專利名稱：棉花葉片抗鹽鑒定方法
技術領域：
本發(fā)明涉及植物生理學，具體地，涉及棉花葉片抗鹽鑒定方法。
背景技術：
在棉花抗鹽鑒定方面，大多采用氯化鈉脅迫下沙培、水培或者是苗期施鹽脅迫的方法，主要是對種子萌發(fā)期和植株苗期的研究。但是，首先，種子萌發(fā)鑒定法要求種子量足夠大，苗期施鹽要求各時期的苗量較大。其次，采用這些鑒定方法進行大量材料鑒定時，要求實驗規(guī)模大，需大量的人力、物力。再次，這些方法所需時間較長，種子萌發(fā)鑒定法從播種到萌發(fā)需要10天左右。最后，低抗材料死亡率高，即使一些抗性材料的生長也會受到影響，不利于品種基因資源的利用及保存。 采用上述常用方法，對有限、珍貴或者難以收獲種子的材料進行抗鹽鑒定時，可能導致材料的死亡，使材料丟失，同時也不能找到材料的抗性水平。棉花的功能葉片是整個植株生理活性最高的葉片，可以代表棉株的生長狀況。棉花葉片棉球定位鑒定法對棉花植株進行局部鑒定，不但快速、簡單，而且可以有效的對棉花進行抗鹽鑒定，又不影響植株正常生長。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的探索一種快速、簡易、精準確定棉花抗鹽水平的方法，以期彌補常用棉花抗鹽鑒定方法的不足。本發(fā)明的目的是提供棉花葉片抗鹽鑒定方法。根據(jù)本發(fā)明的棉花葉片抗鹽鑒定方法，包括以下步驟I)選擇苗齡大小一致的棉苗；2)選擇完好無損，無受害現(xiàn)象的主莖(或側枝)功能葉或其鄰位葉；3)棉球定位處理在每株的功能葉或其鄰位葉的正面自葉柄處開始順時針或逆時針方向設定位置，將大小一致的近圓形棉球蘸滿設定濃度的鹽溶液，按固定方向依序放置于葉片表面的相應位置；4)抗性分級按照鹽溶液濃度大小分級，觀察處理部位是否反應確定其抗性水平。具體地，根據(jù)本發(fā)明的具體實施方式
的方法，包括1)棉花材料苗齡大小的選擇該方法對棉花苗齡大小要求不太嚴格，在苗期、蕾期、花鈴期等各時期都能進行。苗期植株幼嫩，生理代謝旺盛，反應較敏感；直至花鈴期，植株逐漸衰老，生理代謝減慢，反應不敏感。但是，實驗證明，棉花不同生育期的抗性水平趨勢是一致的。所以，每次處理最好保證材料的苗齡大小一致。2)材料葉片的選擇，處理時要選取葉齡大小一致的葉片，這里選擇主莖的功能葉片或其鄰位葉，從棉株頂部開始數(shù)，第三或第四個平展葉，即生理活性最強的葉片，該葉片可以代表整株棉花的生長狀況。如果，選取的葉片過于幼嫩，施用較低濃度鹽溶液時即表現(xiàn)出明顯鹽害癥狀，不能代表材料的真實抗性水平；而選取的葉片過于老化，處理后葉片沒有反應，亦顯示不出其真實的抗性水平；3)棉球定位處理根據(jù)不同鹽溶液濃度，在每株的功能葉的正面自葉柄處開始順時針或逆時針方向設定位置，將大小一致的近圓形棉球蘸滿設定濃度的鹽溶液，按照濃度依次增加的順序，順時針方向依序放置于葉片表面的相應位置。浸泡不同濃度鹽溶液的棉球要按照固定的順序進行放置，逆時針或者順時針都可，這樣方便結果調查；棉球大小要合適，直徑為Icm左右的圓形棉球即可，不宜過大，有些棉花葉子較小，棉球過大會導致不同處理棉球的粘連；亦不易過小，棉球小，蘸取得鹽溶液少，可能導致反應不明顯；棉球溶液要充足，但切勿過量，當放置在葉片時，沒有液體流出為宜。4)抗性分級按照鹽溶液濃度大小分級，分為5個濃度級別，觀察處理部位是否反應確定其抗性水平。在處理后的第三天進行調查，葉片表面出現(xiàn)的黃色干枯圓點即為鹽害癥狀。然后根據(jù)實際反應情況確定其抗性水平。本發(fā)明提供了棉花抗鹽研究方面的一種新方法，在國際和國內為獨創(chuàng)，具有以下優(yōu)點1、該方法大大縮短了實驗周期，從開始處理到調查結束，3天時間即可完成。2、該方法采用局部處理法，大大節(jié)約材料，僅一片葉子即可，處理后的后期危害幾乎沒有，不會影響植株的正常生長。對于有限或者珍稀材料具有特別重要的意義。3、該方法采用濃度大小分級，處理部位是否反應為標準，減少了人為誤差，操作。該方法操作簡單，容易掌握和推廣應用。


圖I棉球定位法處理棉葉浸泡了 5個濃度鹽溶液的棉球在葉片上位置，I (0%Nacl) ；2(0. 4% Nacl) ；3(1. 0% Nacl) ；4(1. 6% Nacl) ；5(22% Nacl) 圖 2 棉球定位鑒定法觀察結果從a-e為高抗至高感,其中,a.高抗,葉片無反應,I級；b.抗,5反應，1_4不反應，2級；c.耐，4-5有反應，1-3無反應，3級；d.感，3-5有反應，1-2無反應，4級；e.高感，2-5有反應，I無反應，5級；5個材料分別是闊葉棉101，闊葉棉9，中12，TM-1,闊葉棉4 ；苗齡65天，葉片是主莖上的功能葉(從棉株頂部開始數(shù)第4片平展葉)。圖片3不同生育期處理結果a苗期(第30天)；b蕾期(第65天)。
具體實施例方式實施例I葉片棉球定位法鑒定中半野生棉對氯化鈉的抗性1、材料、葉片的選擇材料的種植、管理等沒有具體要求。棉花苗齡的大小，即棉花生育期，沒有嚴格要求，在苗期、蕾期、花鈴期等各時期都能進行。但是，同一批次的處理要確保材料的苗鈴大小一致。功能葉片所在棉株上的位置沒有特殊要求，主莖和側枝均可，但是為了確保功能葉片所處微環(huán)境的差異小，一次處理全部選擇主莖或都選用側枝。2、鹽溶液的配制配制IOOmL氯化鈉溶液，分別稱取0. 4、1. 0、1. 6、2· 2g固體氯化鈉(分析純)，溶于IOOmL蒸餾水中，分別配制成0.4%,1.0%,1.6%,2.2%的氯化鈉溶液，備用。3、棉球的準備準備好脫脂棉，撕成大小合適的圓形棉球，直徑為Icm左右即可。
4、棉球定位處理根據(jù)不同鹽溶液濃度，在每株的功能葉的正面自葉柄處開始順時針方向設定位置，將大小一致的近圓形棉球蘸滿設定濃度的鹽溶液，按照濃度依次增加的順序，順時針方向依序放置于葉片表面的相應位置。如圖I所示，浸泡了 5個濃度(I 0% Nacl ；2 :0. 4%Nacl ；3 1.0% Nacl ；4 1.6% Nacl ；5 2. 2% Nacl)鹽溶液的棉球放在葉片上相應的位置上。圖I中的材料是半野生棉-莫利爾棉15，苗齡是65天，葉片是主莖上的功能葉(從棉株頂部開始數(shù)第4片平展葉)。5、結果調查處理后第3天調查，棉球處理的部位，由于受鹽脅迫，導致細胞失水死亡，外在表現(xiàn)就是葉片上棉球所在的位置開始變黃、干枯。不同材料的反應級別不同，從而確定出其抗性水平。如圖2所示，從a-e為高抗至高感，其中，a.高抗，葉片無反應，I級；b.抗，位置5反應，1-4不反應，2級；c.耐，位置4、5有反應，位置1-3無反應，3級；d.感，位置3-5有反應，位置1-2無反應，4級；e.高感，2-5有反應，位置I無反應，5級。5個材料分別是闊葉棉101，闊葉棉9，中12，TM-I，闊葉棉4 ;苗齡65天，葉片是主莖上的功能葉(從棉株頂部開始數(shù)第4片平展葉)。另外，實驗證明，不同生育期的棉苗的抗性水平趨勢也是一致的。如圖3所示，所選材料是莫利爾棉15，葉片是主莖功能葉(從棉株頂部開始數(shù)第4平展葉)，a是苗期(苗齡30天)的處理結果，b是蕾期(苗齡65天)的處理結果，兩次處理的結果都表明半野生棉莫利爾15處于抗鹽水平的第5級,屬于高感材料。
權利要求
1.棉花葉片抗鹽鑒定方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟 1)選擇苗齡大小一致的棉苗； 2)選擇葉齡一致的主莖或側枝的功能葉或其鄰位葉； 3)棉球定位處理根據(jù)不同鹽溶液濃度，在功能葉或其鄰位葉的正面自葉柄處開始順時針或逆時針方向設定位置，將大小一致的棉球蘸滿設定濃度的鹽溶液，按固定方向依濃度順序放置于葉片表面的相應位置； 4)抗性分級按照鹽溶液濃度大小分級，觀察處理部位是否反應確定棉花品種的抗性水平。
2.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征在于，在步驟I)中，選擇處于苗期、蕾期或花鈴期的棉苗。
3.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征在于，所述功能葉為從棉株頂部開始數(shù)第三或第四個平展葉。
4.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征在于，在步驟3)中，所述棉球的直徑為lcm。
5.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征在于，在步驟3)中，棉球鹽溶液含量達到放置棉球在葉片上無液體流出的標準。
6.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征在于，在步驟4)中，鹽溶液濃度劃分為5個等級。
全文摘要
本發(fā)明涉及植物生理學，具體地，涉及棉花葉片抗鹽鑒定方法。所述方法包括步驟1)選擇苗齡大小一致的棉苗；2)選擇葉齡一致的主莖或側枝的功能葉或其鄰位葉；3)在葉片的正面自葉柄處開始順時針或逆時針方向設定位置，將大小一致的棉球蘸滿設定濃度的鹽溶液，按固定方向依序放置于葉片表面的相應位置；4)按照鹽溶液濃度大小分級，觀察處理部位是否反應確定棉花品種的抗性水平。該方法可以在任何時期對棉花植株進行大量的鑒定和篩選，同時不影響植株的正常生長，大大節(jié)約實驗材料，縮短實驗周期，減小實驗規(guī)模，其結果亦精準可靠，對精確評估材料抗性水平提供了技術支持，而且成本低、操作極其簡單，容易掌握和推廣應用。
文檔編號A01G7/06GK102613017SQ201210053538
公開日2012年8月1日 申請日期2012年3月4日 優(yōu)先權日2012年3月4日
發(fā)明者劉方, 張香娣, 王坤波, 王春英, 王玉紅, 蔡小彥, 黎紹惠 申請人:中國農業(yè)科學院棉花研究所