專利名稱：一種培育自花結(jié)實櫻桃新種質(zhì)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物育種領(lǐng)域，具體地說，涉及一種高效培育自花結(jié)實櫻桃新種質(zhì)的方法。
背景技術(shù)：
目前果樹栽培中使用的品種多為自花不結(jié)實，因此需要配置合適的授粉品種，如授粉樹搭配不合理則會嚴重影響坐果率和產(chǎn)量，在設(shè)施栽培中的表現(xiàn)尤為突出。即便栽培少數(shù)自花結(jié)實品種也均為國外引進，部分品種存在雨季裂果、適應(yīng)性差等問題，因此培育適宜我國氣候、土壤等條件的自花結(jié)實品種應(yīng)用于生產(chǎn)，尤其是對設(shè)施栽培的櫻桃而言更具有重要意義和實際應(yīng)用價值。根據(jù)育種實踐，培育自花結(jié)實后代首先應(yīng)選自花結(jié)實的品種做親本，再結(jié)合另一個具有優(yōu)良特性的品種做親本設(shè)置雜交組合。加拿大從 ‘Lambert’ XJI2420后代中成功選育出了自交親和的品種‘Stella’。然后，用Van (S1S3)做母本，‘Stella’做父本雜交又選出了兩個自交親和的姊妹系‘Lapins’(拉賓斯)和‘Sunburst’(艷陽)。櫻桃早熟品種由于果實發(fā)育期短，胚發(fā)育不完全，常規(guī)播種后種子萌發(fā)率極低，已成為培育早熟櫻桃品種的瓶頸。試驗表明，自然授粉的‘紅燈’和‘紅燈’與‘Stella’的雜交種子實生播種出苗率低于4%，嚴重阻礙著育種工作的進一步開展。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種高效培育自花結(jié)實櫻桃新種質(zhì)的方法。為了實現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的一種培育自花結(jié)實櫻桃新種質(zhì)的方法，包括雜交親本配置、有性雜交和雜交后代胚培養(yǎng)的步驟，其中，雜交親本中至少其一為自花結(jié)實櫻桃品種。前述的方法，包括以下步驟1)選擇自花結(jié)實的櫻桃品種及另一具有優(yōu)良特性(例如果實個大、色澤好、風味佳等)的早熟櫻桃品種作為親本進行雜交，人工授粉后的花朵進行套袋；2)取著色后的果實，去掉果肉及外種皮后將種子浸泡于70%酒精中，然后用無菌水沖洗并置于0. 1%升汞中進行消毒，消毒后用無菌水沖洗并浸泡于無菌水中，剝?nèi)?nèi)種皮，最后用84液消毒；3)將消毒后的種子接種于基礎(chǔ)培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)；4)待胚萌發(fā)出新梢后剪下接種于誘導分化培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)；5)待新梢高于2cm時，選擇直立、有4片以上舒展葉片的健壯苗，從基部切下轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基上獲得生根植株；6)最后將培養(yǎng)成株的雜交苗定植田間，結(jié)果后進行綜合性狀評價，利用套袋結(jié)合自花結(jié)實分子標記技術(shù)篩選出具有早熟、優(yōu)質(zhì)、自花結(jié)實等特性的櫻桃新種質(zhì)。前述的方法，步驟I)中所述親本優(yōu)選為櫻桃品種‘Stella’和‘紅燈’。前述的方法，步驟I)具體為采集大氣球期的‘Stella’花藥，于22_28°C放置24小時，待花粉散出后用研缽研磨，裝入瓶中備用；選大氣球期的‘紅燈’花蕾，去雄，蘸取‘Stella’花粉給其柱頭授粉，然后用硫酸紙?zhí)状?，培養(yǎng)雜交后代。
前述的方法，步驟2)具體為取著色后的果實，去掉果肉及外種皮后將種子浸泡于70%酒精中0. 5min，然后用無菌水沖洗2次,將種子置于0. 1%升汞中消毒8min，然后用無菌水沖洗2次并浸泡于無菌水中6h，剝?nèi)?nèi)種皮，最后用84液消毒。前述的方法，步驟3)中所述的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，其配方為MS+6-BA1. 0mg/L+IAA0. 4mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂6. 7g/L，以蒸餾水配制。前述的方法，步驟4)中所述的誘導分化培養(yǎng)基，其配方為MS+6-BA0. 5mg/L+NAAO. lmg/L+鹿糖30g/L+瓊脂6. 7g/L,以蒸懼水配制。
前述的方法，步驟5 )中所述的生根培養(yǎng)基，其配方為1/2MS+IAA0. 3mg/L+1BAO. 3mg/L鹿糖30g/L+瓊脂6. 7g/L,以蒸懼水配制。其中，步驟3) -5)的培養(yǎng)條件為22-28°C，2000-30001x光照培養(yǎng)。本發(fā)明針對當前櫻桃育種及生產(chǎn)中存在的問題，以優(yōu)質(zhì)、自花結(jié)實的櫻桃品種‘Stella’與早熟、大果的‘紅燈’做親本進行雜交，對獲得的胚進行培養(yǎng)，成株率71.19^83.7%。將培養(yǎng)成株的雜交苗定植田間，結(jié)合自花結(jié)實分子標記技術(shù)篩選出‘紅燈’X ‘Stella’組合的后代36株，自花結(jié)實比例高達70. 8%，對已結(jié)果的株系進行套袋，坐果率在28. 99%-85. 5%之間，結(jié)合果實性狀評價，最終獲得優(yōu)質(zhì)、自花結(jié)實的甜櫻桃新優(yōu)系，從而建立一種高效的自花結(jié)實櫻桃新種質(zhì)的育種方法，具有廣闊的推廣前景。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于(一)本發(fā)明選用綜合經(jīng)濟性狀優(yōu)良的櫻桃品種作為兩親本，雜交后代中綜合經(jīng)濟性狀好的比例高。(二)本發(fā)明優(yōu)選‘Stella’與‘紅燈’兩個櫻桃品種為親本，采用傳統(tǒng)雜交與胚培養(yǎng)相結(jié)合的方法，雜交后代成株率高達71. 19T83. 7%，自花結(jié)實后代的比例高達70. 8%。(三)本發(fā)明采用套袋結(jié)合自花結(jié)實分子標記技術(shù)篩選自花結(jié)實新種質(zhì)結(jié)果準確可靠。(四)本發(fā)明育種方法簡單、效率高、成本低，對研究環(huán)境及條件設(shè)施要求不嚴格，適于基層推廣及應(yīng)用。
具體實施例方式以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段，所用原料均為市售商品。以下實施例中涉及的櫻桃品種，其中‘Stella’系1993年引自美國，‘紅燈’、‘紅艷’和‘Van’系1993年引自大連，保存于河北省農(nóng)林科學院昌黎果樹研究所的18年生樹；‘lapins’系1999年引自山海關(guān)，保存于河北省農(nóng)林科學院昌黎果樹研究所的12年生樹。以下實施例中涉及的符號釋義MS表示MS培養(yǎng)基；IAA為吲哚乙酸(Indole-3-acetic acid) ;6_BA 為 6_ 卞氛基腺嘿呤(6-Benzylaminopurine) ；NAA 為蔡乙酸(Naphthalene acetic Acid) ; IBA 為卩引哚丁酸(Indole-3-butyric acid)。實施例I自花結(jié)實櫻桃新種質(zhì)的育種一‘紅燈’ X ‘Stella’I. I 步驟I)采集大氣球期的‘Stella’花藥，于22_28°C放置24小時，待花粉散出后用研缽研磨，裝入瓶中備用；選大氣球期的‘紅燈’花蕾，去雄，蘸取‘Stella’花粉給其柱頭授粉，然后用硫酸紙?zhí)状?，培養(yǎng)雜交后代。2)取接近成熟的果實，去掉果肉及外種皮后將種子浸泡于70%酒精中0. 5min，然后用無菌水沖洗2次，將種子置于0. 1%升汞中消毒8min，然后用無菌水沖洗2次并浸泡于無菌水中6h，剝?nèi)?nèi)種皮，最后用84液消毒。3)將消毒后的種子接種于基礎(chǔ)培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)?；A(chǔ)培養(yǎng)基的配方MS+6-BA1. 0mg/L+IAA0. 4mg/L+鹿糖30g/L+瓊脂6. 7g/L,以蒸懼水配制。培養(yǎng)條件22-280C，2000-30001x 光照培養(yǎng)。4)待胚萌發(fā)出新梢后剪下接種于誘導分化培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。誘導分化培養(yǎng)基的配方MS+6-BA0. 5mg/L+NAAO. lmg/L+鹿糖30g/L+瓊脂6. 7g/L,以蒸懼水配制。培養(yǎng)條件22-280C，2000-30001x 光照培養(yǎng)。5)待新梢高于2cm時，選擇直立、有4片以上舒展葉片的健壯苗，從基部切下轉(zhuǎn)移 至生根培養(yǎng)基上獲得生根植株。生根培養(yǎng)基的配方1/2MS+IAA0. 3mg/L+IBA0. 3mg/L蔗糖30g/L+瓊脂6. 7g/L，以蒸餾水配制。培養(yǎng)條件22-28°C，2000-30001x光照培養(yǎng)。6)最后將培養(yǎng)成株的雜交苗定植田間，結(jié)果后進行綜合性狀評價，利用套袋結(jié)合自花結(jié)實分子標記技術(shù)篩選出具有早熟、優(yōu)質(zhì)、自花結(jié)實等特性的櫻桃新種質(zhì)。7)自交親和性分子鑒定利用CTAB法提取總DNA，瓊脂糖凝膠電泳方法檢測DNA純度，紫外分光光度法檢測
DNA含量。引物BFP200/BFP201，內(nèi)參對照引物IC-F/IC-R。PCR 反應(yīng)體系(15ii L) :10mmol/L Tris-HCl (pH8. 3) , 50mmol/LKCl,0. 2mmol/LdNTPs,2mmol/L MgCl2,0. 2 u mol/L 引物 BFP200/BFP201,0. I u mol/L 引物 IC-F/IC-R, I. 5UTaq DNA聚合酶，約20ng DNA模板。PCR 反應(yīng)條件94°C 3min ;94°C 45s，50°C lmin，72°C lmin，35 個循環(huán)；72 °C 延伸lOmin。PCR產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠(含0. 5 y g/mLEB)上進行電泳分離，電泳緩沖液為
0.5 X TBE,在5V/cm電壓下電泳40min Ih,紫外燈下成像并拍照。上述引物組合BFP200/BFP201、引物組合IC-F/IC-R、dNTPs、Taq DNA聚合酶均購自北京賽百盛公司，PCR儀為PTC-100型。8)篩選結(jié)果(表I)表I自交親和性分子鑒定結(jié)果
品種/株系代I自交親和特異
P口稱各代萬標記(59Qbp)
StellaK
紅燈無
HS08-5, HS08-57、HS08-61 , HS08-68, HS08-71、HS08-75、^
HS08-96、HS08-i()]、HS08-104, HS08-07、HS08-11K 2
HS08-243、HS08-306、HS08-52 ^ _A_
I. 2 結(jié)果已進行試驗示范的優(yōu)系"2-59〃的特征為樹勢開張，成枝力較強；以短果枝結(jié)果為主，4月下旬開花，花期5 7天，在昌黎地區(qū)6月中旬成熟；果實心形，顏色漂亮，紫紅，著色度100% ;果個大，平均單果重6. 0g，最大單果重8. 25g，果實甜酸可口，可溶性固形物含量17. 4%，汁液多，果肉細，半離核；果實整齊，成熟期一致；自花授粉坐果率60. 9%，抗寒性強，與山櫻砧木嫁接親和性好。實施例2自花結(jié)實櫻桃新種質(zhì)的育種一‘Stella’ X ‘紅燈’I. I 步驟I)采集大氣球期的‘紅燈’花藥，于22_28°C放置24小時，待花粉散出后用研缽研磨，裝入瓶中備用；選大氣球期的‘Stella’花蕾，去雄，蘸取‘紅燈’花粉給其柱頭授粉，然后用硫酸紙?zhí)状囵B(yǎng)雜交后代。2)取接近成熟的果實，去掉果肉及外種皮后將種子浸泡于70%酒精中0. 5min，然后用無菌水沖洗2次，將種子置于0. 1%升汞中消毒8min，然后用無菌水沖洗2次并浸泡于無菌水中6h，剝?nèi)?nèi)種皮，最后用84液消毒。3)將消毒后的種子接種于基礎(chǔ)培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)?；A(chǔ)培養(yǎng)基的配方MS+6-BA1. 0mg/L+IAA0. 4mg/L+鹿糖30g/L+瓊脂6. 7g/L,以蒸懼水配制。培養(yǎng)條件22-280C，2000-30001x 光照培養(yǎng)。
4)待胚萌發(fā)出新梢后剪下接種于誘導分化培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。誘導分化培養(yǎng)基的配方MS+6-BA0. 5mg/L+NAAO. lmg/L+鹿糖30g/L+瓊脂6. 7g/L,以蒸懼水配制。培養(yǎng)條件22-280C，2000-30001x 光照培養(yǎng)。5)待新梢高于2cm時，選擇直立、有4片以上舒展葉片的健壯苗，從基部切下轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基上獲得生根植株。生根培養(yǎng)基的配方1/2MS+IAA0. 3mg/L+IBA0. 3mg/L蔗糖30g/L+瓊脂6. 7g/L，以蒸餾水配制。培養(yǎng)條件22-28°C，2000-30001x光照培養(yǎng)。6)最后將培養(yǎng)成株的雜交苗定植田間，結(jié)果后進行綜合性狀評價，利用套袋結(jié)合自花結(jié)實分子標記技術(shù)篩選出具有早熟、優(yōu)質(zhì)、自花結(jié)實等特性的櫻桃新種質(zhì)。7)自交親和性分子鑒定 利用CTAB法提取總DNA，瓊脂糖凝膠電泳方法檢測DNA純度，紫外分光光度法檢測
DNA含量。引物BFP200/BFP201，內(nèi)參對照引物IC-F/IC-R。PCR 反應(yīng)體系(15ii L) :10mmol/L Tris-HCl (pH8. 3) , 50mmol/LKCl,0. 2mmol/LdNTPs, 2mmol/L MgCl2,0. 2 u mol/L 引物 BFP200/BFP201,0. I u mol/L 引物 IC-F/IC-R, I. 5UTaq DNA聚合酶，約20ng DNA模板。PCR 反應(yīng)條件94°C 3min ;94°C 45s，50°C lmin, 72 °C lmin，35 個循環(huán)；72 °C 延伸lOmin。PCR產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠(含0. 5 y g/mLEB)上進行電泳分離，電泳緩沖液為
0.5 X TBE,在5V/cm電壓下電泳40min Ih,紫外燈下成像并拍照。上述引物組合BFP200/BFP201、引物組合IC-F/IC-R、dNTPs、Taq DNA聚合酶均購自北京賽百盛公司，PCR儀為PTC-100型。8)篩選結(jié)果(表2)表2自交親和性分子鑒定結(jié)果
口鈾/她玄從P自交親和特異
品種/株系fW標記(590bp)
Stella;
紅燈無
HS08-I22、HS08-I23、HS08-127. HS08-130, HS08-135,,
HS08-143、HS08-147、HS08-153、HS08-16、HS08-I62、2-62"
_HS08-93、HS08-10、HS08-137_*_ I. 2 結(jié)果已進行試驗示范的優(yōu)系"2-62〃的特征為樹勢較開張，樹勢開張，成枝力較強；4月下旬開花，花期5 7天，成熟期較早，在昌黎地區(qū)5月低成熟；果實心形，顏色漂亮，紫紅，著色度100% ;平均單果重6. lg，最大單果重7. 4g，果實甜，可溶性固形物含量18%，汁液多，果肉硬脆，半離核；果實整齊，成熟期一致；自花授粉坐果率71. 7%，抗寒性強，與山櫻砧木嫁接親和性好。實施例3自花結(jié)實樓桃新種質(zhì)的育種一 ‘lapins’ X ‘Van’I. I 步驟I)采集大氣球期的‘Van’花藥，于22_28°C放置24小時，待花粉散出后用研缽研磨，裝入瓶中備用；選大氣球期的‘lapins’花蕾，去雄，蘸取‘Van’花粉給其柱頭授粉，然后用硫酸紙?zhí)状?，培養(yǎng)雜交后代。2)取接近成熟的果實，去掉果肉及外種皮后將種子浸泡于70%酒精中0. 5min，然后用無菌水沖洗2次，將種子置于0. 1%升汞中消毒8min，然后用無菌水沖洗2次并浸泡于無菌水中6h，剝?nèi)?nèi)種皮，最后用84液消毒。3)將消毒后的種子接種于基礎(chǔ)培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。基礎(chǔ)培養(yǎng)基的配方MS+6-BA1. 0mg/L+IAA0. 4mg/L+鹿糖30g/L+瓊脂6. 7g/L,以蒸懼水配制。培養(yǎng)條件22-280C，2000-30001x 光照培養(yǎng)。4)待胚萌發(fā)出新梢后剪下接種于誘導分化培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。誘導分化培養(yǎng)基的配方MS+6-BA0. 5mg/L+NAAO. lmg/L+鹿糖30g/L+瓊脂6. 7g/L,以蒸懼水配制。培養(yǎng)條件22-280C，2000-30001x 光照培養(yǎng)。5)待新梢高于2cm時，選擇直立、有4片以上舒展葉片的健壯苗，從基部切下轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基上獲得生根植株。生根培養(yǎng)基的配方1/2MS+IAA0. 3mg/L+IBA0. 3mg/L蔗糖30g/L+瓊脂6. 7g/L，以蒸餾水配制。培養(yǎng)條件22-28°C，2000-30001x光照培養(yǎng)。6)最后將培養(yǎng)成株的雜交苗定植田間，結(jié)果后進行綜合性狀評價，利用套袋結(jié)合自花結(jié)實分子標記技術(shù)篩選出具有早熟、優(yōu)質(zhì)、自花結(jié)實等特性的櫻桃新種質(zhì)。7)自交親和性分子鑒定利用CTAB法提取總DNA，瓊脂糖凝膠電泳方法檢測DNA純度，紫外分光光度法檢測
DNA含量。引物BFP200/BFP201，內(nèi)參對照引物IC-F/IC-R。PCR 反應(yīng)體系(15ii L) :10mmol/L Tris-HCl (pH8. 3) , 50mmol/LKCl,0. 2mmol/LdNTPs, 2mmol/L MgCl2,0. 2 u mol/L 引物 BFP200/BFP201,0. I u mol/L 引物 IC-F/IC-R, I. 5UTaq DNA聚合酶，約20ng DNA模板。PCR 反應(yīng)條件94°C 3min ;94°C 45s，50°C lmin, 72 °C lmin，35 個循環(huán)；72 °C 延伸lOmin。PCR產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠(含0. 5 y g/mLEB)上進行電泳分離，電泳緩沖液為
0.5 X TBE,在5V/cm電壓下電泳40min Ih,紫外燈下成像并拍照。上述引物組合BFP200/BFP201、引物組合IC-F/IC-R、dNTPs、Taq DNA聚合酶均購自北京賽百盛公司，PCR儀為PTC-100型。8)篩選結(jié)果(表3) 表3自交親和性分子鑒定結(jié)果
麵繼
Iapins有
Van無
HS08-I63、HS08-166. HS08-168、HS08-170、HS08-175、右
HS08-I77、HS08-i79、HS08-I87、HS08-192. HS08-200、^ 8
_HS08-148, HS08-188, HS08-223_*_I. 2 結(jié)果已進行試驗示范的優(yōu)系"3-8〃的特征為樹勢較開張，樹勢開張，成枝力較強；4月下旬開花，花期5 7天，在昌黎地區(qū)6月上旬成熟；果實腎形，顏色漂亮，鮮紅，著色度100% ;平均單果重5. lg，最大單果重6g，果實甜，可溶性固形物含量18. 72%，汁液多，半離核；果實整齊，成熟期一致；自花授粉坐果率85. 5%，抗寒性強，與山櫻砧木嫁接親和性較好。實施例4自花結(jié)實櫻桃新種質(zhì)的育種一‘lapins’ X ‘紅艷’I. I 步驟I)采集大氣球期的‘紅艷’花藥，于22_28°C放置24小時，待花粉散出后用研缽研磨，裝入瓶中備用；選大氣球期的‘lapins’花蕾，去雄，蘸取‘紅艷’花粉給其柱頭授粉，然后用硫酸紙?zhí)状?，培養(yǎng)雜交后代。2)取接近成熟的果實，去掉果肉及外種皮后將種子浸泡于70%酒精中0. 5min，然后用無菌水沖洗2次，將種子置于0. 1%升汞中消毒8min，然后用無菌水沖洗2次并浸泡于無菌水中6h，剝?nèi)?nèi)種皮，最后用84液消毒。3)將消毒后的種子接種于基礎(chǔ)培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)?；A(chǔ)培養(yǎng)基的配方MS+6-BA1. 0mg/L+IAA0. 4mg/L+鹿糖30g/L+瓊脂6. 7g/L,以蒸懼水配制。培養(yǎng)條件22-280C，2000-30001x 光照培養(yǎng)。4)待胚萌發(fā)出新梢后剪下接種于誘導分化培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。誘導分化培養(yǎng)基的配方MS+6-BA0. 5mg/L+NAAO. lmg/L+鹿糖30g/L+瓊脂6. 7g/L,以蒸懼水配制。培養(yǎng)條件22-280C，2000-30001x 光照培養(yǎng)。5)待新梢高于2cm時，選擇直立、有4片以上舒展葉片的健壯苗，從基部切下轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基上獲得生根植株。生根培養(yǎng)基的配方1/2MS+IAA0. 3mg/L+IBA0. 3mg/L蔗糖30g/L+瓊脂6. 7g/L，以蒸餾水配制。培養(yǎng)條件22-28°C，2000-30001x光照培養(yǎng)。6)最后將培養(yǎng)成株的雜交苗定植田間，結(jié)果后進行綜合性狀評價，利用套袋結(jié)合自花結(jié)實分子標記技術(shù)篩選出具有早熟、優(yōu)質(zhì)、自花結(jié)實等特性的櫻桃新種質(zhì)。7)自交親和性分子鑒定利用CTAB法提取總DNA，瓊脂糖凝膠電泳方法檢測DNA純度，紫外分光光度法檢測
DNA含量。引物BFP200/BFP201，內(nèi)參對照引物IC-F/IC-R。PCR 反應(yīng)體系(15ii L) :10mmol/L Tris-HCl (pH8. 3) , 50mmol/LKCl,0. 2mmol/LdNTPs, 2mmol/L MgCl2,0. 2 u mol/L 引物 BFP200/BFP201,0. I u mol/L 引物 IC-F/IC-R, I. 5 UTaq DNA聚合酶，約20ng DNA模板。PCR 反應(yīng)條件94°C 3min ;94°C 45s，50°C lmin, 72 °C lmin，35 個循環(huán)；72 °C 延伸lOmin。PCR產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠(含0. 5 y g/mLEB)上進行電泳分離，電泳緩沖液為
0.5 X TBE,在5V/cm電壓下電泳40min Ih,紫外燈下成像并拍照。上述引物組合BFP200/BFP201、引物組合IC-F/IC-R、dNTPs、Taq DNA聚合酶均購自北京賽百盛公司，PCR儀為PTC-100型。8)篩選結(jié)果(表4)表4自交親和性分子鑒定結(jié)果
P^自交親和特異
品種/株系代7標記(590bp)
lapins
紅艷無HS08-206、HS08-308、HS08-309、HS08-310、1-57 有StQ4-l-2 . St04-i-22, St04-2-6、St04-2-35、St04-2-28、St04-2-58_±_I. 2 結(jié)果已進行試驗示范的優(yōu)系"1-57〃的特征為樹勢較開張，樹勢開張，成枝力較強；4月下旬開花，花期5 7天，在昌黎地區(qū)6月中下旬成熟；果實寬心形，顏色黑紫，整齊度好，著色度100% ;平均單果重6g，最大單果重6. 8g，果實甜酸，可溶性固形物含量18. 5%，汁液多，半離核；果實整齊，成熟期一致；自花授粉坐果率67. 7%，抗寒性強，與山櫻砧木嫁接親和性較好。雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實施方案對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對之作一些修改或改進，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進，均屬于本發(fā)明要求保護的范圍。
權(quán)利要求
1.一種培育自花結(jié)實櫻桃新種質(zhì)的方法，包括雜交親本配置、有性雜交和雜交后代胚培養(yǎng)的步驟，其特征在于，雜交親本中至少其一為自花結(jié)實櫻桃品種。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，包括以下步驟 1)選擇自花結(jié)實的櫻桃品種及另一具有優(yōu)良特性的早熟櫻桃品種作為親本進行雜交，對人工授粉后的花朵進行套袋； 2)取著色后的果實，去掉果肉及外種皮后將種子浸泡于70%酒精中，然后用無菌水沖洗并置于0. 1%升汞中進行消毒，消毒后用無菌水沖洗并浸泡于無菌水中，剝?nèi)?nèi)種皮，最后用84液消毒； 3)將消毒后的種子接種于基礎(chǔ)培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)； 4)待胚萌發(fā)出新梢后剪下接種于誘導分化培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)； 5)待新梢高于2cm時，選擇直立、有4片以上舒展葉片的健壯苗，從基部切下轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基上獲得生根植株； 6)最后將培養(yǎng)成株的雜交苗定植田間。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，I)中所述的親本為櫻桃品種‘Stella’和‘紅燈，。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，I)中具體步驟為采集大氣球期的‘Stella’花藥，于22-28°C放置24小時，待花粉散出后用研缽研磨，裝入瓶中備用；選大氣球期的‘紅燈’花蕾，去雄，蘸取‘Stella’花粉給其柱頭授粉，然后用硫酸紙?zhí)状囵B(yǎng)雜交后代。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，2)中具體步驟為果實著色后，去掉果肉及外種皮后將種子浸泡于70%酒精中0. 5min，然后用無菌水沖洗2次，將種子置于0. 1%升汞中消毒8min，然后用無菌水沖洗2次并浸泡于無菌水中6h，剝?nèi)?nèi)種皮，最后用84液消毒。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，3)中所述的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，其配方為MS+6-BA1. 0mg/L+IAA0. 4mg/L+ 鹿糖 30g/L+ 瓊脂 6. 7g/L,以蒸懼水配制。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，4)中所述的誘導分化培養(yǎng)基，其配方為MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L+ 鹿糖 30g/L+ 瓊脂 6. 7g/L,以蒸懼水配制。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，5)中所述的生根培養(yǎng)基，其配方為1/2MS+IAA0. 3mg/L+IBA0. 3mg/L 鹿糖 30g/L+ 瓊脂 6. 7g/L,以蒸懼水配制。
9.根據(jù)權(quán)利要求6-8任一項所述的方法，其特征在于，3)-5)中培養(yǎng)條件為22-28°C，2000-30001x光照培養(yǎng)。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種高效培育自花結(jié)實櫻桃新種質(zhì)的方法，包括雜交親本配置、有性雜交和雜交后代胚培養(yǎng)，其中，雜交親本中至少其一為自花結(jié)實櫻桃品種。本發(fā)明根據(jù)櫻桃自花結(jié)實的遺傳特性，結(jié)合傳統(tǒng)雜交與胚培養(yǎng)等方法，獲得大批量的自花結(jié)實后代，依據(jù)它們的綜合經(jīng)濟性狀、果實套袋，結(jié)合自花結(jié)實分子標記技術(shù)選育出一批具有優(yōu)質(zhì)、自花結(jié)實等特性的櫻桃新品系，具有廣闊的推廣前景。
文檔編號A01H1/02GK102742504SQ201210248348
公開日2012年10月24日 申請日期2012年7月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月17日
發(fā)明者劉國儉, 吳永杰, 吳雅琴, 常瑞豐, 李玉生, 程和禾, 趙艷華, 陳龍 申請人:河北省農(nóng)林科學院昌黎果樹研究所