專利名稱：菌群及瓶插法在白木香樹(shù)上生產(chǎn)沉香的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明技術(shù)領(lǐng)域是在人工種植的白木香樹(shù)中，涉及ー種在白木香樹(shù)Aquilariasinensis (Lour. )Gilg上人工生產(chǎn)沉香的結(jié)香菌群制劑，以及與之配套使用的瓶插法。
背景技術(shù)：
國(guó)產(chǎn)沉香為瑞香科沉香屬植物白木香上含有黑色樹(shù)脂的病變木材，可通過(guò)自然結(jié)香或人工結(jié)香等方式產(chǎn)生。在我國(guó)，白木香是我國(guó)生產(chǎn)沉香的唯一植物資源，為我國(guó)特有的珍貴藥用植物。國(guó)產(chǎn)沉香自古以來(lái)不僅是一種名貴的香料，亦是ー種名貴的藥材。作為ー種傳統(tǒng)中藥，沉香具有行氣止痛、溫中止嘔、納氣平喘之功效，主治氣逆喘息、嘔吐、呃逆、心腹疼痛、大腸虛閉、腰膝虛冷等癥。隨著沉香藥用及保健品用量大幅増加，近幾年來(lái)市場(chǎng)對(duì)沉香產(chǎn)品的需求呈供不應(yīng)求的趨勢(shì)。目前國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上好的沉香價(jià)格已超過(guò)5000元/公斤，天然的沉香產(chǎn)品在國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)已十分緊缺。 在自然界的白木香樹(shù)中，只有極少數(shù)的個(gè)體會(huì)自然產(chǎn)生沉香樹(shù)脂，通常的觀點(diǎn)是受到外傷(例如鼠蟲(chóng)咬傷、真菌侵蝕、臺(tái)風(fēng)擊斷、人工砍伐等)之后，白木香樹(shù)出于自身的愈傷保護(hù)機(jī)制，會(huì)分泌出特殊的樹(shù)脂來(lái)保護(hù)自己。通過(guò)外傷和侵蝕等偶然因素導(dǎo)致ー些外部物質(zhì)介入白木香樹(shù)的新陳代謝過(guò)程，致使白木香樹(shù)芯或木質(zhì)部發(fā)生了非正常的酶轉(zhuǎn)化，從而產(chǎn)生了沉香樹(shù)脂。目前的人工誘導(dǎo)結(jié)香技術(shù)，基本上都是基于上述機(jī)制或理論。因此為了充分利用和提高現(xiàn)有沉香種植、生產(chǎn)及加工的經(jīng)濟(jì)效益，促進(jìn)沉香的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展，保護(hù)沉香野生資源和緩解市場(chǎng)的供需矛盾，本發(fā)明在現(xiàn)有人エ結(jié)香技術(shù)的基礎(chǔ)上，根據(jù)種植戶及產(chǎn)業(yè)化發(fā)展的需求，遵循白木香樹(shù)自然產(chǎn)香的自然規(guī)律和形成機(jī)理，總結(jié)前人各種的技術(shù)方法及存在的不足，在實(shí)踐中逐漸摸索并試驗(yàn)出獨(dú)創(chuàng)的結(jié)香生物菌群制劑以及瓶插法，從而形成在白木香樹(shù)上生產(chǎn)沉香新的技術(shù)和方法。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)人們對(duì)采用化學(xué)或激素類結(jié)香劑引起的藥用安全性質(zhì)疑，或僅利用単一誘導(dǎo)菌株結(jié)香的局限性，致使在結(jié)香中不穩(wěn)定或白木比例浪費(fèi)太大，加之許多科研單位在沉香結(jié)香的研究中，又往往忽視了重要的產(chǎn)香率及應(yīng)用生產(chǎn)的量化指標(biāo)，這些問(wèn)題一直制約了我國(guó)人工沉香技術(shù)開(kāi)發(fā)的規(guī)?；爱a(chǎn)業(yè)化發(fā)展，為此木發(fā)明對(duì)現(xiàn)有結(jié)香菌的使用方法進(jìn)行了充實(shí)和創(chuàng)新，做了更科學(xué)和更實(shí)用的創(chuàng)新改迸，這種改進(jìn)其實(shí)是遵循天然沉香的形成機(jī)理，采自天然沉香中多祥性的內(nèi)生真菌，經(jīng)提取、篩選、純化、組合培養(yǎng)成結(jié)香誘導(dǎo)菌群制齊U，篩選那些具有結(jié)香能力的優(yōu)勢(shì)菌株，經(jīng)優(yōu)化組合為生產(chǎn)沉香的生物菌群，激活菌群之間的良性共生關(guān)系和優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，通過(guò)獨(dú)特的瓶插法自動(dòng)滲液于白木香木質(zhì)部，充分促進(jìn)白木香的自我愈傷保護(hù)機(jī)制在非正常的新陳代謝中泌脂結(jié)香。對(duì)現(xiàn)有配套的輸液方法也作了更實(shí)用的改進(jìn)，形成在白木香樹(shù)上輸送菌劑的“瓶插法”。本發(fā)明所述采用以下幾種技術(shù)方案；
①ー種采用沉香內(nèi)生菌群的方法；用于沉香結(jié)香的誘導(dǎo)菌群，均來(lái)源于白木香樹(shù)中多種沉香內(nèi)生真菌，國(guó)內(nèi)外研究表明這些沉香內(nèi)生真菌具有天然促進(jìn)白木香樹(shù)結(jié)香的特殊功能，利用這種特性，從正在生長(zhǎng)中的野生沉香組織內(nèi)提取和分離出優(yōu)勢(shì)沉香內(nèi)生菌，經(jīng)分子生物學(xué)種屬鑒定，沉香內(nèi)生真菌中目前發(fā)現(xiàn)有70多種，所述的保護(hù)范圍不限于以下8種沉香優(yōu)勢(shì)結(jié)香真菌；有色ニ抱菌(Diplodia sp·),可球ニ抱菌(Botryodiplodiatheobromae),木霉(Trichoderma sp),黃綠墨耳(Melanotus fIavolivens)，蒂腐色ニ抱(Botryosphaeria rhodina),紅褐肉座菌(Hypocrea jecorina)，祿ノ^Γ_ノ禹(fusarium)杖丁貝抱ノ禹、acreonium)。上述沉香內(nèi)生真菌的篩選實(shí)驗(yàn)中，先后通過(guò)芐基丙酮耐受性篩選、人工結(jié)香樣品變色部分的寬度和燃燒香味篩選，最后篩選出具有能夠促進(jìn)白木香樹(shù)結(jié)香的8株優(yōu)勢(shì)沉香內(nèi)生真菌，這些菌株經(jīng)分別消毒、提純、培養(yǎng)出原種，再繼代培養(yǎng)和優(yōu)化組合，最后通過(guò)集中深層發(fā)酵液體菌群制劑；在廣東信宜市鎮(zhèn)隆沉香種植基地和廣西北流市清灣鎮(zhèn)龍南種植園 等地結(jié)香實(shí)驗(yàn)表明；采用這些沉香誘導(dǎo)菌群制劑，并經(jīng)獨(dú)創(chuàng)的瓶插法作用于白木香樹(shù)木質(zhì)部?jī)?nèi)，使具有高活性的液體菌群制劑大面積浸入、染色并促進(jìn)白木香木質(zhì)部的感染和結(jié)香。②結(jié)香菌群培養(yǎng)基的制備所述菌群的培養(yǎng)基特征是；將白木香鋸末200克，去皮馬鈴薯200克，切成小塊，カロ水1000ml,煮沸30min,濾去白木香鋸末和馬鈴薯塊,將濾液補(bǔ)足至1000ml,加鹿糖20g,、瓊脂15g、葡萄糖10g、硫酸鎂I. Og、磷酸ニ氫鉀2，Og、磷酸氫ニ鉀2，Og,融化后分裝，調(diào)pH至5. 5，高溫高壓滅菌I. 5小時(shí)，冷卻至常溫備用。③瓶插法利用廢棄的飲料瓶，在瓶的蓋邊鉆ー個(gè)直徑O. 2厘米的小孔，與孔相通連接上一個(gè)錐形塑料插管，設(shè)計(jì)長(zhǎng)10厘米，直徑O. 5至O. 8厘米的錐形插頭，與瓶蓋連接的錐形插管可直接插入白木香樹(shù)鉆孔內(nèi)自動(dòng)滲液，或按此創(chuàng)新方法設(shè)計(jì)并委托批量制作這種錐形瓶蓋，可大量應(yīng)用于結(jié)香的規(guī)?；a(chǎn)(詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)附圖)。本發(fā)明的生物菌群制劑和瓶插法，通過(guò)人工批量感染健康白木香樹(shù)的愈傷組織，誘導(dǎo)原生木質(zhì)組織的微循環(huán)系統(tǒng)在非正常的新陳代謝中泌脂結(jié)香。經(jīng)過(guò)6- 12個(gè)月的積累可逐漸形成綜褐色油狀物和黃綜色的沉香木，此時(shí)割取鉆孔以上形成的綜褐色油狀物或黃綜色沉香木，用刀除去不含樹(shù)脂的木質(zhì)部經(jīng)曬干后即為沉香。用傳統(tǒng)的沉香鑒定法；直接用火燒即可聞到濃烈的沉香香味。


；瓶插法裝置的結(jié)構(gòu)示意圖；其中I、瓶蓋式錐形插管；2、飲料瓶；3、瓶插鉆孔；4、白木香樹(shù)。
具體實(shí)施例方式①以下所述是提取篩選的9種沉香內(nèi)生菌株；通過(guò)芐基丙酮耐受性、人工結(jié)香材料分析等方法篩選出以下8株內(nèi)生真菌具有促進(jìn)和誘導(dǎo)白木香產(chǎn)香的作用；有色ニ孢菌(Diplodia sp.),可球ニ孢菌(Botryodiplodiatheobromae),木霉(Trichoderma sp),黃綠墨耳(MelanotusfIavolivens),蒂腐色 ニ 抱(Botryosphaeria rhodina),紅褐肉座菌(Hypocreajecorina)，祿ノ]— 困(fusarium)杖丁貝抱ノ禹、acreonium)。
②液體菌群培養(yǎng)基配方及制作；上述8種菌株分別經(jīng)提取、篩選、消毒、提純、培養(yǎng)出原種，再優(yōu)化組合繼代培養(yǎng)；其菌群制劑的培養(yǎng)基的配方組成；將白木香鋸末200克，去皮馬鈴薯切成小塊200克，加水1000ml,煮沸30min,濾去白木香鋸末和馬鈴薯塊,將濾液補(bǔ)足至1000ml,加鹿糖20g,、瓊脂15g、葡萄糖10g、硫酸鎂I. Og、磷酸ニ氫鉀2，Og、磷酸氫ニ鉀2，Og,融化后分裝，調(diào)pH至4. 5，高溫高壓滅菌I. 5小時(shí)，冷卻至常溫，將22種沉香內(nèi)生菌群的菌絲體分別接種于該液體培養(yǎng)基中，置往復(fù)式搖床上振蕩培養(yǎng)，搖床室溫控制在28°C 30°C，液體菌群培養(yǎng)時(shí)間5天。成為液體菌種原液，擴(kuò)大的液體菌種的培養(yǎng)仍用上述液體培養(yǎng)基，需將上述液體培養(yǎng)基各成分相應(yīng)擴(kuò)大十倍，加入液體菌種原液500ml，經(jīng)發(fā)酵罐深層發(fā)酵5天后，即可作為生物菌群制劑與瓶插法的配套生產(chǎn)使用。③瓶插法
ー種利用瓶插的滲液法；其特征需先對(duì)白木香樹(shù)進(jìn)行鉆孔，鉆孔直徑O. 6至O. 9厘米，鉆頭上下呈45度角，深度至樹(shù)內(nèi)木質(zhì)部1/2處，以備瓶插法插入使用。瓶插法的組成是；可利用有利環(huán)保的各種廢棄飲料瓶，在瓶蓋中央鉆ー個(gè)直徑O. 5厘米的小孔，與孔相通焊接上一個(gè)錐形塑料插管，頭尖后粗，長(zhǎng)8-10厘米，直徑O. 5至
O.8厘米的錐形插頭，可將菌劑注入飲料瓶后加蓋這種錐形管蓋，與瓶蓋一體連接的錐形插頭可直接插入白木香樹(shù)預(yù)置的鉆孔內(nèi)能自動(dòng)滲液?；虬创朔椒▽I(yè)優(yōu)化設(shè)計(jì)不同的規(guī)格，并委托廠家批量制作這種塑料的錐形插管瓶蓋，配套利用大量的廢棄飲料瓶，應(yīng)用于各地沉香種植園規(guī)?；爱a(chǎn)業(yè)化的人工結(jié)香工具(基本構(gòu)造詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)附圖)。沉香的采收與鑒別菌群制劑通過(guò)“瓶插法”作用白木香樹(shù)并感染后，經(jīng)過(guò)6-12個(gè)月的積累可逐漸形成黃綜色或深褐色油狀物的木質(zhì)部，割取創(chuàng)孔以上形成的黃綜色或深褐色油狀物沉香木，用刀除去不含樹(shù)脂的白木經(jīng)曬干后即得沉香。經(jīng)傳統(tǒng)的沉香鑒定；直接用火燒即可聞到濃烈的沉香香味。用こ醚提取菌群瓶插法半年及一年結(jié)香的沉香揮發(fā)油組分，通過(guò)氣相色譜、質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)技術(shù)對(duì)其進(jìn)行分析和鑒定。結(jié)果兩批沉香樣品均主要由倍半萜、芳香族化合物和脂肪酸等組成，而未經(jīng)處理的健康白木香則以脂肪酸和烷烴類成分為主，瓶插法處理僅半年得到的沉香在揮發(fā)油成分上與野生沉香基本一致，含有天然沉香特征性成分白木香醛及馬兜鈴烯、α -綠葉烯、纈草醛、絨白乳菇醛等倍半萜類化合物，充分表明本發(fā)明所述的結(jié)香菌群制劑和瓶插法，在目前白木香樹(shù)人工促進(jìn)結(jié)香的技術(shù)領(lǐng)域，具有明顯的優(yōu)勢(shì)和創(chuàng)新點(diǎn)。
權(quán)利要求
1.一種利用生物菌群在白木香樹(shù)上生產(chǎn)沉香的方法，其方法特征是在白木香樹(shù)上，利用真菌在一種以上至幾十種以上經(jīng)組合培養(yǎng)的菌群制劑以用于人工生產(chǎn)沉香，以及在沉香誘導(dǎo)、結(jié)香、生產(chǎn)及宣傳等方面被稱為結(jié)(產(chǎn))香菌群或產(chǎn)品名稱的均在此保護(hù)范圍內(nèi)。
2.篩選優(yōu)勢(shì)結(jié)香菌群；經(jīng)優(yōu)化組合的真菌有；有色二孢菌(Diplodiasp.)，可球二抱菌(Botryodiplodiatheobromae),木霉(Trichoderma sp),黃綠墨耳(Melanotusflavolivens),蒂腐色二抱(Botryosphaeria rhodina),紅褐肉座菌(Hypocreajecorina),鐮刀菌屬(fusarium)枝頂孢霉屬(acreonium)。權(quán)利特征不限于上述8株真菌，包括其它的沉香結(jié)香菌株組成的沉香生產(chǎn)菌群。
3.結(jié)香菌群液體培養(yǎng)基配方；其特征是將白木香鋸末200克，去皮馬鈴薯200克，切成小塊，加水1000ml,煮沸30min,濾去白木香鋸末和馬鈴薯塊,將濾液補(bǔ)足至1000ml,加鹿糖.20g,、瓊脂15g、葡萄糖10g、硫酸鎂I. Og、磷酸二氫鉀2，Og、磷酸氫二鉀2，Og。
4.一種利用瓶插法；其特征需先對(duì)白木香樹(shù)進(jìn)行鉆孔，鉆孔直徑0.6至0.9厘米，鉆頭上下呈45度角，深度至樹(shù)內(nèi)木質(zhì)部1/2處，以備瓶插法插入使用。
瓶插法的組成是；可利用廢棄有利環(huán)保的各種飲料瓶，在瓶蓋中央鉆一個(gè)直徑0. 5厘米的小孔，與孔相通焊接上一個(gè)錐形塑料插管，頭尖后粗，長(zhǎng)8-10厘米，直徑0. 5至0. 8厘米的錐形插頭，可將菌劑注入飲料瓶后加蓋這種錐形管蓋，與瓶蓋一體連接的錐形插頭可直接插入白木香樹(shù)預(yù)置的鉆孔內(nèi)能自動(dòng)滲液?；虬创朔椒▽I(yè)優(yōu)化設(shè)計(jì)不同的規(guī)格，并委托廠家批量制作這種塑料的錐形插管瓶蓋，以大量應(yīng)用于沉香種植園規(guī)?；彤a(chǎn)業(yè)化的人工結(jié)香(詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)附圖)。
全文摘要
本發(fā)明領(lǐng)域是在人工種植的白木香樹(shù)中，涉及一種生產(chǎn)沉香的微生物菌群制劑和配套使用的瓶插法。從天然沉香組織內(nèi)提取和分離出；有色二孢菌等8株沉香內(nèi)生菌株，經(jīng)分別消毒、提純、培養(yǎng)出具有結(jié)香能力的液體菌群制劑聯(lián)合作用于自木香樹(shù)。同時(shí)對(duì)現(xiàn)有配套的輸液方法改進(jìn)為瓶插法，本發(fā)明的獨(dú)創(chuàng)的瓶插法改革了現(xiàn)有方法對(duì)成套輸液器械的依賴以及對(duì)滴液快慢需不斷觀察調(diào)整的弊端。所述方法可人工批量將菌劑浸入健康白木香樹(shù)的愈傷組織并滲透感染原生木質(zhì)，促進(jìn)木質(zhì)內(nèi)微循環(huán)系統(tǒng)在非正常的新陳代謝機(jī)制中泌脂結(jié)香。
文檔編號(hào)A01N63/04GK102696690SQ20121019758
公開(kāi)日2012年10月3日 申請(qǐng)日期2012年6月15日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月15日
發(fā)明者唐顯 申請(qǐng)人:唐顯