專利名稱：一種用于幼苗培育的小水體微生物群落調(diào)控方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種用于幼苗培育的小水體微生物群落調(diào)控方法，具體涉及水產(chǎn)無脊椎動物家系選育中用于幼苗培育的小水體微生物群落調(diào)控技術，屬于海水經(jīng)濟動物育苗技術領域。
背景技術：
南美白對蝦作為南方主要養(yǎng)殖品種，南方每年需要生產(chǎn)4000億-5000億以上的蝦苗。是對蝦產(chǎn)業(yè)的關鍵支柱之一。同樣東風螺苗需要量達到20億粒以上。自20世紀30-40年代，蝦苗培育成功，沿用的技術不斷進步，剪(燙)眼柄，人工培育親本，等技術不斷開發(fā)，而這些技術，絕大部分來自于生產(chǎn)第一線的技術員。東風螺苗是在1980s，才開始全人工培育，其技術發(fā)展剛起步。近十多年來，隨著沿海養(yǎng)殖的進行，水域環(huán)境改變，水質(zhì)惡化，病原生物積累，對蝦育苗變得困難了?，F(xiàn)代海水苗種培育產(chǎn)業(yè)分工已經(jīng)十分細致，從親本孵化到產(chǎn)卵，進一步進入無節(jié)幼體或面盤幼體期，為一個階段，而幼體到幼苗(Icm大小)為一個階段，可以由不同苗場操作。目前無節(jié)幼體或面盤幼體到幼苗制作于室內(nèi)池，池大小為20-30立方，一般每池放苗無節(jié)幼體400-1000萬尾(20-50萬尾/立方)或面盤幼體100萬尾。如蝦苗培育技術過程包括準備池子，作水，打底，入無節(jié)幼體，無節(jié)幼體期l-2d，蚤狀幼體-投浮游硅藻l-2d，糠蝦期-投開口餌料和浮游硅藻，仔蝦期-餌料投喂。由于密度大，水體小，光照不足(1000 ； LUX,多數(shù)在200-500)，溫度高(無節(jié)-糠蝦四-31，后期31-33)，使苗池水體急劇變化，系統(tǒng)及其不穩(wěn)定，由此帶來高風險。水體不攜帶病原問題。其中作為育苗風險的最大問題，還是病毒和細菌病原(如 WSSV、TSV、IMNV、致病弧菌等)傳入育苗體系中，而幼體對多數(shù)病原是敏感的。通過超濾-消毒處理使多數(shù)病毒被阻擋在體系外，但是，幼體體內(nèi)攜帶的弧菌病原，早期投入藻類攜帶的弧菌，均將導致育苗過程的病害。在幼體的早期培育(如無節(jié)幼體到糠蝦幼體，東風螺面盤幼體期)，殘藻帶來水體的污染，加上幼體開口后腸道生態(tài)系統(tǒng)重新構建，開口餌料攝入后腸道消化功能較差，體質(zhì)減弱，易于感染病菌，常常導致開口時期的大量死亡。中后期水質(zhì)敗壞嚴重。苗池育苗，換水量少，早期(IOd)基本不換水，投入的餌料均含高蛋白(不低于53%)，富含氨基酸、糖類，各種維生素等高營養(yǎng)餌料，細菌種群可以爆發(fā)性生長，再急劇降低濃度，從而帶來水質(zhì)理化因素變化，如堿度、PH、氧化還原電位、含氮無機小分子物、磷酸鹽等，使水體不適合于生物生存生長，進而使幼體或幼苗生活殘余物不被溶解和分解，水體出現(xiàn)大量塊狀物，或者其他生物生長，出現(xiàn)粘性物。由此，導致幼苗死亡率高居不下，如對蝦，除潘狀幼體Z2期開始，開口攝食導致死亡高峰，糠蝦幼體，也有高的死亡率，當進入仔蝦期，多部分苗池已經(jīng)存活率低于50%。目前，有一些技術的提出，對解決以上問題提供了新的途徑。如生態(tài)育苗，利用室外大池對后期苗繼續(xù)培育，但是，劇烈的條件變化和室外相對惡劣的培育條件帶來的高死亡率問題。也有人采用清水育苗技術，嚴格水處理，盡量控制和減少微生物的干擾，由于生態(tài)系統(tǒng)單一脆弱，這往往帶來高的風險。專禾Ij (申請?zhí)?8110092.9)是蝦苗育苗的設施控制系統(tǒng)，專禾Ij (申請?zhí)?03145558. 1)涉及一種蝦苗培育水過濾，臭氧處理方法；專利(申請?zhí)?01010186226. 7)涉及切斷病毒W(wǎng)SSV和TSV傳染途徑的育苗方法；專利(申請?zhí)?00810158016.X)涉及強對蝦苗種的免疫力的葡聚糖和殼聚糖構成的藥物浸浴液，營養(yǎng)強化的人工配合飼料培育蝦苗；專利(申請?zhí)?0081019擬89. 7)提供一種工廠化育苗設施設備和循環(huán)養(yǎng)殖模式 ’專利(申請?zhí)?2135494. 4)是一種消毒處理，卵子脫毒，代替鹵蟲的無WSSV對蝦苗種生產(chǎn)技術；專利(申請?zhí)?01010594085. 2)利用消毒封閉式設施，生物活菌，控制飼料的蝦苗生產(chǎn)技術；專利(申請?zhí)?01110033585. 3)培育輪蟲為主要餌料的蝦苗培育技術。以上所申報的專利技術不涉及本文申請的發(fā)明技術育苗水體發(fā)酵并維持的內(nèi)容。目前水產(chǎn)育種如對蝦、東風螺多采用多性狀家系選育，生產(chǎn)培育中，多數(shù)要求每一對親本的單獨培育后代，苗種數(shù)量少，水體更難控制，變化起伏大，難以調(diào)理，幼體入池后
1-2d中存活率低，開口期高死亡率，糠蝦期餌料營養(yǎng)不足導致種苗質(zhì)量差，后期水質(zhì)易于惡化等問題。相對于目前廣泛采用的工廠化培育幼苗技術，小水體的控制猶位困難，即使成功，也影響苗的后期生長，未見針對這一問題的同類技術。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種用于幼苗培育的小水體微生物群落調(diào)控方法，具體提供一種水產(chǎn)無脊椎動物家系選育中用于幼苗培育的小水體微生物群落調(diào)控技術。為了解決上述問題，本發(fā)明所采用的技術方案是
一種用于幼苗培育的小水體微生物群落調(diào)控方法，本發(fā)明適用于對蝦、東風螺的海水經(jīng)濟動物的多性狀家系選育過程中每一對親本家系后代單獨培育的小水體，一般在容積0. 5 Im3的玻璃鋼桶，其控制時期為幼體進入前期、有浮游藻類的幼體早期(幼體進入
2-3d)、幼苗期(蝦苗幼苗開口攝食人工餌料到變態(tài)完畢，東風螺苗固著生長基本穩(wěn)定)，主要控制對象為水體的銨氮、亞硝氮、總堿度、氧化還原電位ORP以及可溶性的蛋白質(zhì)類、氨基酸、糖類、維生素等微生物營養(yǎng)因素；具體方法如下
(1)在容積0.5 Im3的玻璃鋼桶即小水體中，用碳酸氫納或其他重碳酸鹽、碳酸鹽及氫氧化物調(diào)整總堿度在2-3 mg/L,或通過換水保持小水體總堿度在2-;3mg/L，同時水體PH 應在7. 5-9. 0這個范圍；
(2)步驟(1)的調(diào)整方法每次調(diào)整總堿度的幅度為24h不超過0.1 0. 2mg/L,以4 的間隔連續(xù)調(diào)整；
(3)小水體氧化還原電位ORP利用維生素C或其磷脂衍生物調(diào)整小水體較高的氧化還原電位0RP，利用碳酸氫納或其他重碳酸鹽、碳酸鹽及氫氧化物調(diào)整較低的氧化還原電位 0RP，保持小水體在氧化還原電位ORP在-10 +50mv之間；
(4)以可溶性魚粉蛋白胨、酵母膏、復合氨基酸、葡萄糖保持小水體中可溶性蛋白為 1 20mg/L，復合氨基酸濃度為0. 1 1. 2mg/L,葡萄糖濃度為0. 1 0. 5mg/L,以磷酸二氫鈉保持小水體正磷酸鹽為0. 1 0. 5mg/L,以5 7d間隔定期投放復合B族維生素，投放量為 50 100mg/L ；(5)在另一小水體，培養(yǎng)餌料硅藻，收集濃縮藻類，并通過投放抗生素，清除雜菌，再稀釋培養(yǎng)，在硅藻培養(yǎng)液中，加入光合細菌制劑，使光合細菌制劑終濃度達到IO4 IO5Cfu/ mL,并保持對-4他；
(6)在步驟(1廣(5)的基礎上，當硅藻培養(yǎng)液中硅藻在進入對數(shù)生長期前8 12h，投放入權利要求1的育苗小水體，水體內(nèi)硅藻的終濃度IO3 IO4個/mL ；
(7)在滿足步驟(1) (6)的基礎上，開始投放對蝦或東風螺的海水經(jīng)濟動物的幼體， 進行培育，保持300-500LX的光照；
(8)在滿足步驟(1) (7)的基礎上，當小水體幼體開口攝食人工餌料時，投放枯草芽孢桿菌制劑，在Mh內(nèi)使水體內(nèi)枯草芽孢桿菌終濃度為IO5 106cfu/mL，并長期保持小水體枯草芽孢桿菌不低于IO5CfuAiL ；
(9)通過在小水體中加入氨基酸發(fā)泡劑，通氣和祛除水面泡沫，或通過換水，維持水體好氧異養(yǎng)菌濃度不高于IO6CfuAiL ；
(10)培育幼體后期，投放含有0.05 0. 1%β -環(huán)糊精或0. 1 0. 2%殼聚糖于小水體中，強化殘余物分解，控制水體中銨氮(NH4-N)不超過彡0. 5mg/L ；
(11)培育幼體后期，通過交換海水使小水體中亞硝氮(NO2-N)不超過為0.lmg/L ；用于交換海水必須通過步驟(1) (5)的預先處理步驟，交換的比例不超過小水體的15% 25%/
do上述步驟(5)所述的光合細菌是指紅假單胞菌，步驟(6)所述的硅藻是指骨條藻， 角毛藻或幾種硅藻組合，步驟(9)所述的氨基酸發(fā)泡劑是指月桂?；劝彼徕c或?；z原肽；投放的浮游藻類、各種餌料必須做滅菌處理。在生產(chǎn)實際中，已經(jīng)證實使用本技術至少可以提高蝦苗生產(chǎn)的成活率20-30%。本發(fā)明針對小水體育苗水質(zhì)的理化特性，利用外源微生物及育苗水體的發(fā)酵培養(yǎng)基及其相關操作程序和技術，人為改變海水的理化因子，優(yōu)勢微生物種群和數(shù)量，構建防病、有利于蝦苗生長，提高成活率的育苗水體。
具體實施例方式下面通過實施例對本發(fā)明做進一步詳細說明，這些實施例僅用來說明本發(fā)明，并不限制本發(fā)明的范圍。實施例1
蝦苗培育
用80目篩絹，60-80cm沙層(粗％。細％，中％)過濾海水，放置時間7d清除浮游動物及其休眠卵(二次萌發(fā)，敵百蟲，0.75mg/L)。消毒水體，殺滅菌體、真菌。減少有機物和其他有害物質(zhì)(ClO2，lmg/L)；
用碳酸氫納調(diào)整水體總堿度在2-3 mg/L，ORP不低于-10mv，投放可溶性蛋白胨、氨基酸、葡萄糖和磷酸二氫鈉分別達到1 ang/L、0· 1 0. ang/L、0· 1 0. ang/L、0. 1 0. 2mg/L,加入適量復合B族維生素；
投放餌料硅藻、光合細菌、少量芽孢桿菌，使水體終濃度IO3 IO4個/mL，IO4 IO5Cfu/ mL, IO3 IO4 cfu/mL ；
0. 5m3水體投入單一親本的凡納濱對蝦無節(jié)幼體，密度不超過20萬/m3，光照200-5001x，逐步增加光照，到仔蝦為20001x，鹽度22%。 沈％。，充氣量1%，使幼體不下沉為度。充氣量逐步加大。幼體進入育苗池的水溫為^.5°C，5個h升高到30°C，糠蝦幼體M2期開始降至^TC,仔蝦P2期降至^°C。無節(jié)幼體變態(tài)為蚤狀幼體時，增加骨條藻達到IO4 IO5個/mL，Z2開始輔以高效微囊餌料，投喂配合飼料6次/d，每次0. 5-1. 2g/m3。Zl以200目的篩絹網(wǎng)過濾；Z2以150目的篩絹網(wǎng)過濾。Ti以120目篩絹過濾，投喂配合飼料和鹵蟲無節(jié)幼體，糠蝦幼體投喂微囊餌料、蝦片及適量輪蟲。P1-P12投喂配合飼料6次/d，和鹵蟲無節(jié)幼體，微粒餌料二餐，以100目的篩絹網(wǎng)過濾，逐步過度到用40目的篩絹過濾，然后用120目的篩絹濾掉顆粒較小的飼料；
當小水體幼體開口攝食人工餌料時，投放枯草芽孢桿菌制劑，在Mh內(nèi)使水體終濃度為IO6 107cfu/mL，并長期保持小水體枯草芽孢桿菌不低于106cfu/mL。通過加入氨基酸發(fā)泡劑(如月桂酰基谷氨酸鈉、，?；z原肽)，通氣和祛除水面泡沫，或通過換水，維持水體好氧異養(yǎng)菌濃度不高于IO6CfuAiL ；
培育幼體后期，投放含有0. 05 0. 1% β -環(huán)糊精或0. 1 0. 2%殼聚糖于小水體，強化殘余物分解，控制水體銨氮(NH4-N)不超過< 0. 5mg/ L ；
培育幼體后期，通過交換海水使小水體亞硝氮(NO2-N)不超過為0. lmg/L。
實施例2東風螺苗的培育
用80目篩絹，60-80cm沙層(粗％。細％，中％)過濾海水，放置時間7d清除浮游動物及其休眠卵(二次萌發(fā)，敵百蟲，0.75mg/L)。消毒水體，殺滅菌體、真菌。減少有機物和其他有害物質(zhì)(ClO2，lmg/L)；
用碳酸氫納調(diào)整水體總堿度在2-3 mg/L，ORP不低于-10mv，投放可溶性蛋白胨、氨基酸、葡萄糖和磷酸二氫鈉分別達到1 ang/L、0· 1 0. ang/L、0· 1 0. ang/L、0. 1 0. 2mg/L,加入適量復合B族維生素；
投放餌料硅藻、光合細菌、少量芽孢桿菌，使水體終濃度IO4 IO5個/mL，IO4 IO5Cfu/mL, IO3 IO4 cfu/mL ；
東風螺苗的幼蟲的分期分別是早期面盤幼體階段、后期面盤幼體、具變態(tài)能力的面盤幼體、變態(tài)后的稚螺。目前無節(jié)幼體或面盤幼體到幼苗制作于室內(nèi)池，池大小為20-30m3，一般投放面盤幼體8萬 10萬尾/m3。親本選育時使用0. 5m3水體，每一個親本單獨所產(chǎn)卵袋培育，當面盤幼蟲達到布幼密度時，將卵囊移至另一個育苗池繼續(xù)孵化；
幼體入池時，應先消毒，將幼體移入手抄網(wǎng)OOO目篩絹)，在200ppm福爾馬林溶液或20ppm聚維酮碘溶液中浸泡30-60s，取出用干凈海水沖洗，然后移入池中；
方斑東風螺卵囊孵化和幼蟲發(fā)育適宜水溫27 30°C ；適宜鹽度3(Γ38，其適宜和最適鹽度下限分別為30和32。光照強度300 5001x，連續(xù)充氣；pH值7. 9 8. 5 ；
前4天不換水，以添加藻水為主。東風螺卵囊孵出的面盤幼蟲就開始攝食亞心形扁藻和角毛藻。維持水中藻類濃度1. 5 2. O X IO4個/mL ；4天后開始換水，每天換水量為50%，逐步到幼體培育日換水量200%。浮游期前期用100目篩網(wǎng)，根據(jù)幼體大小更換不同的網(wǎng)目。后期幼蟲較大，使用80目網(wǎng)兜，變態(tài)后改用60目網(wǎng)進行換水；
東風螺幼蟲階段營濾食性攝食方式。方斑東風螺浮游期為植食性，以活藻為主。主要品種有巴夫藻、扁藻、角毛藻、金藻。投喂的餌料以處于指數(shù)期的活藻為佳，老化或被原生動物、細菌污染的餌料不能投喂；
幼蟲變態(tài)后改投魚肉、蟹漿；蟹漿和螺旋藻粉用200目網(wǎng)揉搓后投喂。投餌量以池攝食完為宜，此時水中藻類濃度維持在2 2. 5 X IO4個/mL ；
當小水體幼體開口攝食人工餌料時，投放枯草芽孢桿菌制劑，在Mh內(nèi)使水體終濃度為IO6 107cfu/mL，并長期保持小水體枯草芽孢桿菌不低于106cfu/mL。通過加入氨基酸發(fā)泡劑(如月桂酰基谷氨酸鈉、，?；z原肽)，通氣和祛除水面泡沫，或通過換水，維持水體好氧異養(yǎng)菌濃度不高于IO6CfuAiL ；
培育幼體后期，投放含有0. 05 0. 1%β -環(huán)糊精或0. 1 0. 2%殼聚糖于小水體，強化殘余物分解，控制水體銨氮(NH4-N)不超過< 0.5mg/L。每日中午配合投喂小球藻5. OX IO4Cells. πιΓ1 ；
培育幼體后期，通過交換海水使小水體亞硝氮(NO2-N)不超過為0. lmg/L ；幼蟲變態(tài)期，13天后大部分幼蟲變態(tài)為稚螺，出現(xiàn)足與吸管，開始營底棲生活。此時將幼蟲收集轉移到稚螺池進行培育。幼蟲食性由濾食浮游藻類轉化為攝食魚、蝦、蟹肉。仍繼續(xù)投喂活藻，濃度維持在5萬 10萬細胞/毫升，再投喂少量蟹肉和蟹漿。稚螺有爬壁習性，在池內(nèi)壁貼海綿10厘米至水位線，每天淋濕海綿3次，防止稚螺干燥死亡；按照上述方法，稚螺產(chǎn)量提高25% 35%，品質(zhì)優(yōu)良。
權利要求
1.一種用于幼苗培育的小水體微生物群落調(diào)控方法，其特征在于本方法適用于對蝦、東風螺的海水經(jīng)濟動物的多性狀家系選育過程中每一對親本家系后代單獨培育的小水體，小水體指容積為0. 5 Im3的玻璃鋼桶，調(diào)控方法是指，在小水體中主要通過控制水體的銨氮、亞硝氮、總堿度、氧化還原電位ORP以及可溶性的蛋白質(zhì)類、氨基酸、糖類、維生素、 正磷酸鹽這些微生物營養(yǎng)因素來實現(xiàn)，具體方法如下(1)在容積0.5 Im3的玻璃鋼桶即小水體中，用碳酸氫納或其他重碳酸鹽、碳酸鹽及氫氧化物調(diào)整總堿度在2-3 mg/L,或通過換水保持小水體總堿度在2-;3mg/L，同時水體PH 在7. 5-9. 0這個范圍；(2)步驟(1)的調(diào)整方法每次調(diào)整總堿度的幅度為24h不超過0.1 0. 2mg/L,以4 的間隔連續(xù)調(diào)整；(3)小水體氧化還原電位ORP利用維生素C或其磷脂衍生物調(diào)整小水體較高的氧化還原電位0RP，利用碳酸氫納或其他重碳酸鹽、碳酸鹽及氫氧化物調(diào)整較低的氧化還原電位 0RP，保持小水體在氧化還原電位ORP在-10 +50mv之間；(4)以可溶性魚粉蛋白胨、酵母膏、復合氨基酸、葡萄糖保持小水體中可溶性蛋白為 1 20mg/L，復合氨基酸濃度為0. 1 1. 2mg/L,葡萄糖濃度為0. 1 0. 5mg/L,以磷酸二氫鈉保持小水體正磷酸鹽為0. 1 0. 5mg/L,以5 7d間隔定期投放復合B族維生素，投放量為 50 100mg/L ；(5)在另一小水體，培養(yǎng)餌料硅藻，收集濃縮藻類，并通過投放抗生素，清除雜菌，再稀釋培養(yǎng)，在硅藻培養(yǎng)液中，加入光合細菌制劑，使光合細菌制劑終濃度達到IO4 IO5Cfu/ mL,并保持對-4他；(6)在步驟(1廣(5)的基礎上，當硅藻培養(yǎng)液中硅藻在進入對數(shù)生長期前8 12h，投放入權利要求1的育苗小水體，水體內(nèi)硅藻的終濃度為IO3 IO4個/mL ；(7)在滿足步驟(1) (6)的基礎上，開始投放對蝦或東風螺的海水經(jīng)濟動物的幼體， 進行培育，保持300-500LX的光照；(8)在滿足步驟(1) (7)的基礎上，當小水體幼體開口攝食人工餌料時，投放枯草芽孢桿菌制劑，在Mh內(nèi)使水體內(nèi)枯草芽孢桿菌終濃度為IO5 106cfu/mL，并長期保持小水體枯草芽孢桿菌不低于IO5CfuAiL ；(9)通過在小水體中加入氨基酸發(fā)泡劑，通氣和祛除水面泡沫，或通過換水，維持水體好氧異養(yǎng)菌濃度不高于IO6CfuAiL ；(10)培育幼體后期，投放含有0.05 0. 1%β -環(huán)糊精或0. 1 0. 2%殼聚糖于小水體中，強化殘余物分解，控制水體銨氮NH4-N不超過< 0. 5mg/L ；(11)培育幼體后期，通過交換海水使小水體亞硝氮NO2-N不超過為0.lmg/L ；用于交換海水必須通過步驟(1) (5)的預先處理步驟，交換的比例不超過小水體的15% 25%/d。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種用于幼苗培育的小水體微生物群落調(diào)控方法，其特征在于步驟(5)所述的光合細菌是指紅假單胞菌。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種用于幼苗培育的小水體微生物群落調(diào)控方法，其特征在于步驟(6)所述的硅藻是指骨條藻，角毛藻或幾種硅藻組合。
4.根據(jù)權利要求1所述的一種用于幼苗培育的小水體微生物群落調(diào)控方法，其特征在于步驟(9)所述的氨基酸發(fā)泡劑是指月桂酰基谷氨酸鈉或?；z原肽。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于幼苗培育的小水體微生物群落調(diào)控方法，本方法適用于對蝦、東風螺的海水經(jīng)濟動物的多性狀家系選育過程中每一對親本家系后代單獨培育的小水體，小水體指容積為0.5～1m3的玻璃鋼桶，調(diào)控方法是指，在小水體中主要通過控制水體的銨氮、亞硝氮、總堿度、氧化還原電位ORP以及可溶性的蛋白質(zhì)類、氨基酸、糖類、維生素、正磷酸鹽這些微生物營養(yǎng)因素來實現(xiàn)，本方法針對小水體育苗水質(zhì)的理化特性，利用外源微生物及育苗水體的發(fā)酵培養(yǎng)基及其相關操作程序和技術，人為改變海水的理化因子，優(yōu)勢微生物種群和數(shù)量，構建防病、有利于蝦苗生長，提高成活率的育苗水體。
文檔編號A23K1/18GK102550459SQ20121001857
公開日2012年7月11日 申請日期2012年1月20日 優(yōu)先權日2012年1月20日
發(fā)明者楊世平, 王成桂, 申玉春, 邱德全, 邱明生 申請人:廣東海洋大學