專利名稱：玉蟬花的組織培養(yǎng)方法
技術領域：
本發(fā)明涉及的是玉蟬花的組織培養(yǎng)方法。
背景技術：
鳶尾屬(Iris)為鳶尾科(Iridaceae)多年生草本植物，廣泛分布于北溫帶，以中國至中東(古地中海)為分化中心。中國鳶尾屬資源非常豐富，尤其是主要分布在西南、 西北及東北地區(qū)的無髯鳶尾類群。鳶尾的生態(tài)適應性廣，抗性較強，適宜在不同生境下栽培，耐粗放管理，繁殖系數較高，特別適合荒山綠化、水土保持、鹽堿地改良，而且具有很高的觀賞價值，根莖可藥用，在初春和秋季霜后，還可以作為牛羊飼料，應用前景極其廣泛。國內對鳶尾的研究起步較晚，且以分類學研究為主，大多數種類仍處于尚未開發(fā)利用的野生狀態(tài)。玉蟬花{J. ensata)主要分布在日本、朝鮮以及我國東北三省、山東和浙江昌化等地?；ㄋ{紫色，花色艷麗，株形優(yōu)美，是園林綠化和濕地修復的良種，也是繁育花菖蒲品雜交種的重要種質資源，對該物種的保育研究也具有重要的實際意義。與其它根莖類鳶尾相同，玉蟬花兼?zhèn)溆行约捶N子和無性即分株兩種繁殖方式，然而，利用種子繁殖，速度慢，繁殖效率低，且變異率高，而利用分株繁殖則會導致分株苗生長勢越來越弱，利用組培技術繁育玉蟬花的技術尚未有人研究，優(yōu)良品種的推廣普及尚未完成，苗木供求矛盾日益加劇，嚴重影響了玉蟬花的園林應用和推廣。

發(fā)明內容
本發(fā)明針對現有的不足提供了一種玉蟬花的育苗方法。本發(fā)明通過以下方法實現上述目的。玉蟬花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于該方法包括下列步驟
①外植體的選擇在玉蟬花開花之前取花葶的莖段和分節(jié)點作為外植體；
②材料處理方法先用軟毛刷將外植體表面的灰塵輕輕刷去，用流水沖洗1h后用紫外燈照射20 min，轉入超凈工作臺，在超凈工作臺上先用70-75 %的乙醇浸泡10秒，然后用無菌水沖洗，再轉入滴加了 2 3滴土溫80的0. 1 %的升汞溶液中浸泡7min，用無菌水沖洗4次，最后在無菌條件下分割材料，莖段切割成0. 5 0. 6 cm長；
③初代培養(yǎng)在無菌的條件下將步驟②得到的外植體接種在初代培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基是在MS常規(guī)培養(yǎng)基中添加了 3. Omg/L的6-BA、l. 2mg/L的NAA，30mg/L的蔗糖，PH 5. 9，培養(yǎng)溫度為對°0，光照周期13h/d，光強度為2100-22001UX，待培養(yǎng)出的外植體帶芽量長至3 個時，即開始下一個階段；
④繼代培養(yǎng)將初代培養(yǎng)的生長健壯的外植體新芽剪下2cm左右接種在繼代培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基是在3/4MS常規(guī)培養(yǎng)基中添加了 1. 3mg/L的6_BA、0. 4mg/L的IBA，25mg/L的蔗糖，PH 5. 9，培養(yǎng)溫度為M°C，光照周期13h/d，光強度為2100-22001UX，待新芽長至2. 5cm 時，即開始下一個階段；⑤生根培養(yǎng)將繼代培養(yǎng)的高度超過2.5cm的新苗剪下接種在生根培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基是在 1/2MS 常規(guī)培養(yǎng)基中添加了 0. 7mg/L 的 IAA、0. 5mg/L 的 NAA，0. 2mg/L 的 GA，28mg/ L的蔗糖，PH 5. 9，培養(yǎng)溫度為M°C，光照周期13h/d，光強度為2100-22001UX，待新苗長至 2. 3cm左右時，即開始下一個階段；
⑥煉苗移栽將長高至10-15cm、長根>5根的組培苗帶瓶移至普通大棚內，放置1-3 天后打開瓶蓋，在2548°C，濕度70-80 %，光強7 100-79001x條件下煉苗3_5天，煉苗完成后取出小苗洗凈根部附著的培養(yǎng)基，移栽到經消毒的重量比腐殖土 草炭珍珠巖 =3:2:2的混合基質中，溫度控制在^°C，前5d濕度控制在90%左右，以后逐漸降低濕度，直至將移栽苗置于自然條件下。有益效果
本發(fā)明對玉蟬花采用組織培養(yǎng)技術，具有以下優(yōu)點
1、本發(fā)明針對玉蟬花原產地的氣候特點，提高了組培過程中的光強度和并延長了光照周期，降低了培養(yǎng)溫度，從而使培養(yǎng)環(huán)境更接近其原生地的氣候，通過對初代培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基配方的精確篩選，達到了增殖速度快、遺傳性狀穩(wěn)定、繁殖系數高、試管苗生長旺盛的優(yōu)良效果。2、在煉苗移栽中通過逐漸提高光照強度，并且在移栽過程中，逐漸降低濕度、嚴格控制溫度，采用合適的基質配方，最終提高了生根試管苗的成活率。3、通過組織培養(yǎng)，其繁殖系數高，能周年繁殖，適合工廠化育苗，大大縮短了育種的時間。
具體實施例方式下面結合實施例對本發(fā)明作進一步的說明，下述各實施例僅用于說明本發(fā)明，對本發(fā)明并沒有限制。玉蟬花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于該方法包括下列步驟
①外植體的選擇在玉蟬花開花之前取花葶的莖段和分節(jié)點作為外植體；
②材料處理方法先用軟毛刷將外植體表面的灰塵輕輕刷去，用流水沖洗1h后用紫外燈照射20 min，轉入超凈工作臺，在超凈工作臺上先用70-75 %的乙醇浸泡10秒，然后用無菌水沖洗，再轉入滴加了 2 3滴土溫80的0. 1 %的升汞溶液中浸泡7min，用無菌水沖洗4次，最后在無菌條件下分割材料，莖段切割成0. 5 0. 6 cm長；
③初代培養(yǎng)在無菌的條件下將步驟②得到的外植體接種在初代培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基是在MS常規(guī)培養(yǎng)基中添加了 3. Omg/L的6-BA、l. 2mg/L的NAA，30mg/L的蔗糖，PH 5. 9，培養(yǎng)溫度為對°0，光照周期13h/d，光強度為2100-22001UX，待培養(yǎng)出的外植體帶芽量長至3 個時，即開始下一個階段；
④繼代培養(yǎng)將初代培養(yǎng)的生長健壯的外植體新芽剪下2cm左右接種在繼代培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基是在3/4MS常規(guī)培養(yǎng)基中添加了 1. 3mg/L的6_BA、0. 4mg/L的IBA，25mg/L的蔗糖，PH 5. 9，培養(yǎng)溫度為M°C，光照周期13h/d，光強度為2100-22001UX，待新芽長至2. 5cm 時，即開始下一個階段；
⑤生根培養(yǎng)將繼代培養(yǎng)的高度超過2.5cm的新苗剪下接種在生根培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基是在 1/2MS 常規(guī)培養(yǎng)基中添加了 0. 7mg/L 的 IAA、0. 5mg/L 的 NAA，0. 2mg/L 的 GA，28mg/L的蔗糖，PH 5. 9，培養(yǎng)溫度為M°C，光照周期13h/d，光強度為2100-22001UX，待新苗長至 2. 3cm左右時，即開始下一個階段；
⑥煉苗移栽將長高至10-15cm、長根> 5根的組培苗帶瓶移至普通大棚內，放置1-3 天后打開瓶蓋，在2548°C，濕度70-80 %，光強7 100-79001x條件下煉苗3_5天，煉苗完成后取出小苗洗凈根部附著的培養(yǎng)基，移栽到經消毒的重量比腐殖土 草炭珍珠巖 =3:2:2的混合基質中，溫度控制在^°C，前5d濕度控制在90%左右，以后逐漸降低濕度，直至將移栽苗置于自然條件下。 經過上述步驟的培養(yǎng)，玉蟬花的愈傷組織的萌動率達到了 96%，增殖倍數達到了 4. 35倍，生根率達到了 100%，而移栽成活率達到了 98%。
權利要求
1. 一種玉蟬花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于該方法包括下列步驟①外植體的選擇在玉蟬花開花之前取花葶的莖段和分節(jié)點作為外植體；②材料處理方法先用軟毛刷將外植體表面的灰塵輕輕刷去，用流水沖洗1h后用紫外燈照射20 min，轉入超凈工作臺，在超凈工作臺上先用70-75 %的乙醇浸泡10秒，然后用無菌水沖洗，再轉入滴加了 2 3滴土溫80的0. 1 %的升汞溶液中浸泡7min，用無菌水沖洗4次，最后在無菌條件下分割材料，莖段切割成0. 5 0. 6 cm長；③初代培養(yǎng)在無菌的條件下將步驟②得到的外植體接種在初代培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基是在MS常規(guī)培養(yǎng)基中添加了 3. Omg/L的6-BA、l. 2mg/L的NAA，30mg/L的蔗糖，PH 5. 9，培養(yǎng)溫度為對°0，光照周期13h/d，光強度為2100-22001UX，待培養(yǎng)出的外植體帶芽量長至3 個時，即開始下一個階段；④繼代培養(yǎng)將初代培養(yǎng)的生長健壯的外植體新芽剪下2cm左右接種在繼代培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基是在3/4MS常規(guī)培養(yǎng)基中添加了 1. 3mg/L的6_BA、0. 4mg/L的IBA，25mg/L的蔗糖，PH 5. 9，培養(yǎng)溫度為M°C，光照周期13h/d，光強度為2100-22001UX，待新芽長至2. 5cm 時，即開始下一個階段；⑤生根培養(yǎng)將繼代培養(yǎng)的高度超過2.5cm的新苗剪下接種在生根培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基是在 1/2MS 常規(guī)培養(yǎng)基中添加了 0. 7mg/L 的 IAA、0. 5mg/L 的 NAA，0. 2mg/L 的 GA，28mg/ L的蔗糖，PH 5. 9，培養(yǎng)溫度為M°C，光照周期13h/d，光強度為2100-22001UX，待新苗長至 2. 3cm左右時，即開始下一個階段；⑥煉苗移栽將長高至10-15cm、長根>5根的組培苗帶瓶移至普通大棚內，放置1-3 天后打開瓶蓋，在2548°C，濕度70-80 %，光強7 100-79001x條件下煉苗3_5天，煉苗完成后取出小苗洗凈根部附著的培養(yǎng)基，移栽到經消毒的重量比腐殖土 草炭珍珠巖 =3:2:2的混合基質中，溫度控制在^°C，前5d濕度控制在90%左右，以后逐漸降低濕度，直至將移栽苗置于自然條件下。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種玉蟬花的組織培養(yǎng)方法，主要通過組織培養(yǎng)過程中初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)以及煉苗移栽的步驟，達到了增殖速度快、遺傳性狀穩(wěn)定、繁殖系數高、試管苗生長旺盛的優(yōu)良效果，玉蟬花的愈傷組織的萌動率達到了96%，增殖倍數達到了4.35倍，生根率達到了100%，而移栽成活率達到了98%。
文檔編號A01H4/00GK102524081SQ20121007036
公開日2012年7月4日 申請日期2012年3月17日 優(yōu)先權日2012年3月17日
發(fā)明者李玉弟 申請人:常熟市尚湖農業(yè)生態(tài)園有限公司