專利名稱：刺五加的組織培養(yǎng)繁育方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥用植物的繁育方法，特別是一種刺五加的組織培養(yǎng)繁育方法。
背景技術(shù)：
刺五加為五加科五加屬灌木，根、莖、葉、皮、果實均可人藥。刺五加具有調(diào)節(jié)機體紊亂，補中、益精、強意志、祛風(fēng)濕、壯筋骨、活血去瘀、健胃利尿等功能。刺五加中的重要成分刺五加甙為良好的強壯劑，可增加肌體的防御功能，有抗疲勞和防止記憶衰退等功效。以刺五加為原料的藥品和食品深受國內(nèi)外的歡迎，但近二十年來掠奪式的采挖，使野生刺五加資源遭到嚴(yán)重破壞，天然資源趨于枯竭。而常規(guī)的刺五加栽培手段存在著種子處理難度大、發(fā)芽率低，扦插生根率低，培育周期長的弊端
發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有刺五加人工栽培技術(shù)中的不足，本發(fā)明提供一種刺五加組織培養(yǎng)的繁育方法，不僅能夠提高刺五加的出苗率，而且能夠縮短培育周期。本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是刺五加的組織培養(yǎng)繁育方法，其特征是該方法包括如下步驟
(O培養(yǎng)基制備選擇MS培養(yǎng)基作為基本培養(yǎng)基，6-芐氨基嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)、玉米素(ZT)和3-吲哚乙酸(IAA)作為調(diào)控激素分別制備三種培養(yǎng)基
初分化培養(yǎng)基 A MS+6-BA0. 8 I. 2mg/L+NAA0. Γθ. 5mg/L,
繼代分化培養(yǎng)基 B MS+6-BA0. 5 I. 5mg/L+ ZTO. I lmg/L，
生根培養(yǎng)基 C MS +NAA0. Γ . Omg/L+IAAO. Γθ. 5mg/L,
培養(yǎng)基A和B中均附加2(T35g/L蔗糖和r5g/L瓊脂，培養(yǎng)基C附加15 25g/L蔗糖和l 2g/L瓊脂，用I 2mol/L的NaOH和HCL調(diào)節(jié)pH值至5. 8 6. O,并將培養(yǎng)基A、B和C在高壓蒸汽滅菌鍋O. Γθ. 15MPa, 120 125°C滅菌15 20min ；
(2)外植體的消毒選用刺五加剛萌發(fā)的嫩芽作為外植體，用自來水沖洗3(T60min，在無菌操作臺上用70%酒精消毒2 4min，用無菌水沖洗3 4次，在解剖鏡下去掉芽的鱗片，再用濃度為O. 059Γ0. 1%的升汞消毒7 15min，最后用無菌水沖洗4 6次；
(3)外植體的誘導(dǎo)將步驟(2)消毒的刺五加外植體接種在初分化培養(yǎng)基A上，接種瓶內(nèi)每瓶放f 3個外植體，置于培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)3(Γ60天，外植體長出不定芽；
(4)繼代芽的分化將步驟(3)中初分化完成的外植體轉(zhuǎn)接入繼代分化培養(yǎng)基B中，置于培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)2(Γ40天，外植體分化出叢芽；
(5)繼代芽的生根將高度為I.5^2. Ocm左右、健壯的繼代單芽轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基C中，進行生根培養(yǎng)，3(Γ40天后根長達2 4cm，生根率達90%以上，具備獨立從土壤、基質(zhì)中吸收營養(yǎng)元素的能力；
(6)煉苗及移栽把接種瓶瓶口打開在培養(yǎng)室內(nèi)散射光下煉苗5 7天，光照周期為16h/d，光照強度為200(T2400Lux，培養(yǎng)室溫度為23 25°C ;之后取出瓶內(nèi)的組培苗，用自來水洗凈根部的瓊脂，再用蒸餾水稀釋成50(Γ600倍的多菌靈浸泡組培苗根部2(T30min，移栽至以蛭石、珍珠巖和腐殖土為混合基質(zhì)的營養(yǎng)杯中，將營養(yǎng)杯放到人工氣候箱中，光照周期為16h/d，光照強度為200(T2400Lux，白天23 25°C，晚上15 18°C，保持濕度40 60%，隔兩周澆一次1/15 1/10MS母液，30 40天后移栽到大棚中，成活率達95%以上。步驟(3) 步驟(5)中，培養(yǎng)條件為光照周期16h/d，光照強度200(T2400Lux，培養(yǎng)溫度23 25°C。步驟(6)中，所述混合基質(zhì)中蛭石珍珠巖腐殖土的質(zhì)量比為2:1:3，并且該混合基質(zhì)需在壓力O. Γ0. 15MPa、溫度120 125°C條件下滅菌15 20min。1/15 1/10MS培養(yǎng)基母液的成分與MS培養(yǎng)基相同，將MS培養(yǎng)基母液稀釋10 15
倍。 本發(fā)明的有益效果本發(fā)明利用組織培養(yǎng)技術(shù)在短時間內(nèi)既能大規(guī)模擴大植株的繁殖量，并且使親本的優(yōu)良性狀得以保存；利用組織培養(yǎng)進行刺五加的無性快速繁殖，取材少，培養(yǎng)經(jīng)濟；可人為控制培養(yǎng)條件，不受自然條件影響，跳出了植物生長環(huán)境、地域以及季節(jié)時間的限制；生長周期短，繁殖率高，能在較短的時間內(nèi)繁育出大量的刺五加組培苗，縮短了刺五加的生長周期。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實例對本發(fā)明作進一步說明。刺五加的組織培養(yǎng)繁育方法，包括以下步驟
(O培養(yǎng)基制備選擇MS培養(yǎng)基作為基本培養(yǎng)基，6-芐氨基嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)、玉米素(ZT)和3-吲哚乙酸(IAA)作為調(diào)控激素分別制備三種培養(yǎng)基初分化培養(yǎng)基 A MS+6-BAl. Omg/L+NAAO. lmg/L,繼代分化培養(yǎng)基 B MS+6-BA0. 5mg/L+ ZTO. 2mg/L,生根培養(yǎng)基C MS +NAAO. 5mg/L+IAA0. lmg/L ;培養(yǎng)基A和B中均附加30g/L蔗糖和4g/L瓊脂，培養(yǎng)基C附加15g/L蔗糖和2g/L瓊脂，用lmol/L的NaOH和HCL調(diào)節(jié)pH值至6. 0，并將培養(yǎng)基A、B和C在高壓蒸汽滅菌鍋0. 15MPa, 125°C滅菌20min。(2)外植體的消毒選用刺五加剛萌發(fā)的嫩芽作為外植體，用自來水沖洗30min,在無菌操作臺上用70%酒精消毒3min，用無菌水沖洗4次，在解剖鏡下去掉芽的鱗片，再用濃度為0. 05%的升萊消毒15min,最后用無菌水沖洗6次。(3)外植體的誘導(dǎo)將步驟(2)消毒的刺五加外植體接種在初分化培養(yǎng)基A上，接種瓶內(nèi)每瓶放I個外植體，置于培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)40天，外植體長出不定芽；培養(yǎng)條件為光照周期16h/d，光照強度2000Lux，培養(yǎng)室溫度23 25°C。(4)繼代芽的分化將步驟(3)中初分化完成的外植體轉(zhuǎn)接入繼代分化培養(yǎng)基B中，置于培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)30天,外植體分化出叢芽；培養(yǎng)條件為光照周期16h/d,光照強度2000Lux,培養(yǎng)室溫度23 25°C。(5)繼代芽的生根將高度為2cm左右、健壯的繼代單芽轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基C中，進行生根培養(yǎng)，40天后根長達3cm ;培養(yǎng)條件為光照周期16h/d，光照強度2000Lux，培養(yǎng)室溫度23 25°C。(6)煉苗及移栽把接種瓶瓶口打開在培養(yǎng)室內(nèi)散射光下煉苗5天，光照周期為16h/d，光照強度為2000LUX，培養(yǎng)室溫度為23 25°C;之后取出瓶內(nèi)的組培苗，用自來水洗凈根部的瓊脂，再用蒸餾水稀釋成500倍的多菌靈浸泡組培苗根部20min，移栽至以蛭石、珍珠巖和腐殖土為混合基質(zhì)的營養(yǎng)杯中，將營養(yǎng)杯放到人工氣候箱中，光照周期為16h/d,光照強度為2000LUX，白天23 25°C，晚上15 18°C，保持濕度50%，隔兩周澆一次1/12MS母液，30天后移栽到大棚中。·
權(quán)利要求
1.刺五加的組織培養(yǎng)繁育方法，其特征在于包括以下步驟 (O培養(yǎng)基制備選擇MS培養(yǎng)基作為基本培養(yǎng)基，6-芐氨基嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)、玉米素(ZT)和3-吲哚乙酸(IAA)作為調(diào)控激素分別制備三種培養(yǎng)基初分化培養(yǎng)基 A MS+6-BA0. 8 I. 2mg/L+NAA0. Γθ. 5mg/L,繼代分化培養(yǎng)基 B MS+6-BA0. 5 I. 5mg/L+ ZTO. I lmg/L，生根培養(yǎng)基 C MS +NAA0. Γ . Omg/L+IAAO. Γθ. 5mg/L, 培養(yǎng)基A和B中均附加2(T35g/L蔗糖和r5g/L瓊脂，培養(yǎng)基C附加15 25g/L蔗糖和l 2g/L瓊脂，用I 2mol/L的NaOH和HCL調(diào)節(jié)pH值至5. 8 6. O,并將培養(yǎng)基A、B和C在高壓蒸汽滅菌鍋O. Γθ. 15MPa, 120 125°C滅菌15 20min ； (2)外植體的消毒選用刺五加剛萌發(fā)的嫩芽作為外植體，用自來水沖洗3(T60min，在無菌操作臺上用70%酒精消毒2 4min，用無菌水沖洗3 4次，在解剖鏡下去掉芽的鱗片，再用濃度為O. 059Γ0. 1%的升汞消毒7 15min，最后用無菌水沖洗4 6次； (3)外植體的誘導(dǎo)將步驟(2)消毒的刺五加外植體接種在初分化培養(yǎng)基A上，接種瓶內(nèi)每瓶放f 3個外植體，置于培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)3(Γ60天，外植體長出不定芽； (4)繼代芽的分化將步驟(3)中初分化完成的外植體轉(zhuǎn)接入繼代分化培養(yǎng)基B中，置于培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)2(Γ40天，外植體分化出叢芽； (5)繼代芽的生根將高度為I.5^2. Ocm左右、健壯的繼代單芽轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基C中，進行生根培養(yǎng)，30^40天后根長達2 4cm ； (6)煉苗及移栽把接種瓶瓶口打開在培養(yǎng)室內(nèi)散射光下煉苗5 7天，光照周期為16h/d，光照強度為200(T2400Lux，培養(yǎng)室溫度為23 25°C ;之后取出瓶內(nèi)的組培苗，用自來水洗凈根部的瓊脂，再用蒸餾水稀釋成50(Γ600倍的多菌靈浸泡組培苗根部2(T30min，移栽至以蛭石、珍珠巖和腐殖土為混合基質(zhì)的營養(yǎng)杯中，將營養(yǎng)杯放到人工氣候箱中，光照周期為16h/d，光照強度為200(T2400Lux，白天23 25°C，晚上15 18°C，保持濕度40 60%，隔兩周澆一次1/15 1/10MS母液，30 40天后移栽到大棚中。
2.如權(quán)利要求I所述刺五加的組織培養(yǎng)繁育方法，其特征是步驟(3) 步驟(5)中，培養(yǎng)條件為光照周期16h/d，光照強度200(T2400Lux，培養(yǎng)溫度23 25°C。
3.如權(quán)利要求I所述刺五加的組織培養(yǎng)繁育方法，其特征是步驟(6)中，所述混合基質(zhì)中蛭石珍珠巖腐殖土的質(zhì)量比為2:1:3，并且該混合基質(zhì)需在壓力0. Γθ. 15MPa、溫度120 125°C條件下滅菌15 20min。
4.如權(quán)利要求I所述刺五加的組織培養(yǎng)繁育方法，其特征是1/15 1/10MS培養(yǎng)基母液的成分與MS培養(yǎng)基相同，將MS培養(yǎng)基母液稀釋1(Γ15倍。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種刺五加的組織培養(yǎng)繁育方法，包括以下步驟(1)MS培養(yǎng)基作為基本培養(yǎng)基，6-BA、NAA、ZT和IAA作為調(diào)控激素；(2)刺五加剛萌發(fā)的嫩芽作為外植體，消毒；(3)將刺五加外植體接種在初分化培養(yǎng)基上，長出不定芽；(4)將長出不定芽的外植體轉(zhuǎn)接入繼代分化培養(yǎng)基中；(5)將繼代分化完成的外植體轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中；(6)將接種瓶口打開煉苗，取出組培苗，移栽至混合基質(zhì)營養(yǎng)杯中，經(jīng)過一段時間培養(yǎng)，移栽至大棚中，成活率達93%~97%。本發(fā)明取材少，培養(yǎng)經(jīng)濟，可人為控制培養(yǎng)條件，不受自然條件影響，生長周期短，繁殖率高，保證了刺五加的品質(zhì)。
文檔編號A01H4/00GK102845306SQ20121030952
公開日2013年1月2日 申請日期2012年8月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月28日
發(fā)明者程鈺翔 申請人:程鈺翔