專利名稱：：一種利用silac整體標(biāo)記果蠅蛋白質(zhì)組的方法及專用培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其涉及一種利用SILAC整體標(biāo)記果蠅蛋白質(zhì)組的方法及專用培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
：果蜆(Drosophilamelanogaster)是個體微小的昆蟲。自從摩爾根開始利用它研究遺傳學(xué)以來，果蠅逐漸成為遺傳學(xué)、生理學(xué)、發(fā)育和進(jìn)化生物學(xué)研究的模式生物。由于果蠅具有生長快、易飼養(yǎng)和繁殖、易維持大群體、價廉、表型豐富且絕大多數(shù)信號途徑與高等生物一致等諸多優(yōu)點，使得果蠅成為了現(xiàn)代生物學(xué)研究中的金蟲。蛋白質(zhì)是生物功能的直接執(zhí)行者。蛋白質(zhì)組學(xué)是系統(tǒng)鑒定和定量細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)，并研究其生物學(xué)功能的新興學(xué)科。隨著果蠅基因組測序的完成和蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù)的快速發(fā)展，科學(xué)家已經(jīng)可以實現(xiàn)果蠅蛋白質(zhì)組鑒定的目標(biāo)。蛋白質(zhì)組的定量比較是研究基因突變或生物學(xué)處理及其效應(yīng)關(guān)系的有效手段，也是當(dāng)前蛋白質(zhì)組學(xué)研究的重點領(lǐng)域。至今已有果蠅定量蛋白質(zhì)組學(xué)的報道。如Brunner等利用ICAT技術(shù)定量比較了果蠅的蛋白質(zhì)組。Xun等定量比較了帕金森病的果蠅模型。Krijgsveld等利用15N標(biāo)記的酵母飼喂果蠅，得到了15N標(biāo)記的果蠅，開始了果蠅體內(nèi)標(biāo)記和定量蛋白質(zhì)組學(xué)的研究。但由于15N標(biāo)記的蛋白質(zhì)組同位素分布寬，輕重標(biāo)之間容易重疊導(dǎo)致定量精度低，且輕重標(biāo)難于區(qū)分，易產(chǎn)生假陽性等技術(shù)難題，使得定量蛋白質(zhì)組學(xué)逐漸轉(zhuǎn)向基于細(xì)胞培養(yǎng)過程中的重穩(wěn)定性同位素標(biāo)記氨基酸的整體蛋白質(zhì)組標(biāo)記技術(shù)(stableisotopelabelingbyaminoacidincellculture,SILAC)這一定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究的金標(biāo)準(zhǔn)。Mann研究小組利用SILAC技術(shù)對果蠅的SL2細(xì)胞系進(jìn)行了研究，鑒定和定量了6000多個蛋白質(zhì)，并比較了mRNA和蛋白質(zhì)豐度的關(guān)聯(lián)關(guān)系。盡管SILAC剛開始只是用于培養(yǎng)的細(xì)胞，如酵母、哺乳動物細(xì)胞等，最近SILAC標(biāo)記整體小鼠的成功開創(chuàng)了整體動物重穩(wěn)定性同位素標(biāo)記的先河。Sury等利用SILAC技術(shù)標(biāo)記了整體果蠅，但因技術(shù)限制，其標(biāo)記效率只能達(dá)到96%左右，影響了定量的精度和檢測的靈敏度。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一個目的是提供一種SILAC標(biāo)記果蠅專用培養(yǎng)基。本發(fā)明提供SILAC標(biāo)記果蠅專用培養(yǎng)基，按照如下方法制備將SILAC標(biāo)記的酵母菌體涂布在果蠅培養(yǎng)基上，得到SILAC標(biāo)記果蠅專用培養(yǎng)基。上述果蠅培養(yǎng)基由低熔點瓊脂糖、葡萄糖、對羥基苯甲酸甲酯、乙酸乙酯和水組成；所述低熔點瓊脂糖、所述葡萄糖、所述對羥基苯甲酸甲酯、所述乙酸乙酯的質(zhì)量比為O.810:0·002:0·8ο上述果蠅培養(yǎng)基組分具體濃度如下所述低熔點瓊脂糖在所述果蠅培養(yǎng)基中的濃度為0.8%(質(zhì)量百分含量);所述葡萄糖在所述果蠅培養(yǎng)基中的濃度為10%(質(zhì)量百分含量)；所述對羥基苯甲酸甲酯在所述果蠅培養(yǎng)基中的濃度為O.002%(質(zhì)量百分含量);所述乙酸乙酯所述瓊脂在所述果蠅培養(yǎng)基中的濃度為O.8%(質(zhì)量百分含量)。其中果蠅培養(yǎng)基組分中對羥基苯甲酸甲酯以對羥基苯甲酸甲酯乙醇溶液的形式加入果蠅培養(yǎng)基中，對羥基苯甲酸甲酯乙醇溶液按照如下方法制備將對羥基苯甲酸甲酯溶于95%乙醇水溶液中得到的混合液，且對羥基苯甲酸甲酯在混合液中的濃度為10%(質(zhì)量百分含量)。上述專用培養(yǎng)基中，所述SILAC標(biāo)記的酵母菌體按照如下方法制備將賴氨酸營養(yǎng)缺陷型酵母菌株在含有重穩(wěn)定性同位素標(biāo)記賴氨酸的SILAC標(biāo)記酵母專用培養(yǎng)基中培養(yǎng)，收集菌體，得到SILAC標(biāo)記的酵母菌體。本發(fā)明的實施例中的賴氨酸營養(yǎng)缺陷型酵母菌株為敲除菌株BY4741ΔYBRl15C,購自SaccharomycesGenomeDeletionProject。上述含有重穩(wěn)定性同位素標(biāo)記賴氨酸的SILAC標(biāo)記酵母專用培養(yǎng)基按照如下方法制備由酵母氮源基礎(chǔ)、葡萄糖、重穩(wěn)定性同位素標(biāo)記的賴氨酸、腺苷、尿嘧啶、色氨酸、組氨酸、精氨酸、蛋氨酸、酪氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、纈氨酸、蘇氨酸、絲氨酸和水組成；所述酵母氮源基礎(chǔ)在所述SILAC標(biāo)記酵母專用培養(yǎng)基中的濃度為7g/L;所述葡萄糖在所述SILAC標(biāo)記酵母專用培養(yǎng)基中的濃度為20g/L;所述重穩(wěn)定性同位素標(biāo)記的賴氨酸L-Iysine-13C6在所述SILAC標(biāo)記酵母專用培養(yǎng)基中的濃度為164.3μM;所述腺苷、所述尿嘧啶、所述色氨酸、所述組氨酸、所述精氨酸、所述蛋氨酸在所述SILAC標(biāo)記酵母專用培養(yǎng)基中的濃度均為20mg/L;所述酪氨酸、所述亮氨酸、所述異亮氨酸在所述SILAC標(biāo)記酵母專用培養(yǎng)基中的濃度均為30mg/L;所述苯丙氨酸在所述SILAC標(biāo)記酵母專用培養(yǎng)基中的濃度為50mg/L;所述谷氨酸和所述天冬氨酸在所述SILAC標(biāo)記酵母專用培養(yǎng)基中的濃度均為100mg/L;所述纈氨酸在所述SILAC標(biāo)記酵母專用培養(yǎng)基中的濃度為150mg/L;所述蘇氨酸在所述SILAC標(biāo)記酵母專用培養(yǎng)基中的濃度為200mg/L;所述絲氨酸在所述SILAC標(biāo)記酵母專用培養(yǎng)基中的濃度為400mg/L。上述SILAC標(biāo)記酵母專用培養(yǎng)基中的重穩(wěn)定性同位素標(biāo)記的賴氨酸為L-Iysine-13C6;也可以為其它質(zhì)量數(shù)不同的重穩(wěn)定性同位素標(biāo)記賴氨酸，如L-Iysine-13C615N2等。上述SILAC標(biāo)記的酵母菌體制備方法中，所述培養(yǎng)的方式為30°C培養(yǎng)9代，共培養(yǎng)18h。上述專用培養(yǎng)基在SILAC標(biāo)記果蠅蛋白質(zhì)組中的應(yīng)用也是本發(fā)明保護(hù)的范圍。本發(fā)明的另一個目的是提供一種SILAC果蠅培養(yǎng)基標(biāo)記果蠅蛋白質(zhì)組的方法。本發(fā)明提供的方法，包括如下步驟用上述的SILAC標(biāo)記果蠅專用培養(yǎng)基培養(yǎng)果蠅的卵至發(fā)育成成蟲，得到SILAC整體標(biāo)記果蠅蛋白質(zhì)組的果蠅，實現(xiàn)SILAC整體標(biāo)記果蠅蛋白質(zhì)組。上述方法中，所述果蠅的卵為將成對的雌雄果蠅在上述的專用培養(yǎng)基上培養(yǎng)、產(chǎn)卵得到。本發(fā)明的實驗證明，本發(fā)明開發(fā)的一種用于果蠅SILAC標(biāo)記的培養(yǎng)基，可以專門用于SILAC標(biāo)記果妮蛋白質(zhì)組，并可以實現(xiàn)快速、聞效地標(biāo)記，為定量內(nèi)標(biāo)的制備和聞精度地定量蛋白質(zhì)組研究創(chuàng)造了條件。圖I為重穩(wěn)定性同位素標(biāo)記氨基酸完全標(biāo)記的酵母菌圖2為含有SILAC標(biāo)記培養(yǎng)基的果蠅培養(yǎng)裝置圖3為SILAC標(biāo)記培養(yǎng)基養(yǎng)殖的果蠅與普通果蠅的比較圖4為SILAC標(biāo)記培養(yǎng)基養(yǎng)殖果蠅標(biāo)記效率測試具體實施例方式下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。本發(fā)明可以通過以下實例更容易地理解，但本發(fā)明并不僅限于這些實例。實施例I、SILAC標(biāo)記酵母菌體的制備一、SILAC標(biāo)記酵母專用培養(yǎng)基的制備每IL的SILAC標(biāo)記酵母專用培養(yǎng)基(含有重穩(wěn)定性同位素標(biāo)記的氨基酸的SC培養(yǎng)基)的組分如下7gDifco酵母氮源基礎(chǔ)(美國BD公司，貨號239210)、20g葡萄糖(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，貨號10010592)、164.3μmol的重穩(wěn)定性同位素標(biāo)記的賴氨酸L-Iysine-13C6(美國CIL公司，貨號CNLM-291-0.25)、20mg的腺苷(美國Amresco公司，貨號0325-50G0325-50G)、20mg尿嘧啶(美國Amresco公司，貨號0847-250G0847_250G)、20mg色氨酸(美國Amresco公司，貨號E800-25G)、20mg組氨酸(美國Amresco公司，貨號E806-100G)、20mg精氨酸(美國Amresco公司，貨號:0877-100G)、20mg蛋氨酸(美國Amresco公司，貨號:E801-100G)、30mg酪氨酸(美國Amresco公司，貨號E821_25G)、30mg亮氨酸(美國Amresco公司’貨號:E811_100G)、30mg異亮氨酸(美國Amresco公司，貨號E803-25G)、50mg苯丙氨酸(美國Amresco公司，貨號0991_100G)、IOOmg谷氨酸(美國Amresco公司，貨號:0421-1KG)、IOOmg天冬氛酸(美國Amresco公司，貨號:0192_500G)、150mg纟顏氨酸(美國Amresco公司，貨號:lB1102-25G)、200mg蘇氨酸(美國Amresco公司，貨號E808-25G)、400mg絲氨酸(美國Amresco公司，貨號1B1103_25G)，用水補(bǔ)齊體積。二、SILAC標(biāo)記酵母菌體的獲得及驗證I、SILAC標(biāo)記酵母從YPD固體培養(yǎng)平板上挑取裂殖酵母賴氨酸營養(yǎng)缺陷型菌株(敲除菌株BY4741ΛYBRl15C,購自SaccharomycesGenomeDeletionProject)新鮮的菌落，轉(zhuǎn)接到Y(jié)PD液體培養(yǎng)基(每升中含有IOg細(xì)菌酵母提取物、20g細(xì)菌蛋白胨、20g葡萄糖)中，生長過夜，得到種子培養(yǎng)液；在無菌的條件下離心種子培養(yǎng)液收集酵母細(xì)胞，以無菌水洗兩次，并以無菌水重懸后取一定量接種到上述SILAC標(biāo)記酵母專用培養(yǎng)基，使得起始菌體的終濃度為O.00230D(A_)，30°C培養(yǎng)9代共18小時后，達(dá)到菌體的終濃度為I.20D(A600)，再經(jīng)IOOOOg離心5分鐘收集菌體，得到SILAC標(biāo)記酵母菌體，_80°C凍存?zhèn)溆谩?、SILAC標(biāo)記酵母菌體的驗證I)總蛋白的提取以IOmMpH8.O的Tris、0.IM的NaH2P04、8M尿素、O.02%SDS和IOmMβ-巰基乙醇作為蛋白提取液，以玻璃珠(BiospecProductsInc.，Bartlesville)震蕩破壁法裂解SILAC標(biāo)記酵母菌體。菌體-玻璃珠混合液在旋渦混合器上最高速震蕩I分鐘，在冰上冷卻I分鐘，共14次得到裂解產(chǎn)物，再將裂解產(chǎn)物在17000g的條件下離心5分鐘，得到總蛋白。用常用的Bradford法定量后用于蛋白酶消化,結(jié)果為總蛋白的濃度約為10μg/μI。2)消化取5μg總蛋白經(jīng)終濃度為5mM的DTT處理30分鐘，并以終濃度為20mM的碘乙酰胺避光25°C下處理30分鐘，再加入尿素至終濃度為8M變性30分鐘，以50MmNH4HC03稀釋尿素至4M濃度，以lOng/μI的賴氨酸蛋白酶C(Lys-C，日本W(wǎng)ako公司，貨號125-05061)37°C消化14小時，得到肽段。3)色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析將上述所得的肽段以C18柱脫鹽(3M，St.Paul,MN)，以10μI的5%乙腈和1%甲酸的色譜-質(zhì)譜聯(lián)用上樣緩沖液進(jìn)行溶解，取2μI進(jìn)行色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析，具體參照Xu,P.;Duong,D.;Peng,J.,Systematicaloptimizationofreverse-phasechromatographyforshotgunproteomics.JProteomeRes2009，8(8)，3944-50中記載的方法。以SILAC標(biāo)記前酵母菌體按照上述方法制備蛋白、檢測為對照。隨機(jī)選取ATP結(jié)合蛋白SSA2肽段NQAAMNPANTVFDAK，結(jié)果如圖I所示，可以看出，SILAC標(biāo)記酵母菌體為完全標(biāo)記酵母菌體，在9代后完全標(biāo)記，且檢測不到含有天然的輕同位素的賴氨酸的肽段。三、對照輕標(biāo)記酵母菌體和對照酵母菌體的獲得對照輕標(biāo)記培養(yǎng)基與SILAC標(biāo)記酵母專用培養(yǎng)基組分基本相同，不同的是將重穩(wěn)定性同位素標(biāo)記的賴氨酸L-Iysine-13C6替換為普通的輕同位素標(biāo)記賴氨酸(美國Amresco公司，貨號0437-100G)YPD培養(yǎng)基1%細(xì)菌酵母提取物Bacto-yeastextract(美國Amresco公司，貨號J850-1KG),2%細(xì)菌蛋白腺bacto-peptone(美國Amresco公司，貨號J636_500G),2%葡萄糖(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，貨號10010592)，2%細(xì)菌培養(yǎng)基用瓊脂粉(美國Amresco公司，貨號J637-500G)。采用上述二的I的方法，將酵母BY4741ΔYBRl15C分別在對照輕標(biāo)記培養(yǎng)基和YPD培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到對照輕標(biāo)記酵母菌體和對照YPD酵母菌體。實施例2、SILAC標(biāo)記果蠅專用培養(yǎng)基的制備I、SILAC標(biāo)記果蠅專用培養(yǎng)基制備每IL的果蠅培養(yǎng)基的組分如下質(zhì)量百分含量為O.8%的Bio-Rad低熔點瓊脂糖(Bio-RadHercules,CA)、質(zhì)量百分含量為10%的葡萄糖、質(zhì)量百分含量為O.002%對羥基苯甲酸甲酯、終濃度為O.8%乙酸乙酯和水混合，用水定容到I升。SILAC標(biāo)記果蠅專用培養(yǎng)基按照如下方法制備在上述果蠅培養(yǎng)基上涂布由實施例I的二的I得到的SILAC標(biāo)記酵母菌體(重穩(wěn)定性同位素標(biāo)記的酵母菌體)，得到標(biāo)記果蠅的SILAC標(biāo)記培養(yǎng)基。2、對照果蠅SILAC輕標(biāo)記培養(yǎng)基對照果蠅SILAC輕標(biāo)記培養(yǎng)基與SILAC標(biāo)記果蠅專用培養(yǎng)基的制備方法基本相同，不同的是涂布由實施例I的三得到的對照輕標(biāo)記酵母菌體；對照YPD果蠅培養(yǎng)基與SILAC標(biāo)記果蠅專用培養(yǎng)基的制備方法基本相同，不同的是涂布由實施例I的三得到的對照YPD酵母菌體。實施例3、SILAC標(biāo)記果妮專用培養(yǎng)基在完全標(biāo)記果妮蛋白質(zhì)組中的應(yīng)用一、SILAC標(biāo)記I、材料選用野生型果蜆wll8株(以下簡稱果蜆W118D;melanogasterwl118,購自美國印地安娜大學(xué)的果妮保藏中心(BloomingtonDrosophilaStockCenteratIndianaUniversity)進(jìn)行試驗，在標(biāo)準(zhǔn)的果蠅培養(yǎng)基、25°C和70%濕度條件下培養(yǎng)。2、標(biāo)記SILAC標(biāo)記將100只雌性果蠅wll8和100只雄性果蠅wll8混養(yǎng)在上述SILAC標(biāo)記果蠅專用培養(yǎng)基上產(chǎn)卵；再將卵隨后移種到插入折疊3次的3M濾紙的并含有上述SILAC標(biāo)記果蠅專用培養(yǎng)基的果蠅培養(yǎng)管中(圖2)，每管約100個卵，在70%濕度條件下25°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，孵化成幼蟲，經(jīng)由蛹的階段，發(fā)育成成熟的果蠅，得到SILAC標(biāo)記果蠅。對照SILAC輕標(biāo)記果蠅采用同樣的方法將成對果蠅在對照果蠅SILAC輕標(biāo)記培養(yǎng)基進(jìn)行產(chǎn)卵、培養(yǎng)得到對照SILAC輕標(biāo)記果蠅；對照YPD果蠅采用同樣的方法將成對果蠅在對照YPD果蠅培養(yǎng)基進(jìn)行產(chǎn)卵、培養(yǎng)得到對照標(biāo)記果蠅。二、檢測I、外形觀察SILAC標(biāo)記果蠅(重標(biāo)SD培養(yǎng)基)、對照SILAC輕標(biāo)記果蠅(輕標(biāo)SD培養(yǎng)基)和對照標(biāo)記果蠅(YPD培養(yǎng)基)觀察，結(jié)果如圖3所示，A為用SILAC標(biāo)記果蠅流程圖；B為分別用YPD培養(yǎng)基、輕標(biāo)SD培養(yǎng)基、重標(biāo)SD培養(yǎng)基培養(yǎng)的酵母飼養(yǎng)的果蠅的蛹的形態(tài)比較；C為分別用YPD培養(yǎng)基、輕標(biāo)SD培養(yǎng)基、重標(biāo)SD培養(yǎng)基培養(yǎng)的酵母飼養(yǎng)的果蠅的成蟲眼睛，身體及翅膀的形態(tài)比較，可以看出，用上述培養(yǎng)基和方法培養(yǎng)的標(biāo)記后果蠅，形狀和普通培養(yǎng)基培養(yǎng)的果蠅完全一致。2、質(zhì)譜檢測I)總蛋白的提取將上述一得到的SILAC標(biāo)記果蠅按照實施例I的第二部分2的O的方法提取；2)消化與實施例I的第二部分2的2)相同；3)色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析與實施例I的第二部分2的3)相同；隨機(jī)選取蛋白二硫鍵異構(gòu)酶的酶解肽段(DNEIAIIGFFK)，結(jié)果如圖4A所示，SILAC標(biāo)記果蠅為完全標(biāo)記果蠅，在I代后就能完全標(biāo)記，檢測不到含有天然的輕同位素的賴氨酸的肽段。這種重穩(wěn)定性同位素完全標(biāo)記的果蠅適于高精度定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究。3、SILAC完全標(biāo)記果蠅標(biāo)記效率的測定上述SILAC標(biāo)記果蠅的制備過程中分別在零天(卵)和幼蟲I期(Ll)、2期(L2)、3期(L3)和成蟲階段取樣，按照上述2提取總蛋白、消化和色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析，計算標(biāo)記效率(為重標(biāo)氨基酸替換輕標(biāo)氨基酸的比例)。對每個樣品的定量結(jié)果進(jìn)行輕、重標(biāo)定量值的對數(shù)的分布分析。實驗重復(fù)三次，結(jié)果取平均值。結(jié)果如圖4B和表I所示，顯示在LI、L2、L3的標(biāo)記效率分別為80%、95%、和96%，在成蟲樣品中基本檢測不到輕標(biāo)的肽段，系統(tǒng)檢測發(fā)現(xiàn)其標(biāo)記效率在98%以上。表明經(jīng)過一代養(yǎng)殖，可以實現(xiàn)果蠅的完全標(biāo)記。這種重穩(wěn)定性同位素完全標(biāo)記的果蠅適于高精度定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究。表I果蠅蛋白質(zhì)組的標(biāo)記率權(quán)利要求1.一種SILAC標(biāo)記果蠅專用培養(yǎng)基，按照如下方法制備將SILAC標(biāo)記的酵母菌體涂布在果蠅培養(yǎng)基上，得到SILAC標(biāo)記果蠅專用培養(yǎng)基。2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的專用培養(yǎng)基，其特征在于所述果蠅培養(yǎng)基由低熔點瓊脂糖、葡萄糖、對羥基苯甲酸甲酯、乙酸乙酯和水組成；所述低熔點瓊脂糖、所述葡萄糖、所述對羥基苯甲酸甲酯、所述乙酸乙酯的質(zhì)量比為0.8:100.002:0.8。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的專用培養(yǎng)基，其特征在于；所述果蠅培養(yǎng)基中，所述低熔點瓊脂糖在所述果蠅培養(yǎng)基中的濃度為0.8%(質(zhì)量百分含量)；所述葡萄糖在所述果蠅培養(yǎng)基中的濃度為10%(質(zhì)量百分含量)；所述對羥基苯甲酸甲酯在所述果蠅培養(yǎng)基中的濃度為0.002%(質(zhì)量百分含量);所述乙酸乙酯所述瓊脂在所述果蠅培養(yǎng)基中的濃度為0.8%(質(zhì)量百分含量)。4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一所述的專用培養(yǎng)基，其特征在于所述SILAC標(biāo)記的酵母菌體按照如下方法制備將賴氨酸營養(yǎng)缺陷型酵母菌株在含有重穩(wěn)定性同位素標(biāo)記賴氨酸的SILAC標(biāo)記酵母專用培養(yǎng)基中培養(yǎng)，收集菌體，得到SILAC標(biāo)記的酵母菌體。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的專用培養(yǎng)基，其特征在于所述重穩(wěn)定性同位素標(biāo)記賴氨酸為L-Iysine-13C6;所述培養(yǎng)的方式為30°C培養(yǎng)9代，共培養(yǎng)18h。6.權(quán)利要求1-5中任一所述的專用培養(yǎng)基在SILAC標(biāo)記果蠅蛋白質(zhì)組中的應(yīng)用。7.一種SILAC標(biāo)記果蠅蛋白質(zhì)組的方法，包括如下步驟在權(quán)利要求1-5中任一所述的專用培養(yǎng)基上培養(yǎng)果蠅的卵至發(fā)育成成蟲，得到SILAC整體標(biāo)記果蠅蛋白質(zhì)組的果蠅，實現(xiàn)SILAC整體標(biāo)記果蠅蛋白質(zhì)組。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述果蠅的卵為將成對的雌雄果蠅在權(quán)利要求1-5中任一所述的專用培養(yǎng)基上培養(yǎng)、產(chǎn)卵得到。全文摘要本發(fā)明公開了一種利用SILAC標(biāo)記果蠅蛋白質(zhì)組的方法及專用培養(yǎng)基。本發(fā)明提供的SILAC標(biāo)記果蠅專用培養(yǎng)基，按照如下方法制備將SILAC標(biāo)記的酵母菌體涂布在果蠅培養(yǎng)基上，得到SILAC標(biāo)記果蠅專用培養(yǎng)基。本發(fā)明的實驗證明，本發(fā)明開發(fā)的一種用于果蠅SILAC標(biāo)記的培養(yǎng)基，可以專門用于SILAC標(biāo)記果蠅蛋白質(zhì)組，可以實現(xiàn)快速、高效地標(biāo)記，為定量內(nèi)標(biāo)的制備和高精度地定量蛋白質(zhì)組研究創(chuàng)造了條件。文檔編號A01K67/033GK102805052SQ20121027005公開日2012年12月5日申請日期2012年7月31日優(yōu)先權(quán)日2012年7月31日發(fā)明者徐平,楊大福,常蕾申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所