馬鈴薯脫毒微型種薯的生產(chǎn)方法
【專利摘要】馬鈴薯脫毒微型種薯的生產(chǎn)方法，它屬于馬鈴薯種薯生產(chǎn)領(lǐng)域。本發(fā)明要解決現(xiàn)有馬鈴薯脫毒制微型種薯方法存在脫毒效率低和脫毒苗質(zhì)量差的技術(shù)問題。方法：一、選脫毒材料，先打破薯塊的休眠，溫潤沙覆蓋，催芽，高溫；二、剝?nèi)∏o尖，自來水沖洗，再乙醇浸泡，用次氯酸鈉溶液浸，用無菌水沖洗；步驟三、剖取帶有1~2個葉原基莖尖分生組織，進(jìn)行離體培養(yǎng)，當(dāng)苗的數(shù)量達(dá)到檢測用量時，對苗進(jìn)行PLRV、PVA、PVY、PVM、PVX、PVS、PSTV七種病毒進(jìn)行檢測，結(jié)果均為陰性即為脫毒苗；步驟四、擴(kuò)繁，煉苗，移栽至溫室內(nèi)進(jìn)行肥水管理，培養(yǎng)至收獲，獲得微型薯。本發(fā)明用于生產(chǎn)馬鈴薯種薯。
【專利說明】馬鈴薯脫毒微型種薯的生產(chǎn)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于 馬鈴薯種薯生產(chǎn)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]馬鈴薯是世界第四大糧食作物，它適應(yīng)性強(qiáng)，產(chǎn)業(yè)鏈長，是重要的糧食經(jīng)濟(jì)兼用的作物和工業(yè)原料作物。
[0003]植物繁殖過程中入侵病毒的積累，導(dǎo)致馬鈴薯長勢每年下降，收獲的土豆越來越少，甚至絕產(chǎn)等等。
[0004]目前，采用馬鈴薯脫毒制微型種薯來防止馬鈴薯退化，但存在脫毒效率低和脫毒苗質(zhì)量差的技術(shù)問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明要解決現(xiàn)有馬鈴薯脫毒制微型種薯方法存在脫毒效率低和脫毒苗質(zhì)量差的技術(shù)問題；而提供了馬鈴薯脫毒微型種薯的生產(chǎn)方法。
[0006]馬鈴薯脫毒微型種薯的生產(chǎn)方法，其特征在于馬鈴薯脫毒微型種薯的生產(chǎn)方法是按下述步驟進(jìn)行的:
步驟一、以品種特征明顯(即皮色、肉色、薯型、芽眼等符合特性要求)的生長健壯的優(yōu)良植株所結(jié)的且無病斑、蟲蛀和機(jī)械創(chuàng)傷的薯塊作脫毒材料，先打破薯塊的休眠，然后用溫潤沙覆蓋，置于25°C黑暗條件下催芽，待莖尖長Icm時，轉(zhuǎn)入光照培養(yǎng)箱進(jìn)行高溫處理20^25天，高溫處理期間每天先在40°C高溫處理2小時再在38°C高溫處理22小時，高溫處理第 7天用 0.1~0.5 mg /L赤霉素(GA3)+0.1`θ.5 mg /L6-芐氨基喋呤(6BA) +0.1~θ.5mg/LD-泛酸鈣處理一次(用脫脂棉蘸取配制好的液體，放于牙尖上處理5分鐘);
步驟二、然后剝?nèi)?~3cm長的莖尖，用自來水沖洗30min，再用70%~75% (質(zhì)量濃度)乙醇浸泡30秒，隨即用5%~7% (質(zhì)量濃度)次氯酸鈉溶液浸20分鐘，再用無菌水沖洗3~4次；步驟三、然后在實體解剖鏡下，剖取帶有廣2個葉原基(約0.2^0.3mm)的莖尖分生組織，進(jìn)行離體培養(yǎng)，當(dāng)苗的數(shù)量達(dá)到檢測用量時，對苗進(jìn)行PLRV、PVA、PVY、PVM、PVX、PVS,PSTV七種病毒進(jìn)行檢測，結(jié)果均為陰性即為脫毒苗；
步驟四、將脫毒苗接種于MS培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng)室內(nèi)，在培養(yǎng)室的溫度保持在25°C，光照為2000-3000勒克斯，每天16小時光照條件下進(jìn)行切段擴(kuò)繁，煉苗，移栽至溫室內(nèi)進(jìn)行肥水管理，培養(yǎng)至收獲，獲得微型薯。
[0007]本發(fā)明通過高溫變溫處理鈍化植物體內(nèi)病毒，去除病毒能力明顯增強(qiáng)，能去除PLRV、PVA、PVY、PVM、PVX、PVS、PSTV七種病毒，同時保證植物的生長發(fā)育，增強(qiáng)脫毒效率。用赤霉素+6-芐氨基喋呤^BA) +D-泛酸鈣處理可以加速莖尖細(xì)胞的分裂和生長，從而提高莖尖的質(zhì)量，取得好的脫毒效果。
[0008]生產(chǎn)出來的微型薯和由微型薯生產(chǎn)的原種一代試驗品在黑龍江、內(nèi)蒙古等地試種表現(xiàn)良好，田間長勢和抗病性突出；可達(dá)到上市銷售級別的原種二代試驗品經(jīng)過在惠州、青島等地試種取得良好地效果，植株健壯，生長旺盛，抗病性明顯增強(qiáng)，每667平方米產(chǎn)量可達(dá)8000斤以上，大薯率在90%以上，田間幾乎沒有爛薯，較傳統(tǒng)的自留種(一般667平方米產(chǎn)量在2000斤以下)有非常明顯的優(yōu)勢，取得了良好地經(jīng)濟(jì)效益。
[0009] 【具體實施方式】:
【具體實施方式】一:本實施方式中馬鈴薯脫毒微型種薯的生產(chǎn)方法是按下述步驟進(jìn)行
的:
步驟一、以品種特征明顯(即皮色、肉色、薯型、芽眼等符合特性要求)的生長健壯的優(yōu)良植株所結(jié)的且無病斑、蟲蛀和機(jī)械創(chuàng)傷的薯塊作脫毒材料，先打破薯塊的休眠，然后用溫潤沙覆蓋，置于25°C黑暗條件下催芽，待莖尖長Icm時，轉(zhuǎn)入光照培養(yǎng)箱進(jìn)行高溫處理20-25天，高溫處理期間每天先在40°C高溫處理2小時再在38°C高溫處理22小時，高溫處理第 7 天用 0.1~0.5 mg /L 赤霉素(GA3)+0.1~θ.5 mg /L6-芐氨基喋呤(6BA) +0.1~θ.5mg/LD-泛酸鈣處理一次(用脫脂棉蘸取配制好的液體，放于牙尖上處理5分鐘)；
步驟二、然后剝?nèi)?~3cm長的莖尖，用自來水沖洗30min，再用70%~75% (質(zhì)量濃度)乙醇浸泡30秒，隨即用5%~7% (質(zhì)量濃度)次氯酸鈉溶液浸20分鐘，再用無菌水沖洗3~4次；步驟三、然后在實體解剖鏡下，剖取帶有廣2個葉原基(約0.2^0.3mm)的莖尖分生組織，進(jìn)行離體培養(yǎng)，當(dāng)苗的數(shù)量達(dá)到檢測用量時，對苗進(jìn)行PLRV、PVA、PVY、PVM、PVX、PVS,PSTV七種病毒進(jìn)行檢測，結(jié)果均為陰性即為脫毒苗；
步驟四、將脫毒苗接種于MS培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng)室內(nèi)，在培養(yǎng)室的溫度保持在25°C，光照為2000-3000勒克斯，每天16小時光照條件下進(jìn)行切段擴(kuò)繁，煉苗，移栽至溫室內(nèi)進(jìn)行肥水管理，培養(yǎng)至收獲，獲得微型薯；
【具體實施方式】二:本實施方式與【具體實施方式】一不同的是:步驟一中用15硫脲+5mg/L赤霉素浸種5分鐘來打破休眠。其它步驟和參數(shù)與【具體實施方式】一相同；
【具體實施方式】三:本實施方式與【具體實施方式】一或二不同的是:步驟二用70% (質(zhì)量濃度)乙醇浸泡。其它步驟和參數(shù)與【具體實施方式】一或二相同；
【具體實施方式】四:本實施方式與【具體實施方式】一至三之一不同的是:步驟二所述的次氯酸鈉溶液的質(zhì)量百分比濃度為5%。其它步驟和參數(shù)與【具體實施方式】一至三之一相同；
【具體實施方式】五:本實施方式與【具體實施方式】一至四之一不同的是:步驟三的莖尖分生組織培養(yǎng)基，MS+赤霉素0.lmg/L+6-芐胺基嘌呤0.lmg/L+D-泛酸鈣0.lmg/L+蔗糖3%，瓊脂粉0.5%，PH5.8，培養(yǎng)條件(23±2) °C，16小時光照，光強(qiáng)30001x。其它步驟和參數(shù)與【具體實施方式】一至四之一相同；
【具體實施方式】六:本實施方式中馬鈴薯脫毒微型種薯的生產(chǎn)方法是按下述步驟進(jìn)行
的:
步驟一、以品種特征明顯(即皮色、肉色、薯型、芽眼等符合特性要求)的生長健壯的優(yōu)良植株所結(jié)的且無病斑、蟲蛀和機(jī)械創(chuàng)傷的薯塊作脫毒材料，先打破薯塊的休眠，然后用溫潤沙覆蓋，置于25°C黑暗條件下催芽，待莖尖長Icm時，轉(zhuǎn)入光照培養(yǎng)箱進(jìn)行高溫處理25天，高溫處理期間每天先在40°C高溫處理2小時再在38°C高溫處理22小時，高溫處理第7天用0.2 mg /L赤霉素(GA3) +0.3 mg /L6-節(jié)氨基喋呤(6BA) +0.2mg/LD_泛酸鈣處理一次，(用脫脂棉蘸取配制好的液體，放于牙尖上處理5分鐘)；
步驟二、然后剝?nèi)?~3cm長的莖尖，用自來水沖洗30min，再用75% (質(zhì)量)乙醇浸泡30秒，隨即用5% (質(zhì)量)次氯酸鈉溶液浸20分鐘，再用無菌水沖洗3~4次；
步驟三、然后在實體解剖鏡下，剖取帶有2個葉原基的莖尖分生組織，進(jìn)行離體培養(yǎng)，當(dāng)苗的數(shù)量達(dá)到檢測用量時，對苗進(jìn)行PLRV、PVA、PVY、PVM、PVX、PVS、PSTV七種病毒進(jìn)行檢測，結(jié)果均為陰性即為合格脫毒苗；
步驟四、將脫毒苗切段擴(kuò)繁，接種于MS培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng)室內(nèi)，在培養(yǎng)室的溫度保持在25°C左右，光照為2000-3000勒克斯，每天16小時光照條件下進(jìn)行培養(yǎng)；
步驟五、煉苗(煉苗具體方法及參數(shù)將脫毒苗移入溫室，自然放置3天后，將培養(yǎng)瓶蓋打開，再放置2天即可移栽)，移栽至溫室內(nèi)進(jìn)行肥水管理(具體方法及參數(shù)剛剛移栽脫毒苗要立即澆透水，覆蓋薄膜保水，每天上午9點前或者下午4點后適量噴水，待小苗緩苗后，去掉薄膜，進(jìn)入日常管理，視情況補(bǔ)水補(bǔ)肥，每隔10天左右噴施一次防止疫病的藥物)，培養(yǎng)至收獲，獲得微型薯。
[0010]步驟三的莖尖分生組織培養(yǎng)基:MS+赤霉素0.lmg/L+6-芐胺基嘌呤0.1mg/L+D-泛酸鈣0.lmg/L+蔗糖3%，瓊脂粉0.5%，PH5.8 ;培養(yǎng)條件(23±2) °C，16小時光照，光強(qiáng) 30001x。
[0011]本實施方式方法每株結(jié)薯3個以上，單個重2g以上，最大塊莖重100g以上。每次每平方米可收獲500-600塊。
[0012]種薯栽培方法如下:
1、切種:將選好的種子切成塊，每塊帶芽眼廣2個，塊重20克以上。注意切種刀用消毒液消毒；
2、拌種:將切好 的種塊用64%殺毒礬Wp0.5kg+農(nóng)用鏈霉素30g拌種薯1000kg ；
3、整地:在選好的地塊上，每畝施有機(jī)肥1500~2500公斤，尿素20公斤，普鈣20~30公斤，鉀肥10~12公斤作為底肥，化肥要施于離種薯2~3厘米處，避免與種薯直接接觸。如有地下害蟲，可與化肥一起施加防蟲害農(nóng)藥地塊的選擇要求，偏酸性的含腐殖質(zhì)沙壤土，前茬未種茄科植物；
4、播種:每667平方米，播種薯塊5000塊左右。覆土8~12cm ；
5、日常管理:待出苗后，注意補(bǔ)肥補(bǔ)水，注意除草，防病蟲害。
[0013]生產(chǎn)出來的微型薯和由微型薯生產(chǎn)的原種一代試驗品在黑龍江、內(nèi)蒙古等地試種表現(xiàn)良好，田間長勢和抗病性突出；可達(dá)到上市銷售級別的原種二代試驗品經(jīng)過在惠州、青島等地試種取得良好地效果，植株健壯，生長旺盛，抗病性明顯增強(qiáng)，每667平方米產(chǎn)量可達(dá)8000斤以上，大薯率在90%以上，田間幾乎沒有爛薯，較傳統(tǒng)的自留種(一般667平方米產(chǎn)量在2000斤以下)有非常明顯的優(yōu)勢，取得了良好地經(jīng)濟(jì)效益。
【權(quán)利要求】
1.馬鈴薯脫毒微型種薯的生產(chǎn)方法，其特征在于馬鈴薯脫毒微型種薯的生產(chǎn)方法是按下述步驟進(jìn)行的: 步驟一、以品種特征明顯的生長健壯的優(yōu)良植株所結(jié)的且無病斑、蟲蛀和機(jī)械創(chuàng)傷的薯塊作脫毒材料，先打破薯塊的休眠，然后用溫潤沙覆蓋，置于25°c黑暗條件下催芽，待莖尖長Icm時，轉(zhuǎn)入光照培養(yǎng)箱進(jìn)行高溫處理20-25天，高溫處理期間每天先在40°C高溫處理2小時再在38°C高溫處理22小時，高溫處理第7天用0.θ.5 mg /L赤霉素+0.θ.5 mg/L6-芐氨基喋呤+0.θ.5mg/LD-泛酸鈣處理一次； 步驟二、然后剝?nèi)?~3cm長的莖尖，用自來水沖洗30min，再用70%~75% (質(zhì)量濃度)乙醇浸泡30秒，隨即用5%~7% (質(zhì)量濃度)次氯酸鈉溶液浸20分鐘，再用無菌水沖洗3~4次； 步驟三、然后在實體解剖鏡下，剖取帶有f 2個葉原基的莖尖分生組織，進(jìn)行離體培養(yǎng)，當(dāng)苗的數(shù)量達(dá)到檢測用量時，對苗進(jìn)行PLRV、PVA、PVY、PVM、PVX、PVS、PSTV七種病毒進(jìn)行檢測，結(jié)果均為陰性即為脫毒苗； 步驟四、將脫毒苗接種于MS培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng)室內(nèi)，在培養(yǎng)室的溫度保持在25°C，光照為2000-3000勒克斯，每天16小時光照條件下進(jìn)行切段擴(kuò)繁，煉苗，移栽至溫室內(nèi)進(jìn)行肥水管理，培養(yǎng)至收獲，獲得微型薯。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的馬鈴薯脫毒微型種薯的生產(chǎn)方法，其特征在于步驟一中用15硫脲+5mg/L赤霉素浸種5分鐘來打破休眠。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的馬鈴薯脫毒微型種薯的生產(chǎn)方法，其特征在于步驟二用70%(質(zhì)量濃度)乙醇浸泡。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的馬鈴薯脫毒微型種薯的生產(chǎn)方法，其特征在于步驟二所述的次氯酸鈉溶液的質(zhì)量百分比濃度為5%。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的馬鈴薯脫毒微型種薯的生產(chǎn)方法，其特征在于步驟三的莖尖分生組織培養(yǎng)基:MS+赤霉素0.lmg/L+6-芐胺基嘌呤0.lmg/L+D-泛酸鈣0.lmg/L+蔗糖3%，瓊脂粉0.5%，PH5.8，培養(yǎng)條件:(23±2) °C，16小時光照，光強(qiáng)30001x。
【文檔編號】A01H4/00GK103651113SQ201210338291
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2012年9月14日 優(yōu)先權(quán)日:2012年9月14日
【發(fā)明者】張引強(qiáng) 申請人:哈爾濱睿哲科技開發(fā)有限公司