專利名稱：灰氈毛忍冬渝蕾1號組培種苗的繁育方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種植物組培種苗的繁育方法。
背景技術(shù)：
灰租毛忍冬(Lonicera m acranthoides Hand. Mazz)是忍冬科忍冬屬多年生半常綠纏繞小灌木或直立小灌木植物，其花蕾的綠原酸含量在全國各種金銀花中最高，是西南、 中南地區(qū)商品金銀花的主要品種之一。渝蕾I號于2008年經(jīng)重慶市林木品種審定委員會審定為灰氈毛忍冬的一個新品種。該品種畝產(chǎn)鮮花達(dá)400千克以上，較傳統(tǒng)種植灰氈毛忍冬增產(chǎn)3(Γ80%，抗逆性和適應(yīng)性也較傳統(tǒng)家種灰氈毛忍冬強(qiáng)，其最顯著的特點是花期長達(dá)2(Γ30天且整個花期都是花蕾， 基本上不開花，與傳統(tǒng)家種灰氈毛忍冬7 10天的花蕾期相比，采摘期大大延長，便于采摘用工安排和加工時間安排。該品種已列入重慶“兩翼”農(nóng)戶萬元增收計劃中。由于該品種植株性狀變異較大，目前通常采用無性系育種方法如扦插、嫁接繁殖優(yōu)良單株無性系，但嫁接的砧木和接穗資源不多，扦插成活率低于40%，導(dǎo)致繁殖系數(shù)較低，不能滿足生產(chǎn)和市場需求。因此，通過組織培養(yǎng)的無性繁殖在短期內(nèi)實現(xiàn)種苗產(chǎn)業(yè)化很有市場前景。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種灰氈毛忍冬渝蕾I號組培種苗的繁育方法，具有愈傷組織誘導(dǎo)率高，不定芽分化率和增殖系數(shù)高，生根率高，試管苗移栽成活率高， 芽苗生長健壯、葉形葉色正常、皮下生根、新葉萌發(fā)快等優(yōu)點，能夠滿足灰氈毛忍冬渝蕾I 號大面積規(guī)?；耘嗟男枰檫_(dá)到上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案
灰氈毛忍冬渝蕾I號組培種苗的繁育方法，包括以下步驟
a.愈傷組織誘導(dǎo)以當(dāng)年抽出的葉片作為外植體，將葉片消毒后，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)，獲得愈傷組織；所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基是以B5為基本培養(yǎng)基，并添加 6-芐氨基嘌呤(6-BA) 2mg/L、激動素(KT) 2mg/L、萘乙酸(NAA) O. lmg/L、卡拉膠5. 5 6. Og/ L和蔗糖30g/L,調(diào)節(jié)pH至5. 6 5. 8 ；
b.不定芽分化將步驟a所得愈傷組織轉(zhuǎn)接至分化培養(yǎng)基中進(jìn)行不定芽分化培養(yǎng)，獲得初代叢生芽；所述分化培養(yǎng)基是以B5為基本培養(yǎng)基，并添加6-BA lmg/L、KT 2mg/L、NAA
O.lmg/L、卡拉膠5. 5 6. Og/L和鹿糖30g/L,調(diào)節(jié)pH至5. 6 5· 8 ；
c.不定芽繼代將步驟b所得初代叢生芽切割成單芽后，轉(zhuǎn)接至繼代培養(yǎng)基中進(jìn)行不定芽繼代培養(yǎng)，獲得繼代叢生芽；所述繼代培養(yǎng)基是以MB為基本培養(yǎng)基，并添加6-BA Img/ L、吲哚乙酸(IAA) O. 8mg/L、卡拉膠5. 5 6. Og/L和蔗糖30g/L，調(diào)節(jié)pH至5. 6 5. 8 ；
d.生根待步驟c所得繼代叢生芽生長至I.5 2cm高時，將叢生芽切割成單芽后，轉(zhuǎn)接至生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，獲得試管苗；所述生根培養(yǎng)基是以1/3MB培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，并添加卩引哚丁酸(IBA)l. 5mg/L、IAA O. lmg/L、卡拉膠5. 5^6. Og/L和鹿糖30g/L,調(diào)節(jié)pH 至 5. 6 5. 8 ；
e.試管苗移栽將步驟d所得試管苗移栽入體積比為1:9的珍珠巖-泥炭土混合基質(zhì)中培養(yǎng)，即得灰氈毛忍冬渝蕾I號組培種苗。進(jìn)一步，步驟a所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)、步驟b所述不定芽分化培養(yǎng)和步驟d所述生根培養(yǎng)的條件為每天在溫度為25土1°C、光照強(qiáng)度為200(Γ30001χ的條件下光照培養(yǎng)1(Γ12小時；步驟c所述不定芽繼代培養(yǎng)的條件為每天在溫度為25±1°C、光照強(qiáng)度為 200(Γ30001χ的條件下光照培養(yǎng)1(Γ12小時，晝夜溫差控制在8 12°C;步驟e所述培養(yǎng)的條件為每天在基質(zhì)濕度為75°/Γ85%、光照強(qiáng)度為150(Γ30001χ的條件下光照1(Γ 2小時，每 10天施用I次氮質(zhì)量百分含量為15%、磷和鉀質(zhì)量百分含量各為5%的氮磷鉀三元復(fù)混肥。上述技術(shù)方案中涉及的Β5培養(yǎng)基是1968年Gamborg等設(shè)計的培養(yǎng)基，為植物組織培養(yǎng)中的常用培養(yǎng)基；MS培養(yǎng)基是1962年Murashige和Skoog為培養(yǎng)煙草細(xì)胞而設(shè)計的培養(yǎng)基，也是植物組織培養(yǎng)中的常用培養(yǎng)基;MB培養(yǎng)基是發(fā)明人在MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上改良而得，主要是對MS培養(yǎng)基中大量元素的種類及其濃度進(jìn)行了調(diào)整，微量元素的種類與MS 培養(yǎng)基相同但各組分的濃度約相當(dāng)于MS培養(yǎng)基中濃度的2/3，鐵鹽與有機(jī)物的種類及其濃度與MS培養(yǎng)基相同；1/2、1/3、1/4MB培養(yǎng)基是指培養(yǎng)基中大量元素各組分的濃度分別相當(dāng)于MB培養(yǎng)基中濃度的1/2、1/3、1/4，微量元素、鐵鹽與有機(jī)物的濃度與MB培養(yǎng)基相同。B5、 MS和MB培養(yǎng)基的具體配方如下表所示。
權(quán)利要求
1.灰氈毛忍冬渝蕾I號組培種苗的繁育方法，其特征在于，包括以下步驟a.愈傷組織誘導(dǎo)以當(dāng)年抽出的葉片作為外植體，將葉片消毒后，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)，獲得愈傷組織；所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基是以B5為基本培養(yǎng)基，并添加 6-BA 2mg/L、KT 2mg/L、NAA O. lmg/L、卡拉膠 5. 5 6. Og/L 和鹿糖 30g/L,調(diào)節(jié) pH 至5.6 5· 8 ；b.不定芽分化將步驟a所得愈傷組織轉(zhuǎn)接至分化培養(yǎng)基中進(jìn)行不定芽分化培養(yǎng)，獲得初代叢生芽；所述分化培養(yǎng)基是以B5為基本培養(yǎng)基，并添加6-BA lmg/L、KT 2mg/L、NAA O. lmg/L、卡拉膠5. 5 6. Og/L和鹿糖30g/L,調(diào)節(jié)pH至5. 6 5· 8 ；c.不定芽繼代將步驟b所得初代叢生芽切割成單芽后，轉(zhuǎn)接至繼代培養(yǎng)基中進(jìn)行不定芽繼代培養(yǎng)，獲得繼代叢生芽；所述繼代培養(yǎng)基是以MB為基本培養(yǎng)基，并添加6-BA Img/ L、IAA O. 8mg/L、卡拉膠 5. 5 6. Og/L 和鹿糖 30g/L,調(diào)節(jié) pH 至 5. 6 5. 8 ；d.生根待步驟c所得繼代叢生芽生長至I.5 2cm高時，將叢生芽切割成單芽后，轉(zhuǎn)接至生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，獲得試管苗；所述生根培養(yǎng)基是以1/3MB培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，并添加IBA I. 5mg/L、IAA O. lmg/L、卡拉膠5. 5 6. Og/L和蔗糖30g/L,調(diào)節(jié)pH至 5. 6 5. 8 ；e.試管苗移栽將步驟d所得試管苗移栽入體積比為1:9的珍珠巖-泥炭土混合基質(zhì)中培養(yǎng)，即得灰氈毛忍冬渝蕾I號組培種苗。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的灰氈毛忍冬渝蕾I號組培種苗的繁育方法，其特征在于，步驟a所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)、步驟b所述不定芽分化培養(yǎng)和步驟d所述生根培養(yǎng)的條件為 每天在溫度為25±1°C、光照強(qiáng)度為200(Γ30001χ的條件下光照培養(yǎng)1(Γ 2小時；步驟c所述不定芽繼代培養(yǎng)的條件為每天在溫度為25±1°C、光照強(qiáng)度為200(Γ30001χ的條件下光照培養(yǎng)1(Γ12小時，晝夜溫差控制在8 12°C;步驟e所述培養(yǎng)的條件為每天在基質(zhì)濕度為 75% 85%、光照強(qiáng)度為150(Γ30001χ的條件下光照培養(yǎng)10 12小時，每10天施用I次氮質(zhì)量百分含量為15%、磷和鉀質(zhì)量百分含量各為5%的氮磷鉀三元復(fù)混肥。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種灰氈毛忍冬渝蕾1號組培種苗的繁育方法，是以當(dāng)年抽出的葉片作為外植體，將其消毒后接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)，再將愈傷組織轉(zhuǎn)接至分化培養(yǎng)基中進(jìn)行不定芽分化培養(yǎng)，所得初代叢生芽切割成單芽后轉(zhuǎn)接至繼代培養(yǎng)基中進(jìn)行不定芽繼代培養(yǎng)，待繼代叢生芽生長至1.5~2cm高時，將其切割成單芽后轉(zhuǎn)接至生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，生成的試管苗再移栽入體積比為1:9的珍珠巖-泥炭土混合基質(zhì)中培養(yǎng)，即得灰氈毛忍冬渝蕾1號組培種苗，本發(fā)明對誘導(dǎo)培養(yǎng)基、分化培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基均進(jìn)行了優(yōu)化，所得方法具有愈傷組織誘導(dǎo)率高，不定芽分化率和增殖系數(shù)高，生根率高，試管苗移栽成活率高，芽苗生長健壯、葉形葉色正常、皮下生根、新葉萌發(fā)快等優(yōu)點，能夠滿足灰氈毛忍冬渝蕾1號大面積規(guī)模化栽培的需要。
文檔編號A01H4/00GK102577969SQ20121005972
公開日2012年7月18日 申請日期2012年3月8日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月8日
發(fā)明者劉奕清, 唐建民, 廖林正, 陳澤雄, 黃登艷, 黃科 申請人:重慶文理學(xué)院