專利名稱：一種昆蟲病原線蟲的活體繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種昆蟲病原線蟲的活體培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
昆蟲病原線蟲(Entomopathogenic Nematode, EPN)是害蟲的重要天敵，具有廣泛的寄主昆蟲，是目前害蟲生物防治的重要手段。由于昆蟲病原線蟲能夠低成本、高效地大量培養(yǎng)，它的繁殖技術(shù)在不斷地發(fā)展，從活體培養(yǎng)法到離體培養(yǎng)法，從離體培養(yǎng)中的無菌培養(yǎng)法到單菌培養(yǎng)法，單菌培養(yǎng)法又分為固相培養(yǎng)法和液相培養(yǎng)法，使其走向工廠化生產(chǎn)規(guī)模。但在實(shí)驗(yàn)室研究時(shí)一直采用White trap活體繁殖法，即利用線蟲的趨水性，當(dāng)線蟲耗盡了寄主體內(nèi)的有機(jī)質(zhì)時(shí),侵染期線蟲(IJs)從寄主尸體內(nèi)鉆出，向水源移動(dòng)，將含有線蟲的水收集起來即得到擴(kuò)繁后的大量線蟲。寄主昆蟲多數(shù)采用大蠟螟(Galleria mellonellaLinnaeus)和黃粉蟲(Tenebrio moIitor),但用大臘螟成本較高,用黃粉蟲繁殖出來的線蟲產(chǎn)量低，致病力差。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的要解決現(xiàn)有昆蟲病原線蟲的活體培養(yǎng)方法存在繁殖成本高或產(chǎn)量低、致病力差的問題，而是提供一種昆蟲病原線蟲活體繁殖方法。一種昆蟲病原線蟲的活體繁殖方法，具體是按以下步驟完成的首先按培養(yǎng)皿A的皿蓋大小裁剪兩張中速定性濾紙，并墊在培養(yǎng)皿A的皿蓋中，再將8 12頭5齡斜紋夜蛾幼蟲放在培養(yǎng)皿A皿蓋中的中速定性濾紙上，然后采用O. 4mL O. 6mL的5500條/mL 6500條/mL侵染期線蟲的水懸液浸潤(rùn)培養(yǎng)皿A皿蓋中的中速定性濾紙，再將培養(yǎng)皿A的皿底扣在培養(yǎng)皿A的皿蓋上，至8 12頭5齡斜紋夜蛾幼蟲全部死亡，然后移去培養(yǎng)皿A皿底，并將培養(yǎng)皿A皿蓋置于培養(yǎng)皿B中，然后向培養(yǎng)皿B與培養(yǎng)皿A之間的空隙中注入無菌水，且無菌水的高度低于培養(yǎng)皿A皿蓋上沿，并在24°C 26°C下恒溫培養(yǎng)至無菌水中出現(xiàn)侵染期線蟲為止，然后每天收集有侵染期線蟲的無菌水，且收集后補(bǔ)充無菌水，每次補(bǔ)充的無菌水的高度低于培養(yǎng)皿A上沿，即完成昆蟲病原線蟲的活體繁殖。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)采用本發(fā)明生產(chǎn)異小桿線蟲Heterorhabditis bacteriophora-NJ和斯氏線蟲Steinernema carpocapsae_All,每克寄主繁殖出的侵染期病原線蟲數(shù)的產(chǎn)量與大蠟螟的產(chǎn)量分別高27% 29%和21% 23%，斜紋夜蛾體積大，體內(nèi)有機(jī)質(zhì)含量高，繁殖出的線蟲產(chǎn)量高，價(jià)格又低，降低了活體繁殖成本，通過成本核算可知繁殖上述兩種線蟲的成本均降低53 %以上，且病原線蟲對(duì)寄主昆蟲的致病力沒有下降。
具體實(shí)施例方式具體實(shí)施方式
一本實(shí)施方式是一種昆蟲病原線蟲的活體繁殖方法，具體是按以下步驟完成的首先按培養(yǎng)皿A的皿蓋大小裁剪兩張中速定性濾紙，并墊在培養(yǎng)皿A的皿蓋中，再、將8 12頭5齡斜紋夜蛾幼蟲放在培養(yǎng)皿A皿蓋中的中速定性濾紙上，然后采用O. 4mL O. 6mL的5500條/mL 6500條/mL侵染期線蟲的水懸液浸潤(rùn)培養(yǎng)皿A皿蓋中的中速定性濾紙，再將培養(yǎng)皿A的皿底扣在培養(yǎng)皿A的皿蓋上，至8 12頭5齡斜紋夜蛾幼蟲全部死亡，然后移去培養(yǎng)皿A皿底，并將培養(yǎng)皿A皿蓋置于培養(yǎng)皿B中，然后向培養(yǎng)皿B與培養(yǎng)皿A之間的空隙中注入無菌水，且無菌水的高度低于培養(yǎng)皿A皿蓋上沿，并在24°C 26°C下恒溫培養(yǎng)至無菌水中出現(xiàn)侵染期線蟲為止，然后每天收集有侵染期線蟲的無菌水，且收集后補(bǔ)充無菌水，每次補(bǔ)充的無菌水的高度低于培養(yǎng)皿A上沿，即完成昆蟲病原線蟲的活體繁殖。采用本實(shí)施方 式生產(chǎn)異小桿線蟲Heterorhabditis bacteriophora-NJ和斯氏線蟲Steinernema carpocapsae_All,每克寄主繁殖出的侵染期病原線蟲數(shù)的產(chǎn)量與大臘螟的產(chǎn)量分別高27 % 29 %和21 % 23 %，斜紋夜蛾體積大，體內(nèi)有機(jī)質(zhì)含量高，繁殖出的線蟲產(chǎn)量高，價(jià)格又低，降低了活體繁殖成本，通過成本核算可知繁殖上述兩種線蟲的成本均降低53%以上，且病原線蟲對(duì)寄主昆蟲的致病力沒有下降。
具體實(shí)施方式
二本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一的不同點(diǎn)是所述的5500條/mL 6500條/mL侵染期線蟲的水懸液中的線蟲為異小桿線蟲Heterorhabditisbacteriophora-NJ和斯氏線蟲Steinernema carpocapsae-All。其他與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一或二之一不同點(diǎn)是所述培養(yǎng)皿A的直徑為60mm,所述培養(yǎng)皿B的直徑為90mm。其他與具體實(shí)施方式
一或二相同。
具體實(shí)施方式
四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至三之一不同點(diǎn)是向培養(yǎng)皿B與培養(yǎng)皿A之間的空隙中注入無菌水的量為9mL llmL。其他與具體實(shí)施方式
一至三相同。采用下述試驗(yàn)驗(yàn)證本發(fā)明效果試驗(yàn)一一種昆蟲病原線蟲的活體繁殖方法，具體是按以下步驟完成的首先按直徑為60mm培養(yǎng)皿A的皿蓋大小裁剪兩張中速定性濾紙，并墊在直徑為60mm培養(yǎng)皿A的皿蓋中，再將10頭5齡斜紋夜蛾幼蟲放在直徑為60mm培養(yǎng)皿A皿蓋中的中速定性濾紙上，然后采用0. 5mL的6000條/mL侵染期線蟲的水懸液浸潤(rùn)直徑為60mm培養(yǎng)皿A皿蓋中的中速定性濾紙，再將直徑為60_培養(yǎng)皿A的皿底扣在直徑為60mm培養(yǎng)皿A的皿蓋上，至10頭5齡斜紋夜蛾幼蟲全部死亡，然后移去直徑為60mm培養(yǎng)皿A皿底，并將直徑為60mm培養(yǎng)皿A皿蓋置于直徑為90mm培養(yǎng)皿B中，然后向直徑為90mm培養(yǎng)皿B與直徑為60mm培養(yǎng)皿A之間的空隙中注入無菌水，且無菌水的高度低于直徑為60mm培養(yǎng)皿A皿蓋上沿，并在25°C下恒溫培養(yǎng)至無菌水中出現(xiàn)侵染期線蟲為止，然后每天收集有侵染期線蟲的無菌水，且收集后補(bǔ)充無菌水，每次補(bǔ)充的無菌水的高度低于直徑為60mm培養(yǎng)皿A上沿，即完成昆蟲病原線蟲的活體繁殖。本試驗(yàn)所述的6000條/mL侵染期線蟲的水懸液中的線蟲為異小桿線蟲Heterorhabditis bacteriophora—NJ。通過計(jì)算可知本試驗(yàn)每克斜紋夜蛾幼蟲能繁殖出約5. 6萬條異小桿線蟲Heterorhabditis bacteriophora—NJ。試驗(yàn)二 一種昆蟲病原線蟲的活體繁殖方法，具體是按以下步驟完成的首先按直徑為60mm培養(yǎng)皿A的皿蓋大小裁剪兩張中速定性濾紙，并墊在直徑為60mm培養(yǎng)皿A的皿蓋中，再將10頭5齡斜紋夜蛾幼蟲放在直徑為60mm培養(yǎng)皿A皿蓋中的中速定性濾紙上，然后采用O. 5mL的6000條/mL侵染期線蟲的水懸液浸潤(rùn)直徑為60mm培養(yǎng)皿A皿蓋中的中速定性濾紙，再將直徑為60_培養(yǎng)皿A的皿底扣在直徑為60_培養(yǎng)皿A的皿蓋上，至10頭5齡斜紋夜蛾幼蟲全部死亡，然后移去直徑為60mm培養(yǎng)皿A皿底，并將直徑為60mm培養(yǎng)皿A皿蓋置于直徑為90mm培養(yǎng)皿B中，然后向直徑為90mm培養(yǎng)皿B與直徑為60mm培養(yǎng)皿A之間的空隙中注入無菌水，且無菌水的高度低于直徑為60mm培養(yǎng)皿A皿蓋上沿，并在25°C下恒溫培養(yǎng)至無菌水中出現(xiàn)侵染期線蟲為止，然后每天收集有侵染期線蟲的無菌水，且收集后補(bǔ)充無菌水，每次補(bǔ)充的無菌水的高度低于直徑為60mm培養(yǎng)皿A上沿，即完成昆蟲病原線蟲的活體繁殖。本試驗(yàn)所述的6000條/mL侵染期線蟲的水懸液中的線蟲為斯氏線蟲Steinernema carpocapsae—Allο通過計(jì)算可知本試驗(yàn)每克斜紋夜蛾幼蟲能繁殖出約6.9萬條斯氏線蟲Steinernema carpocapsae—All。
權(quán)利要求
1.一種昆蟲病原線蟲的活體繁殖方法，其特征在于昆蟲病原線蟲的活體繁殖方法是按以下步驟完成的 首先按培養(yǎng)皿A的皿蓋大小裁剪兩張中速定性濾紙，并墊在培養(yǎng)皿A的皿蓋中，再將8 12頭5齡斜紋夜蛾幼蟲放在培養(yǎng)皿A皿蓋中的中速定性濾紙上，然后采用O. 4mL O. 6mL的5500條/mL 6500條/mL侵染期線蟲的水懸液浸潤(rùn)培養(yǎng)皿A皿蓋中的中速定性濾紙，再將培養(yǎng)皿A的皿底扣在培養(yǎng)皿A的皿蓋上，至8 12頭5齡斜紋夜蛾幼蟲全部死亡，然后移去培養(yǎng)皿A皿底，并將培養(yǎng)皿A皿蓋置于培養(yǎng)皿B中，然后向培養(yǎng)皿B與培養(yǎng)皿A之間的空隙中注入無菌水，且無菌水的高度低于培養(yǎng)皿A皿蓋上沿，并在24°C 26°C下恒溫培養(yǎng)至無菌水中出現(xiàn)侵染期線蟲 為止，然后每天收集有侵染期線蟲的無菌水，且收集后補(bǔ)充無菌水，每次補(bǔ)充的無菌水的高度低于培養(yǎng)皿A上沿，即完成昆蟲病原線蟲的活體繁殖。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種昆蟲病原線蟲的活體繁殖方法，其特征在于所述的5500條/mL 6500條/mL侵染期線蟲的水懸液中的線蟲為異小桿線蟲Heterorhabditisbacteriophora-NJ 和斯氏線蟲 Steinernema carpocapsae-All。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的一種昆蟲病原線蟲的活體繁殖方法，其特征在于所述培養(yǎng)皿A的直徑為60mm，所述培養(yǎng)皿B的直徑為90mm。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種昆蟲病原線蟲的活體繁殖方法，其特征在于向培養(yǎng)皿B與培養(yǎng)皿A之間的空隙中注入無菌水的量為9mL llmL。
全文摘要
一種昆蟲病原線蟲的活體繁殖方法，它涉及一種昆蟲病原線蟲的活體培養(yǎng)方法。本發(fā)明的目的要解決現(xiàn)有昆蟲病原線蟲的活體培養(yǎng)方法存在繁殖成本高或產(chǎn)量低、致病力差的問題。方法首先剪兩張中速定性濾紙墊在培養(yǎng)皿A的皿蓋中，再放入斜紋夜蛾幼蟲，然后采用侵染期線蟲的水懸液浸潤(rùn)中速定性濾紙，再將培養(yǎng)皿A的皿底扣在培養(yǎng)皿A的皿蓋上，至斜紋夜蛾幼蟲全部死亡，然后移去培養(yǎng)皿A皿底，并將培養(yǎng)皿A皿蓋置于培養(yǎng)皿B中，然后向培養(yǎng)皿B與培養(yǎng)皿A之間的空隙中注入無菌水，并恒溫培養(yǎng)至無菌水中出現(xiàn)侵染期線蟲為止，然后每天收集有侵染期線蟲的無菌水，并補(bǔ)充無菌水，即完成昆蟲病原線蟲的活體繁殖。本發(fā)明主要用于活體繁殖昆蟲病原線蟲。
文檔編號(hào)A01K67/033GK102640730SQ201210108069
公開日2012年8月22日 申請(qǐng)日期2012年4月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月13日
發(fā)明者司兆勝, 李春杰 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院東北地理與農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所