專利名稱：復合微生物發(fā)酵牧草飼料的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種復合微生物發(fā)酵牧草飼料的制備方法。
背景技術：
牧草飼料發(fā)酵的發(fā)展歷史悠久，世界各國均十分重視發(fā)酵發(fā)酵牧草飼料的研究與生產。中國對發(fā)酵牧草飼料的研究和應用尚處于起步階段，多數以自然發(fā)酵的作坊式青貯飼料為主，尚未形成規(guī)?；a，產品質量參差不齊，產品飼用安全性難以保證。所謂生物飼料，是在微生態(tài)理論指導下采用已知有益的微生物與營養(yǎng)載體混合經發(fā)酵、干燥等特殊工藝制成的含活性益生菌的安全、無污染的菌體飼料。微生物一般都能在常溫、常壓下利用簡單的營養(yǎng)物質生長繁殖，并在生長中增加營養(yǎng)豐富的菌體蛋白和積累有用的中間代謝產物，利用微生物發(fā)酵原理，生產、調制飼料一般具有設備投資少、每類催化效能較高的特點。本發(fā)明是以牧草粉為發(fā)酵基質，采用多株細菌、霉菌、酵母菌共同發(fā)酵，制備復合微生物發(fā)酵牧草飼料，用于畜禽養(yǎng)殖。采用本方法制備的發(fā)酵牧草飼料富含多種畜禽腸道益生菌、多種酶類、維生素及較高的菌體蛋白，是一種營養(yǎng)豐富、消化吸收率很高的優(yōu)良飼料。

發(fā)明內容
本發(fā)明目的在于提供一種復合微生物發(fā)酵牧草飼料的制備方法。本發(fā)明的目的是這樣實現的本發(fā)明中所涉及的百分比除另有注明之外為質量比，本發(fā)明的產品采用這樣的方法來制備的I.發(fā)酵菌株的選擇及培養(yǎng)基的制備本發(fā)明選擇的發(fā)酵菌株均購于中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心，菌株編號及使用的培養(yǎng)基配方如下A菌-康寧木霉Trichoderma koningii,菌株編號CICC 13037,培養(yǎng)基為鉄
皮 馬鈴薯濾液100毫升蔗糖2克，PH 6，麩皮 馬鈴薯濾液的制備方法5克麩皮和20克馬鈴薯加100毫升水煮沸過濾，蒸餾水補足至100毫升。B 菌-膠紅酵母 Rhodotorula mucilaginosa,菌株編號CICC 31192,培養(yǎng)基
為5° Β 麥芽汁瓊脂。C菌——枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis，菌株編號CICC 10063，培養(yǎng)基為氯化鈉O. 5克瓊脂2克，牛肉膏I克蛋白胨I克，水100毫升PH 7.2。D菌——枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis，菌株編號CICC 10089，培養(yǎng)基為氯化鈉O. 5克瓊脂2克，牛肉膏I克蛋白胨I克，水100毫升PH 7.2。2.復合微生物發(fā)酵劑凍干粉的制備過程2. I原菌種活化分別量取O. 9%的生理鹽水IOml于4只試管內，經121°C滅菌20分鐘冷卻至30°C，
4將4株菌安瓶內的凍干菌粉末在無菌狀態(tài)下全部倒入O. 9%的生理鹽水中，震蕩使其溶解， 在30°C恒溫箱中靜止活化30分鐘，備用。2. 2發(fā)酵菌擴大培養(yǎng)2. 2. I母發(fā)酵劑的制備分別量取4株菌培養(yǎng)基各200ml于4只500ml三角瓶內，121°C滅菌20分鐘冷卻至30°C，按培養(yǎng)基體積的10%接種2. I步驟中已經活化的菌種，在30°C、搖床轉速110轉/ 分鐘條件下?lián)u床培養(yǎng)24小時，作為母發(fā)酵劑。2. 2. 2生產發(fā)酵劑的制備首先配制質量百分比濃度為10%的脫脂奶乳濁液，分裝于4只500mL三角瓶內， 每瓶200mL，121°C滅菌20分鐘冷卻至30°C，分別按2%體積比例接種母發(fā)酵劑，30°C、搖床轉速110轉/分鐘條件下?lián)u床培養(yǎng)40-42小時，檢測4株菌發(fā)酵液活菌數，各發(fā)酵液活菌數彡IO9個/ml，視同為發(fā)酵成熟，如果活菌數< IO9個/ml，繼續(xù)培養(yǎng)，直至達到IO9個/ml。2. 3粉末凍干菌種的制備將成熟的生產發(fā)酵劑在無菌條件下導入玻璃安瓶中，液面高度低于1cm，加蓋瓶塞后放入-30°C冰柜速凍，凍結后將玻璃安瓶用托盤乘裝，放入凍干機進行冷凍干燥，制備粉末凍干菌種。2. 4復合微生物發(fā)酵劑凍干粉的制備按各粉末凍干菌種重量，取A菌粉末2-3份，B菌粉末3_5份，C菌粉末2_4份，D 菌粉末2-3份，充分混勻后制成復合微生物發(fā)酵劑凍干粉，用于發(fā)酵牧草。需要進一步說明的是本發(fā)明中選用的發(fā)酵菌株購于中國工業(yè)微生物菌種保藏中心，這些菌種的活化、凍干方法不僅僅限于本發(fā)明所述的具體方法，培養(yǎng)基的成分也不限于此，其它常規(guī)技術和方法都是可以的，只要可以提高菌種的活力、并將其制備成凍干粉狀而方便使用即可。3.復合微生物發(fā)酵牧草飼料的制備3. I牧草預處理將收割后的新鮮牧草切割成O. 5cm-lcm的牧草段。3. 2復合微生物發(fā)酵劑凍干粉活化首先配制質量百分比濃度為2 %的葡萄糖溶液I千克，取I克復合微生物發(fā)酵劑凍干粉，25°C -30°C條件下完全溶解于I千克葡萄糖溶液中，制成復合微生物菌懸液，靜止狀態(tài)下活化30分鐘。3. 3 發(fā)酵將經過3. 2步驟活化后的復合微生物菌懸液I千克，均勻噴灑在20千克經過3. I 步驟預處理的牧草段上，然后將牧草段堆放于發(fā)酵池中，堆放厚度40Cm-50Cm，25°C -30°C 條件下靜止發(fā)酵48小時。3. 4 干燥將經過3. 3步驟發(fā)酵處理的牧草在40°C _45°C條件下通風干燥，直至牧草中水分含量低于15%，即可停止干燥，然后包裝即為成品。
具體實施方式
下面舉例對本發(fā)明作更詳細的描述實施例一本發(fā)明采用的4株菌均采購于中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心，分別為康寧木霉CICC13037、膠紅酵母CICC 31192、枯草芽孢桿菌CICC 10063、枯草芽孢桿菌CICC 10089。I.復合微生物發(fā)酵劑凍干粉的制備過程I. I原菌種活化分別量取O. 9%的生理鹽水IOml于4只試管內，經121 °C滅菌20分鐘冷卻至30°C， 將4株菌安瓶內的凍干菌粉末在無菌狀態(tài)下全部倒入O. 9%的生理鹽水中，震蕩使其溶解， 在30°C恒溫箱中靜止活化30分鐘，備用。I. 2發(fā)酵菌擴大培養(yǎng)I. 2. I母發(fā)酵劑的制備分別量取4株菌培養(yǎng)基各200ml于4只500ml三角瓶內，121°C滅菌20分鐘冷卻至30°C，按培養(yǎng)基體積的10%接種I. I步驟中已經活化的菌種，在30°C、搖床轉速110轉/ 分鐘條件下?lián)u床培養(yǎng)24小時，作為母發(fā)酵劑。I. 2. 2生產發(fā)酵劑的制備首先配制質量百分比濃度為10%的脫脂奶乳濁液，分裝于4只500mL三角瓶內， 每瓶200mL，121°C滅菌20分鐘冷卻至30°C，分別按2%體積比例接種母發(fā)酵劑，30°C、搖床轉速110轉/分鐘條件下?lián)u床培養(yǎng)40-42小時，檢測4株菌發(fā)酵液活菌數，各發(fā)酵液活菌數彡IO9個/ml，視同為發(fā)酵成熟，如果活菌數< IO9個/ml，繼續(xù)培養(yǎng)，直至達到IO9個/ml。I. 3粉末凍干菌種的制備將成熟的生產發(fā)酵劑在無菌條件下導入玻璃安瓶中，液面高度低于1cm，加蓋瓶塞后放入-30°C冰柜速凍，凍結后將玻璃安瓶用托盤乘裝，放入凍干機進行冷凍干燥，制備粉末凍干菌種。I. 4復合微生物發(fā)酵劑凍干粉的制備按各粉末凍干菌種重量，取A菌粉末2份，B菌粉末3份，C菌粉末2份，D菌粉末 2份，充分混勻后制成復合微生物發(fā)酵劑凍干粉，用于發(fā)酵牧草。2.復合微生物發(fā)酵牧草飼料的制備2. I牧草預處理將收割后的新鮮牧草切割成O. 5cm-lcm的牧草段。2. 2復合微生物發(fā)酵劑凍干粉活化首先配制質量百分比濃度為2 %的葡萄糖溶液I千克，取I克復合微生物發(fā)酵劑凍干粉，25°C -30°C條件下完全溶解于I千克葡萄糖溶液中，制成復合微生物菌懸液，靜止狀態(tài)下活化30分鐘。2. 3 發(fā)酵將經過2. 2步驟活化后的復合微生物菌懸液I千克，均勻噴灑在20千克經過2. I 步驟預處理的牧草段上，然后將牧草段堆放于發(fā)酵池中，堆放厚度40Cm-50Cm，25°C -30°C 條件下靜止發(fā)酵48小時。2. 4 干燥
將經過2. 3步驟發(fā)酵處理的牧草在40°C _45°C條件下通風干燥，直至牧草中水分含量低于15%，即可停止干燥，然后包裝即為成品。實施例二I.復合微生物發(fā)酵劑凍干粉的制備過程I. I原菌種活化分別量取O. 9%的生理鹽水IOml于4只試管內，經121°C滅菌20分鐘冷卻至30°C， 將4株菌安瓶內的凍干菌粉末在無菌狀態(tài)下全部倒入O. 9%的生理鹽水中，震蕩使其溶解， 在30°C恒溫箱中靜止活化30分鐘，備用。I. 2發(fā)酵菌擴大培養(yǎng)I. 2. I母發(fā)酵劑的制備分別量取4株菌培養(yǎng)基各200ml于4只500ml三角瓶內，121°C滅菌20分鐘冷卻至30°C，按培養(yǎng)基體積的10%接種I. I步驟中已經活化的菌種，在30°C、搖床轉速110轉/ 分鐘條件下?lián)u床培養(yǎng)24小時，作為母發(fā)酵劑。I. 2. 2生產發(fā)酵劑的制備首先配制質量百分比濃度為10%的脫脂奶乳濁液，分裝于4只500mL三角瓶內， 每瓶200mL，121°C滅菌20分鐘冷卻至30°C，分別按2%體積比例接種母發(fā)酵劑，30°C、搖床轉速110轉/分鐘條件下?lián)u床培養(yǎng)40-42小時，檢測4株菌發(fā)酵液活菌數，各發(fā)酵液活菌數彡IO9個/ml，視同為發(fā)酵成熟，如果活菌數< IO9個/ml，繼續(xù)培養(yǎng)，直至達到IO9個/ml。I. 3粉末凍干菌種的制備將成熟的生產發(fā)酵劑在無菌條件下導入玻璃安瓶中，液面高度低于1cm，加蓋瓶塞后放入-30°C冰柜速凍，凍結后將玻璃安瓶用托盤乘裝，放入凍干機進行冷凍干燥，制備粉末凍干菌種。I. 4復合微生物發(fā)酵劑凍干粉的制備按各粉末凍干菌種重量，取A菌粉末3份，B菌粉末5份，C菌粉末4份，D菌粉末 3份，充分混勻后制成復合微生物發(fā)酵劑凍干粉，用于發(fā)酵牧草。2.復合微生物發(fā)酵牧草飼料的制備2. I牧草預處理將收割后的新鮮牧草切割成O. 5cm-lcm的牧草段。2. 2復合微生物發(fā)酵劑凍干粉活化首先配制質量百分比濃度為2 %的葡萄糖溶液I千克，取I克復合微生物發(fā)酵劑凍干粉，25°C -30°C條件下完全溶解于I千克葡萄糖溶液中，制成復合微生物菌懸液，靜止狀態(tài)下活化30分鐘。2. 3 發(fā)酵將經過2. 2步驟活化后的復合微生物菌懸液I千克，均勻噴灑在20千克經過2. I 步驟預處理的牧草段上，然后將牧草段堆放于發(fā)酵池中，堆放厚度40Cm-50Cm，25°C -30°C 條件下靜止發(fā)酵48小時。2. 4 干燥將經過2. 3步驟發(fā)酵處理的牧草在40°C _45°C條件下通風干燥，直至牧草中水分含量低于15%，即可停止干燥，然后包裝即為成品。
權利要求
1.復合微生物發(fā)酵牧草飼料的制備方法，其特征在于按以下方法制備1).發(fā)酵菌株的選擇及培養(yǎng)基的制備A菌-康寧木霉Trichoderma koningii,菌株編號CICC 13037,培養(yǎng)基為鉄皮 馬鈴薯濾液100毫升蔗糖2克，PH 6，麩皮 馬鈴薯濾液的制備方法5克麩皮和20克馬鈴薯加100毫升水煮沸過濾，蒸餾水補足至100毫升。B菌——膠紅酵母Rhodotorula mucilaginosa，菌株編號CICC 31192，培養(yǎng)基為 5° Β 麥芽汁瓊脂。C菌——枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis，菌株編號CICC 10063，培養(yǎng)基為氯化鈉O.5克瓊脂2克，牛肉膏I克蛋白胨I克，水100毫升PH 7. 2。D菌——枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis，菌株編號CICC 10089，培養(yǎng)基為氯化鈉O.5克瓊脂2克，牛肉膏I克蛋白胨I克，水100毫升PH 7. 2。2).原菌種活化分別量取O. 9%的生理鹽水IOml于4只試管內，經121°C滅菌20分鐘冷卻至30°C，將 4株菌安瓶內的凍干菌粉末在無菌狀態(tài)下全部倒入O. 9 %的生理鹽水中，震蕩使其溶解，在 30°C恒溫箱中靜止活化30分鐘，備用。3).母發(fā)酵劑的制備分別量取4株菌培養(yǎng)基各200ml于4只500ml三角瓶內，121 °C滅菌20分鐘冷卻至 30°C，按培養(yǎng)基體積的10%接種2)步驟中已經活化的菌種，在30°C、搖床轉速110轉/分鐘條件下?lián)u床培養(yǎng)24小時，作為母發(fā)酵劑。4).生產發(fā)酵劑的制備首先配制質量百分比濃度為10%的脫脂奶乳濁液，分裝于4只500mL三角瓶內，每瓶 200mL, 121°C滅菌20分鐘冷卻至30°C，分別按2%體積比例接種母發(fā)酵劑，30°C、搖床轉速 110轉/分鐘條件下?lián)u床培養(yǎng)40-42小時，檢測4株菌發(fā)酵液活菌數，各發(fā)酵液活菌數> IO9 個/ml，視同為發(fā)酵成熟，如果活菌數< IO9個/ml，繼續(xù)培養(yǎng)，直至達到IO9個/ml。5).粉末凍干菌種的制備將成熟的生產發(fā)酵劑在無菌條件下導入玻璃安瓶中，液面高度低于1cm，加蓋瓶塞后放入-30°C冰柜速凍，凍結后將玻璃安瓶用托盤乘裝，放入凍干機進行冷凍干燥，制備粉末凍干菌種。6).復合微生物發(fā)酵劑凍干粉的制備按各粉末凍干菌種重量，取A菌粉末2-3份，B菌粉末3-5份，C菌粉末2-4份，D菌粉末2-3份，充分混勻后制成復合微生物發(fā)酵劑凍干粉。7).牧草預處理將收割后的新鮮牧草切割成O. 5cm-lcm的牧草段。8).復合微生物發(fā)酵劑凍干粉活化首先配制質量百分比濃度為2%的葡萄糖溶液I千克，取I克復合微生物發(fā)酵劑凍干粉，25°C -30°C條件下完全溶解于I千克葡萄糖溶液中，制成復合微生物菌懸液，靜止狀態(tài)下活化30分鐘。9).發(fā)酵將經過8)步驟活化后的復合微生物菌懸液I千克，均勻噴灑在20千克經過7)步驟預處理的牧草段上，然后將牧草段堆放于發(fā)酵池中，堆放厚度40Cm-50Cm，25°C _30°C條件下靜止發(fā)酵48小時。10).干燥將經過9)步驟發(fā)酵處理的牧草在40°C _45°C條件下通風干燥，直至牧草中水分含量低于15%，停止干燥，然后包裝即為成品。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種復合微生物發(fā)酵牧草飼料的制備方法。首先制備康寧木霉CICC13037、膠紅酵母CICC 31192、枯草芽孢桿菌CICC 10063、枯草芽孢桿菌CICC 10089四株菌的復合微生物發(fā)酵劑凍干粉，經2％的葡萄糖溶液活化后接種于鮮牧草段中，再經保溫發(fā)酵、通風干燥后，包裝即為成品。
文檔編號A23K1/14GK102599335SQ20121005706
公開日2012年7月25日 申請日期2012年3月7日 優(yōu)先權日2012年3月7日
發(fā)明者佟曉芳, 劉文輝, 姜帆, 滕春紅, 陳成 申請人:哈爾濱市海澳斯生物科技開發(fā)有限公司