專利名稱：防止桉樹繼代培養(yǎng)玻璃化的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)生物技術(shù)中植物組織培養(yǎng)的方法，具體地說，涉及一種防止桉樹繼代培養(yǎng)玻璃化的方法。
背景技術(shù)：
在桉樹的大規(guī)模工廠化育苗中，隨著不定芽培養(yǎng)繼代代數(shù)的增加，培養(yǎng)后代玻璃化比率也隨之加大，叢生芽分化率降低，嚴(yán)重影響了組培生產(chǎn)的進(jìn)行。玻璃化 (Vitrification)是植物組織培養(yǎng)的三大難題之一，是指在植物組織培養(yǎng)過程中所特有的一種生理失調(diào)或生理病變。其特征是不定芽呈半透明玻璃狀，矮小腫脹；葉片呈淺綠色， 厚而狹長，脆弱易碎；葉表面缺少角質(zhì)層和蠟質(zhì)；莖短粗扁平，節(jié)間很短。研究證明，玻璃化不是基因型病變，而是組織培養(yǎng)過程中措施不當(dāng)造成的非遺傳的生理性失調(diào)癥狀。玻璃化的形成與植物組織生長環(huán)境中的水分、營養(yǎng)條件、激素水平有關(guān)，改善培養(yǎng)條件可緩解玻璃化的程度，但難以徹底消除。目前預(yù)防桉樹繼代培養(yǎng)中玻璃化現(xiàn)象的發(fā)生，一般采用降低培養(yǎng)基激素水平，如 NAA和6-BA等，特別是6-BA，但是激素NAA和6-BA是不定芽分化所需要的，無法采取減少或取消激素用量的措施來減少或防止玻璃化現(xiàn)象的發(fā)生，因此，探索激素的替代物，進(jìn)而減少激素用量，防止桉樹繼代培養(yǎng)中玻璃化現(xiàn)象的發(fā)生對促進(jìn)桉樹大規(guī)模工廠化育苗的發(fā)展具有重要的理論與實(shí)踐意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供出一種簡便、經(jīng)濟(jì)，且可減少培養(yǎng)基中的激素用量的一種防止桉樹繼代培養(yǎng)玻璃化的方法。本發(fā)明人用含有稀土元素的培養(yǎng)基對桉樹不定芽進(jìn)行增殖培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)證明，由于稀土元素具有激素樣的作用，可以部分替代α-萘乙酸(NAA)或完全替代Ν6-苯甲酰基酰嘌呤出-BA)，從而減少培養(yǎng)基中激素的用量，防止桉樹繼代培養(yǎng)過程中玻璃化現(xiàn)象的發(fā)生， 進(jìn)而實(shí)現(xiàn)了本發(fā)明的目的。本發(fā)明的防止桉樹繼代培養(yǎng)玻璃化的方法，包括以下的步驟(I)配制培養(yǎng)基在改良Murashige & Skoog(MS)培養(yǎng)基中添加3_5g/L的瓊脂, 10-30g/L 的蔗糖，0-3.0mg/L N6-苯甲酰基酰嘌呤(6-BA)，0-1. Omg/L α -萘乙酸(NAA)， O. 001-1. OmmoI/L的單一或混合稀土化合物，調(diào)節(jié)ΡΗ5. 4 5. 8，并進(jìn)行高壓滅菌處理；(2)繼代培養(yǎng)將桉樹不定芽接入上述培養(yǎng)基中，在溫度26-28 °C，光照為 3000-70001ux的條件下，每天光照10-12小時，培養(yǎng)20-30天。在上述(I)步驟中，所用的單一或混合稀土元素的化合物包括鑭、鈰、釹、鐠、釤的硝酸鹽和氧化物；步驟(2)所述的桉樹不定芽是由桉樹離體芽器官誘導(dǎo)分化而來的叢生芽。目前國內(nèi)尚未有關(guān)于防止桉樹繼代培養(yǎng)玻璃化的專利和文獻(xiàn)報(bào)道，而本發(fā)明具有簡單、易行、經(jīng)濟(jì)的特點(diǎn)，特別是對巨桉X尾葉桉(E. grandisXE. urophylla)無性系十分有效。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例是對本發(fā)明的進(jìn)一步說明，不是對本發(fā)明的限制。實(shí)施例一配制培養(yǎng)基A、B、C及對照組(CK)，培養(yǎng)基A、B、C及CK添加瓊脂3. 2g/L和蔗糖25g/L，其中N6-苯甲酰基酰嘌呤(6-ΒΑ)、α-萘乙酸(NAA)和硝酸釹[Nd(NO3)3]在培養(yǎng)基的濃度如下，將培養(yǎng)基經(jīng)高壓蒸氣滅菌處理后，接入桉樹不定芽，在溫度28 °C，光照為 50001uX，每天光照12小時的條件下培養(yǎng)25天后繼代苗含水量如下所示
權(quán)利要求
1.防止桉樹繼代培養(yǎng)玻璃化的方法，其特征在于包括以下步驟(1)配制培養(yǎng)基在改良Murashige& Skoog(MS)培養(yǎng)基中添加3_5g/L的瓊脂, 10-30g/L 的蔗糖，0-3. Omg/L N6-苯甲?；｀堰?6-BA)，0-1. Omg/L α -萘乙酸(NAA)， O. 001-1. OmmoI/L的單一或混合稀土化合物，調(diào)節(jié)ΡΗ5. 4 5. 8，并進(jìn)行高壓滅菌處理；(2)繼代培養(yǎng)將桉樹無性系不定芽接入上述培養(yǎng)基中，在溫度26-28V，光照為 3000-70001ux的條件下，每天光照10-12小時，培養(yǎng)20-30天。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的防止桉樹繼代培養(yǎng)玻璃化的方法，其特征在于所述的單一或混合稀土化合物包括鑭、鈰、釹、鐠、釤的硝酸鹽和氧化物。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的防止桉樹繼代培養(yǎng)玻璃化的方法，其特征在于所述的桉樹不定芽為由桉樹離體芽器官誘導(dǎo)分化而來的叢生芽。
全文摘要
本發(fā)明涉及的防止桉樹繼代培養(yǎng)玻璃化的方法，繼代苗在含有單一或混合稀土元素化合物的改良Murashige & Skoog(MS)培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，可有效地消除和防止桉樹繼代苗玻璃化現(xiàn)象的發(fā)生。所述單一或混合稀土元素化合物包括鑭、鈰、釹、鐠、釤的硝酸鹽和氧化物，且所述稀土元素可減少或替代培養(yǎng)基中的生長素或細(xì)胞分裂素。
文檔編號A01H4/00GK102577945SQ20121002130
公開日2012年7月18日 申請日期2012年1月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月31日
發(fā)明者吳俊 , 李鐵, 梁鈞淞, 玉桂成, 陳劍成, 黃麗丹, 黃光蘭 申請人:玉林市林業(yè)科學(xué)研究所