澳洲紫蔓豆種苗的組培快繁方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種澳洲紫蔓豆種苗的組培快繁方法。包括以下步驟：1)外植體取材與消毒；2)叢生芽誘導(dǎo)；3)叢生芽增殖和分離復(fù)壯；4)誘導(dǎo)生根。本發(fā)明的澳洲紫蔓豆種苗的組培快繁方法以組培快繁為方法對(duì)該植物進(jìn)行擴(kuò)繁，在較短時(shí)間內(nèi)獲得大量性狀穩(wěn)定統(tǒng)一的優(yōu)質(zhì)種苗，可達(dá)到每年擴(kuò)繁速度為1000-10000倍，組培苗生長(zhǎng)健壯，根系發(fā)達(dá)，移栽成活率高，是一種理想的快繁技術(shù)，可滿足國(guó)內(nèi)澳洲紫曼豆規(guī)?；N種植的需要。
【專利說(shuō)明】澳洲紫蔓豆種苗的組培快繁方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物組培育苗【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種澳洲紫蔓豆種苗的組培快繁方法。
【背景技術(shù)】
[0002]澳洲紫蔓豆(Hardenbergia violacea)為蝶形花科哈登柏豆屬多年生常綠藤本植物，也稱哈登柏豆、紫珊瑚豆，在澳大利亞是一種流行的園林景觀植物，廣泛種植。其常纏繞攀援其他植物生長(zhǎng)，株高2-3米，花蝶形，一般為紫色，另有粉紅色、白色、藍(lán)色等多種顏色品種，花期在冬春季節(jié)，觀賞性極高。
[0003]澳洲紫曼豆可用于庭院綠化、道路隔離帶籬笆綠化、陽(yáng)臺(tái)綠化等，其功能類似于牽牛花。由于其花型奇特，粗生，園林綠化用途廣，對(duì)于澳洲紫曼豆的引種十分重要。澳洲紫蔓豆主要采用分株、嫩芽扦插、播種等方式進(jìn)行繁殖。傳統(tǒng)繁殖方法以嫩芽扦插繁殖為主，但扦插繁殖率不高，比較適用于家庭栽植，難以滿足規(guī)?；a(chǎn)的需要。目前，國(guó)內(nèi)引種只能通過(guò)購(gòu)買種子播種的方式。其發(fā)芽率較低，且存在種間性狀分離，特別是在花色上存在變異，因此不是最佳的繁殖方法。澳洲紫蔓豆種苗市場(chǎng)化生產(chǎn)可以通過(guò)組織培養(yǎng)的方法來(lái)實(shí)現(xiàn)，且通過(guò)組織培養(yǎng)方法培育出的種苗性狀統(tǒng)一穩(wěn)定，是較合適的種苗生產(chǎn)方式。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供一種澳洲紫蔓豆種苗的組培快繁方法，克服有性繁殖(播種)植株變異與整齊度差的缺點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)快速獲得大量性狀穩(wěn)定的優(yōu)質(zhì)澳洲紫曼豆種苗。
[0005]本發(fā)明的澳洲紫蔓豆 種苗的組培快繁方法，包括以下步驟: [0006]I)外植體取材與消毒:于每年2-4月份對(duì)處于生長(zhǎng)旺季的澳洲紫曼豆母株取材，取材前I周用1000倍惡霉靈和1000倍硫酸鏈霉素混合農(nóng)藥殺菌，并作控水處理；取材時(shí)，工具用75%的酒精浸泡消毒I分鐘，剪取母株頂端幼嫩的帶芽莖段，約2-3cm，剪去葉片，加適量的洗衣粉，流水沖洗30分鐘后用吸水紙吸干水分備用；在超凈工作臺(tái)上，先用75%酒精對(duì)莖段進(jìn)行預(yù)消毒，時(shí)間20-30秒，再加入0.1 %升汞溶液，1-2滴表面活性劑，消毒12-15分鐘，無(wú)菌水沖洗材料5次以上；消毒過(guò)程中要注意輕輕搖勻；
[0007]2)叢生芽誘導(dǎo):消毒處理完畢，在超凈工作臺(tái)上，將莖段兩端直接接觸消毒液的部分切除，留下Icm左右的帶芽莖段或者頂芽，接種于1/2MS+BA 2.0-3.0mg/L+KT
0.5-1.0mg/L+NAA 0.1-0.2mg/L+ 卡拉膠 8g/L+ 蔗糖 30g/L, pH = 5.8 的培養(yǎng)基上；恢復(fù)期內(nèi)黑暗培養(yǎng)，7天后無(wú)褐化的材料可見(jiàn)光，培養(yǎng)溫度白天25土 1°C，晚上19-22°C，光照強(qiáng)度1500-20001ux，光周期 12h/天；
[0008]3)叢生芽增殖和分離復(fù)壯:材料接種至叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基I個(gè)月后頂芽或腋芽位置產(chǎn)生不定芽，45-60天后形成3-5顆叢生的芽團(tuán)，將芽團(tuán)分離轉(zhuǎn)接至增殖培養(yǎng)基上，能夠?qū)崿F(xiàn)快速增殖；之后每40天左右進(jìn)行一次繼代增殖，增殖系數(shù)> 4.0 ;培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度1500-20001ux，光周期12h/天，培養(yǎng)溫度白天25±1°C，晚上19-22°C ；
[0009]4)誘導(dǎo)生根:切取復(fù)壯后的叢生芽團(tuán)中節(jié)段(帶節(jié)莖段和帶頂芽莖段均可)，將其接種到生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度20001uX，光周期16h/天，培養(yǎng)溫度白天25 ± I °C，晚上19-22°C，生根率大于70 %。培養(yǎng)45天后，根系長(zhǎng)至3_5條，根長(zhǎng)0.5-1.0cm之間，可移植日光溫室煉苗3-7天，光照強(qiáng)度3000-40001ux ;煉苗后，出瓶種植于O-1Omm泥炭和河沙比例為2:1的混合基質(zhì)中，成活率超過(guò)90 %。
[0010]本發(fā)明的澳洲紫蔓豆種苗的組培快繁方法，在步驟I)中:所述澳洲紫蔓豆外植體還通過(guò)以下步驟獲取:選取性狀穩(wěn)定(特別是花色)的母株種子，用孔徑較小的紗布包裹種子兩層，加適量的洗衣粉，自來(lái)水沖洗30分鐘，75%酒精消毒30秒，然后用0.1%升汞消毒12-15分鐘，最后用無(wú)菌水沖洗5次，接種于1/2MS+Ad 2%。+卡拉膠8g/L+蔗糖30g/L，pH= 5.8的空白培養(yǎng)基中，培養(yǎng)45-60天可獲得無(wú)菌實(shí)生苗，發(fā)芽率約38% ;培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度20001ux，光周期12h/天，培養(yǎng)溫度白天25±1°C，晚上19_22°C。
[0011]本發(fā)明的澳洲紫蔓豆種苗的組培快繁方法，在步驟3)中:所述增殖培養(yǎng)基為1/2MS+BA 1.0-2.0mg/L+KT 0.2-0.5mg/L+NAA0.05-0.lmg/L+ 卡拉膠 8g/L+ 蔗糖 30g/L，pH= 5.8的培養(yǎng)基。
[0012]本發(fā)明的澳洲紫蔓豆種苗的組培快繁方法，在步驟3)中:多次繼代的叢生芽會(huì)出現(xiàn)細(xì)弱徒長(zhǎng)的狀態(tài)，在誘導(dǎo)生根前，需將其轉(zhuǎn)入1/2MS+BA 0.2-0.5mg/L+NAA 0.5mg/L+ 土豆泥50-100g/L+卡拉膠8g/L+蔗糖30g/L，pH = 6.0,培養(yǎng)30-40天，待其復(fù)壯。
[0013]本發(fā)明的澳洲紫蔓豆種苗的組培快繁方法，在步驟4)中:所述生根培養(yǎng)基為1/3MS+IBA 0.2-0.5mg/L+NAA 0.1-0.2mg/L+Ad 2%。+ 卡拉膠 8g/L+ 蔗糖 20g/L, pH = 5.8的培養(yǎng)基。
[0014]與現(xiàn)有技術(shù)相比本發(fā)明的有益效果為:本發(fā)明的澳洲紫蔓豆種苗的組培快繁方法以組培快繁為方法對(duì)該植物進(jìn)行擴(kuò)繁，在較短時(shí)間內(nèi)獲得大量性狀穩(wěn)定統(tǒng)一的優(yōu)質(zhì)種苗，可達(dá)到每年擴(kuò)繁速度為1000-10000倍，組培苗生長(zhǎng)健壯，根系發(fā)達(dá)，移栽成活率高，是一種理想的快繁技術(shù)，可滿足國(guó)內(nèi)澳洲紫曼豆規(guī)模化引種種植的需要。
【具體實(shí)施方式】
[0015]下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】作進(jìn)一步詳細(xì)描述。以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。
[0016]實(shí)施例1
[0017]一種澳洲紫蔓豆種苗的組培快繁方法，包括以下步驟:
[0018]1)外植體取材與消毒:于每年2-4月份對(duì)處于生長(zhǎng)旺季的澳洲紫曼豆母株取材，取材前I周用1000倍惡霉靈和1000倍硫酸鏈霉素混合農(nóng)藥殺菌，并作控水處理；取材時(shí)，工具用75%的酒精浸泡消毒I分鐘，剪取母株頂端幼嫩的帶芽莖段，約2-3cm，剪去葉片，加適量的洗衣粉，流水沖洗30分鐘后用吸水紙吸干水分備用；在超凈工作臺(tái)上，先用75%酒精對(duì)莖段進(jìn)行預(yù)消毒，時(shí)間20-30秒，再加入0.1 %升汞溶液，1-2滴表面活性劑，消毒12-15分鐘，無(wú)菌水沖洗材料5次以上；消毒過(guò)程中要注意輕輕搖勻；
[0019]2)叢生芽誘導(dǎo):消毒處理完畢，在超凈工作臺(tái)上，將莖段兩端直接接觸消毒液的部分切除，留下Icm左右的帶芽莖段或者頂芽，接種于1/2MS+BA 2.0-3.0mg/L+KT0.5-1.0mg/L+NAA 0.1-0.2mg/L+ 卡拉膠 8g/L+ 蔗糖 30g/L, pH = 5.8 的培養(yǎng)基上；恢復(fù)期內(nèi)黑暗培養(yǎng)，7天后無(wú)褐化的材料可見(jiàn)光，培養(yǎng)溫度白天25土 1°C，晚上19-22°C，光照強(qiáng)度1500-20001ux，光周期 12h/ 天；
[0020]3)叢生芽增殖和分離復(fù)壯:材料接種至叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基I個(gè)月后頂芽或腋芽位置產(chǎn)生不定芽，45-60天后形成3-5顆叢生的芽團(tuán)，將芽團(tuán)分離轉(zhuǎn)接至增殖培養(yǎng)基上，能夠?qū)崿F(xiàn)快速增殖；之后每40天左右進(jìn)行一次繼代增殖，增殖系數(shù)>4.0 ;培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度1500-20001ux，光周期12h/天，培養(yǎng)溫度白天25±1°C，晚上19-22°C ；
[0021]4)誘導(dǎo)生根:切取復(fù)壯后的叢生芽團(tuán)中節(jié)段(帶節(jié)莖段和帶頂芽莖段均可)，將其接種到生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度20001uX，光周期16h/天，培養(yǎng)溫度白天25 ± I °C，晚上19-22°C，生根率大于70 %。培養(yǎng)45天后，根系長(zhǎng)至3_5條，根長(zhǎng)0.5-1.0cm之間，可移植日光溫室煉苗3-7天，光照強(qiáng)度3000-40001ux ;煉苗后，出瓶種植于O-1Omm泥炭和河沙比例為2:1的混合基質(zhì)中，成活率超過(guò)90 %。
[0022]本發(fā)明的澳洲紫蔓豆種苗的組培快繁方法，在步驟3)中:所述增殖培養(yǎng)基為1/2MS+BA 1.0-2.0mg/L+KT 0.2-0.5mg/L+NAA0.05-0.lmg/L+ 卡拉膠 8g/L+ 蔗糖 30g/L，pH= 5.8的培養(yǎng)基。
[0023]本發(fā)明的澳洲紫蔓豆種苗的組培快繁方法，在步驟3)中:多次繼代的叢生芽會(huì)出現(xiàn)細(xì)弱徒長(zhǎng)的狀態(tài)，在誘導(dǎo)生根前，需將其轉(zhuǎn)入1/2MS+BA 0.2-0.5mg/L+NAA 0.5mg/L+ 土豆泥50-100g/L+卡拉膠8g/L+蔗糖30g/L，pH = 6.0,培養(yǎng)30-40天，待其復(fù)壯。
[0024]本發(fā)明的澳洲紫蔓豆種苗的組培快繁方法，在步驟4)中:所述生根培養(yǎng)基為1/3MS+IBA 0.2-0.5mg/L+NAA 0.1-0.2mg/L+Ad 2%。+ 卡拉膠 8g/L+ 蔗糖 20g/L, pH = 5.8的培養(yǎng)基。
[0025]實(shí)施例2`[0026]與實(shí)施例1不同之處在于:所述澳洲紫蔓豆外植體還通過(guò)以下步驟獲取:選取性狀穩(wěn)定(特別是花色)的母株種子，用孔徑較小的紗布包裹種子兩層，加適量的洗衣粉，自來(lái)水沖洗30分鐘，75%酒精消毒30秒，然后用0.1 %升汞消毒12-15分鐘，最后用無(wú)菌水沖洗5次，接種于1/2MS+Ad 2%o +卡拉膠8g/L+蔗糖30g/L，pH = 5.8的空白培養(yǎng)基中，培養(yǎng)45-60天可獲得無(wú)菌實(shí)生苗，發(fā)芽率約38% ;培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度20001uX，光周期12h/天，培養(yǎng)溫度白天25± I°C，晚上19-22°C。
[0027]本發(fā)明的澳洲紫蔓豆種苗的組培快繁方法以組培快繁為方法對(duì)該植物進(jìn)行擴(kuò)繁，在較短時(shí)間內(nèi)獲得大量性狀穩(wěn)定統(tǒng)一的優(yōu)質(zhì)種苗，可達(dá)到每年擴(kuò)繁速度為1000-10000倍，組培苗生長(zhǎng)健壯，根系發(fā)達(dá)，移栽成活率高，是一種理想的快繁技術(shù)，可滿足國(guó)內(nèi)澳洲紫曼豆規(guī)模化引種種植的需要。
[0028]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明技術(shù)原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和變型，這些改進(jìn)和變型也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種澳洲紫蔓豆種苗的組培快繁方法，其特征在于，包括以下步驟: 1)外植體取材與消毒:于每年2-4月份對(duì)處于生長(zhǎng)旺季的澳洲紫曼豆母株取材，取材前I周用1000倍惡霉靈和1000倍硫酸鏈霉素混合農(nóng)藥殺菌，并作控水處理；取材時(shí)，工具用75%的酒精浸泡消毒I分鐘，剪取母株頂端幼嫩的帶芽莖段，約2-3cm，剪去葉片，加適量的洗衣粉，流水沖洗30分鐘后用吸水紙吸干水分備用；在超凈工作臺(tái)上，先用75%酒精對(duì)莖段進(jìn)行預(yù)消毒，時(shí)間20-30秒，再加入0.1 %升汞溶液，1-2滴表面活性劑，消毒12-15分鐘，無(wú)菌水沖洗材料5次以上；消毒過(guò)程中要注意輕輕搖勻； 2)叢生芽誘導(dǎo):消毒處理完畢，在超凈工作臺(tái)上，將莖段兩端直接接觸消毒液的部分切除，留下Icm左右的帶芽莖段或者頂芽，接種于1/2MS+BA 2.0-3.0mg/L+KT 0.5-1.0mg/L+NAA 0.1-0.2mg/L+卡拉膠8g/L+蔗糖30g/L，pH = 5.8的培養(yǎng)基上；恢復(fù)期內(nèi)黑暗培養(yǎng)，7天后無(wú)褐化的材料可見(jiàn)光，培養(yǎng)溫度白天25± I°C，晚上19-22°C，光照強(qiáng)度1500_20001ux，光周期12h/天； 3)叢生芽增殖和分離復(fù)壯:材料接種至叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基I個(gè)月后頂芽或腋芽位置產(chǎn)生不定芽，45-60天后形成3-5顆叢生的芽團(tuán)，將芽團(tuán)分離轉(zhuǎn)接至增殖培養(yǎng)基上，能夠?qū)崿F(xiàn)快速增殖；之后每40天左右進(jìn)行一次繼代增殖，增殖系數(shù)> 4.0 ;培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度1500-20001ux，光周期12h/天，培養(yǎng)溫度白天25±1°C，晚上19-22°C ； 4)誘導(dǎo)生根:切取復(fù)壯后的叢生芽團(tuán)中節(jié)段(帶節(jié)莖段和帶頂芽莖段均可)，將其接種到生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度20001UX，光周期16h/天，培養(yǎng)溫度白天25± 1°C，晚上19-22°C，生根率大于70%。培養(yǎng)45天后，根系長(zhǎng)至3_5條，根長(zhǎng)0.5-1.0cm之間，可移植日光溫室煉苗3-7天，光照強(qiáng)度3000-40001ux ;煉苗后，出瓶種植于O-1Omm泥炭和河沙比例為2: I的混合基質(zhì)中，成活率超過(guò)90%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的澳洲紫蔓豆種苗的組培快繁方法，其特征在于，在步驟I)中:所述澳洲紫蔓豆外植體還通過(guò)以下步驟獲取:選取性狀穩(wěn)定(特別是花色)的母株種子，用孔徑較小的紗布包裹種子兩層，加適量的洗衣粉，自來(lái)水沖洗30分鐘，75%酒精消毒30秒，然后用0.1 %升汞消毒12-15分鐘，最后用無(wú)菌水沖洗5次，接種于1/2MS+Ad 2%。+卡拉膠8g/L+蔗糖30g/L，pH = 5.8的空白培養(yǎng)基中，培養(yǎng)45-60天可獲得無(wú)菌實(shí)生苗，發(fā)芽率約38 %;培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度2000lux，光周期12h/天，培養(yǎng)溫度白天25 ± I °C，晚上19-22°C。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的澳洲紫蔓豆種苗的組培快繁方法，其特征在于，在步驟3)中:所述增殖培養(yǎng)基為 1/2MS+BA 1.0-2.0mg/L+KT 0.2-0.5mg/L+NAA 0.05-0.lmg/L+ 卡拉膠8g/L+蔗糖30g/L，pH = 5.8的培養(yǎng)基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的澳洲紫蔓豆種苗的組培快繁方法，其特征在于，在步驟3)中:多次繼代的叢生芽會(huì)出現(xiàn)細(xì)弱徒長(zhǎng)的狀態(tài)，在誘導(dǎo)生根前，需將其轉(zhuǎn)入1/2MS+BA0.2-0.5mg/L+NAA 0.5mg/L+ 土豆泥 50_100g/L+ 卡拉膠 8g/L+ 蔗糖 30g/L，pH = 6.0,培養(yǎng)30-40天，待其復(fù)壯。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的澳洲紫蔓豆種苗的組培快繁方法，其特征在于，在步驟4)中:所述生根培養(yǎng)基為 1/3MS+IBA 0.2-0.5mg/L+NAA 0.1-0.2mg/L+Ad 2%。+卡拉膠 8g/L+蔗糖20g/L，pH = 5.8 的培養(yǎng)基。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103503771SQ201210212828
【公開(kāi)日】2014年1月15日 申請(qǐng)日期:2012年6月26日 優(yōu)先權(quán)日:2012年6月26日
【發(fā)明者】周國(guó)權(quán), 陳樟爍, 邱欣敏, 張林杰, 黃鎮(zhèn)茂 申請(qǐng)人:佛山市粵山生物科技有限公司