專利名稱：一種構(gòu)樹簡便組培方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物組織培養(yǎng)方法，具體涉及一種構(gòu)樹簡便組培方法，屬生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
構(gòu)樹iBroussonetia papyriferaL )屬?？?系多年生闊葉喬木，具有速生、適應(yīng)性強(qiáng)、分布廣、熱量高、輪伐期短的特點。構(gòu)樹是一種投資少、周期短、見效快、受益長的特種經(jīng)濟(jì)林樹種，主要分布于我國黃河、長江及珠江流域。構(gòu)樹的韌皮部纖維含量高，纖維長而細(xì)， 品質(zhì)優(yōu)良，是生產(chǎn)制造宣紙和造幣紙的優(yōu)質(zhì)原料；樹葉富含蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素、碳水化合物以及微量元素，是加工畜類飼料的純天然綠色原料。加快構(gòu)樹培育速度，擴(kuò)大構(gòu)樹資源是保證宣紙制造和飼料加工業(yè)持續(xù)發(fā)展的重要基礎(chǔ)，也是增加農(nóng)民收益的重要途徑。構(gòu)樹組織培養(yǎng)，一方面可以擴(kuò)大其繁殖系數(shù)，從而實現(xiàn)規(guī)?；敝常涣硪环矫?，可以在保存其原有的優(yōu)良性狀的基礎(chǔ)上，實現(xiàn)構(gòu)樹種苗的快速繁殖和壯苗生產(chǎn)。構(gòu)樹組織培養(yǎng)的成本主要包括組培苗生產(chǎn)所需的培養(yǎng)基、設(shè)施設(shè)備、供電成本、耗材和人工成本。常規(guī)的構(gòu)樹組織培養(yǎng)方法要求接種過程、培養(yǎng)過程都在無菌培養(yǎng)基中進(jìn)行，無菌消毒耗能大，人工操作成本高。如果能通過培養(yǎng)基改造，獲得既保證構(gòu)樹組織正常生長，又具有殺菌、抗菌或抑菌功能的培養(yǎng)基，菌類也就不能在培養(yǎng)基中滋生。由于這種改造后的培養(yǎng)基不需要進(jìn)行高溫高壓滅菌，一方面可以降低構(gòu)樹組織培養(yǎng)對設(shè)施設(shè)備的要求，尤其不需要高溫高壓滅菌所需配置的高壓鍋設(shè)備，縮減了投資成本，電能消耗也將大幅度降低；另一方面，采用這種培養(yǎng)基開展構(gòu)樹組織培養(yǎng)，組培環(huán)節(jié)大為簡化，人工操作的速度大幅提高，從而降低了人工成本。此外，由于改造后的培養(yǎng)基自身具有殺菌、抗菌或抑菌作用，組織培養(yǎng)過程中的污染問題得到有效控制，構(gòu)樹組織培養(yǎng)無需在嚴(yán)格的無菌環(huán)境中進(jìn)行，從根本上簡化了構(gòu)樹組織培養(yǎng)。因此，構(gòu)樹簡便組培的關(guān)鍵是培養(yǎng)基的改造，具體是找到一種或多種能夠添加到培養(yǎng)基中，既具有廣譜性殺菌、抗菌或抑菌能力，又不會對構(gòu)樹生長產(chǎn)生毒害或抑制，即不影響構(gòu)樹生長的物質(zhì)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種構(gòu)樹簡便組培方法。本發(fā)明的目的是通過以下方法實現(xiàn)的。本發(fā)明的一種構(gòu)樹簡便組培方法，包括抑菌劑的配制、培養(yǎng)容器消毒、培養(yǎng)基配制、誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和瓶苗移栽，其特征在于
I.抑菌劑的配制抑菌劑I號的配制方法在益培隆殺菌劑A瓶藥劑中加入20 ml蒸餾水稀釋后與B瓶藥劑混合，并用蒸餾水定容到100 ml，為抑菌劑I號；抑菌劑2號的配制方法在益培隆殺菌劑A瓶藥劑中加入20 ml蒸餾水稀釋后與B瓶藥劑混合，再加入次氯酸鈉溶液10 20 ml，并用蒸餾水定容至100 ml，為抑菌劑2號；所述益培隆殺菌劑由A 瓶藥劑和B瓶藥劑組成，由市場購得；所述次氯酸鈉溶液為分析純，活性氯的重量百分比不低于O. 5% ；
2.培養(yǎng)容器消毒將培養(yǎng)瓶及瓶蓋在抑菌劑I號與水的體積比為O. 3 % O. 5 % (V / V)的水溶液中浸泡不少于10 h，保存?zhèn)溆茫?br> 3.培養(yǎng)基配制誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+0.5 I. O mg/L 6-BA+0. I O. 5 mg/L NAA+3 5 ml/L抑菌劑2號+20 g/L蔗糖+3. 5 g/L瓊脂粉，ρΗ5· 8 ;增殖培養(yǎng)基為MS+1. O mg/L 6-BA+0. I O. 5 mg/L NAA+3 5 ml/L 抑菌劑 2 號 +20 g/L 蔗糖 +3. 5 g/L 瓊脂粉，ρΗ5· 8 ； 生根培養(yǎng)基為1/2MS+0. I O. 5 mg/L NAA+3 5 ml/L抑菌劑2號+20 g/L蔗糖+3. 5 g/ L瓊脂粉，pH5. 8 ;所述MS培養(yǎng)基為1962年，Murashige和Skoog公開的MS培養(yǎng)基；所述 6-BA,指6-芐氨基嘌吟；所述NAA，指^ -萘乙酸；配制培養(yǎng)基時，先不加抑菌劑2號，按各培養(yǎng)基配方配齊其他原料后，用蒸餾水定容、加熱至瓊脂粉完全溶解，然后按各培養(yǎng)基配方添加抑菌劑2號，用I mol/L的NaOH或I mol/L的HCl調(diào)pH值至5. 8，分裝到培養(yǎng)容器中， 封口，冷卻凝固，備用；
4.誘導(dǎo)培養(yǎng)將采集的構(gòu)樹枝條用酒精消毒后，用O.I %的升汞溶液消毒6 min，取出用無菌水沖洗后，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；培養(yǎng)室溫度為28 °C，光照12 h，光照強(qiáng)度為1400 Ix ；
5.增殖培養(yǎng)將誘導(dǎo)出的芽苗切成帶腋芽的莖段接種到增殖培養(yǎng)基上，30d轉(zhuǎn)接一次；培養(yǎng)室溫度為26 °C，光照12 h，光照強(qiáng)度為1400 Ix ；
6.生根培養(yǎng)當(dāng)苗長到2 4 cm時，將叢生苗切成單株，接種到生根培養(yǎng)基上，25 d
移栽;
培養(yǎng)室溫度為25 °C，光照12 h，光照強(qiáng)度為1500 Ix ；
7.瓶苗移栽生根培養(yǎng)25 d后，將生根苗取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，用800倍的多菌靈浸泡30 min后移栽至大棚內(nèi)，大棚上層用遮光網(wǎng)遮蓋，移栽的環(huán)境溫度為25 °C。本發(fā)明的應(yīng)用效果
I.本發(fā)明的構(gòu)樹簡便組培方法對構(gòu)樹增殖倍數(shù)和污染率的影響由于本發(fā)明的構(gòu)樹簡便組培方法，配制的培養(yǎng)基是無需高溫高壓滅菌，所以在增殖過程中，除了要考慮增殖率外，還要考慮污染率的問題。通過實驗證實，本發(fā)明的構(gòu)樹簡便組培方法與常規(guī)的構(gòu)樹組培方法相比，增殖率和污染率都沒有太大差異。從瓶苗的生長狀況看，本發(fā)明的構(gòu)樹簡便組培方法的培養(yǎng)基由于不經(jīng)過高溫高壓滅菌，激素和營養(yǎng)元素?fù)p失較少，其構(gòu)樹組培苗更綠，更壯。本發(fā)明的構(gòu)樹簡便組培方法對構(gòu)樹增殖倍數(shù)和污染率的影響如表I所示。表I本發(fā)明的構(gòu)樹簡便組培方法對構(gòu)樹增殖倍數(shù)和污染率的影響
權(quán)利要求
1.一種構(gòu)樹簡便組培方法,包括抑菌劑的配制、培養(yǎng)容器消毒、培養(yǎng)基配制、誘導(dǎo)培養(yǎng)、 增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和瓶苗移栽，其特征在于(I)抑菌劑的配制抑菌劑I號的配制方法在益培隆殺菌劑A瓶藥劑中加入20 ml 蒸餾水稀釋后與B瓶藥劑混合，并用蒸餾水定容到100 ml，為抑菌劑I號；抑菌劑2號的配制方法在益培隆殺菌劑A瓶藥劑中加入20 ml蒸餾水稀釋后與B瓶藥劑混合，再加入次氯酸鈉溶液10 20 ml，并用蒸餾水定容至100 ml，為抑菌劑2號；所述次氯酸鈉溶液為分析純，活性氯的重量百分比不低于O. 5% ；(2)培養(yǎng)容器消毒將培養(yǎng)瓶及瓶蓋在抑菌劑I號與水的體積比為O. 3 % O. 5 %的水溶液中浸泡不少于10 h，保存?zhèn)溆茫?3)培養(yǎng)基配制誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+0.5 I. O mg/L 6-BA+0. I O. 5 mg/L NAA+3 5 ml/L抑菌劑2號+20 g/L蔗糖+3. 5 g/L瓊脂粉，pH5. 8 ;增殖培養(yǎng)基為MS+1. O mg/L 6-BA+0. I O. 5 mg/L NAA+3 5 ml/L 抑菌劑 2 號 +20 g/L 蔗糖 +3. 5 g/L 瓊脂粉，ρΗ5· 8 ； 生根培養(yǎng)基為1/2MS+0. I O. 5 mg/L NAA+3 5 ml/L抑菌劑2號+20 g/L蔗糖+3. 5 g/ L瓊脂粉，pH5. 8 ;所述MS培養(yǎng)基為1962年，Murashige和Skoog公開的MS培養(yǎng)基；所述 6-BA，指6-芐氨基嘌吟；所述-萘乙酸；配制培養(yǎng)基時，先不加抑菌劑2號，按各培養(yǎng)基配方配齊其他原料后，用蒸餾水定容、加熱至瓊脂粉完全溶解，然后按各培養(yǎng)基配方添加抑菌劑2號，用I mo I/L的NaOH或I mol/L的HCl調(diào)pH值至5. 8，分裝到培養(yǎng)容器中， 封口，冷卻凝固，備用；(4)誘導(dǎo)培養(yǎng)將采集的構(gòu)樹枝條用酒精消毒后，用O.I %的升汞溶液消毒6 min，取出用無菌水沖洗后，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；培養(yǎng)室溫度為28 °C，光照12 h，光照強(qiáng)度為1400 Ix ；(5)增殖培養(yǎng)將誘導(dǎo)出的芽苗切成帶腋芽的莖段接種到增殖培養(yǎng)基上，30d轉(zhuǎn)接一次；培養(yǎng)室溫度為26 °C，光照12 h，光照強(qiáng)度為1400 Ix ；(6)生根培養(yǎng)當(dāng)苗長到2 4cm時，將叢生苗切成單株，接種到生根培養(yǎng)基上，25 d移栽；培養(yǎng)室溫度為25 °C，光照12 h，光照強(qiáng)度為1500 Ix ；瓶苗移栽生根培養(yǎng)25 d后，將生根苗取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，用800倍的多菌靈浸泡30 min后移栽至大棚內(nèi)，大棚上層用遮光網(wǎng)遮蓋，移栽的環(huán)境溫度為25 °C。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種構(gòu)樹簡便組培方法，其特征在于誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+0.8 mg/L 6-BA+0. I mg/L NAA+4 ml/L 抑菌劑 2 號 +20 g/L 蔗糖 +3. 5 g/L 瓊脂粉，pH5. 8。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種構(gòu)樹簡便組培方法，其特征在于增殖培養(yǎng)基為MS+1.O mg/L 6-BA+0. I mg/L NAA+4 ml/L 抑菌劑 2 號 +20 g/L 蔗糖 +3. 5 g/L 瓊脂粉，pH5. 8。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種構(gòu)樹簡便組培方法，其特征在于生根培養(yǎng)基為 1/2MS+0. I mg/L NAA+4 ml/L 抑菌劑 2 號 +20 g/L 蔗糖 +3. 5 g/L 瓊脂粉，ρΗ5· 8。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種構(gòu)樹簡便組培方法，包括抑菌劑的配制、培養(yǎng)容器消毒、培養(yǎng)基配制、誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和瓶苗移栽。采用本發(fā)明的構(gòu)樹簡便組培方法，培養(yǎng)容器和培養(yǎng)基都無需進(jìn)行高溫高壓滅菌，減少了工作量和能源消耗，簡化了構(gòu)樹組培環(huán)節(jié)，降低了構(gòu)樹組培成本；本發(fā)明的構(gòu)樹簡便組培方法，操作簡單，只要按不同的培養(yǎng)基配方配制后，再加上抑菌劑即可，實用性強(qiáng)，推廣性好；本發(fā)明的構(gòu)樹簡便組培方法與常規(guī)的構(gòu)樹組培方法對比，可以降低成本10%以上。
文檔編號A01H4/00GK102577976SQ20121007046
公開日2012年7月18日 申請日期2012年3月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月17日
發(fā)明者林慶良, 許莉萍, 闕友雄, 高世武 申請人:福建農(nóng)林大學(xué)