專利名稱：一種家兔精液稀釋保存液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是一種家兔精液稀釋保存液。
背景技術(shù)：
家兔是草食性動(dòng)物，是目前國家促進(jìn)畜牧業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整重點(diǎn)發(fā)展扶持的農(nóng)業(yè)項(xiàng)目，同時(shí)也是目前我國農(nóng)村增收致富的特色產(chǎn)業(yè)。近30年來，我國畜牧業(yè)取得了長足的發(fā)展，但家兔產(chǎn)業(yè)技術(shù)水平相比較于其它畜禽業(yè)還相對(duì)滯后，特別是繁殖技術(shù)方面，豬、牛、雞等早已實(shí)現(xiàn)人工授精進(jìn)行繁殖，但目前家兔產(chǎn)業(yè)還基本采用自然交配的方式進(jìn)行繁殖，嚴(yán)重制約了家兔產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。長期以來，由于家兔的繁殖技術(shù)問題沒有得到突破性進(jìn)展，導(dǎo)致家兔生產(chǎn)效益較低，不能充分體現(xiàn)規(guī)?；B(yǎng)殖效益。因此，改進(jìn)家兔繁殖技術(shù)，采用人工授精，實(shí)現(xiàn)同期發(fā) 情、同期分娩、同期斷奶、同期上市的全進(jìn)全出周期化生產(chǎn)模式顯得尤為必要；搞人工授精首先要解決的是公兔精液體外保存問題，精液稀釋保存液的研發(fā)又是重中之重，精液能有效的體外保存是人工授精技術(shù)成功的前提，同時(shí)也是該技術(shù)應(yīng)用推廣的保障。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足提供一種家兔精液稀釋保存液。本發(fā)明的技術(shù)方案如下一種家兔精液稀釋保存液，組分為檸檬酸2. 13g，Tris3. Hg,無水葡萄糖0. 60g，溶解于IOOml蒸餾水中，然后進(jìn)行高壓滅菌處理，待滅菌完冷卻后，將其放入無菌操作臺(tái)，加入2ml卵黃，青霉素20萬IU，鏈霉素20萬IU。試驗(yàn)結(jié)果表明，自配的精液稀釋保存液能在4°C體外保存公兔精液60h以上，且活力大于0. 5 (活力0. 5是保證能正常進(jìn)行人工授精的指標(biāo))。其在體外保存能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于5%葡萄糖溶液和生理鹽水。同時(shí)進(jìn)行的人工授精試驗(yàn)(活力0. 5時(shí))的受胎率在75%左右，試驗(yàn)結(jié)果也表明，該稀釋液配方在體外保存家兔精液60h以內(nèi)均可進(jìn)行人工授精。


圖I為自配稀釋保存液體外保存精液IOh時(shí)間內(nèi)，活力均為0. 8，無變化，但畸形率升高了 0. 78個(gè)百分點(diǎn)，A :正常精子；B :畸形精子。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。I試驗(yàn)材料與方法I. I試驗(yàn)動(dòng)物選擇健康無病、繁殖力正常的I 2周歲的成年齊卡大型新西蘭公兔30只。
1.2試驗(yàn)儀器與試劑試驗(yàn)儀器顯微鏡、電子天平、PH計(jì)、恒溫水浴鍋、高壓滅菌鍋、冰箱、無菌操作臺(tái)、微量移液槍、采精器、血球計(jì)數(shù)板等其它玻璃儀器。試驗(yàn)試劑考馬氏亮藍(lán)染色液、Tris、檸檬酸、無水葡萄糖(分析純)、卵黃、青霉素、鏈霉素、蒸餾水、5% (重量百分比)葡萄糖溶液、生理鹽水、3% (重量百分比)Nacl溶液等。1.3精液品質(zhì)測(cè) 定I. 3. I精液采集采用人工制作的假陰道采精器進(jìn)行人工采精。1.3.2 射精量用2. 5ml注射器進(jìn)行測(cè)定，排除注射器內(nèi)空氣后進(jìn)行讀數(shù)、計(jì)數(shù)。1.3.3 PH 值測(cè)定采用PH計(jì)進(jìn)行直接測(cè)定。I. 3. 4精子活力通過目測(cè)法以十級(jí)制評(píng)估精子的活力。I. 3. 5精子密度將采集的新鮮精液用3% Nacl做100倍體積比稀釋，搖勻稀釋精液，采用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行計(jì)數(shù)測(cè)定。Iml原精液的精子數(shù)=5個(gè)大方格內(nèi)的精子數(shù)X5X10X1000X100。I. 3. 6精子畸形率采用考馬氏亮藍(lán)染色劑染色，在1000倍下觀察計(jì)數(shù)。精子畸形率=畸形精子數(shù)/300X100%1.4精液體外保存試驗(yàn)I. 4. I稀釋保存液配制電子天平準(zhǔn)確稱取朽1檬酸2. 13g, Tris3. 17g,無水葡萄糖0. 60g,溶解于IOOml蒸餾水中，然后進(jìn)行高壓滅菌處理。待滅菌完冷卻后，將其放入無菌操作臺(tái)，加入2ml卵黃，青霉素20萬IU，鏈霉素20萬IU。1.4.2體外保存研究將鮮精液用稀釋保存液稀釋，稀釋后的濃度為30X 106/ml。同時(shí)用5%葡萄糖溶液、生理鹽水做對(duì)照，原精液不做任何處理對(duì)照。將稀釋后的精液、純精液在4°C下保存。在稀釋后的 2h、4h、6h、8h、10h、12h、24h、36h、48h、60h、72h 進(jìn)行觀察測(cè)定。I. 5人工授精試驗(yàn)采用自配稀釋保存液，稀釋后的精液，活力在0. 5時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行人工授精試驗(yàn)，根據(jù)體外保存試驗(yàn)結(jié)果，選擇在體外保存60小時(shí)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行人工授精。選擇500只初配母兔(齊卡大型新西蘭)連續(xù)進(jìn)行4胎人工授精，每只母兔輸精濃度為15X106。配種后采用摸胎法進(jìn)行妊娠檢查。I. 6試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel軟件進(jìn)行處理后，采用SPSS14. 0統(tǒng)計(jì)軟件，結(jié)果均以平均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差表
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2結(jié)果與分析2. I鮮精液質(zhì)量表I顯示，其射精量、活力、PH值、密度、畸形率分別為1.43ml、0.81、7. 23、3. 84XioVml>8. 87%。表I精液質(zhì)量測(cè)定結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種家兔精液稀釋保存液，其特征在于，組分為檸檬酸2. 13g，Tris3. 17g，無水葡萄糖0. 60g，溶解于IOOml蒸餾水中，然后進(jìn)行高壓滅菌處理，待滅菌完冷卻后，將其放入無菌操作臺(tái)，加入2ml卵黃，青霉素20萬IU,鏈霉素20萬IU。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種家兔精液稀釋保存液，組分為檸檬酸2.13g，Tris3.17g，無水葡萄糖0.60g，溶解于100ml蒸餾水中，然后進(jìn)行高壓滅菌處理，待滅菌完冷卻后，將其放入無菌操作臺(tái)，加入2ml卵黃，青霉素20萬IU，鏈霉素20萬IU。試驗(yàn)結(jié)果表明，自配的精液稀釋保存液能在4℃體外保存公兔精液60h以上，且活力大于0.5(活力0.5是保證能正常進(jìn)行人工授精的指標(biāo))。其在體外保存能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于5％葡萄糖溶液和生理鹽水。同時(shí)進(jìn)行的人工授精試驗(yàn)(活力0.5時(shí))的受胎率在75％左右，試驗(yàn)結(jié)果也表明，該稀釋液配方在體外保存家兔精液60h以內(nèi)均可進(jìn)行人工授精。
文檔編號(hào)A01N1/02GK102845413SQ20121036122
公開日2013年1月2日 申請(qǐng)日期2012年9月18日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月18日
發(fā)明者任永軍, 鄭潔, 楊超, 鄺良德, 謝曉紅, 雷岷, 李叢艷, 郭志強(qiáng), 張翔宇, 鄧小東, 張翠霞 申請(qǐng)人:四川省畜牧科學(xué)研究院