專利名稱：一種白芨的快速繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物工程領(lǐng)域，涉及植物組織培養(yǎng)技術(shù)，具體地說是一種白芨的組織培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
植物是藥物的天然寶庫，人們利用藥用植物的歷史源遠(yuǎn)流長，全世界約有75%的人口以植物作為治療預(yù)防疾病的藥物來源(邢建民，2001)。人類已經(jīng)從植物中發(fā)現(xiàn)了許多具有高度生理活性的藥物，目前從植物來源的藥物占藥物總量的25%以上(鄭光植， 1987)。我國的傳統(tǒng)中草藥已有數(shù)千年的歷史，至今仍在我國和許多國家和地區(qū)廣為使用。 但由于傳統(tǒng)的中草藥獲取方法是以采集和消耗大量的野生植物資源為代價的，當(dāng)采集和消耗量超過自然資源的再生能力時，必然會導(dǎo)致物種的瀕危甚至滅絕。同時隨著自然生態(tài)環(huán)境的日益破壞，也進(jìn)一步導(dǎo)致藥用植物資源的匱乏。生物技術(shù)的蓬勃發(fā)展為從根本上改變傳統(tǒng)藥材的生產(chǎn)提供了一個嶄新的方法，植物組織和細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)則是其中一個重要的手段。我國自1964年羅士韋教授首先報道了人參組織培養(yǎng)獲得成功的研究成果以來，許多科學(xué)家先后從事了多種藥用植物的組織培養(yǎng)研究。至今，我國藥用植物的組織培養(yǎng)研究迅速發(fā)展。目前，世界各國對植物的藥用開發(fā)和研究都十分重視，就以美國來說，其成藥中有 47%是以植物為原料制成的(謝啟昆，1986)。為了解決藥用植物的供需矛盾，人們采用人工栽培的方法擴(kuò)大藥源。但在人工栽培的藥用植物中，有不少名貴藥材等生產(chǎn)周期較長，如人參、黃連，如果以常規(guī)方法育種或育苗，需要花費(fèi)很長的時間；另有一些藥用植物如貝母、 番紅花等，因繁殖系數(shù)小、耗種量大，導(dǎo)致育種速度很慢，生產(chǎn)成本增加。利用植物的有性繁殖方式對其有效成分含量波動比較大，所以利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)解決藥用植物的植株再生與繁殖問題迫在眉睫。近年來，國內(nèi)外在這方面已做了大量工作，已成功離體培養(yǎng)獲得試管植株的藥用植物至少有200種，如云南黑節(jié)草、延齡草、高山紅景天、莪術(shù)、水母雪蓮、星花繡線菊、溪黃草、玉葉金花、遼東榴木等；其中包括一些具有抗癌有效成分的珍稀植物，如紅豆杉、艾、黃楊、大戟屬植物、長春花、米仔蘭、狗牙花和香榧等。白芨，又名白給，屬于蘭科。多年生草本，喜溫暖、陰涼和較陰濕的環(huán)境，不耐寒，高 30 50cm。葉4 5枚，基部互相套疊成莖狀，中央抽出花葶?？偁罨ㄐ蚓邤?shù)朵花；花紫色或淡紅色，直徑約5厘米，由3枚萼片、2枚花瓣和I枚特化的唇瓣組成；唇瓣3裂，上面有縱褶片；雄蕊與花柱合生而成合蕊柱，合蕊柱頂端有一個花藥，前上方有一個柱頭凹穴。地下有粗厚的根狀莖，如雞頭狀，富粘性，含白及膠質(zhì)，即白及甘露聚糖，可供藥用，有止血補(bǔ)肺、 生肌止痛之效，也可供作糊料。白及屬共有6種，均產(chǎn)于東亞。研究表明，白芨的假鱗莖具有很高的藥用成分，主要含有富含淀粉、葡萄糖、揮發(fā)油、粘液質(zhì)等，外用涂擦，可消除臉上痤瘡般下的痕跡，讓肌膚光滑無痕。球莖含白及膠質(zhì)、淀粉、揮發(fā)油等；藥用，有收效、補(bǔ)肺止血、消腫等作用，外敷治創(chuàng)傷出血、癰腫、燙傷、疔瘡等；花美麗，栽培供觀賞。收斂止血，消腫生肌。主要用于止血，是一種名貴的止血藥物，用于咳血吐血，外傷出血，瘡瘍腫毒，皮膚皸裂；肺結(jié)核咳血，潰瘍病出血。
因此，為了滿足日益增大的藥用需求，種子收獲量小，種子繁殖出苗率極低，種子培育過程煩瑣，生長速度慢，同時保護(hù)白芨的野生資源，利用組培快繁技術(shù)，實(shí)現(xiàn)人工栽培是最好的解決方法。迄今為止，在國內(nèi)外尚未見關(guān)于白芨組織培養(yǎng)快繁成功的報道。我們通過大量試驗(yàn)，終于摸索出一套成熟的方法，成功實(shí)現(xiàn)了白芨的組培快繁，可以快速培育出大量幼苗， 為實(shí)現(xiàn)工業(yè)化人工栽培白芨提供可能。白芨的組培快繁技術(shù)方法的成功建立，可以為大規(guī)模人工栽培藥用植物白芨提供種苗，為現(xiàn)代科技農(nóng)業(yè)提供了一種切實(shí)可行的開發(fā)項(xiàng)目。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供白芨的快速繁殖方法，該方法非常適合工業(yè)化生產(chǎn)，配方效果佳，出芽率高，培養(yǎng)時間短，植株生長旺盛，可操作性強(qiáng)，應(yīng)用價值高等優(yōu)點(diǎn)。具有投入少， 產(chǎn)出高的特點(diǎn)。本發(fā)明所述白芨的快速繁殖方法，其具體操作步驟如下I)外植體的選取與滅菌選用白芨的假鱗莖上芽體作為培養(yǎng)材料，經(jīng)洗潔精和自來水洗凈，置流水下沖洗10-30分鐘后，置于75%酒精中處理10-30秒，然后再經(jīng)O. 1%的升汞消毒后用無菌水沖洗，切去外植體變色的部分后備用；2)芽體的萌發(fā)將滅菌處理后的芽體接種在含NAA的LS+6-BA1. 2mg/L培養(yǎng)基上， pH值為5. 8，培養(yǎng)溫度23-27°C，每天光照12小時，光照強(qiáng)度1000LX，接種后6_8天芽體的萌發(fā)，10天左右形成帶葉的小苗；3)叢生芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)將小苗切下轉(zhuǎn)接于LS+6-BA0. 5mg/L+IAA0. 4mg/L培養(yǎng)基上，直至形成叢生芽，PH值為5. 8，培養(yǎng)溫度23-27 °C，每天光照16小時，光照強(qiáng)度 1000LX。30天左右為一個生長周期，以保持高速度遞增，增殖系數(shù)為5以上；4)生根培養(yǎng)選擇 LS+6-BA0. 5mg/L+IAA0. 4mg/L+NAA O. 5mg/L 作為生根培養(yǎng)基， pH值為5. 8，培養(yǎng)溫度23-27°C，每天光照16小時，光照強(qiáng)度1000LX，生根率達(dá)到90%以上， 只需要25天左右形成完整植株；5)試管苗的移栽選取根系生長良好的試管苗，放入清水中把根部的瓊脂清洗干凈，移載到沙土或富養(yǎng)土中，注意保水保溫保濕，移載I個月后，移載成活率達(dá)到90%以上；6)后期管理4月份左右移植大田后，6-9月份用兩層遮陽網(wǎng)進(jìn)行覆蓋，并采用滴管方式進(jìn)行補(bǔ)水，進(jìn)入11月份后用地膜進(jìn)行保溫保水，到第二年3月份左右去除地膜，采用以上方式進(jìn)行白芨栽培管理；若發(fā)生黑斑病，用70%甲基托布津濕性粉劑1000倍液噴灑； 若發(fā)生根結(jié)線蟲病危害，用3%呋喃丹顆粒劑灌施盆土 ；若缺肥時在花后至8月中旬施I次磷肥。在一個具體實(shí)施方案中，步驟I中采用O. I %升汞進(jìn)行消毒，消毒時間控制優(yōu)選在 7-15分鐘。在一個具體實(shí)施方案中，步驟2中NAA的用量為O. 1-0. 3mg/L。在另一個具體實(shí)施方案中，步驟6中大田濕度控制在40-70 % ;溫度控制在 10-30。。。技術(shù)效果(I)利用白芨帶芽根莖段為外植體，使得外植體取材較容易，一年四季均可取材，而且數(shù)量多，采用根莖芽體做外植體，保證了遺傳穩(wěn)定性，同時克服了組織培養(yǎng)中，愈傷組織在分化培養(yǎng)基上隨著芽的分化而逐漸停止生長，失去增殖能力的弱點(diǎn)，可防止傷組織繼代培養(yǎng)過程中，隨著培養(yǎng)代數(shù)的增加，分化出來的苗出現(xiàn)變異的現(xiàn)象。(2)本發(fā)明方法利用外植體建立，增殖生根同步化這一技術(shù)路線，僅需30天左右形成完整植株，4-6個月內(nèi)事獲得大量完整植株，實(shí)現(xiàn)白芨的大規(guī)模工廠化育苗。(3)本發(fā)明方法獲得的試管苗在移載時所采用的基質(zhì)利用沙土，方法簡單，而且大大降低了移載成本。本培養(yǎng)方法出芽快，增殖率高，方法簡單，生產(chǎn)成本低，可批量生產(chǎn)，應(yīng)用價值高。(4)白芨的生產(chǎn)可以在人為控制條件下進(jìn)行，不受季節(jié)、氣候條件與土壤等因素的制約，可排除病蟲害的侵襲和農(nóng)藥殘留的影響，嚴(yán)格控制白芨的質(zhì)量。增殖速度快，生產(chǎn)周期短，設(shè)備簡單，占地面積少，能節(jié)省人力、物力等，便于工廠
化生產(chǎn)。(5)使用本發(fā)明提供的組培快繁技術(shù)得到的白芨幼苗進(jìn)行人工栽培，可以得到個體差異小，品質(zhì)均一的白芨成品。(6)可以保存白芨的種質(zhì)資源，同時有利于保護(hù)白芨野生資源，減少對自然資源的破壞。
具體實(shí)施例方式下面，本發(fā)明將用實(shí)施例進(jìn)行進(jìn)一步的說明，但是它并不限于這些實(shí)施例的任一個或類似實(shí)例。實(shí)施例I :取材白芨帶芽莖段為外植體I、外植體的選取與滅菌采自湖南慈利的白芨鮮嫩芽莖段等幼嫩組織，作為培養(yǎng)材料，經(jīng)洗潔精和自來水洗凈，置流水下沖洗10-30分鐘后，置于75%酒精中處理10-30秒， 然后再經(jīng)O. I %的升汞消毒10分鐘后用無菌水沖洗，切去外植體變色的部分后備用。2、芽體的萌發(fā)將滅菌處理后的芽體接種在LS+6-BA1. 2mg/L+NAA0. 2mg/L培養(yǎng)基上，pH值為5. 8，培養(yǎng)溫度23-27°C，每天光照12小時，光照強(qiáng)度1000LX ;接種后6_8天芽體的萌發(fā)，10天左右形成帶葉的小苗。3、叢生芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)將小苗切下轉(zhuǎn)接于LS+6-BA0. 5mg/L+IAA0. 4mg/L培養(yǎng)基上，直至形成叢生芽，PH值為5. 8，培養(yǎng)溫度23-27°C，每天光照16小時，光照強(qiáng)度 1000LX。30天左右為一個生長周期，以保持高速度遞增，增殖系數(shù)為5以上。4、生根培養(yǎng)選擇 LS+6-BA0. 5mg/L+IAA0. 4mg/L+NAA O. 5mg/L 作為生根培養(yǎng)基， pH值為5. 8，培養(yǎng)溫度23-27°C，每天光照16小時，光照強(qiáng)度1000LX，生根率達(dá)到90%以上， 只需要25天左右形成完整植株。5、試管苗的移栽選取根系生長良好的試管苗，放入清水中把根部的瓊脂清洗干凈，移載到沙土中，注意保水保溫保濕，移載I個月后，移載成活率達(dá)到90%以上。6、后期管理4月份左右移植大田后，6-9月份用兩層遮陽網(wǎng)進(jìn)行覆蓋，并采用滴管方式進(jìn)行補(bǔ)水，進(jìn)入11月份后用地膜進(jìn)行保溫保水，到第二年3月份左右去除地膜，采用以上方式進(jìn)行白芨栽培管理。若發(fā)生黑斑病，用70%甲基托布津濕性粉劑1000倍液噴灑。有時有根結(jié)線蟲病危害，用3%呋喃丹顆粒劑灌施盆土。若缺肥時在花后至8月中旬施I次磷肥。實(shí)施例2 取材白芨帶芽莖段為外植體I、外植體的選取與滅菌采自湖南慈利的白芨鮮嫩芽莖段等幼嫩組織，作為培養(yǎng)材料，經(jīng)洗潔精和自來水洗凈，置流水下沖洗10-30分鐘后，置于75%酒精中處理10-30秒， 然后再經(jīng)O. I %的升汞消毒10分鐘后用無菌水沖洗，切去外植體變色的部分后備用。2、芽體的萌發(fā)將滅菌處理后的芽體接種在LS+6-BA1. 2mg/L+NAA0. 3mg/L培養(yǎng)基上，pH值為5. 8，培養(yǎng)溫度23-27°C，每天光照12小時，光照強(qiáng)度1000LX ;接種后7_8天芽體的萌發(fā)，12天左右形成帶葉的小苗。3、叢生芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)將小苗切下轉(zhuǎn)接于LS+6-BA0. 5mg/L+IAA0. 4mg/L培養(yǎng)基上，直至形成叢生芽，PH值為5. 8，培養(yǎng)溫度23-27°C，每天光照16小時，光照強(qiáng)度 1000LX。30天左右為一個生長周期，以保持高速度遞增，增殖系數(shù)為5以上。4、生根培養(yǎng)選擇 LS+6-BA0. 5mg/L+IAA0. 4mg/L+NAA O. 5mg/L 作為生根培養(yǎng)基， pH值為5. 8，培養(yǎng)溫度23-27°C，每天光照16小時，光照強(qiáng)度1000LX，生根率達(dá)到90%以上， 只需要25天左右形成完整植株。5、試管苗的移栽選取根系生長良好的試管苗，放入清水中把根部的瓊脂清洗干凈，移載到富養(yǎng)土中，注意保水保濕，移載I個月后，移載成活率達(dá)到90%以上。6、后期管理4月份左右移植大田后，6-9月份用兩層遮陽網(wǎng)進(jìn)行覆蓋，并采用滴管方式進(jìn)行補(bǔ)水，進(jìn)入11月份后用地膜進(jìn)行保溫保水，到第二年3月份左右去除地膜，采用以上方式進(jìn)行白芨栽培管理。若發(fā)生黑斑病，用70%甲基托布津濕性粉劑1000倍液噴灑。 有時有根結(jié)線蟲病危害，用3%呋喃丹顆粒劑灌施盆土。若缺肥時在花后至8月中旬施I次磷肥。實(shí)施例3 取材白芨帶芽莖段為外植體I、外植體的選取與滅菌采自湖南慈利的白芨鮮嫩芽莖段等幼嫩組織，作為培養(yǎng)材料，經(jīng)洗潔精和自來水洗凈，置流水下沖洗10-30分鐘后，置于75%酒精中處理10-30秒， 然后再經(jīng)O. I %的升汞消毒10分鐘后用無菌水沖洗，切去外植體變色的部分后備用。2、芽體的萌發(fā)將滅菌處理后的芽體接種在LS+6-BA1. 2mg/L+NAA0. lmg/L培養(yǎng)基上，pH值為5. 8，培養(yǎng)溫度23-27°C，每天光照12小時，光照強(qiáng)度1000LX ;接種后6_8天左右芽體的萌發(fā)，10天左右形成帶葉的小苗。3、叢生芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)將小苗切下轉(zhuǎn)接于LS+6-BA0. 5mg/L+IAA0. 4mg/L培養(yǎng)基上，直至形成叢生芽，PH值為5. 8，培養(yǎng)溫度23-27°C，每天光照16小時，光照強(qiáng)度 1000LX。30天左右為一個生長周期，以保持高速度遞增，增殖系數(shù)為5以上。4、生根培養(yǎng)選擇LS+6-BA0. 5mg/L+NAA O. 5mg/L作為生根培養(yǎng)基，pH值為5. 8，培養(yǎng)溫度23-27°C，每天光照16小時，光照強(qiáng)度1000LX，生根率達(dá)到95%以上，只需要20天左右形成完整植株。5、試管苗的移栽選取根系生長良好的試管苗，放入清水中把根部的瓊脂清洗干凈，移載到沙土中，注意保水保濕，移載I個月后，移載成活率達(dá)到85%以上。
6、后期管理4月份左右移植大田后，6-9月份用兩層遮陽網(wǎng)進(jìn)行覆蓋，并采用滴管方式進(jìn)行補(bǔ)水，進(jìn)入11月份后用地膜進(jìn)行保溫保水，到第二年3月份左右去除地膜，采用以上方式進(jìn)行白芨栽培管理。若發(fā)生黑斑病，用70%甲基托布津濕性粉劑1000倍液噴灑。 有時有根結(jié)線蟲病危害，用3%呋喃丹顆粒劑灌施盆土。若缺肥時在花后至8月中旬施I次磷肥。
權(quán)利要求
1.一種白芨的快速繁殖方法，其步驟包括.1)外植體的選取與滅菌選用白芨的假鱗莖上芽體作為培養(yǎng)材料，經(jīng)洗潔精和自來水洗凈，置流水下沖洗10-30分鐘后，置于75%酒精中處理10-30秒，然后再經(jīng)O. 1%的升汞消毒后用無菌水沖洗，切去外植體變色的部分后備用；.2)芽體的萌發(fā)將滅菌處理后的芽體接種在含NAA的LS+6-BA1.2mg/L培養(yǎng)基上，pH值為5. 8，培養(yǎng)溫度23-27°C，每天光照12小時，光照強(qiáng)度1000LX，接種后6_8天芽體的萌發(fā)， 10天左右形成帶葉的小苗；.3)叢生芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)將小苗切下轉(zhuǎn)接于LS+6-BA0.5mg/L+IAA0. 4mg/L培養(yǎng)基上，直至形成叢生芽，PH值為5. 8，培養(yǎng)溫度23-27°C，每天光照16小時，光照強(qiáng)度1000LX， 30天左右為一個生長周期，以保持高速度遞增，增殖系數(shù)為5以上；.4)生根培養(yǎng)選擇LS+6-BA0.5mg/L+IAA0. 4mg/L+NAA O. 5mg/L作為生根培養(yǎng)基，pH值為5. 8，培養(yǎng)溫度23-27°C，每天光照16小時，光照強(qiáng)度1000LX，生根率達(dá)到90%以上，只需要25天左右形成完整植株；.5)試管苗的移栽選取根系生長良好的試管苗，放入清水中把根部的瓊脂清洗干凈， 移載到沙土或富養(yǎng)土中，注意保水保溫保濕，移載I個月后，移載成活率達(dá)到90%以上；.6)后期管理4月份左右移植大田后，6-9月份用兩層遮陽網(wǎng)進(jìn)行覆蓋，并采用滴管方式進(jìn)行補(bǔ)水，進(jìn)入11月份后用地膜進(jìn)行保溫保水，到第二年3月份左右去除地膜，采用以上方式進(jìn)行白芨栽培管理；若發(fā)生黑斑病，用70%甲基托布津濕性粉劑1000倍液噴灑；若發(fā)生根結(jié)線蟲病危害，用3%呋喃丹顆粒劑灌施盆土 ；若缺肥時在花后至8月中旬施I次磷肥。
2.權(quán)利要求I的方法，其中步驟I中采用O.I %升汞進(jìn)行消毒，消毒時間控制優(yōu)選在 7-15分鐘。
3.權(quán)利要求2的方法，其中步驟2中NAA的用量為O.1-0. 3mg/L。
4.權(quán)利要求3的方法，其中步驟6中大田濕度控制在40-70%;溫度控制在10-30°C。
全文摘要
本申請為一種白芨的快速繁殖方法，該方法是在MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)白芨的假鱗莖段等組織，確切取帶1-2個芽的根莖段為外植體，消毒后，接種在MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.4mg/L培養(yǎng)基中培養(yǎng)，接種后6-8天左右芽體的萌發(fā)，10天左右形成帶葉的小苗，將小苗切下轉(zhuǎn)接于MS+6-BA1.5mg/L+IAA0.4mg/L培養(yǎng)基上，以保持高速度遞增，增殖系數(shù)為5以上。選擇MS+6-BA1.5mg/L+IAA0.4mg/L+NAA0.5mg／L作為生根培養(yǎng)基，生根率達(dá)到90%以上，只需要25天左右形成完整植株。試管苗移載到沙土中，注意保水保濕，移載1個月后，移載成活率達(dá)到90%以上，建立了一套高頻穩(wěn)定再生體系。本發(fā)明方法具有穩(wěn)定好，操作簡便，繁殖速度快，生產(chǎn)成本低，達(dá)到產(chǎn)業(yè)化水平等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號A01H4/00GK102599063SQ20121010008
公開日2012年7月25日 申請日期2012年4月9日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月9日
發(fā)明者向華 申請人:向華