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一種鐵皮石斛組織培養(yǎng)一步成苗的方法

文檔序號:225524閱讀:592來源:國知局
專利名稱:一種鐵皮石斛組織培養(yǎng)一步成苗的方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及鐵皮石斛的組培技術(shù)領(lǐng)域,尤其涉及一種鐵皮石斛組織培養(yǎng)ー步成苗的方法。
背景技術(shù)
鐵皮石斛,被譽為“中華九大仙草之首”,為蘭科多年生草本植物。生于山地半陰濕的巖石上,喜溫暖濕潤氣候和半陰半陽的環(huán)境,不耐高溫、干燥,不耐寒。鐵皮石斛為石斛之極品,它因表皮呈鐵綠色而得名,具有益胃生津,滋陰清熱等藥用價值。鐵皮石斛種子微小,自然萌發(fā)率和繁殖率低,生產(chǎn)上的種苗均來自組織培養(yǎng)。目前,鐵皮石斛的組培育苗主要通過原球莖誘導、幼苗分化與壯苗培養(yǎng)3個階段來實現(xiàn),培養(yǎng) 時間較長、成本較高。因此,如何縮短培養(yǎng)時間、提高培養(yǎng)效率、降低培養(yǎng)成本已成為促進鐵皮石斛產(chǎn)業(yè)加速發(fā)展的當務之急。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足,提供一種鐵皮石斛組織培養(yǎng)ー步成苗的方法。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的一種鐵皮石斛組織培養(yǎng)ー步成苗的方法,包括以下步驟
(1)制備成苗培養(yǎng)基以B5為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,每升B5培養(yǎng)基中添加0.Img的6-芐氨基嘌呤、0. 3mg的a -萘こ酸、2. Og的活性炭、3. 5g的瓊脂和30g的蔗糖,加熱至沸騰,加熱過程中攪拌,待瓊脂完全溶解后,調(diào)節(jié)PH值至6. 0,得成苗培養(yǎng)基;均勻地將成苗培養(yǎng)基分裝于培養(yǎng)容器中,邊分裝邊攪拌,避免活性炭沉底,分裝完畢后加蓋;培養(yǎng)容器加蓋后,放入高壓滅菌鍋內(nèi)滅菌,滅菌條件為121°C下滅菌20分鐘,滅菌后取出培養(yǎng)容器,冷卻后備用;
(2)鐵皮石斛果實滅菌將鐵皮石斛果實放入水中清洗干凈;在無菌條件下,將鐵皮石斛果實在體積百分比濃度為75%的こ醇溶液中浸泡I分鐘,取出用無菌水清洗若干遍,放入體積百分比濃度為2%的次氯酸鈉溶液滅菌10分鐘,再用無菌水清洗若干適,吸干水分后放入無菌培養(yǎng)皿中備用;
(3)接種解開鐵皮石斛果實的果皮,把種子均勻地灑在成苗培養(yǎng)基表面,蓋緊蓋子;
(4)培養(yǎng)將完成接種的培養(yǎng)容器移入培養(yǎng)室,培養(yǎng)條件為溫度25°C,光照時間每天12小時,光照強度1500 20001x,培養(yǎng)時間約為3個月,得到0. 5-1. 0 cm的幼苗;
(5)轉(zhuǎn)接首先配置壯苗培養(yǎng)基每升B5培養(yǎng)基中添加0.5mg的6-芐氨基嘌呤、I. Omg的a -萘こ酸、3. Og的活性炭、3. Og的瓊脂和30g的蔗糖,加熱至沸騰,加熱過程中攪拌,待瓊脂完全溶解后,調(diào)節(jié)PH值至6. 0,得狀苗培養(yǎng)基;然后將幼苗轉(zhuǎn)接至壯苗培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng),直至苗高5-6cm時,移栽至大棚。本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明通過合理掌控兩種激素用量及相互間的配比,以及其他輔料的添加,促進鐵皮石斛種子一歩成苗,而不必經(jīng)過原球莖階段,縮短培養(yǎng)時間2個月左右,降低了經(jīng)濟成本。轉(zhuǎn)接結(jié)果也表明,一歩成苗培養(yǎng)成的組培苗長勢旺盛,符合生產(chǎn)所需,可作為鐵皮石斛生產(chǎn)種苗的重要來源。
具體實施例方式本發(fā)明鐵皮石斛組織培養(yǎng)ー步成苗的方法,包括以下步驟
I.成苗培養(yǎng)基準備
(I)配制以B5為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,每升B5培養(yǎng)基中添加0. Im g的6-芐氨基嘌呤、0. 3mg的a -萘こ酸、2. Og的活性炭,3. 5g的瓊脂和30g的蔗糖,加熱至沸騰,加熱過程中攪拌,待瓊脂完全溶解后,調(diào)節(jié)pH值至6. 0,得成苗培養(yǎng)基。(2)分裝均勻地將培養(yǎng)基分裝于培養(yǎng)容器中,邊分裝邊攪拌,避免活性炭沉底,分裝完畢,加蓋。(3)滅菌培養(yǎng)容器加蓋后,及時放入高壓滅菌鍋內(nèi)滅菌,滅菌條件為121°C下滅菌20分鐘,滅菌后及時取出培養(yǎng)容器,冷卻后備用。2.外植體滅菌
先清洗將外植體鐵皮石斛果實放入清水中,加少許洗潔精,清洗果實表面,后用流水沖洗干凈。滅菌事先將鑷子和燒杯滅菌,在無菌條件下,用鑷子將果實在體積百分比濃度為75 %的こ醇溶液中浸泡I分鐘,取出用無菌水清洗2遍,放入體積百分比濃度為2%的次氯酸鈉溶液滅菌10分鐘,再用無菌水清洗6遍,吸干水分,放入無菌培養(yǎng)皿中備用。3.接種
用無菌解剖刀解開鐵皮石斛果實的果皮,把種子均勻地灑在培養(yǎng)基表面,立刻蓋緊蓋子。4.培養(yǎng)
將完成接種的培養(yǎng)容器移入培養(yǎng)室,培養(yǎng)條件為■ 溫度25°C,光照時間每天12小時,光照強度1500 20001x,培養(yǎng)時間約為3個月,得到0. 5-1. 0 cm的幼苗;培養(yǎng)期間要勤檢查,發(fā)現(xiàn)污染及時移除。5.轉(zhuǎn)接
配置壯苗培養(yǎng)基每升B5培養(yǎng)基中添加0. 5mg的6-芐氨基嘌呤、I. Omg的a -萘こ酸、3. Og的活性炭、3. Og的瓊脂和30g的蔗糖。加熱至沸騰,加熱過程中攪拌,待瓊脂完全溶解后,調(diào)節(jié)PH值至6. 0,得狀苗培養(yǎng)基。將高0.5-1. 0 cm的幼苗轉(zhuǎn)接至壯苗培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng),直至苗高5-6 cm時,移栽至大棚。
權(quán)利要求
1.一種鐵皮石斛組織培養(yǎng)一步成苗的方法,其特征在于,包括以下步驟 (1)制備成苗培養(yǎng)基以B5為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,每升B5培養(yǎng)基中添加O.Img的6-芐氨基嘌呤、O. 3mg的α -萘乙酸、2. Og的活性炭、3. 5g的瓊脂和30g的蔗糖,加熱至沸騰,加熱過程中攪拌,待瓊脂完全溶解后,調(diào)節(jié)PH值至6. 0,得成苗培養(yǎng)基;均勻地將成苗培養(yǎng)基分裝于培養(yǎng)容器中,邊分裝邊攪拌,避免活性炭沉底,分裝完畢后加蓋;培養(yǎng)容器加蓋后,放入高壓滅菌鍋內(nèi)滅菌,滅菌條件為121°C下滅菌20分鐘,滅菌后取出培養(yǎng)容器,冷卻后備用; (2)鐵皮石斛果實滅菌將鐵皮石斛果實放入水中清洗干凈;在無菌條件下,將鐵皮石斛果實在體積百分比濃度為75%的乙醇溶液中浸泡I分鐘,取出用無菌水清洗若干遍,放入體積百分比濃度為2%的次氯酸鈉溶液滅菌10分鐘,再用無菌水清洗若干遍,吸干水分后放入無菌培養(yǎng)皿中備用; (3)接種解開鐵皮石斛果實的果皮,把種子均勻地灑在成苗培養(yǎng)基表面,蓋緊蓋子; (4)培養(yǎng)將完成接種的培養(yǎng)容器移入培養(yǎng)室,培養(yǎng)條件為溫度25°C,光照時間每天12小時,光照強度1500 20001x,培養(yǎng)時間約為3個月,得到O. 5-1. O cm的幼苗; (5)轉(zhuǎn)接首先配置壯苗培養(yǎng)基每升B5培養(yǎng)基中添加O.5mg的6-芐氨基嘌呤、I. Omg的α -萘乙酸、3. Og的活性炭、3. Og的瓊脂和30g的蔗糖,加熱至沸騰,加熱過程中攪拌,待瓊脂完全溶解后,調(diào)節(jié)PH值至6. 0,得狀苗培養(yǎng)基;然后將幼苗轉(zhuǎn)接至壯苗培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng),直至苗高5-6cm時,移栽至大棚。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種鐵皮石斛組織培養(yǎng)一步成苗的方法,該方法通過合理調(diào)配培養(yǎng)基中兩種激素的比例和劑量,同時加入活性炭等輔料,使得鐵皮石斛種子直接發(fā)育成幼苗,將幼苗轉(zhuǎn)接到壯苗培養(yǎng)基之后,成活率達99.5%以上。本發(fā)明可將鐵皮石斛組織培養(yǎng)的成苗時間縮短2個月,顯著提高培養(yǎng)效率,降低經(jīng)濟成本,可作為鐵皮石斛組培苗生產(chǎn)的重要方法。
文檔編號A01H4/00GK102845308SQ20121036891
公開日2013年1月2日 申請日期2012年9月27日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月27日
發(fā)明者沈曉霞, 沈宇峰, 王志安 申請人:浙江省中藥研究所有限公司
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