一種誘導(dǎo)巴西人參直接建成完整組培苗的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種誘導(dǎo)巴西人參直接建成完整組培苗的方法，包括如下步驟：將經(jīng)表面滅菌的巴西人參外植體帶腋芽莖段接種到含有靈發(fā)素LFS的MS固體培養(yǎng)基上，常規(guī)培養(yǎng)，直到獲得根苗齊全的巴西人參完整組培苗。本發(fā)明的方法能誘導(dǎo)巴西人參莖段腋芽迅速正常萌發(fā)生長(zhǎng)，形成不定根，直接建成根苗齊全的完整組培苗，縮短了繁殖周期，簡(jiǎn)化培養(yǎng)基的配制和生產(chǎn)操作程序，生產(chǎn)效率成倍增加，且獲得的組培苗根系發(fā)達(dá)，質(zhì)量顯著提高。本發(fā)明還提供所述誘導(dǎo)巴西人參建成完整組培苗的方法在巴西人參繁育中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供靈發(fā)素LFS在誘導(dǎo)巴西人參建成完整組培苗中的應(yīng)用。
【專利說(shuō)明】一種誘導(dǎo)巴西人參直接建成完整組培苗的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物的組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種誘導(dǎo)巴西人參直接建成完整組培苗的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]巴西人參(Pfaffia paniculata)亦稱法非亞(Pfaffia),系覓科(Amaranthaccac)牛膝屬多年生草本植物,原產(chǎn)南美洲巴西等國(guó)的熱帶雨林地區(qū)。巴西人參以根入藥，富含多種氨基酸、維生素、礦物質(zhì)和皂甙，具有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛、壯陽(yáng)和抗腫瘤作用。
[0003]為擴(kuò)大我國(guó)的藥用植物資源，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所和廣西藥用植物園先后引種成功。但是，對(duì)其組培苗生產(chǎn)技術(shù)的研究較少，僅見凌征柱等人利用細(xì)胞分裂素N6-卞基腺嘌呤(BA)和生長(zhǎng)素萘乙酸(NAA)，按照誘導(dǎo)外植體腋芽萌發(fā)、無(wú)根苗繼代擴(kuò)繁、誘導(dǎo)生根的常規(guī)組織培養(yǎng)程序才獲得完整的組培苗[種子，2006，25 (10):20-21]。按照以上過(guò)程，獲得完整組培苗至少需要三種不同的復(fù)合型培養(yǎng)基，操作比較繁雜，且40天的培養(yǎng)周期增殖倍數(shù)僅達(dá)3.9。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為簡(jiǎn)化巴西人參組培苗的建成過(guò)程，提高生產(chǎn)效益，獲得優(yōu)質(zhì)組培苗，本發(fā)明的目的在于提供一種誘導(dǎo)巴西人參直接建成完整組培苗的方法。
[0005]本發(fā)明利用新型植物生長(zhǎng)物質(zhì)靈發(fā)素LFS (Lingfasu，亦稱狹霉素，代號(hào)PGR-08)同時(shí)具有細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素兩類植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑生物活性的特點(diǎn)，將LFS加入到常規(guī)MS固體培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)巴西人參直接建成完整組培苗。
[0006]本發(fā)明提供的誘導(dǎo)巴西人參直接建成完整組培苗的方法，包括如下步驟:
[0007]將經(jīng)表面滅菌的巴西人參外植體帶腋芽莖段接種到含有靈發(fā)素LFS的MS固體培養(yǎng)基上，常規(guī)培養(yǎng)，直到獲得根苗齊全的巴西人參完整組培苗。
[0008]其中，獲得所述巴西人參外植體帶腋芽莖段的具體方法為:從巴西人參無(wú)病毒健康植株上采集已經(jīng)硬化的幼枝，流水沖洗，擦干，切去頂芽和葉片，保留部分葉柄以保護(hù)腋芽，再分切成帶腋芽的單節(jié)莖段作為巴西人參外植體帶腋芽莖段。
[0009]其中，所述表面滅菌的具體方法為:在凈化工作臺(tái)上，將外植體帶腋芽莖段用75%酒精消毒，再用0.1 %升汞消毒，消毒后用無(wú)菌水沖洗。
[0010]其中，所述MS固體培養(yǎng)基含靈發(fā)素LFS的濃度為0.1-1.0mg/L，優(yōu)選為0.3mg/L。
[0011]其中，所述常規(guī)培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為，白天溫度26-30°C，夜間溫度20_24°C，光照時(shí)間11小時(shí)/天，光照強(qiáng)度15001X。
[0012]按照本發(fā)明的方法所獲得的巴西人參組培苗，作為組培擴(kuò)繁增殖材料的應(yīng)用，具體為將獲得的組培苗切除根、頂之后，切割為單節(jié)帶腋芽莖段，作為外植體帶腋芽莖段使用。[0013]本發(fā)明還提供一種誘導(dǎo)巴西人參建成完整組培苗的方法在巴西人參良種繁育中的應(yīng)用。
[0014]本發(fā)明還提供靈發(fā)素LFS在誘導(dǎo)巴西人參建成完整組培苗中的應(yīng)用。
[0015]本發(fā)明的有益效果在于:
[0016]I)本發(fā)明中，添加了靈發(fā)素LFS的MS固體培養(yǎng)基適用于常規(guī)組織培養(yǎng)中誘導(dǎo)外植體腋芽萌發(fā)、繼代苗擴(kuò)繁增殖及繼代苗生根這三個(gè)生產(chǎn)環(huán)節(jié)，無(wú)需再添加任何其它激素或調(diào)節(jié)劑，就能誘導(dǎo)巴西人參莖段腋芽迅速正常萌發(fā)生長(zhǎng)，并形成不定根，直接建成根苗齊全的完整組培苗，使繁殖周期縮短為20d ；
[0017]2)本發(fā)明使用添加了靈發(fā)素LFS的MS固體培養(yǎng)基完成常規(guī)要用三種復(fù)合培養(yǎng)基才能完成的巴西人參組培苗生產(chǎn)全過(guò)程，大大簡(jiǎn)化培養(yǎng)基的配制和生產(chǎn)操作程序；
[0018]3)使用本發(fā)明組織培養(yǎng)巴西人參，增殖倍數(shù)顯著變大，生產(chǎn)效率成倍增加；
[0019]4)使用本發(fā)明組織培養(yǎng)巴西人參，獲得的組培苗根系發(fā)達(dá)，其質(zhì)量顯著提高。
【具體實(shí)施方式】
[0020]以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。在不背離本發(fā)明精神和實(shí)質(zhì)的情況下，對(duì)本發(fā)明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發(fā)明的范圍。
[0021]若未特別指明，實(shí)施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段。
[0022]實(shí)施例1誘導(dǎo)巴西人 參外植體腋芽萌發(fā)
[0023]利用本發(fā)明誘導(dǎo)巴西人參外植體腋芽萌發(fā)。
[0024]從防蟲網(wǎng)內(nèi)的無(wú)病毒健康植株上采集已經(jīng)硬化的幼枝，到室內(nèi)流水沖洗表面塵埃，干毛巾除去游離水，切去頂芽和葉片，保留部分葉柄以保護(hù)腋芽，再分切成帶腋芽的單節(jié)莖段作外植體帶腋芽莖段。
[0025]將外植體帶腋芽莖段在凈化工作臺(tái)上用75%酒精消毒30seC，再用0.1%升汞消毒5min,消毒后用無(wú)菌水沖洗6遍。
[0026]配制表I所列的a-f各組培養(yǎng)基，a(MS+LFS 0.1)為固體MS培養(yǎng)基+0.lmg/LLFS(終濃度，下同)，b(MS+LFS 0.3)為固體 MS 培養(yǎng)基+0.3mg/L LFS, f(MS+BA 0.3+NAA
0.1)為固體MS培養(yǎng)基+0.3mg/L BA+0.lmg/L NAA，其他各組類推。各組培養(yǎng)基除激素種類與濃度不同外，其他添加物及PH均相同。
[0027]將消毒后的外植體帶腋芽莖段分別接入a-f各組培養(yǎng)基，每組20瓶，每瓶I個(gè)單節(jié)莖段，在相同條件(晝/夜溫度28/22±2°C，光照強(qiáng)度15001x，光照時(shí)間llh/d)下常規(guī)培養(yǎng)20d，分別統(tǒng)計(jì)各組外植體第7天、第10天、第15天、第20天(7d、10d、15d、20d)的發(fā)芽率、發(fā)根率、出愈率(見表I)。
[0028]結(jié)果表明:⑴含LFS 0.1-1.0mg/L的a、b、C、d各組培養(yǎng)基都能誘導(dǎo)外植體直接建成根苗齊全的完整組培苗，基本無(wú)愈傷組織，其中b(MS+LFS 0.3)效果最好。(2)傳統(tǒng)含BA或BA+NAA的e、f兩組常用培養(yǎng)基只能得到無(wú)根苗和愈傷組織。
[0029]表1.LFS對(duì)巴西人參單書莖段外植體誘導(dǎo)的影響(單位:％ )
【權(quán)利要求】
1.一種誘導(dǎo)巴西人參直接建成完整組培苗的方法，包括如下步驟: 將經(jīng)表面滅菌的巴西人參外植體帶腋芽莖段接種到含有靈發(fā)素的MS固體培養(yǎng)基上，常規(guī)培養(yǎng)，直到獲得根苗齊全的巴西人參完整組培苗。
2.如權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)巴西人參直接建成完整組培苗的方法，其特征在于，獲得所述巴西人參外植體帶腋芽莖段的具體方法為:從巴西人參無(wú)病毒健康植株上采集已經(jīng)硬化的幼枝，流水沖洗，擦干，切去頂芽和葉片，保留部分葉柄以保護(hù)腋芽，再分切成帶腋芽的單節(jié)莖段作為巴西人參外植體帶腋芽莖段。
3.如權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)巴西人參直接建成完整組培苗的方法，其特征在于，所述表面滅菌的具體方法為:在凈化工作臺(tái)上，將外植體帶腋芽莖段用75%酒精消毒，再用0.1 %升汞消毒，消毒后用無(wú)菌水沖洗。
4.如權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)巴西人參直接建成完整組培苗的方法，其特征在于，所述MS固體培養(yǎng)基含靈發(fā)素的濃度為0.1-1.0mg/L。
5.如權(quán)利要求1或4所述的誘導(dǎo)巴西人參直接建成完整組培苗的方法，其特征在于，所述MS固體培養(yǎng)基含靈發(fā)素的濃度為0.3mg/L。
6.如權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)巴西人參直接建成完整組培苗的方法，其特征在于，所述常規(guī)培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為，白天溫度26-30°C，夜間溫度20-24°C，光照時(shí)間11小時(shí)/天，光照強(qiáng)度 15001x。
7.權(quán)利要求1-6任一 項(xiàng)所述方法所獲得的巴西人參組培苗，作為組培擴(kuò)繁增殖材料的應(yīng)用，具體為將獲得的組培苗切除根、頂之后，切割為單節(jié)帶腋芽莖段，作為權(quán)利要求1中的外植體帶腋芽莖段使用。
8.權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的誘導(dǎo)巴西人參直接建成完整組培苗的方法，在巴西人參繁育中的應(yīng)用。
9.靈發(fā)素在誘導(dǎo)巴西人參建成完整組培苗中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103444521SQ201210180184
【公開日】2013年12月18日 申請(qǐng)日期:2012年6月1日 優(yōu)先權(quán)日:2012年6月1日
【發(fā)明者】許鴻章, 陳汝賢, 解云英, 許鴻源, 龔銀花, 許皓翔 申請(qǐng)人:中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所