專利名稱：哺乳動物胚胎和卵母細胞玻璃化冷凍載體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及細胞玻璃化冷凍技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及ー種哺乳動物胚胎和卵母細胞玻璃化冷凍載體。
背景技術(shù)：
哺乳動物卵母細胞和胚胎冷凍是人類和動物生殖生物學(xué)的重要組成部分。特別是玻璃化冷凍的發(fā)明，可以使冷凍不需要借助常規(guī)的冷凍儀器，將冷凍材料放入冷凍液后直接投入液氮，大大簡化了程序。玻璃化冷凍技術(shù)是利用體積微小的冷凍載體，在極快的降溫(>2000V /min)過程中，使高濃度的冷凍保護液變?yōu)轲ざ群軓姷念愃撇Ａ拥墓虘B(tài)，避免細胞內(nèi)冰晶的形成，達到冷凍保護的目的，從而顯著提高細胞、組織冷凍后的存活力和發(fā)育能力。常用的玻璃化冷凍方法有尼龍環(huán)玻璃化法(Cryoloop)、開放式拉管法(0PS，Open Pulled Straw)、微細玻璃管法(GMP)、微滴法(Microdrops)、銅網(wǎng)法、Cryoloop、Cryotop 等。在玻璃化冷凍過程中冷凍載體的選擇非常重要，直接影響著冷凍效率。冷凍載體的功能在于承載標本的同時盡量減少負載的冷凍液，達到冷凍過程中使標本直接接觸液氮，快速降溫達到玻璃化狀態(tài)，同時解凍過程中又能迅速脫除冷凍液的目的。開放式拉管法由于重量輕冷凍時易漂浮于液氮表面，而且細管管壁較薄，在液氮中極易斷裂在成樣品丟失。微細玻璃管法在冷凍過程中易斷裂，易造成樣品丟失；GMP的直徑和體積很小，限制了一次冷凍的樣品數(shù)量，而且該法虹 吸效果顯著，増加了操作難度。微滴法在貯存過程中無法進行標識，不利于樣品的長期貯存。銅網(wǎng)法、Cryoloop和Cryotop在冷凍解凍過程中都存在樣品丟失現(xiàn)象。

發(fā)明內(nèi)容
針對目前現(xiàn)有技術(shù)中細胞冷凍存在的問題和缺陷，本發(fā)明提供ー種哺乳動物胚胎和卵母細胞玻璃化冷凍載體。技術(shù)方案ー種哺乳動物胚胎和卵母細胞玻璃化冷凍載體，包括冷凍細管和錐形吸頭，兩者匹配對扣安裝，其中所述冷凍細管的后端安裝有金屬配重體，該金屬配重體與冷凍細管的存放內(nèi)腔之間設(shè)置有密封隔層。所述冷凍細管的前端與錐形吸頭連接處設(shè)置有至少一條縱向的剪切ロ。所述金屬配重體完全密封于冷凍細管的后端，或者，在金屬配重體接觸的冷凍細管側(cè)壁上設(shè)置有孔。所述金屬配重體的前端設(shè)置有叉狀筋，所述叉狀筋穿過隔層后伸入存放內(nèi)腔中，并貼合固定在冷凍細管的內(nèi)側(cè)壁上。所述金屬配重體外露于冷凍細管之外，金屬配重體僅有部分與冷凍細管套裝固定，金屬配重體的前端設(shè)置有叉狀筋，所述叉狀筋穿過隔層后伸入存放內(nèi)腔中，并貼合固定在冷凍細管的內(nèi)側(cè)壁上。所述錐形吸頭的尖端切ロ處的口徑范圍為ΙΟΟμ 200μπ 。有益效果1.本發(fā)明成本低，制作材料可以常用的耗材，操作簡單。2.能夠精確控制冷凍液的量，而且一次可以冷凍多枚卵母細胞或者胚胎。3.采用金屬配重體，樣品不會漂于液氮表面，不會丟失樣品。4.采用金屬配重體具有較好的導(dǎo)熱性能，使冷凍速度快、效率高，減少了樣品的冷凍損傷。尤其是采用了延伸到存放內(nèi)腔中的叉狀筋，不僅起到支撐冷凍管從而保護冷凍細胞的作用，而且與金屬 配重體連接具有加快降溫的作用，降溫效果顯著。5.載體可重復(fù)利用，不會斷裂丟失樣品，節(jié)約成本。在細管上可以做標記，便于長期保存。


圖I是本發(fā)明玻璃化冷凍載體的冷凍細管剖面結(jié)構(gòu)示意圖之ー；
圖2是與圖I中冷凍細管配合安裝的錐形吸頭結(jié)構(gòu)示意 圖3是本發(fā)明玻璃化冷凍載體的冷凍細管剖面結(jié)構(gòu)示意圖之ニ；
圖4是圖3的A部放大結(jié)構(gòu)示意 圖5是圖3的B-B剖面結(jié)構(gòu)示意 圖6是本發(fā)明玻璃化冷凍載體的冷凍細管剖面結(jié)構(gòu)示意圖之三。圖中標號I為冷凍細管，11為冷凍細管的存放內(nèi)腔，2為金屬配重體,21為叉狀筋，3為隔層，4為封ロ，5為剪切ロ，6為孔，7為錐形吸頭，71為切ロ，72為安裝ロ。
具體實施例方式 實施例一參見圖I和圖2，該哺乳動物胚胎和卵母細胞玻璃化冷凍載體包括冷凍細管I和錐形吸頭7，兩者匹配對扣安裝。圖I中，冷凍細管I的前端與錐形吸頭7連接處設(shè)置有至少一條縱向的剪切ロ 5，便于與錐形吸頭匹配套裝，并具有緊固性。圖2中，錐形吸頭7的尖端設(shè)置切ロ 71，另一端為安裝ロ 72，切ロ 71處的口徑范圍為ΙΟΟμπι 200μπι。用Eppendorf 20μ1移液器安裝錐形吸頭7，將該載體裝置一同放入液氮，用鑷子將吸有冷凍樣品的錐形吸頭7從剪切ロ 5處插入冷凍細管I。等全部樣品冷凍完成后，將所有冷凍細管I放入液氮罐中的提子里，放入液氮罐中即可長久保存。其中所述冷凍細管的后端安裝有金屬配重體2，該金屬配重體2與冷凍細管的存放內(nèi)腔之間設(shè)置有密封隔層3。所述金屬配重體2完全密封于冷凍細管I的后端，便于冷凍細管能夠下沉。另外，金屬配重體2還能加速熱傳遞的作用，提高冷凍效率，減少了樣品的冷凍損傷。實施例ニ 參見圖3、圖4和圖5,內(nèi)容與實施例一基本相同，相同之處不重述，不同的是在金屬配重體2接觸的冷凍細管側(cè)壁上設(shè)置有孔6。并且，所述金屬配重體2的前端設(shè)置有叉狀筋21，所述叉狀筋21穿過隔層后伸入存放內(nèi)腔11中，并貼合固定在冷凍細管I的內(nèi)側(cè)壁上，叉狀筋21不僅對支撐冷凍細管具有加強和支持作用，而且與金屬配重體連接具有加快降溫的作用，降溫效果顯著。實施例三參見圖6,內(nèi)容與實施例ニ基本相同,相同之處不重述,不同的是所述金屬配重體2外露于冷凍細管之外,金屬配重體2僅有部分與冷凍細管I套裝固定，金屬配重體2的前端設(shè)置有叉狀筋21，所述叉狀筋21穿過隔層3后伸入存放內(nèi)腔11中，并貼合固 定在冷凍細管I的內(nèi)側(cè)壁上。外漏的金屬配重體2更利于導(dǎo)熱作用。
權(quán)利要求
1.一種哺乳動物胚胎和卵母細胞玻璃化冷凍載體，其特征是包括冷凍細管和錐形吸頭，兩者匹配對扣安裝，其中所述冷凍細管的后端安裝有金屬配重體，該金屬配重體與冷凍細管的存放內(nèi)腔之間設(shè)置有密封隔層。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的哺乳動物胚胎和卵母細胞玻璃化冷凍載體，其特征是所述冷凍細管的前端與錐形吸頭連接處設(shè)置有至少一條縱向的剪切口。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的哺乳動物胚胎和卵母細胞玻璃化冷凍載體，其特征是所述金屬配重體完全密封于冷凍細管的后端，或者，在金屬配重體接觸的冷凍細管側(cè)壁上設(shè)置有孔。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的哺乳動物胚胎和卵母細胞玻璃化冷凍載體，其特征是所述金屬配重體的前端設(shè)置有叉狀筋，所述叉狀筋穿過隔層后伸入存放內(nèi)腔中，并貼合固定在冷凍細管的內(nèi)側(cè)壁上。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的哺乳動物胚胎和卵母細胞玻璃化冷凍載體，其特征是所述金屬配重體外露于冷凍細管之外，金屬配重體僅有部分與冷凍細管套裝固定，金屬配重體的前端設(shè)置有叉狀筋，所述叉狀筋穿過隔層后伸入存放內(nèi)腔中，并貼合固定在冷凍細管的內(nèi)側(cè)壁上。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項所述的哺乳動物胚胎和卵母細胞玻璃化冷凍載體，其特征是所述錐形吸頭的尖端切口處的口徑范圍為100 ii m 200 ii m。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種哺乳動物胚胎和卵母細胞玻璃化冷凍載體，包括冷凍細管和錐形吸頭，兩者匹配對扣安裝，其中所述冷凍細管的后端安裝有金屬配重體，該金屬配重體與冷凍細管的存放內(nèi)腔之間設(shè)置有密封隔層。本發(fā)明成本低，制作材料是常用的耗材，操作簡單；能夠精確控制冷凍液的量，而且一次可以冷凍多枚卵母細胞或者胚胎；采用金屬配重體，樣品不會漂于液氮表面，不會丟失樣品；使冷凍速度快、效率高，減少了樣品的冷凍損傷；載體可重復(fù)利用，不會斷裂丟失樣品，節(jié)約成本。在細管上可以做標記，便于長期保存。
文檔編號A01N1/02GK102669088SQ20121017295
公開日2012年9月19日 申請日期2012年5月30日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月30日
發(fā)明者島田浩明, 張玉洋, 徐照學(xué), 施巧婷, 水谷將也, 王二耀, 辛?xí)粤? 郎利敏, 陳俊峰, 魏成斌 申請人:河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院