專利名稱：九華黃精的組培快繁方法
技術領域：
本發(fā)明涉及ー種具有藥用價值的黃精屬植物的組培快繁方法，特別是九華黃精的組培快繁方法。
背景技術：
九華黃精是百合科黃精屬多年生宿根性草本藥用植物，其根莖是傳統(tǒng)中藥，在九華山地區(qū)普遍生長。近代研究表明，黃精含有煙酸、醒類、豁液質、ニ氨基丁酸、多種皂苷和黃精多糖等成分，作為中藥使用具有補脾潤肺、益氣養(yǎng)陰、強壯筋骨等作用。近年來，黃精已被廣泛應用于治療冠心病、高血壓、糖尿病、肺結核、再生障礙性貧血等疾病，取得了較好的療效。隨著黃精的藥用價值和保健價值越來越被人們所認識，黃精原料的需求量也越來越大，從而導致對野生黃精的大量掠奪性采集加劇，使自然資源迅速枯竭。因此，保證黃精原料來源、實行產業(yè)化種植的重要性越來越明顯。而由于黃精生產上多采用分根繁殖，其繁殖系數低，種根莖用量大，不便栽植管理與推廣，故黃精種苗問題成了人工大面積種植的瓶頸。利用植物組織培養(yǎng)技術建立黃精快速繁殖體系是生產優(yōu)質黃精種苗的有效途徑。其關鍵技術之ー在于黃精根莖上不定芽的増殖數量和質量，不同激素組合及其濃度對此影響很大。盡管國內已有黃精組織培養(yǎng)研究的報道，但黃精種苗繁殖率低，無法進行エ業(yè)化生產的問題仍然沒有得到有效解決。

發(fā)明內容
本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種九華黃精的組培快繁方法，該方法克服了九華黃精根狀莖繁殖率低、生長年限長的缺陷，達到了繁殖系數高，速度快、技術穩(wěn)定、可在短時間內提供大量優(yōu)質黃精種苗的目的。為了實現本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用的技術方案為一種九華黃精的組培快繁方法，包括下列培養(yǎng)階段I)不定芽的誘導階段取幼嫩黃精根狀莖，先進行消毒獲得無菌材料，再將其接種于誘導培養(yǎng)基上，培養(yǎng)28-32天，培養(yǎng)溫度為25±1°C，光照時間為10_12h/天，光照強度為16001x，獲得叢芽，所述的誘導培養(yǎng)基組成為MS基本培養(yǎng)基+3. 0-5. Omg/L6-BA+0. 3-0. 5mg/L 2，4_D+6_8g/L 瓊脂 +28_32g/L 蔗糖，其 pH5. 5-6. O ；2)叢芽增殖階段將步驟I)所得叢芽切成保留一個頂芽或側芽的莖段，分別接種于增殖培養(yǎng)基上，培養(yǎng)38-42天，培養(yǎng)溫度為25± 1°C，光照時間為10_12h/天，光照強度為16001x，所述的增殖培養(yǎng)基的組成為MS基本培養(yǎng)基+0. 5-0. 7mg/L 6-BA+0. 1-0. 2mg/LIAA+0. 1-0. 2mg/L NAA+6_8g/L 瓊脂 +28_32g/L 蔗糖，ρΗ5· 5-6. 0 ；3)試管苗培養(yǎng)生根階段將所得的單個健壯不定芽從基部剪下，接種于生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)22-26天，培養(yǎng)溫度為25±1°C，光照時間為10_12h/天，光照強度為16001x，培養(yǎng)出生根試管苗，所述的生根培養(yǎng)基組成為1/2MS基本培養(yǎng)+0. 5-0. 7mg/L NAA+6_8g/L瓊脂 +28-32g/L 蔗糖，ρΗ5· 5-6. O ；4)煉苗移栽階段當試管苗生根后，將培養(yǎng)試管苗的培養(yǎng)瓶塞打開后，置于40001χ左右的光照下煉苗3-4d，取出生根試管苗，洗凈培養(yǎng)基，移栽到混和土中，并蓋上有機玻璃蓋子，移栽后7d內要保持沒有直射光照射、溫度在20°C以上、濕度在90%以上的環(huán)境條件，7d后去蓋，即可得到優(yōu)質黃精種苗，所述的混和土由蛭石、黒土和珍珠巖按比例混合而成，三者的混合比例為蛭石黒土珍珠巖=(10-14) (I. 5-2. 5) I的混和土。所述的九華黃精組培快繁方法，其特征是步驟I)中獲得無菌材料的具體操作為I)取幼嫩黃精根狀莖，洗掉泥土，用刀切取帶芽根莖于洗潔精水溶液中浸泡
5-6min,然后用自來水沖洗干凈；2)再用75%こ醇擦洗黃精根狀莖表面，再次用自來水沖洗；3)再在超凈工作臺中先用75%こ醇浸泡O. 5min，再用滅菌水沖洗；再用升汞浸泡lOmin，滅菌水沖洗；最后用無菌濾紙吸干水份，用刀切去傷ロ壞死部分，接種在誘導培
養(yǎng)基上。所述的九華黃精組培快繁方法，其特征是所述的誘導、増殖、生根階段的培養(yǎng)溫度均為25°C，光照時間為12h/天，光照強度為16001x。所述的九華黃精組培快繁方法，其特征是步驟4)所述的混合土中添加有鐵礦尾礦，混合土各組分的重量比例為蛭石黒土 珍珠巖鐵礦尾礦=(10-14) (I. 5-2. 5) I (2-3)。鐵礦尾礦的化學成分分析為(％)
權利要求
1.一種九華黃精的組培快繁方法，其特征是包括下列培養(yǎng)階段 1)不定芽的誘導階段取幼嫩黃精根狀莖，先進行消毒獲得無菌材料，再將其接種于誘導培養(yǎng)基上，培養(yǎng)28-32天，培養(yǎng)溫度為25±1°C，光照時間為10-12h/天，光照強度為16001x，獲得叢芽，所述的誘導培養(yǎng)基組成為MS基本培養(yǎng)基+3. 0-5. 0mg/L6-BA+0. 3-0. 5mg/L 2，4-D+6-8g/L 瓊脂 +28_32g/L 蔗糖，其 pH 5. 5-6. 0 ； 2)叢芽增殖階段將步驟I)所得叢芽切成保留一個頂芽或側芽的莖段，分別接種于增殖培養(yǎng)基上，培養(yǎng)38-42天，培養(yǎng)溫度為25±1°C，光照時間為10-12h/天，光照強度為16001x,所述的增殖培養(yǎng)基的組成為MS基本培養(yǎng)基+0. 5-0. 7mg/L 6-BA+0. 1-0. 2mg/LIAA+0. 1-0. 2mg/L NAA+6_8g/L 瓊脂 +28_32g/L 蔗糖，pH 5. 5-6. 0 ； 3)試管苗培養(yǎng)生根階段將所得的單個健壯不定芽從基部剪下，接種于生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)22-26天，培養(yǎng)溫度為25±1°C，光照時間為10-12h/天，光照強度為16001x，培養(yǎng)出生根試管苗，所述的生根培養(yǎng)基組成為1/2MS基本培養(yǎng)+0. 5-0. 7mg/L NAA+6_8g/L瓊脂+28-32g/L 蔗糖，pH 5. 5-6. 0 ； 4)煉苗移栽階段當試管苗生根后，將培養(yǎng)試管苗的培養(yǎng)瓶塞打開后，置于40001x左右的光照下煉苗3-4d，取出生根試管苗，洗凈培養(yǎng)基，移栽到混和土中，并蓋上有機玻璃蓋子，移栽后7d內要保持沒有直射光照射、溫度在20°C以上、濕度在90%以上的環(huán)境條件，7d后去蓋，即可得到優(yōu)質黃精種苗，所述的混和土由蛭石、黑土和珍珠巖按比例混合而成，三者的混合比例為蛭石黑土 珍珠巖=(10-14) (1. 5-2. 5) 1的混和土。
2.根據權利要求I所述的九華黃精組培快繁方法，其特征是步驟I)中獲得無菌材料的具體操作為 1)取幼嫩黃精根狀莖，洗掉泥土，用刀切取帶芽根莖于洗潔精水溶液中浸泡5-6min，然后用自來水沖洗干凈； 2)再用75%乙醇擦洗黃精根狀莖表面，再次用自來水沖洗； 3)再在超凈工作臺中先用75%乙醇浸泡0.5 min，再用滅菌水沖洗；再用升汞浸泡lOmin，滅菌水沖洗；最后用無菌濾紙吸干水份，用刀切去傷口壞死部分，接種在誘導培養(yǎng)基上。
3.根據權利要求I所述的九華黃精組培快繁方法，其特征是所述的誘導、增殖、生根階段的培養(yǎng)溫度均為25°C，光照時間為12h/天，光照強度為16001x。
4.根據權利要求I所述的九華黃精組培快繁方法，其特征是步驟4)所述的混合土中添加有鐵礦尾礦，混合土各組分的重量比例為蛭石黑土 珍珠巖鐵礦尾礦=(10-14)(I. 5-2. 5) 1 :(2-3)。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種九華黃精的組培快繁方法，以黃精根狀莖為外植體，經過不定芽的誘導階段，叢芽增殖階段，生根階段和煉苗移栽階段，調配和優(yōu)選各培養(yǎng)階段的培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)條件，形成了每年擴繁速度為106倍的組培技術，實現了九華黃精的組織培養(yǎng)和快速穩(wěn)定繁殖，可以有效解決九華黃精的優(yōu)質種苗供應問題。
文檔編號A01H4/00GK102630562SQ20121008505
公開日2012年8月15日 申請日期2012年3月28日 優(yōu)先權日2012年3月28日
發(fā)明者陳偉民 申請人:青陽縣九華黃精產業(yè)化協(xié)會