模型享有相對快的誘導(dǎo)期，而且作為rhroGF-BB的治療作用的篩選，該模型是非常合適的，是臨床腱炎的代表?？偣惨话倭?165)只雄性Sprague Dawley大鼠用于該研究。給大鼠在其右跟腱注射膠原酶，接著在膠原酶注射后7天，在損傷部位進(jìn)行rhH)GF-BB或?qū)φ?僅緩沖液)的單次注射治療。使用帶有28. 5G針的胰島素注射器，將膠原酶和rhH)GF-BB或?qū)φ?僅緩沖液)注射到大鼠右跟腱的骨-肌腱連接處附近。將動物分成11組，每組n=15，如表I所示。在利用該模型的文獻(xiàn)中所報道的研究，歷史上使用每治療組8-9只動物用于生物力學(xué)測試，3-6只動物用于組織學(xué)分析。試驗品和對照品
本研究對照組利用在無rhH)GF-BB的膠原酶處理的大鼠跟腱中大鼠肌腱的自然修復(fù)反應(yīng)作為對照以接近受損肌腱的自然愈合反應(yīng)。研究試驗品使用rhH)GF-BB作為注射藥物以輔助肌腱的再生。對于間充質(zhì)源細(xì)胞，例如成骨細(xì)胞、肌腱細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞，重組人血小板衍生生長因子BB (rhH)GF-BB)是促有絲分裂的和趨化性的。因此，當(dāng)弓I入損傷的肌骨骼部位時，rhPDGF-BB將結(jié)締組織細(xì)胞和祖細(xì)胞吸引至治療部位，刺激其增殖，導(dǎo)致細(xì)胞數(shù)目增加，所述細(xì)胞隨后沉積基質(zhì)以使受損組織再生。此外，如上述實施例I所示，暴露于I3DGF-BB的肌腱細(xì)胞顯示DNA合成和趨化性增加。兩批不同濃度的無菌重組人I3DGF-BB用于研究(I) 3. 4 mg/ml rhTOGF-BB，在20mM乙酸鈉緩沖液(pH 6. O ± O. 5)中;和(2) O. 34 mg/ml rhPDGF-BB，在20 mM乙酸鈉緩沖液(pH 6.0±0. 5)中。溶媒對照樣品是無菌20 mM乙酸鈉緩沖液(pH 6.0±0. 5)，其按照標(biāo)準(zhǔn)方法制備。劑量包括1. 02 μ gUO. 2 μ g和102 μ g rhPDGF-BB。制備兩種濃度的NaOAc緩沖液中的rhroGF-BB :3.4 mg/ml和O. 34 mg/mL·當(dāng)以30 μ I肌腱內(nèi)遞送時，達(dá)到102μ g和10. 2 μ g劑量水平。對于I. 02 μ g劑量，O. 34 mg/mL溶液用20 mM NaOAc緩沖液1:10稀釋。膠原酶以粉末形式購自Sigma-Aldrich (目錄號C-6885 ;St. Louis, MO)，在含有 50 mM NaH2POjP 150 mM NaCl 的 PBS (pH 7. 4±0· 5)中復(fù)溶至所需濃度(10 mg/mL)。
在開始研究時，將3.4 mg/ml rhPDGF-BB,O. 34 mg/ml rhPDGF-BB 和 20 mM 乙酸鈉緩沖液試驗品的至少兩個未開啟、未使用的小瓶保持在相同的貯存條件(4°C)下作為用于給藥、穩(wěn)定性和濃度分析的小瓶。采用UV/Vis分光光度測定法和反相HPLC分析進(jìn)行穩(wěn)定性和劑量驗證分析。采用用于處理試驗品和溶媒對照品的標(biāo)準(zhǔn)實驗室安全規(guī)程。準(zhǔn)確地講，在制備和給予劑量時戴上手套、面罩、實驗服(即實驗工作服)和護(hù)目用具。試驗系統(tǒng)(動物和動物護(hù)理)
一百六十五(165)只雄性 Sprague Dawley 大鼠(Charles River Laboratories,Int’I,Wilmington,MA)用于該研究。在研究選擇之前，通過肉眼檢查篩選所有動物以確保健康和正常步態(tài)。根據(jù)其體重(在膠原酶注射時約315克)，選擇用于研究的所有動物。以寫在大鼠尾部的獨特編號識別每只大鼠。根據(jù)大鼠體重將其隨機分配到每組。
在研究期間,將大鼠關(guān)養(yǎng)在同一實驗室設(shè)施中。所有的關(guān)養(yǎng)和飼養(yǎng)管理符合動物福利法和“實驗室動物護(hù)理和使用指南”。因適當(dāng)?shù)难芯肯嚓P(guān)事件(例如麻醉)而撤除食物和水，除此之外任意提供。在研究前使動物適應(yīng)設(shè)施最少5天。該適應(yīng)期允許動物適應(yīng)研究室環(huán)境。實驗設(shè)計
動物(15只/組)，每籠關(guān)養(yǎng)4只，用異氟烷麻醉，夾住后踝區(qū)域，清潔用于注射。使用帶有28. 5G針的胰島素注射器，將膠原酶(50 μ 1,10 mg/ml溶于含有50 mM NaH2POjP 150mM NaCl的PBS (pH 7. 4)中)注射到所有大鼠右跟腱的骨-肌腱連接處附近(圖3)。膠原酶注射后7天，使用帶有28. 5G針的胰島素注射器，以30 μ I總體積給予溶媒或I. 02 μ g、10. 2 μ g或102 μ g的rhroGF-BB治療。在7天(基線)、14天和28天將動物處死用于肌腱損傷的組織病理學(xué)評價和生物力學(xué)評價。在每組15只動物中，6只動物用于組織病理學(xué)，取9只動物的后腿(經(jīng)治療和未治療的后肢兩者)，切開，冷凍用于后續(xù)生物力學(xué)評價。下面提供生物力學(xué)評價的描述。表I.治療組
權(quán)利要求
1.一種治療腱病的方法，所述方法包括給予受累部位有效量的包含roGF和緩沖液的組合物。
2.權(quán)利要求I的方法，其中所述腱病是腱退變。
3.權(quán)利要求I的方法，其中所述腱病是腱炎。
4.權(quán)利要求I的方法，其中所述腱病是腱鞘炎。
5.權(quán)利要求1-4中任一項的方法，其中所述I3DGF選自TOGF-AA、PDGF-BB,PDGF-AB,PDGF-CC 和 PDGF-DD。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述I3DGF是TOGF-BB。
7.權(quán)利要求5的方法，其中所述TOGF是重組人(rh)PDGF-BB0
8.權(quán)利要求6-7中任一項的方法，其中所述有效量的組合物包含介于每劑量約75μ g 和約 7，500 μ g 之間的 PDGF-BB。
9.權(quán)利要求6-7中任一項的方法,其中所述有效量的組合物包含介于每劑量約500μ g-約 1，000 μ g 之間的 PDGF-BB。
10.權(quán)利要求6-7中任一項的方法，其中所述有效量的組合物包含介于每劑量約5，000 μ g 至約 7，500 μ g 之間的 PDGF-BB。
11.權(quán)利要求6-7中任一項的方法,其中所述有效量的組合物包含介于每劑量約450μ g-約 3000 μ g 之間的 PDGF-BB。
12.權(quán)利要求6-7中任一項的方法，其中所述有效量的組合物包含介于每劑量約400μ g-約 1000 μ g 之間的 PDGF-BB。
13.權(quán)利要求6-7中任一項的方法,其中所述有效量的組合物包含介于每劑量約500μ g-約 900 μ g 之間的 PDGF-BB。
14.權(quán)利要求6-7中任一項的方法,其中所述有效量的組合物包含介于每劑量約600μ g-約 800 μ g 之間的 PDGF-BB。
15.權(quán)利要求6-7中任一項的方法,其中所述有效量的組合物包含介于每劑量約650μ g-約 750 μ g 之間的 PDGF-BB。
16.權(quán)利要求6-7中任一項的方法，其中所述有效量的組合物包含每劑量約700μ g的 PDGF-BB。
17.權(quán)利要求1-16中任一項的方法，其中所述組合物的體積為約I.O-約2. O ml/劑量。
18.權(quán)利要求1-16中任一項的方法，其中所述組合物的體積約為I.5 ml/劑量。
19.權(quán)利要求1-18中任一項的方法，其中所述緩沖液選自磷酸緩沖鹽溶液(“PBS”)、乙酸鈉、乙酸銨、乙酸、檸檬酸、檸檬酸鈉、三(羥甲基)氨基乙烷(“tris”)、N-2-羥乙基哌嗪-N’ -2-乙磺酸(“HEPES”)、3-(N-嗎啉代)丙磺酸(“MOPS”)、2_(N-嗎啉代)乙磺酸(“MES”)、N-(2-乙酰氨基)亞氨基二乙酸(“ADA”)、哌嗪-N，N’-雙(2-乙磺酸)(“PIPES”)和N-(2-乙酰氨基)-2-氨基乙烷磺酸(“ACES”)。
20.權(quán)利要求19的方法，其中所述緩沖液是乙酸鈉。
21.權(quán)利要求20的方法，其中乙酸鈉的濃度介于約10mM和約100 mM之間。
22.權(quán)利要求21的方法，其中乙酸鈉的濃度約為20禮。
23.權(quán)利要求1-22中任一項的方法，其中所述組合物的pH介于約4.O和約7. O之間。
24.權(quán)利要求23的方法，其中所述組合物的pH約為6。
25.權(quán)利要求1-24中任一項的方法，其中通過直接注射至受累部位來給藥。
26.權(quán)利要求25的方法，其中所述受累部位是骨-肌腱連接處。
27.權(quán)利要求25的方法，其中所述受累部位是肌腱。
28.權(quán)利要求1-27中任一項的方法,其中所述腱病選自跟腱病、館腱病、夕卜上媒炎、內(nèi)上髁炎、足底筋膜炎和肌腱套腱病。
29.權(quán)利要求1-27中任一項的方法，其中所述腱病是外上髁炎。
30.權(quán)利要求1-29中任一項的方法，其中以單劑量給予所述組合物。
31.權(quán)利要求1-30中任一項的方法，其中通過單次注射給予所述組合物。
32.權(quán)利要求1-29中任一項的方法，其中以不止一個劑量給予所述組合物。
33.權(quán)利要求1-29或32中任一項的方法，其中通過單次注射一周一次給予所述組合物達(dá)4周。
34.權(quán)利要求1-33中任一項的方法，其中與基線相比，所述方法導(dǎo)致在給藥約7天內(nèi)肌腱強度提高至少約60%。
35.權(quán)利要求1-33中任一項的方法，其中與基線相比，所述方法導(dǎo)致在給藥約7天內(nèi)肌腱強度提高至少約65%。
36.權(quán)利要求1-33中任一項的方法，其中與基線相比，所述方法導(dǎo)致在給藥約7天內(nèi)肌腱強度提高至少約70%。
37.權(quán)利要求1-36中任一項的方法，其中所述方法導(dǎo)致肌腱在給藥約7天內(nèi)達(dá)到其最終強度的至少約80%，其中在給藥后約21天測量最終強度。
38.權(quán)利要求1-36中任一項的方法，其中所述方法導(dǎo)致肌腱在給藥約7天內(nèi)達(dá)到其最終強度的至少約85%，其中在給藥后約21天測量最終強度。
39.權(quán)利要求1-36中任一項的方法，其中所述方法導(dǎo)致肌腱在給藥約7天內(nèi)達(dá)到其最終強度的至少約90%，其中在給藥后約21天測量最終強度。
40.一種治療腱病的方法，所述方法包括給予受累部位有效量的由TOGF和緩沖液組成的組合物。
41.權(quán)利要求40的方法，其中所述腱病是腱退變。
42.權(quán)利要求40的方法，其中所述腱病是腱炎。
43.權(quán)利要求40的方法，其中所述腱病是腱鞘炎。
44.權(quán)利要求40-43中任一項的方法，其中所述I3DGF選自roGF-AA、roGF-BB、roGF-AB、PDGF-CC和 PDGF-DD。
45.權(quán)利要求44的方法，其中所述I3DGF是TOGF-BB。
46.權(quán)利要求45的方法，其中所述TOGF是重組人(rh)PDGF-BB0
47.權(quán)利要求44-45中任一項的方法，其中所述有效量的組合物包含介于每劑量約75μ g 和約 7，500 μ g 之間的 PDGF-BB。
48.權(quán)利要求44-45中任一項的方法，其中所述有效量的組合物包含介于每劑量約·500 μ g-約 1，000 μ g 之間的 PDGF-BB。
49.權(quán)利要求44-45中任一項的方法，其中所述有效量的組合物包含介于每劑量約·5,000 μ g 至約 7，500 μ g 之間的 PDGF-BB。
50.權(quán)利要求44-45中任一項的方法，其中所述有效量的組合物包含介于每劑量約450 μ g-約 3000 μ g 之間的 PDGF-BB。
51.權(quán)利要求44-45中任一項的方法，其中所述有效量的組合物包含介于每劑量約400 μ g-約 1000 μ g 之間的 PDGF-BB。
52.權(quán)利要求44-45中任一項的方法，其中所述有效量的組合物包含介于每劑量約500 μ g-約 900 μ g 之間的 PDGF-BB。
53.權(quán)利要求44-45中任一項的方法，其中所述有效量的組合物包含介于每劑量約600 μ g-約 800 μ g 之間的 PDGF-BB。
54.權(quán)利要求44-45中任一項的方法，其中所述有效量的組合物包含介于每劑量約650 μ g-約 750 μ g 之間的 PDGF-BB。
55.權(quán)利要求44-45中任一項的方法，其中所述有效量的組合物包含每劑量約700μ g 的 PDGF-BB。
56.權(quán)利要求40-55中任一項的方法，其中所述組合物的體積為約I.O-約2. O ml/劑量。
57.權(quán)利要求40-55中任一項的方法，其中所述組合物的體積約為I.5 ml/劑量。
58.權(quán)利要求40-57中任一項的方法，其中所述緩沖液選自磷酸緩沖鹽溶液(“PBS”)、乙酸鈉、乙酸銨、乙酸、檸檬酸、檸檬酸鈉、三(羥甲基)氨基乙烷(“tris”)、N-2-羥乙基哌嗪-N’ -2-乙磺酸(“HEPES”)、3-(N-嗎啉代)丙磺酸(“MOPS”)、2_ (N-嗎啉代)乙磺酸(“MES”)、N-(2-乙酰氨基)亞氨基二乙酸(“ADA”)、哌嗪-N，N’-雙(2-乙磺酸)(“PIPES”)和N-(2-乙酰氨基)-2-氨基乙烷磺酸(“ACES”)。
59.權(quán)利要求58的方法，其中所述緩沖液是乙酸鈉。
60.權(quán)利要求59的方法，其中所述乙酸鈉的濃度介于約10mM和約100 mM之間。
61.權(quán)利要求59的方法，其中所述乙酸鈉的濃度約為20mM。
62.權(quán)利要求40-61中任一項的方法，其中所述組合物的pH介于約4.O和約7. O之間。
63.權(quán)利要求62的方法，其中所述組合物的pH約為6。
64.權(quán)利要求40-63中任一項的方法，其中所述給藥通過直接注射至受累部位進(jìn)行。
65.權(quán)利要求64的方法，其中所述受累部位是骨-肌腱連接處。
66.權(quán)利要求64的方法，其中所述受累部位是肌腱。
67.權(quán)利要求40-66中任一項的方法,其中所述腱病選自跟腱病、館腱病、夕卜上媒炎、內(nèi)上髁炎、足底筋膜炎和肌腱套腱病。
68.權(quán)利要求40-66中任一項的方法,其中所述腱病是外上媒炎。
69.權(quán)利要求40-68中任一項的方法，其中以單劑量給予所述組合物。
70.權(quán)利要求40-69中任一項的方法，其中通過單次注射給予所述組合物。
71.權(quán)利要求40-68中任一項的方法，其中以不止一個劑量給予所述組合物。
72.權(quán)利要求40-68或71中任一項的方法，其中通過單次注射一周一次給予所述組合物達(dá)4周。
73.權(quán)利要求40-72中任一項的方法，其中與基線相比，所述方法導(dǎo)致在給藥約7天內(nèi)肌腱強度提高至少約60%。
74.權(quán)利要求40-72中任一項的方法，其中與基線相比，所述方法導(dǎo)致在給藥約7天內(nèi)肌腱強度提高至少約65%。
75.權(quán)利要求40-72中任一項的方法，其中與基線相比，所述方法導(dǎo)致在給藥約7天內(nèi)肌腱強度提高至少約70%。
76.權(quán)利要求40-75中任一項的方法，其中所述方法導(dǎo)致在給藥約7天內(nèi)肌腱達(dá)到其最終強度的至少約80%，其中在給藥后約21天測量最終強度。
77.權(quán)利要求40-75中任一項的方法，其中所述方法導(dǎo)致在給藥約7天內(nèi)肌腱達(dá)到其最終強度的至少約85%，其中在給藥后約21天測量最終強度。
78.權(quán)利要求40-75中任一項的方法，其中所述方法導(dǎo)致在給藥約7天內(nèi)肌腱達(dá)到其最終強度的至少約90%，其中在給藥后約21天測量最終強度。
79.權(quán)利要求40-78中任一項的方法，其中所述方法由給予受累部位有效量的由I3DGF和緩沖液組成的組合物組成。
全文摘要
本文提供用于治療腱病的組合物和方法，所述腱病例如腱鞘炎、腱退變或腱炎，包括跟腱病、髕腱病、外上髁炎即“網(wǎng)球肘”、內(nèi)上髁炎即“高爾夫球員肘”、足底筋膜炎和肌腱套腱病，具體地講，本文涉及通過給予包含血小板衍生生長因子(PDGF)的組合物治療腱病的方法。
文檔編號A01N63/00GK102811622SQ201180010529
公開日2012年12月5日 申請日期2011年2月22日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月22日
發(fā)明者H.K.克斯特勒, D.J.拉杰-阿吉亞, V.沙 申請人:生物模擬治療公司