專利名稱：川西云杉體細胞胚胎發(fā)生與植株再生方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及林業(yè)細胞工程種苗繁殖領(lǐng)域，具體地，涉及一種川西云杉體細胞胚胎發(fā)生與植株再生方法。
背景技術(shù)：
云杉屬(Picea dietr)植物全世界約有40種，主要分布在北纟韋50° 60°的寒溫帶或凍原地帶，少數(shù)分布在溫帶或亞熱帶的濕冷高山上，即多數(shù)種呈環(huán)極式分布，而在我國和美國可分布到北緯30°附近，是低熱量地區(qū)的重要建群樹種。云杉屬樹種單位面積年生長量高，木材品質(zhì)好，用途廣，成為西歐、北歐、波羅的海沿岸國家、俄羅斯和加拿大的重要工業(yè)用材樹種。我國云杉屬有17種和9個變種，是世界上該屬種類最多的地區(qū)，主要分布在東北、華北、西北、西南等高山地帶，是我國高山區(qū)的重 要造林樹種和最佳紙漿材樹種。川西云杉(Picea balfouriana)又名西康云杉、康藏云杉、包氏云杉。川西云杉林是四川的主要森林類型，為青藏高原東部地區(qū)的特有森林植物群落，其不僅分布遼闊，且資源豐富，是重要的用材林樹種。同時，它還是川西高原地區(qū)組成森林草原過渡地帶的連緣森林，對防止草原南移、森林線下降及涵養(yǎng)水源、保持水土和長江源頭地區(qū)的防護都有極為重要的作用。體細胞胚胎發(fā)生是細胞工程中植株再生的重要途徑之一，可作為遺傳轉(zhuǎn)化的受體系統(tǒng)，同時也是為研究全能性細胞分化及其形態(tài)而建成的理想試驗體系。在應(yīng)用上，體細胞胚胎發(fā)生是一種有效的大規(guī)模無性繁殖方法。川西云杉天然林生長較慢，種子成熟率很低，造成繁殖和品種選育的很大困難，且苗期和幼林期生長慢，嚴重影響著遺傳改良進程，特別是遺傳評價進程。而通過體細胞胚胎發(fā)生可以大大縮短苗期，因此川西云杉體細胞胚胎發(fā)生技術(shù)會成為能否加速育種的關(guān)鍵之一。若能開發(fā)出一種川西云杉體細胞胚胎發(fā)生與植株再生方法，克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，是非常有必要的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種川西云杉體細胞胚胎發(fā)生與植株再生方法。本發(fā)明提供的一種川西云杉體細胞胚胎發(fā)生與植株再生方法，包括采集川西云杉自由授粉無性系球果，分離出未成熟合子胚進行體胚發(fā)生培養(yǎng)；所述體胚發(fā)生培養(yǎng)包括四個階段胚性愈傷組織誘導(dǎo)階段、胚性愈傷組織增殖階段、體細胞胚成熟階段和體細胞胚萌發(fā)階段。其中，分離出未成熟合子胚進行體胚發(fā)生培養(yǎng)是在無菌條件下進行的。未成熟合子胚是指球形期至子葉期的未成熟合子胚。其中，所述胚性愈傷組織誘導(dǎo)階段和胚性愈傷組織增殖階段均采用1/2LM基本培養(yǎng)基，其附加激素均分別為0. 55^2. 2mg/L的2，4-氯化苯氧乙酸(2, 4-dichlorophenoxyacetic acid,簡稱 2，4_D),0 I. lmg/L 的 6_ 節(jié)基氨基嘌呤(benzylaminmopurine,簡稱 6-BA)和 0 0. 44mg/L 的 6-糖基氨基嘌呤(6-Furfurylaminopurine,簡稱 KT)。進一步地,所述2，4-D均優(yōu)選2. 2mg/Lo所述6-BA在誘導(dǎo)階段優(yōu)選0. 55^1. Img/L，更優(yōu)選I. lmg/L ；6-BA在增殖階段優(yōu)選0. 8^1. lmg/L,更優(yōu)選0. 8mg/L。所述KT在誘導(dǎo)階段優(yōu)選(T22mg/L，更優(yōu)選0. 22mg/L ；KT在增殖階段優(yōu)選(TO. 44mg/L,更優(yōu)選Omg/L。其中，所述胚性愈傷組織誘導(dǎo)階段和胚性愈傷組織增殖階段1/2LM基本培養(yǎng)基中附加激素中，2，4-D的用量為6-BA的2倍以上，優(yōu)選2倍。其中，所述胚性愈傷組織誘導(dǎo)階段和增殖階段的培養(yǎng)基中，均還包括濃度為1%的蔗糖，500mg/L的谷氨酰胺，lg/L的酶解酪蛋白和0. 2%的植物凝膠。本發(fā)明所述方法，在胚性愈傷組織增殖階段之后(體細胞胚成熟階段之前)，還包括胚性愈傷組織的狀態(tài)調(diào)整階段，為采用1/2LM基本培養(yǎng)基，不添加任何激素進行培養(yǎng)7 天。其目的和作用是使胚性愈傷組織由增殖狀態(tài)向分化狀態(tài)轉(zhuǎn)換。其中，所述體細胞胚成熟階段采用1/2LM基本培養(yǎng)基，其附加12 20mg/L的丙烯基乙基巴比妥酸(脫落酸，abscisic acid，簡稱ABA)和(Tl%的活性炭。所述ABA優(yōu)選為16 20mg/L，更優(yōu)選16mg/L?；钚蕴績?yōu)選為0. 4 0. 8%，更優(yōu)選0. 4%。其中，所述體細胞胚成熟階段的培養(yǎng)基中，還包括0. 6%的植物凝膠，6%的蔗糖，500mg/L的谷氨酰胺和lg/L的水解酪蛋白。其中，所述胚性愈傷組織誘導(dǎo)階段、胚性愈傷組織增殖階段和體細胞胚成熟階段的培養(yǎng)條件均為將培養(yǎng)基的PH值調(diào)至5. 8，121 °C、壓力lOlkp，高溫、高壓滅菌20分鐘，培養(yǎng)溫度為24±1°C，黑暗條件培養(yǎng)。本發(fā)明所述方法，胚性愈傷組織誘導(dǎo)階段和增殖階段，以及體細胞胚的萌發(fā)階段使用的激素濃度，能夠起到很好的協(xié)同作用，最大程度地發(fā)揮其作用，對川西云杉胚性愈傷組織的誘導(dǎo)和增殖起到較優(yōu)的效果，有利于維持胚性愈傷組織的胚性能力。其中，所述體細胞胚萌發(fā)階段采用1/4LM基本培養(yǎng)基，其附加(T0. 25%的活性炭?；钚蕴績?yōu)選0. 125 0. 25%，更優(yōu)選0. 25%。其中，所述體細胞胚萌發(fā)階段的培養(yǎng)基中，還包括谷氨酰胺500mg/L，2%蔗糖、lg/L水解酪蛋白和0. 4%的植物凝膠。其中，所述體細胞胚的萌發(fā)階段的培養(yǎng)條件均為在24土 1°C，80 UEnT2s-1下光照培養(yǎng)16h。本發(fā)明所述的方法，在對未成熟合子胚進行體胚發(fā)生培養(yǎng)前，還包括對川西云杉自由授粉無性系球果進行消毒，然后在無菌的環(huán)境下取出未成熟合子胚。其中，所述消毒方式為利用75、5%的乙醇對川西云杉自由授粉無性系球果消毒15^20min,再用無菌水沖洗3 4次。優(yōu)選利用95%的乙醇消毒對川西云杉自由授粉無性系球果15min,再用無菌水沖洗3次。進一步地，在消毒前還可以對川西云杉自由授粉無性系球果于4°C條件下冷藏(T30天。優(yōu)選4°C條件下冷藏7天。經(jīng)過冷藏和消毒處理的球果，會使得誘導(dǎo)率增加，污染率低于0. 1%。本發(fā)明中出現(xiàn)的濃度百分數(shù)“％”均指質(zhì)量-體積濃度g/mL (IOOmL溶液里需要添加的克數(shù))。本發(fā)明采用未成熟合子胚，尤其是利用球形期至子葉期的未成熟合子胚進行體胚發(fā)生培養(yǎng)，能夠成功誘導(dǎo)出川西云杉胚性愈傷組織，優(yōu)勢是幼嫩的未成熟合子胚可以有效地提高誘導(dǎo)率。本發(fā)明提供的方法，是專門針對川西云杉天然結(jié)實率低，種子成熟率很低，苗期和幼林期生長慢，種苗繁殖技術(shù)無法滿足大面積植樹造林需要的現(xiàn)狀，尋找一種川西云杉優(yōu)良無性系的體細胞胚胎發(fā)生與植株再生的技術(shù)。和現(xiàn)有技術(shù)相比，該方法大大縮短了苗期，天然結(jié)實率、種子成熟率和分化率以及萌發(fā)率均有提高。為在林業(yè)生產(chǎn)中大規(guī)模推廣種植川西云杉提供了一種周期短，繁殖率高、生產(chǎn)步驟銜接緊密、成本低廉的育苗方法，適用于川西云杉細胞工程快速繁殖技術(shù)體系，滿足市場對川西云杉的需要。


圖I為川西云杉的未成熟合子胚。 圖2為川西云杉的胚性愈傷組織。圖3為川西云杉的成熟體細胞胚。圖4為川西云杉的體細胞胚萌發(fā)的植株。
具體實施例方式以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。本發(fā)明所用植物凝膠Gelrite購自美國Sigma公司。它是一種冷凝膠，跟瓊脂的作用相同，但效果要好很多，培養(yǎng)基凝的快且是透明的。所用其他原料和試劑均為從市場上購得的常規(guī)原料和試劑。LM 液體培養(yǎng)基的成分為:1. 65g/L NH4NO3,1. 9g/L KNO3,1. 85g/L MgS04 7H20，0. 34g/L KH2PO4,0. 2g/L Myo-Inositol (肌醇)，2g/L N-Z-Amine A (酶解酪蛋白)，0. 022g/LCaCl2 *2H20,0. 028g/L,FeSO4 *7H20,0. 038g/L EDTA *2H20 (乙二胺四乙酸)，0. 0304g/LH3B03,0. 0210g/L MnSO4 .H20,0. 043g/L ZnSO4 *7H20,0. OOlg/LNiacinamide (尼克酰胺)，0. 0002g/L Pyroxidone-HCl(Vitamin B6),0. 0002g/L Thiamine-HCl(Vitamin BI),0. 0042g/L KI,0. 00126g/LNa2Mo04 27H20，0. 0005g/L CuSO4 5H20，0. 00013g/L CoCl2 6H20，加水至 1L。本發(fā)明所用基本培養(yǎng)基就是在上述成分的液體培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加各相應(yīng)培養(yǎng)階段所需的植物凝膠的半固體培養(yǎng)基。實施例I分離出未成熟合子胚采集春季自由授粉，8月底獲得的川西云杉自由授粉無性系球果，將采下的球果于4°C條件下低溫冷藏7天。用95%的乙醇處理球果15min，無菌水沖洗3次。無菌狀態(tài)下，取出種子并剝?nèi)シN皮，將未成熟合子胚(如圖I所示)進行下一階段的胚性愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)。實施例2胚性愈傷組織誘導(dǎo)階段將實施例I得到的未成熟合子胚，進行胚性愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)。采用1/2LM基本培養(yǎng)基，附加激素濃度分別為2，4-D 2. 2mg/L，6_BAl. lmg/L和KTO. 22mg/L。并且，在培養(yǎng)基中添加lg/L的天然復(fù)合物酶解酪蛋白，1%的蔗糖，500mg/L的谷氨酰胺(過濾滅菌)和0. 2%的植物凝膠(GeIrite，Sigma)。滅菌前將pH調(diào)至5. 7，121 °C、壓力IOlkp高溫、高壓滅菌20分鐘，培養(yǎng)溫度24± 1°C，黑暗條件培養(yǎng)，至誘導(dǎo)出胚性愈傷組織。誘導(dǎo)率為61. 55%。實施例3胚性愈傷組織誘導(dǎo)階段將實施例I得到的未成熟合子胚，進行胚性愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)。采用1/2LM基本培養(yǎng)基，附加激素濃度分別為2，4-D 0. 55mg/L,6-BA 0. 8mg/L，并且，在培養(yǎng)基中添加lg/L的天然復(fù)合物酶解酪蛋白，1%的蔗糖，500mg/L的谷氨酰胺(過濾滅菌)和0.2%的植物凝膠(Gelrite，Sigma)。滅菌前將pH調(diào)至5. 7，121°C、壓力IOlkp高溫、高壓滅菌20分鐘，培養(yǎng)溫度24± 1°C，黑暗條件培養(yǎng)，至誘導(dǎo)出胚性愈傷組織。誘導(dǎo)率為60. 56%o實施例4胚性愈傷組織誘導(dǎo)階段將實施例I得到的未成熟合子胚，進行胚性愈傷組織誘 導(dǎo)培養(yǎng)。采用1/2LM基本培養(yǎng)基，附加激素濃度分別為2，4-D 2. 2mg/L和6-BA I. lmg/L(不添加KT)。并且，在培養(yǎng)基中添加lg/L的天然復(fù)合物酶解酪蛋白，1%的蔗糖，500mg/L的谷氨酰胺(過濾滅菌)和0. 2%的植物凝膠(Gelrite，Sigma)。滅菌前將pH調(diào)至5. 7，121°C、壓力lOlkp，高溫、高壓滅菌20分鐘，培養(yǎng)溫度24±1°C，黑暗條件培養(yǎng)，至誘導(dǎo)出胚性愈傷組織。誘導(dǎo)率為59. 67%。未成熟的合子胚接入上述誘導(dǎo)培養(yǎng)基后約2 3天開始啟動，長出的愈傷組織淡黃、半透明。25天左右，有的形成綠色瘤狀堅硬的愈傷組織，繼代(繼代方式和本階段的條件完全一致)后褐化，而有的則長出半透明、松散的胚性愈傷組織。這種愈傷組織在顯微鏡下觀察，多為細胞核大、細胞質(zhì)濃的細胞。實施例5胚性愈傷組織的增殖階段將實施例2 4誘導(dǎo)出的胚性愈傷組織繼續(xù)進行增殖培養(yǎng)。采用1/2LM基本培養(yǎng)基，附加激素濃度分別為2，4-D 2. 2mg/L和6-BA I. lmg/L (不添加KT)。并且，在培養(yǎng)基中添加lg/L的天然復(fù)合物酶解酪蛋白，1%的蔗糖，500mg/L的谷氨酰胺(過濾滅菌)和0. 2%的植物凝膠(Gelrite，Sigma)。且培養(yǎng)條件均與誘導(dǎo)階段相同，得到的胚性愈傷組織如圖2所示。根據(jù)本實施例得到的胚性愈傷組織的生長量為起始接種量的2. 5倍。胚性愈傷組織的狀態(tài)調(diào)整，培養(yǎng)基仍采用1/2LM基本培養(yǎng)基，不添加激素培養(yǎng)一周，培養(yǎng)基中的其它成分以及培養(yǎng)條件均不變，目的是使胚性愈傷組織由增殖狀態(tài)向分化轉(zhuǎn)換，可以在節(jié)省人力物力的基礎(chǔ)上縮短培養(yǎng)周期。實施例6胚性愈傷組織的增殖階段其他條件同實施例5。所不同的是附加激素濃度分別為2，4-D 2. 2mg/L,6-BA I. lmg/L和KT 0. 22mg/L，根據(jù)本實施例得到的胚性愈傷組織的生長量為起始接種量的2倍。實施例7胚性愈傷組織的增殖階段其他條件同實施例5。所不同的是附加激素濃度分別為2，4-D 2. 2mg/L, 6-BAO. 55mg/L和KT 0. 44mg/L根據(jù)本實施例得到的胚性愈傷組織的生長量為起始接種量的I. 5倍。
實施例8體細胞胚的成熟階段將實施例5 7得到的胚性愈傷組織，進行體細胞胚成熟培養(yǎng)。采用1/2LM基本培養(yǎng)基，附加的激素和活性炭分別為16mg/L的ABA，0. 4%的活性炭。此時培養(yǎng)基中的蔗糖濃度為6%，植物凝膠(Gelrite，Sigma)為0. 6%，水解酪蛋白替代誘導(dǎo)同增殖階段的酶解酪蛋白，為lg/L，谷氨酰胺的量為500mg/L，其中ABA和谷氨酰胺均為過濾滅菌。且培養(yǎng)條件均與誘導(dǎo)階段和增殖階段相同。平均每IOOmg愈傷組織在這種分化培養(yǎng)基上可以形成143個成熟的子葉胚。得到的成熟體細胞胚如圖3所示。
實施例9體細胞胚的成熟階段將實施例5 7得到的胚性愈傷組織，進行體細胞胚成熟培養(yǎng)。采用1/2LM基本培養(yǎng)基，附加的激素和活性炭分別為16mg/L的ABA，0. 6%的活性炭。此 時培養(yǎng)基中的蔗糖濃度為6%，植物凝膠(Gelrite，Sigma)為0. 6%，水解酪蛋白替代誘導(dǎo)同增殖階段的酶解酪蛋白，為lg/L，谷氨酰胺的量為500mg/L，其中ABA和谷氨酰胺均為過濾滅菌。且培養(yǎng)條件均與誘導(dǎo)階段和增殖階段相同。平均每IOOmg愈傷組織在這種分化培養(yǎng)基上可以形成129個成熟的子葉胚。實施例10體細胞胚的成熟階段將實施例5 7得到的胚性愈傷組織，進行體細胞胚成熟培養(yǎng)。采用1/2LM基本培養(yǎng)基，附加的激素和活性炭分別為20mg/L的ABA，0. 8%的活性炭。此時培養(yǎng)基中的蔗糖濃度為6%，植物凝膠(Gelrite，Sigma)為0. 6%，水解酪蛋白替代誘導(dǎo)同增殖階段的酶解酪蛋白，為lg/L，谷氨酰胺的量為500mg/L，其中ABA和谷氨酰胺均為過濾滅菌。且培養(yǎng)條件均與誘導(dǎo)階段和增殖階段相同。平均每IOOmg愈傷組織在這種分化培養(yǎng)基上可以形成106個成熟的子葉胚。轉(zhuǎn)入上述成熟階段培養(yǎng)基以后胚性愈傷組織開始分化，經(jīng)過兩個月的發(fā)育會依次經(jīng)過球形胚、心形胚、魚雷胚和子葉胚。在本發(fā)明改良培養(yǎng)基上，成功的調(diào)整了胚性細胞的生長狀況，使得體細胞胚胎發(fā)生中最難的關(guān)鍵技術(shù)問題-畸形胚和不同步化的發(fā)生得到有效控制，且分化率高，平均每IOOmg愈傷組織可以形成106 143個成熟的子葉胚。在添加活性炭的成熟階段培養(yǎng)基中形成的體細胞胚在形態(tài)上更接近其合子胚(由于體細胞胚胎發(fā)生具有兩極性的特點，所以，成熟的子葉胚可以同時形成子葉和根，成為完整的幼苗，繼而很好的解決了針葉樹體細胞胚胎發(fā)生中生根難的問題)且分化時間要縮短一半，僅需40 50天。實施例11體細胞胚的萌發(fā)階段將實施例8 10得到的體細胞胚繼續(xù)進行萌發(fā)。使用1/4LM基本培養(yǎng)基，添加活性炭0. 25%，谷氨酰胺500mg/L，2%蔗糖、lg/L水解酪蛋白和0. 4%的植物凝膠(Gelrite, Sigma)。溫度為 ZdilUOiiEnriV1 下光照培養(yǎng) 16h。由于體細胞胚胎發(fā)生具有兩極性的特點，所以，成熟的子葉胚可以同時形成子葉和根，成為完整的幼苗，繼而很好的解決了針葉樹體細胞胚胎發(fā)生中生根難的問題。根據(jù)本實施例得到植株(如圖4所示)的萌發(fā)率為22. 52%。實施例12體細胞胚的萌發(fā)階段其他條件同實施例11，活性炭濃度分別為0、0. 1%、0. 125%、0. 2和0. 25 (同實施例11)，體細胞胚的萌發(fā)率如下表所示
權(quán)利要求
1.一種川西云杉體細胞胚胎發(fā)生與植株再生方法，其特征在于，包括采集川西云杉自由授粉無性系球果，分離出未成熟合子胚進行體胚發(fā)生培養(yǎng)；所述體胚發(fā)生培養(yǎng)包括四個階段胚性愈傷組織誘導(dǎo)階段、胚性愈傷組織增殖階段、體細胞胚成熟階段和體細胞胚萌發(fā)階段。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述胚性愈傷組織誘導(dǎo)階段，采用1/2LM基本培養(yǎng)基，其附加激素為0. 55 2. 2mg/L的2，4-氯化苯氧乙酸,(Tl. lmg/L的6-節(jié)基氨基嘌呤和(TO. 44mg/L的6-糖基氨基嘌呤；2，4-氯化苯氧乙酸優(yōu)選2. 2mg/L，6_芐基氨基嘌呤優(yōu)選0. 55^1. lmg/L, 6-糖基氨基嘌呤優(yōu)選(T22mg/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的方法，其特征在于，所述胚性愈傷組織增殖階段，采用1/2LM基本培養(yǎng)基，其附加激素為0. 55^2. 211^/1的2，4-氯化苯氧乙酸，0 1. lmg/L的6-芐基氨基嘌呤和(TO. 44mg/L的6-糖基氨基嘌呤；2，4-氯化苯氧乙酸優(yōu)選2. 2mg/L ;6_芐基氨基嘌呤優(yōu)選0. 8 I. lmg/L, 6-糖基氨基嘌呤優(yōu)選(TO. 44mg/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述胚性愈傷組織誘導(dǎo)階段和增殖階段的培養(yǎng)基中，均還包括1%的蔗糖，500mg/L的谷氨酰胺，lg/L的酶解酪蛋白和0. 2%的植物凝膠。
5.根據(jù)權(quán)利要求f4任意一項所述的方法，其特征在于，在胚性愈傷組織增殖階段之后，還包括胚性愈傷組織的狀態(tài)調(diào)整階段，為采用1/2LM基本培養(yǎng)基，不添加任何激素進行培養(yǎng)7天。
6.根據(jù)權(quán)利要求r5任意一項所述的方法，其特征在于，所述體細胞胚成熟階段采用1/2LM基本培養(yǎng)基，其附加12 20mg/L的丙烯基乙基巴比妥酸和(Tl%的活性炭優(yōu)選16 20mg/L，活性炭優(yōu)選0. 4 0. 8%。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述體細胞胚成熟階段的培養(yǎng)基中，還包括0. 6%的植物凝膠，6%的蔗糖，500mg/L的谷氨酰胺和lg/L的水解酪蛋白。
8.根據(jù)權(quán)利要求廣7任意一項所述的方法，其特征在于，所述體細胞胚萌發(fā)階段，采用1/4LM基本培養(yǎng)基，其附加0 0. 25%的活性炭，優(yōu)選0. 125 0. 25%。
9.根據(jù)權(quán)利要求8任意一項所述的方法，其特征在于，所述體細胞胚萌發(fā)階段的培養(yǎng)基中，還包括谷氨酰胺500mg/L，2%蔗糖、lg/L水解酪蛋白和0. 4%植物凝膠。
10.根據(jù)權(quán)利要求I、任意一項所述的方法，其特征在于，該方法在對未成熟合子胚進行體胚發(fā)生培養(yǎng)前，還包括對球果進行消毒，然后在無菌的環(huán)境下取出未成熟合子胚；所述消毒方式為利用75、5%的乙醇對球果消毒15 20min，再用無菌水沖洗3 4次；優(yōu)選利用95%的乙醇消毒對球果15min,再用無菌水沖洗3次。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種川西云杉體細胞胚胎發(fā)生與植株再生方法，包括采集川西云杉自由授粉無性系球果，分離出未成熟合子胚進行體胚發(fā)生培養(yǎng)；所述體胚發(fā)生培養(yǎng)包括四個階段胚性愈傷組織誘導(dǎo)階段、胚性愈傷組織增殖階段、體細胞胚成熟階段和體細胞胚萌發(fā)階段。和現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明方法大大縮短了苗期，天然結(jié)實率、種子成熟率和分化率以及萌發(fā)率均有提高。為在林業(yè)生產(chǎn)中大規(guī)模推廣種植川西云杉提供了一種周期短，繁殖率高、生產(chǎn)步驟銜接緊密、成本低廉的育苗方法，適用于川西云杉細胞工程快速繁殖技術(shù)體系，滿足市場對川西云杉的需要。
文檔編號A01H4/00GK102771393SQ20121027433
公開日2012年11月14日 申請日期2012年8月2日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月2日
發(fā)明者王軍輝 申請人:中國林業(yè)科學(xué)研究院林業(yè)研究所