專利名稱：基于ppar結(jié)合活性的鮭鱒魚類飼料及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖與水產(chǎn)飼料生產(chǎn)加工技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于PPAR結(jié)合活性的鮭鱒魚魚類適用的飼料及其制備方法，可以提高養(yǎng)殖鮭鱒魚類魚肉產(chǎn)品的品質(zhì)。
背景技術(shù)：
魚類肉質(zhì)鮮美、蛋白含量高，富含有益人體健康的不飽和脂肪酸，是人類的重要食物來源。尤其是鮭鱒魚類，其肉質(zhì)細(xì)嫩、色澤美觀、營(yíng)養(yǎng)豐富，特別是EPA、DHA等含量高于其他魚類數(shù)倍以上。備受消費(fèi)者青睞的三文魚即是某些鮭鱒魚類的商品名稱，市售挪威三文魚主要為大西洋鮭。然而，單純依靠捕撈野生魚已經(jīng)不能滿足人們的需求，供應(yīng)的不足只能通過養(yǎng)殖魚來填補(bǔ)。因此，鮭鱒魚類的養(yǎng)殖有巨大的經(jīng)濟(jì)效益和市場(chǎng)前景。遺憾的是，養(yǎng)殖魚與野生魚在品質(zhì)以及營(yíng)養(yǎng)價(jià)值上存在著較大的差異，在人工飼 養(yǎng)過程中使用配合飼料，魚往往出現(xiàn)腹部膨脹、肝臟肥大，可食部分相對(duì)減少等問題，尤其是在鮭鱒魚類養(yǎng)殖中這個(gè)問題尤為突出。以大西洋鮭為例，野生大西洋鮭的脂肪含量?jī)H為8. 59Γ9. 8%，而人工養(yǎng)殖大西洋鮭脂肪含量可高達(dá)21. 8%。而且，野生大西洋鮭富含ω -3脂肪酸，其具有保護(hù)心腦血管、調(diào)整血脂異常、抑制血小板聚集、防止血栓形成、抑制癌細(xì)胞的產(chǎn)生和轉(zhuǎn)移等功效。研究指出魚體脂肪含量和脂肪酸的組成是衡量魚肉品質(zhì)的重要標(biāo)準(zhǔn)。本發(fā)明正是基于這一標(biāo)準(zhǔn)，以降低養(yǎng)殖魚類的脂肪含量、提高魚肉ω-3脂肪酸含量為目的，為改善和提聞養(yǎng)殖魚類的品質(zhì)提供新思路和新方法。魚體脂肪組織主要以甘油三酯的形式堆積于腹腔(內(nèi)臟周圍)、肝臟、肌肉、腸系膜和腹翼中，不僅影響?zhàn)B殖魚類的肉質(zhì)、口感以及營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，而且對(duì)提高養(yǎng)殖效率和降低養(yǎng)殖成本也有較多的不利影響。長(zhǎng)期以來，脂肪組織一直被認(rèn)為是被動(dòng)的、不活躍的組織。因此國(guó)內(nèi)外大量研究在考慮減少魚體脂肪含量時(shí)主要從飼料組成角度開展工作，嘗試通過降低飼料脂肪含量，即被動(dòng)減少養(yǎng)殖魚類脂肪攝入量來減少魚體脂肪含量。但是研究結(jié)果并不理想，不僅魚肉重量沒有提高，甚至抑制了魚類的正常生長(zhǎng)，降低了養(yǎng)殖效率。近幾年的研究成果發(fā)現(xiàn)，脂肪組織并非被動(dòng)的、不活躍的組織，而是可以通過內(nèi)分泌、旁分泌和自分泌的形式在能量調(diào)節(jié)中起到重要作用。脂肪細(xì)胞可分泌大量的活性物質(zhì)，大部分的活性物質(zhì)通過自(旁)分泌途徑調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞的代謝，進(jìn)入血管后，可以調(diào)節(jié)機(jī)體各組織的脂肪代謝，以及機(jī)體的能量平衡。在這個(gè)過程中，一類與脂肪合成代謝、脂肪細(xì)胞分化和脂肪堆積密切相關(guān)的受體超家族成員起著重要的信號(hào)介導(dǎo)和調(diào)控作用，這類受體就是過氧化物酶體增殖物激活受體(Peroxisome Proliferator Activated Receptor,PPAR)。PPAR包括α、β、Y三個(gè)亞型，PPARa亞型可調(diào)節(jié)與脂肪酸氧化相關(guān)的酶的基因，被相應(yīng)配體激活后能夠增強(qiáng)脂肪酸的β氧化，減少脂肪在組織中的沉積。PPARii亞型在胰島β細(xì)胞、心肌、骨骼肌、脂肪組織、皮膚、腦組織等均有較高表達(dá)，其主要功能與PPARa相似，在心肌、骨骼肌和脂肪組織中，PPARP的選擇性激動(dòng)劑能夠增強(qiáng)脂肪酸的氧化和利用，減少脂質(zhì)在這些組織中的沉積，從而明顯改善機(jī)體的脂代謝。而PPAR Y主要在脂肪組織中參與脂肪細(xì)胞的分化，是誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞分化的特異性轉(zhuǎn)錄因子，對(duì)于促進(jìn)脂肪細(xì)胞的分化及脂肪組織的沉積起著重要作用。簡(jiǎn)言之，PPARa和PPARP可以減少脂肪的堆積，而PPARy相反。此外，PPAR還與魚體的ω-3脂肪酸含量有密切關(guān)系。因此，如果能夠利用天然PPAR活性物質(zhì)提高養(yǎng)殖魚的魚肉品質(zhì)，將產(chǎn)生良好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有養(yǎng)殖魚類的魚肉品質(zhì)問題，提出一種基于PPAR結(jié)合活性的魚類飼料及其制備方法，該飼料可以調(diào)控養(yǎng)殖魚類脂肪和脂肪酸合成代謝，降低養(yǎng)殖魚體內(nèi)脂肪含量，提高有益ω-3脂肪酸含量，提升魚肉品質(zhì)。天然物質(zhì)，如類花生酸類物質(zhì)、小檗堿、柚皮素、虎杖苷、山奈酚和大豆苷元等是PPAR的天然激動(dòng)劑，它們通過反饋?zhàn)饔茫梢杂绊懮矬w內(nèi)脂肪的合成代謝及ω-3脂肪酸的含量，且這些天然物質(zhì)在很多魚飼料配方中存在。本發(fā)明即是根據(jù)上述原理，提出基于PPAR結(jié)合活性的魚類飼料及其制備方法，通過改變飼料中PPARa和PPARi^結(jié)合活性物質(zhì) 的含量，使PPARa和PPARii被激活后，能夠增強(qiáng)脂肪和脂肪酸的氧化和利用，減少養(yǎng)殖鮭鱒魚類脂肪在組織中的沉積，達(dá)到調(diào)控養(yǎng)殖鮭鱒魚類脂肪和脂肪酸合成代謝、提升魚肉品質(zhì)的目的。具體來說，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案一種鮭鱒魚類飼料的優(yōu)化制備方法，其特征在于，通過添加天然PPAR結(jié)合活性物質(zhì)調(diào)節(jié)飼料中PPARa和/或PPARβ結(jié)合活性物質(zhì)含量，對(duì)鮭鱒魚類飼料進(jìn)行優(yōu)化?？蛇x地，將飼料的各組分經(jīng)微粉碎后過80目篩，再用鼓型混合機(jī)進(jìn)行混合，然后用膨化機(jī)制成膨化顆粒飼料。一種鮭鱒魚類飼料，包括鮭鱒魚類生長(zhǎng)所需的基本物質(zhì)，其特征在于，還包括天然的PPAR a和/或PPARii結(jié)合活性物質(zhì)。所述基本物質(zhì)包括蛋白、脂肪和微量元素，各組分及占飼料總重量的百分比含量?jī)?yōu)選為魚粉36°/Γ45%，小麥粉18°/Γ25%，魚油12°/Γ 8%，小麥淀粉15°/Γ 7%，多維維生素
I.09Γ2. 0%，礦物質(zhì) O. 5°/Γθ. 7%，氨基酸混合物 2. 0°/Γ2. 5%。所述天然的PPAR結(jié)合活性物質(zhì)選自下列物質(zhì)中的一種或多種黃豆苷、花生四烯酸、姜黃素、異黃酮、小檗堿、柚皮素、虎杖苷、山奈酚、大豆苷元和共軛亞油酸。優(yōu)選地，所述天然的PPAR結(jié)合活性物質(zhì)為黃豆苷，其占飼料總重量的4%。優(yōu)選地，所述天然的PPAR結(jié)合活性物質(zhì)為花生四烯酸，其占飼料總重量的5%。優(yōu)選地，所述天然的PPAR結(jié)合活性物質(zhì)為姜黃素，其占飼料總重量的3. 5%。優(yōu)選地，所述天然的PPAR結(jié)合活性物質(zhì)為異黃酮，其占飼料總重量的4%。優(yōu)選地，所述天然的PPAR結(jié)合活性物質(zhì)為黃豆苷和姜黃素，其分別占飼料總重量的2%和3% ο魚類投喂實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與投喂基礎(chǔ)飼料的對(duì)照組相比，本發(fā)明的上述鮭鱒魚類飼料飼料不僅可以滿足魚類正常生長(zhǎng)，而且魚體中脂肪含量適中(7. 919Γ9. 92%)，低于文獻(xiàn)報(bào)道的人工養(yǎng)殖虹鱒魚和三文魚全魚脂肪含量，與野生三文魚脂肪含量相近；肌肉脂肪含量為3. 539Γ3. 83%，在已報(bào)道的適口肌肉脂肪含量范圍(3. 5% 4. 5%)內(nèi)，口感好；ω-3脂肪酸含量明顯升高，與對(duì)照組相比提高了 389Γ54%，其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和保健價(jià)值進(jìn)一步提高。綜合而言，新飼料配方養(yǎng)殖的魚類的魚肉品質(zhì)大大提升，具有良好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。
具體實(shí)施例方式下面通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做詳細(xì)的說明。本實(shí)施例以虹鱒魚為研究對(duì)象，首先確定魚類飼料中可以添加的天然PPAR結(jié)合活性物質(zhì)的種類，然后研究得出添加不同含量天然PPAR結(jié)合活性物質(zhì)后的飼料與魚肉脂肪及脂肪酸含量的關(guān)系。具體實(shí)施過程如下(一)天然物質(zhì)的PPAR結(jié)合活性可采用磷酸對(duì)硝基苯酚活力測(cè)試，具體步驟如下首先，構(gòu)建GST與虹鱒魚PPARa或PPAR0受體融合蛋白表達(dá)載體pGEX_4T，及轉(zhuǎn)錄共激活因子SRCl與細(xì)菌堿性磷酸酶BAP融合蛋白表達(dá)載體pET28a，GST與PPAR受體融合蛋白和SRCl-BAP融合蛋白通過大腸桿菌體外表達(dá)系統(tǒng)獲得。l.GST-PPARa受體融合蛋白 利用Trizol法提取虹鱒魚肝臟組織中總RNA,反轉(zhuǎn)錄得到cDNA。利用PrimerPremier 5設(shè)計(jì)兼并引物，PPARa正義引物序列為5’ GTGGGCATGTCSCACAAYGC3’ ；反義引物序列為 5，CAGCAGATRATRGCRGCCA C3，;PCR 反應(yīng)條件95°C Imin ;35 個(gè)循環(huán)(95°C 15s,58°C 60s) ；72°C 6min。純化PCR產(chǎn)物測(cè)序獲得PPAR a片段序列，通過3’ RACE和5’ RACE(大連寶生物公司)獲得PPARa全序列。然后，根據(jù)目的載體的酶切位點(diǎn)分別設(shè)計(jì)帶接頭PPARa 引物，上游5' ~CCGGAATTCCTAGATGCTCTGACCCCAGCAT~3/，下劃線為 EcoRI 酶切位點(diǎn)；下游5' -GATAAGCTTTCAGTACATGTCCCTGTAGAT-3'，下劃線為 Hind III 酶切位點(diǎn)；反應(yīng)條件為94°C 5min,94°C 30s, 60°C 30s, 72°C 45s，共 35 個(gè)循環(huán)，72°C延伸 IOmin ;瓊脂糖凝膠電泳后，切膠回收PCR產(chǎn)物，用EcoRI和Hind III酶切DNA片段，TaKaRa膠回收試劑盒回收酶切后產(chǎn)物，再用T4DNA連接酶連接PPAR α和PGEX_4T，轉(zhuǎn)化至DH5 α感受態(tài)大腸桿菌中。將瓊脂平板培養(yǎng)基中加入氨芐、IPTG、X-gal，取適量感受態(tài)大腸桿菌涂布瓊脂平板培養(yǎng)基，37°C過夜培養(yǎng)，形成的白斑為重組體，藍(lán)斑為假陽性菌落。挑選單菌落接種于20mL含ΙΟΟμ g/mL氨芐的LB液體培養(yǎng)基中，37°C振蕩培養(yǎng)過夜。測(cè)序，確定DNA序列的準(zhǔn)確性。后續(xù)方法見文獻(xiàn)“Kanayama T, Mamiya S，Nishihara T, et al. Basis of a high-throughputmethod for nuclear receptor ligands. J Biochem, 2003，133 (6) : 791-797”,將確認(rèn)后的菌種保留用于后續(xù)蛋白提取。蛋白提取將上述菌種接種于含有氨芐的LB液體培養(yǎng)基培養(yǎng)，當(dāng)菌液濁度OD值達(dá)到O. Ο. 6左右時(shí)加入IPTG誘導(dǎo)3h，提取純化得到GST_rPPAR α融合蛋白。2. GST-PPAR^受體融合蛋白基本流程同GST-PPARa。PPAR β基因擴(kuò)增正義引物序列為5’CGCTTCCAGAAGTGCCTG3’ ；反義引物序列為 5’GCAAACTCRAACTTGGGCTC 3’。PPARP 酶切引物為上游5 ' -CCGGAATTC AAAGCCCCGACCACC-3 '，下劃線為EcoRI酶切位點(diǎn)；下游5'~GATAAGCTTTCAGTACATGTCCCTGTAGATT~3/，下劃線為 Hind III 酶切位點(diǎn)；反應(yīng)條件為94°C 5min,94°C 30s, 52°C 10s,72°C 45s，共 35 個(gè)循環(huán)，72°C延伸 lOmin。3. SRCl與堿性磷酸酶BAP (SRCl-BAP)融合蛋白利用Trizol法提取斑馬魚肝臟組織中總RNA，反轉(zhuǎn)錄得到cDNA。根據(jù)目的載體的酶切位點(diǎn)分別設(shè)計(jì)帶接頭SCR-1引物，上游5 ' CGCGGATCCGATGAAAAGGGCAACCTCG-3'，下劃線為 BamHI 酶切位點(diǎn)；下游5 ' -CATCTCGAGAAGATCATCCAGGATATCATCCA-3 '，下劃線為XhoI酶切位點(diǎn)；反應(yīng)條件為94°C 5min，94°C 30s, 57°C 10s，72°C 45s，共35個(gè)循環(huán)，72 °C延伸lOmin。瓊脂糖凝膠電泳后，切膠回收PCR產(chǎn)物，用BamHI和XhoI酶切DNA片段，回收酶切后產(chǎn)物，再用T4DNA連接酶連接SRC-I和pET_28a，轉(zhuǎn)化至DH5 α感受態(tài)大腸桿菌中。將瓊脂平板培養(yǎng)基中加入卡那霉素、IPTG、X-gal，取適量感受態(tài)大腸桿菌涂布瓊脂平板培養(yǎng)基，37°C過夜培養(yǎng)，形成的白斑為重組體，藍(lán)斑為假陽性菌落。挑選單菌落接種于20mL含20μ g/mL卡那霉素的LB液體培養(yǎng)基中，37°C振蕩培養(yǎng)過夜。測(cè)序，確定DNA序列的準(zhǔn)確性。后續(xù)蛋白提取方法見文獻(xiàn)“Kanayama T, Mamiya S, NishiharaT, et al.Basis of a high-throughput method for nuclear receptor ligands.JBiochem, 2003，133(6):791-797”。結(jié)合活性測(cè)試方法將GST-rPPARa受體融合蛋白結(jié)合到酶標(biāo)板上過夜，加入SRCl-BAP融合蛋白及待測(cè)物與PPARa結(jié)合；加緩沖液徹底清洗未結(jié)合SRCl-BAP ;然后加入BAP的底物4-硝基苯磷酸二鈉(4-NPP)，如果PPAR與待測(cè)物結(jié)合，就可以將無色的4-NPP催化為黃色的對(duì)硝基酹(NP),最后在405nm處測(cè)定光吸收值來檢測(cè)配體結(jié)合情況；如果PPAR不能與待測(cè)物結(jié)合，則仍為無色的；光吸收值可以反映待測(cè)物與PPAR的結(jié)合強(qiáng)弱，也 即為該物質(zhì)的PPAR結(jié)合活性大小。利用上述方法，對(duì)一些魚類飼料中的成分及其常用添加劑的PPARa和ΡΡΑΙ β活性進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示，黃豆苷和花生四烯酸的PPARα結(jié)合活性較強(qiáng)，姜黃素和異黃酮的PPARii結(jié)合活性較強(qiáng)。(二)獲得各物質(zhì)PPAR結(jié)合活性數(shù)據(jù)結(jié)果后，進(jìn)行添加PPAR結(jié)合活性物質(zhì)飼料的虹鱒魚投喂實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)方法如下試驗(yàn)所用虹鱒魚為北京臥佛山莊養(yǎng)殖有限公司養(yǎng)殖，隨機(jī)選取540尾健康的I齡虹鱒魚作為試驗(yàn)材料，分別放入18個(gè)養(yǎng)殖池(I. 2m*I. 2m*0. 6m),每組3個(gè)重復(fù)，放養(yǎng)密度為30尾/池。虹鱒魚初始平均體重約150g，各養(yǎng)殖池中虹鱒魚總體重基本相同，以保證各養(yǎng)殖池不存在顯著差異。預(yù)飼2周后開始正式試驗(yàn)，試驗(yàn)周期為8周。虹鱒等鮭鱒魚類作為典型肉食性魚類,對(duì)配合飼料營(yíng)養(yǎng)的要求比較高。因此,本飼料配方以魚粉為主要蛋白源，魚油為脂肪來源、小麥(淀)粉為碳水化合物來源，并補(bǔ)充多維維生素、礦物質(zhì)和氨基酸等配制基礎(chǔ)飼料。依據(jù)農(nóng)業(yè)部“漁用配合飼料通用技術(shù)要求(SC/T1077-2004)”標(biāo)準(zhǔn)、《鮭鱒魚類養(yǎng)殖技術(shù)》(葉遠(yuǎn)濤，中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2001),《虹鱒魚養(yǎng)殖》(王昭明，中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2004)等，結(jié)合養(yǎng)殖過程鮭鱒魚類對(duì)蛋白、脂肪、碳水化合物、維生素、礦物質(zhì)以及氨基酸等這些鮭鱒魚類生長(zhǎng)所需的基本物質(zhì)的實(shí)際需求進(jìn)行配制，具體可采用魚粉、小麥粉、魚油、小麥淀粉、多維維生素、礦物質(zhì)以及氨基酸混合物等配制。所述鮭鱒魚類生長(zhǎng)所需的基本物質(zhì)按重量百分比各組分的優(yōu)選含量范圍如表I所示，其中魚粉36°/Γ45%，小麥粉18°/Γ25%，魚油12°/Γ 8%，小麥淀粉(糊化)15°/Γ 7%，多維維生素(含鮭鱒魚類的生長(zhǎng)所需15種維生素)1.09Γ2. 0%，礦物質(zhì)(含鈣、磷、鉀、鐵、銅、錳、鋅、鈷、碘、硒、鈉)0. 59ΓΟ. 7%，氨基酸混合物(含精氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸、色氨酸和纈氨酸10種必需氨基酸)2.09Γ2.5%。飼料原料經(jīng)微粉碎后過80目篩，用鼓型混合機(jī)進(jìn)行混合后再用膨化機(jī)制成3mm顆粒。主要的飼料配方如下配方I :在滿足鮭鱒魚生長(zhǎng)所需的基本物質(zhì)的基礎(chǔ)上添加黃豆苷，其占飼料總重量的4% ；配方2 :在滿足鮭鱒魚生長(zhǎng)所需的基本物質(zhì)的基礎(chǔ)上添加花生四烯酸，其占飼料總重量的5% ；配方3 :在滿足鮭鱒魚生長(zhǎng)所需的基本物質(zhì)的基礎(chǔ)上添加姜黃素，其占飼料總重量的3. 5% ；配方4 :在滿足鮭鱒魚生長(zhǎng)所需的基本物質(zhì)的基礎(chǔ)上添加異黃酮，其占飼料總重量的4% ；配方5 :在滿足鮭鱒魚生長(zhǎng)所需的基本物質(zhì)的基礎(chǔ)上添加黃豆苷和姜黃素，其分別占飼料總重量的2%和3%。本實(shí)施例中，各配方的組分及含量如表I所示。 表I飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干重)

成分(％)基礎(chǔ)飼料飼料I~ 飼料2~ 飼料3~ 飼料4~ 飼料5~
魚粉4442.24 Th 842.46 42.24 Th8
小麥粉201972191973ΙθΠ19
魚油IiTi14.208 14.06 14.282 14.208 14.06
小麥淀粉(糊化)ΙθΠ15. 744 15.58 15.826 15. 744 15. 58
~多維維生素 °O1.728 TTlI. 737 I. 728 TTl
礦物質(zhì)b0 60.576 057O. 579 O. 576 057
氨基酸混合物 °2 42.304 2 282. 316 2. 304 2 28
黃豆苷42
花生四烯酸5
姜黃素^53
異黃酮4a:每kg多維維生素各組分含量維生素Bl，62mg;核黃素(維生素B2)，71mg;煙酸，294mg;泛酸鈣，153mg;維生素B6，50mg;葉酸，22mg;維生素B12，O. 08mg;維生素H，0.8mg;肌醇，176mg;維生素A，8818IU;維生素D3，588mg;維生素E，670mg;維生素K3, 37mg;維生素 C，3000mg;膽堿,5000mg。b:每kg礦物質(zhì)各組分含量KI, I. 9mg;MnSO4 .H2O, 75. 8mg;ZnSO4 ·7Η20, 132. Omg;Na2Se03, O. 88mg; CoCl3 ·6Η20, 4. Omg; CuSO4 ·Η20, 11. 8mg; FeSO4 ·Η20, 298. 5mg; Ca3O8P2, 5000mg。c:每kg氨基酸混合物中各組分含量精氨酸，1.9g;組氨酸，O. 3g;異亮氨酸，4. 8g;亮氨酸，I. 3g;賴氨酸，2g;甲硫氨酸，2. 4g;苯丙氨酸，3. 5g;蘇氨酸，O. 7g;色氨酸O. 4g;纈氨酸，8. Igo
試驗(yàn)期按魚體重的2%確定日投飼量(視水質(zhì)、攝食情況而定，盡量以攝食完為度)，每天5:00和17:00分兩次投喂，投飼Ih后收集剩餌，烘干后稱重，每天記錄投飼量和剩餌量，觀察水質(zhì)和魚類活動(dòng)情況。試驗(yàn)期間，水溫為12.5 16.5°C，溶解氧含量為
7.8 10mg/L。試驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)試驗(yàn)魚饑餓24小時(shí)，記錄每條魚的體重體長(zhǎng)，在每個(gè)重復(fù)中各隨機(jī)選取12尾魚，麻醉致死，樣品放入冰箱冷凍。由于虹鱒魚脂肪易于在腹部、肝臟、腸壁等組織中蓄積，因此脂肪含量測(cè)定為全魚采樣，將虹鱒魚殺死后將其用刀切成小塊，經(jīng)強(qiáng)力絞肉機(jī)絞碎，再用組織勻漿機(jī)攪勻，用于脂肪含量測(cè)定。肌肉樣品為取魚體兩側(cè)頭后至尾柄前的全部肌肉，去皮，經(jīng)細(xì)細(xì)剪碎，混勻用于脂肪和脂肪酸測(cè)定。肝臟樣品為解剖后小心取出完整肝臟樣品，并小心剔除表面的結(jié)締組織和脂肪等附著物，剪碎，混勻。測(cè)定方法采用“食品中總脂肪、飽和脂肪(酸)、不飽和脂肪(酸)(GB/T 22223-2008)的測(cè)定”。其中ω-3脂肪酸含量為二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)含量之和。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與投喂基礎(chǔ)飼料的對(duì)照組相比，上述5種含有PPAR結(jié)合活性物質(zhì)的飼料飼喂的虹鱒魚生長(zhǎng)性能沒有顯著差異(表2)。鮭鱒魚類在人工養(yǎng)殖過程中，往往出現(xiàn)腹部膨大、肝臟肥大，可食用部分相對(duì)減少的問題，影響了養(yǎng)殖魚品質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)中，上述5種含有PPAR結(jié)合活性物質(zhì)的飼料投喂虹·鱒魚體脂肪含量均出現(xiàn)降低(表3)，全魚脂肪含量由原來的11. 54%下降到7. 919Γ9. 92%，低于現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道的人工養(yǎng)殖虹鱒魚和三文魚全魚脂肪含量(請(qǐng)參考①徐奇友，李嬋，許紅，等.茶多酚對(duì)虹鱒生長(zhǎng)性能、生化指標(biāo)和非特異性免疫指標(biāo)的影響.動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2008，20 (5) :547-553 ;②許紅，李嬋，徐奇友，等.肉骨粉和血粉替代魚粉對(duì)虹鱒生產(chǎn)性能和肉質(zhì)的影響.飼料工業(yè)，2008，29 (14) :23-24 ;③鄒方起，徐美娜，王嘉，等.切達(dá)奶酪粉部分替代魚粉對(duì)虹鱒幼魚生長(zhǎng)性能、體成分及血漿生化指標(biāo)的影響.動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2011，23 (8) :1430-1438 劉含亮，孫敏敏，王紅衛(wèi)，等.殼寡糖對(duì)虹鱒生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)及非特異性免疫功能的影響.動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2012,24(3) :479-486 ;⑤江建軍，鄧林，李華.人工養(yǎng)殖三文魚營(yíng)養(yǎng)成分的分析.食品與機(jī)械，2011，27:40-46.)，與野生三文魚脂肪含量相近(①鄧林，李華，江建軍.挪威三文魚的營(yíng)養(yǎng)評(píng)價(jià).食品工業(yè)科技，2012,33:377-379 ;②劉延嶺，鄧林.養(yǎng)殖三文魚與挪威三文魚營(yíng)養(yǎng)成分的比較分析.食品與發(fā)酵科技，201247:84-86.)。解剖發(fā)現(xiàn)，飼喂含PPAR結(jié)合活性物質(zhì)的虹鱒魚腹等部位脂肪沉積減少。飼喂含PPAR結(jié)合活性物質(zhì)的虹鱒魚肌肉脂肪含量為3. 539Γ3. 83%，肝臟中脂肪含量為
2.919Γ3. 05%,與對(duì)照組相比略有降低。據(jù)報(bào)道，肌肉脂肪含量達(dá)到鮮樣的3. 5% 4. 5%才會(huì)有良好的適口性(孫中武，李超，尹洪濱，等.不同品系虹鱒的肌肉營(yíng)養(yǎng)成分分析.營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2008，30 (3) :298-301.)，采用新飼料后虹鱒肌肉的粗脂肪含量均在這此范圍內(nèi)，未因魚體內(nèi)脂肪含量降低而影響其口感。5種含有PPAR結(jié)合活性物質(zhì)的飼料投喂虹鱒魚有益ω-3脂肪酸含量明顯升高，與對(duì)照組相比提高了 38°/Γ54%。其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和保健價(jià)值進(jìn)一步提高。綜合而言，新飼料配方養(yǎng)殖的魚類的魚肉品質(zhì)大大提升。表2各組虹鱒魚生長(zhǎng)性能
權(quán)利要求
1.一種鮭鱒魚類飼料的優(yōu)化制備方法，其特征在于通過添加天然的PPAR結(jié)合活性物質(zhì)調(diào)節(jié)飼料中PPARa和/或PPARβ結(jié)合活性物質(zhì)含量，對(duì)鮭鱒魚類飼料進(jìn)行優(yōu)化。
2.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于所述天然的PPAR結(jié)合活性物質(zhì)選自下列物質(zhì)中的一種或多種黃豆苷、姜黃素、異黃酮、花生四烯酸、小檗堿、柚皮素、虎杖苷、山奈酹、大豆苷元和共軛亞油酸。
3.如權(quán)利要求I或2所述的方法，其特征在于將飼料的各組分經(jīng)微粉碎后過80目篩，再用鼓型混合機(jī)進(jìn)行混合，然后用膨化機(jī)制成膨化顆粒飼料。
4.一種鮭鱒魚類飼料，包括鮭鱒魚類生長(zhǎng)所需的基本物質(zhì)，其特征在于還包括天然的PPAR α和/或PPARii結(jié)合活性物質(zhì)。
5.如權(quán)利要求4所述的鮭鱒魚類飼料，其特征在于所述基本物質(zhì)的各組分及占飼料總重量的百分比含量分別為魚粉36°/Γ45%，小麥粉18°/Γ25%，魚油12°/Γ 8%，小麥淀粉15°/Γ17%，多維維生素I. 09Γ2. 0%，礦物質(zhì)O. 5°/Γθ. 7%，氨基酸混合物2. 09Γ2. 5% ;所述天然的PPAR結(jié)合活性物質(zhì)選自下列物質(zhì)中的一種或多種黃豆苷、姜黃素、異黃酮、花生四烯酸小檗堿、柚皮素、虎杖苷、山奈酚、大豆苷元和共軛亞油酸。
6.如權(quán)利要求5所述的魚類飼料，其特征在于所述天然的PPAR結(jié)合活性物質(zhì)為黃豆苷，其占飼料總重量的4%。
7.如權(quán)利要求5所述的魚類飼料，其特征在于所述天然的PPAR結(jié)合活性物質(zhì)為花生四烯酸，其占飼料總重量的5%。
8.如權(quán)利要求5所述的魚類飼料，其特征在于所述天然的PPAR結(jié)合活性物質(zhì)為姜黃素，其占飼料總重量的3. 5%。
9.如權(quán)利要求5所述的魚類飼料，其特征在于所述天然的PPAR結(jié)合活性物質(zhì)為異黃酮，其占飼料總重量的4%。
10.如權(quán)利要求5所述的魚類飼料，其特征在于所述天然的PPAR結(jié)合活性物質(zhì)為黃豆苷和姜黃素，其分別占飼料總重量的2%和3%。
全文摘要
本發(fā)明提供一種基于PPAR結(jié)合活性的鮭鱒魚類飼料及其制備方法。該鮭鱒魚類飼料包括滿足鮭鱒魚生長(zhǎng)所需的蛋白、脂肪、微量元素等基本物質(zhì)，還包括天然的PPARα和/或PPARβ結(jié)合活性物質(zhì)，比如黃豆苷、姜黃素、異黃酮、花生四烯酸、小檗堿、柚皮素、虎杖苷、山奈酚、大豆苷元、共軛亞油酸等。該鮭鱒魚類飼料可以調(diào)控養(yǎng)殖的鮭鱒魚類脂肪和脂肪酸合成代謝，降低魚體內(nèi)脂肪含量，提高有益ω-3脂肪酸含量，提升魚肉品質(zhì)。
文檔編號(hào)A23K1/18GK102813092SQ20121033571
公開日2012年12月12日 申請(qǐng)日期2012年9月11日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月11日
發(fā)明者賈成霞, 張清靖, 朱華, 劉盼, 曲疆奇, 楊慕 申請(qǐng)人:北京市水產(chǎn)科學(xué)研究所